Name: Colección Protocolo de páncreas humano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Aprende a diseccionar el páncreas humano preservando la orientación anatómica mediante marcaje con tinta y división en tres regiones. Este método permite analizar la composición de islotes para investigación sobre diabetes tipo 1.

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Los autores agradecen a las familias de los donantes y las organizaciones de obtención de órganos involucrados en esta investigación y Martino María y Kusmartseva Irina por su ayuda de expertos. Este trabajo fue financiado por la Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) en apoyo de la Red de Donantes de Órganos de páncreas con diabetes.

1. Set-up <ol><li> Casetes de etiquetas para los bloques de parafina de forma manual con un lápiz, o automáticamente con una impresora de cartucho. Incluye el identificador de los donantes (CaseID), el tipo de muestra, número de parte alícuota, y cualquier otro documento de identidad única (la hoja de Caso, <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">el Apéndice 1</a> ). </li><li> Etiqueta OCT moldes como para cassettes con un marcador permanente. Cortar rectángulos de 5-10 cm de papel de aluminio. </li><li> Imprimir etiquetas o de forma manual con marcador permanente todos los viales y tubos. Incluya viales suficientes para muestras instantáneas picada congelada y tubos con medio RPMI para los envíos de frescos. Para los viales se congelaron con RNAlater, añadir 1 ml a cada RNAlater criovial. </li><li> Set-up placas de disección en materia de seguridad campana y los mostradores con los instrumentos de disección estériles (fórceps, escalpelos, hojas, gasas (4x4)), así como cassettes y moldes OCT dispuestos en orden de uso. </li><li> Prepare un baño de congelación, poniendohielo seco en una caja de tamaño mediano de espuma de poliestireno (10x10 cm) a una profundidad de al menos 3 cm y añadir isopentano hasta que el hielo seco está completamente cubierta. </li><li> Opcional: Complete un pequeño recipiente Dewar con nitrógeno líquido. </li><li> Si el páncreas es necesario para la microscopía electrónica (EM), preparar el fijador TAAB mediante la adición de 1,25 ml de paraformaldehído al 16%, 1,25 ml de glutaraldehído al 8%, y 7,5 ml de 0,1 M de PBS. Preparar fijador Lowicryl mediante la adición de 2,5 ml de paraformaldehído al 16% a 7,5 ml de PBS 0,1 M. </li><li> Preparar las soluciones utilizadas para el aislamiento de las células. Para botella de 500 ml de DMEF (con glutamina), seguir las técnicas asépticas al tiempo que añade lo siguiente: <ol><li> De suero fetal bovino (SFB): añadir 50 ml, 10% final. </li><li> La penicilina / estreptomicina (Pen / Strep, 10.000 U / ml / 10000 ug / ml stock) - añadir 5 ml Pen / Strep acciones a RPMI para la concentración final de 100 U / ml / 100ug/mL. También añadir 5 ml de una botella de 500 ml de DPBS cuando se utilizan para la celebración de los ganglios linfáticos o muestras de bazo. </li></ol></li></ol> 2. Personal <ol&gt; <li> Procedimiento que se realiza de manera óptima con tres miembros del personal sin embargo, el procedimiento puede llevarse a cabo con una persona bien entrenada. Dos individuos generalmente puede completar el procedimiento en 90 minutos. La duración real depende de la cantidad de tejidos recibidos y la facilidad para encontrar los ganglios linfáticos pancreáticos. Las muestras para aislamientos celulares se mantuvieron a 4 ° C hasta la finalización de la disección del tejido, mientras que las muestras de suero se procesan en paralelo. </li><li> Patólogo, patología asistente, o su equivalente, un miembro del personal con experiencia lleva a la manipulación de tejidos y lleva a cabo disecciones más importantes, incluyendo la división (s) de la cabeza del páncreas y la cosecha de los ganglios linfáticos pancreáticos. Los esfuerzos iniciales se dirigen hacia el páncreas seguido de un examen de la grasa peri-pancreática de los ganglios linfáticos. </li><li> Técnico de laboratorio u órgano equivalente de personal capacitado en el tejido de corte cuyas funciones principales son para pesar el páncreas y las regiones y los tejidos de acabado de bloques fijos y congelada, y de complemento congelada vIALS. Recibe el duodeno y el bazo de la asistente de patología y los procesos de estos órganos, mientras que el asistente de patología está procesando el páncreas. </li><li> Asistente de laboratorio-un miembro del personal que asiste a los otros como el bloqueo y etiquetado vial, muestra de picar para crioviales, y el procesamiento de suero. </li></ol> 3. La disección del páncreas <ol><li> Retire el duodeno y el bazo y el páncreas limpiar de grasa extraños, los vasos y los nervios mediante disección roma y cortante </li><li> Coloque el páncreas limpiado en un tablero de disección cubiertas con toallas de papel. Humedezca un bastoncillo de algodón en tinta azul y propagación en la superficie anterior del páncreas. Seque el exceso. </li><li> Opcional: Sumerja un nuevo aplicador de tinta negro y se extendió sobre la superficie posterior del páncreas. Volver páncreas a la orientación normal con superficie anterior frente prosector. </li><li> Cortar el páncreas en 3 regiones: cabeza, cuerpo y cola (Figura 1). Cortar la unión entre head cuerpo y luego dividir la porción restante en ~ porciones iguales para el cuerpo y la cola. </li><li> Pese cada región de pesos páncreas y registro (caso hoja de diagnóstico diferencial ( <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">Anexo 1</a> )). </li><li> Sección (~ 0.5 cm) de cada región del páncreas en una transversal &quot;barra de pan&quot; forma (Figura 1). </li><li> Utilice las secciones de ambas uniones entre las regiones para las muestras de picada. Dependiendo del tamaño del páncreas, una muestra de la región de unión cuerpo-cola puede ser difícil de obtener en cuyo caso el número de bloques de parafina se puede disminuir para obtener muestras picados o muestras sólo del páncreas cabeza-cuerpo región se puede obtener. Crioviales etiqueta con arreglo a la cabeza o el cuerpo para denotar la región proximal en la unión. <ol><li> Picar las piezas y se dividen en partes iguales entre los crioviales (≥ 1 gramo por dosis). La rápida congelación de los viales sin RNALater en nitrógeno líquido o hielo seco en la - suspensión isopentano a continuación, transferir tOA -80 ° C congelador. </li><li> Mantener viales con RNALater a temperatura ambiente durante 30 minutos para permitir el equilibrio, remix y rápidamente congelar en nitrógeno líquido o en la de hielo seco-isopentano suspensión luego se transfieren a un -80 ° C congelador. </li></ol></li><li> Eliminar las secciones alternas de bloques de parafina y PTU que comienzan con parafina (Figura 1). </li><li> Incline todas las secciones transversales a la derecha. </li><li> Lugar ~ 1,5 x 1,5 x 0,5 cm secciones en las casetes. Si las secciones transversales son demasiado grandes, cortado por la mitad (Figura 2b). Casetes de etiquetas de color azul medio anterior como &quot;A&quot; y la mitad posterior como &quot;B&quot;. </li><li> Si las piezas son todavía demasiado grandes, corte cada sección perpendicular al corte anterior (Figura 2c). Casetes de etiquetas DC en sentido horario. Recorte las piezas más, según sea necesario para que quepa en casetes. </li><li> Bloques de números en secuencia dentro de la región, comenzando por la parte más medial. </li><li> Para los bloques de parafina, la posición Cassettes por lo que la etiqueta está a la izquierda y el lugar del tejido en el cassette, manteniendo su orientación. Cerrar la tapa de cassette y la transferencia a un recipiente con 500 ml ~ 10% de formalina neutra tamponada (MNB). Empezar fijación temporización cuando la casete último se coloca en fijador. </li><li> Para los bloques de OCT, vierta una capa delgada de octubre los medios de comunicación en el molde prelabeled a continuación, establecer el tejido en el molde y asegúrese de mantener la orientación y cubrir con el tejido octubre Rápidamente sumergir los moldes OCT en un hielo seco - suspensión de isopentano para ~ 1 minuto. Eliminar de la suspensión y el lugar en hielo seco para el almacenamiento temporal o en el congelador -80 ° C para el almacenamiento a largo plazo. </li><li> Obtener ~ 0,5 x 0,5 cm rebanadas de la unión cabeza-cuerpo para microscopía electrónica (EM). Coloque una rebanada en el fijador TAAB y la otra rebanada en el fijador Lowicryl. Guarde los dos tipos de fijador con muestras a 4 ° C durante al menos 48 horas y / o por tiempo indefinido hasta su posterior procesamiento para EM. </li></ol> 4. Bazo, ganglios linfáticos disecciónciones y duodenal mucosa disecciones <ol><li> Aislar los ganglios linfáticos pancreáticos (PLN) de la grasa y cortar todo el tejido conjuntivo de la cápsula de los ganglios. Colóquelo en un recipiente estéril de cultivo celular que contiene DMEF. Dependiendo del número total de aislados, se divide en partes alícuotas PLN para los envíos de frescos y criopreservados aislamientos celulares, parafina y / o bloques de OCT, y los viales. Picar los ganglios grandes en trozos no mayores de 0,5 cm. </li><li> Picar no pancreáticas ganglios linfáticos y el bazo en la pequeña (0,5 cm) cubos. Colocar en fijador, los medios de octubre, o DMEM y para envío de muestras frescas o aislamientos criopreservados celular de acuerdo con las cantidades de materiales de partida. </li><li> Abra el duodeno y frote suavemente la mucosa duodenal, limpio de la mucosa con una gasa humedecida. Los cortes de secciones de la mucosa de la parafina y / o bloques congelados de PTU y las muestras de picada para viales, con y sin RNAlater. Congelar como para otras muestras. </li></ol> 5. Envuelva OCT bloques en pre-etiquetados papel de aluminio y coloque bloques de OCT y<html> viales en las cajas para el almacenamiento a largo plazo a -80 ° C. 6. Enviar ejemplos fijos para el procesamiento de parafina <ol><li> Fijar los tejidos durante 16 horas (rango de 20 ± 4 horas) con un procesador automático de la parafina o el uso de cronometraje manual. Proceso para los bloques de parafina utilizando un procesador automático ( <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix2.doc" target="_blank">Anexo 2</a> ). </li><li> Incluye secciones en la orientación exacta como colocada por el prosector con la etiqueta del cassette a la izquierda. Insertar la mucosa duodenal con la superficie del corte hacia abajo para permitir el examen de la perpendicular de la mucosa hasta la submucosa. </li></ol> 7. Limpie las áreas de disección y desinfectar. Lave los instrumentos de disección y volver a esterilizar. Coloque los tejidos remanentes humanos en fijador de formol para su almacenamiento, como los desechos biomédicos. Eliminar los desechos biomédicos de acuerdo con las normativas locales plazo de un mes. 8. Actualizar el sistema de inventario de la muestra ve_title &quot;&gt; 9. Resultados representativos Este procedimiento se tramitará un páncreas humano intacto, con un muestreo representativo a través del órgano incluyendo la demarcación de las tres regiones principales, a saber, cabeza, cuerpo y cola de 2 horas. La región uncinado, que se encuentra en la región de la cabeza posterior, se incluye en la disección cabeza. El peso de páncreas media en donantes de órganos que no tienen diabetes fue 82,4 gramos (52,7 - 139,0 gramos). Pesos páncreas regionales fueron aproximadamente iguales (Figura 3). Este procedimiento también puede permitir la reconstrucción de todo el páncreas mediante diapositivas manchadas de parafina secuencial y bloques de OCT. Múltiples formatos son posibles teniendo en cuenta la máxima utilización de las tecnologías actuales y futuras. La hoja de cálculo actual caso nPOD se proporciona ( <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">Anexo 1</a> ) que se utiliza para documentar las muestras recuperadas y posteriormente processing por los tipos y cantidades alícuotas. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig1.jpg" /> Figura 1. Esquema general del procedimiento. El páncreas se procesa toda vez que mantiene orientaciones anatómicas. La región de la cabeza es más largo en el eje superior-inferior debido a la presencia del lóbulo pancreático ventral en la región posterior que incluye la región uncinado. La zona sombreada en los cruces indican las regiones utilizados para las muestras de picados en los crioviales. P, de parafina, O, octubre <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig2.jpg" /> Figura 2. Esquema de letras para las secciones de páncreas. Cortes transversales del páncreas se pueden dividir en mitades o cuartos y letras en sentido horario. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig3.jpg" /> Figura 3. Pesos de páncreas de donantes de órganos que no tienen diabetes. Lospáncreas intacto de donantes adultos (&gt; 17 años) se pesó luego se divide en regiones y pesos regionales obtenidos. Los datos son medias ± SEM (n = 15).

<ol><li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li>
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<li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst.+Monogr%22%5BJournal%5D)">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li>
<li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li>
<li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+%CE%B2-cell+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab.+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li>
<li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li>
<li>Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El objetivo de este procedimiento es definir un proceso estándar de páncreas que puede ser armonizado en los distintos sitios de recolección de varios, para poder comparar los resultados obtenidos con los diferentes grupos. El método se basa en la disección estándar de prácticas de patología quirúrgica con medidas adicionales para la anotación de las regiones más importantes del páncreas seguido de intra-regionales subdivisiones. La estandarización de los métodos de procesamiento de especímenes biológicos se requiere pa...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Incluidos los instrumentos de disección con 22 hojas de bisturí </td><td> Varios </td><td> Varios </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de centrífuga (15 y 50 ml) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-539-5, 430828 </td><td> Estéril </td></tr><tr><td> Criotubos (1,8 ml) </td><td> VWR América del Norte </td><td> 89004-300 </td><td> Estériles, los códigos de barras opcionales </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Tinta Patología Quirúrgica </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Casetes </td><td> Mercedes Médico </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 10% formalina tamponada neutra </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> OCT medio de congelación </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Moldes </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> Varios tamaños </td></tr><tr><td> Isopentano </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3551-4 </td><td> Escalofriante baño de octubre </td></tr><tr><td> El hielo seco </td><td></td><td></td><td> Escalofriante baño de octubre </td></tr><tr><td> El nitrógeno líquido en el vaso Dewar </td><td></td><td></td><td> Coloque los crioviales de congelación </td></tr><tr><td> Placa de cultivo celular (100 mm) </td><td> Corning </td><td> 430167 </td><td> Estéril </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> Almacén estéril, refrigerados, incluidos glutamina </td></tr><tr> &lt;td&gt; suero bovino fetal </td><td> Cellgro </td><td> 35 a 010 CV </td><td> Alícuotas estériles, congelados tienda </td></tr><tr><td> La penicilina / estreptomicina / antifúngico </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> Alícuotas estériles, congelados tienda </td></tr><tr><td> Escriba 9 de parafina </td><td> Richard Allan-Científico </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> D-PBS 1X </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> Estéril </td></tr><tr><td> 16% de paraformaldehído </td><td> EM Ciencias </td><td> 15710 </td><td> Haga tienda fresca, refrigerada </td></tr><tr><td> 8% de glutaraldehído </td><td> EM Ciencias </td><td> 16019 </td><td> Haga tienda fresca, refrigerada </td></tr><tr><td> Nivel de Bioseguridad 2 campana </td><td> Varios </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultra-bajo el congelador </td><td> Varios </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Impresora Casete Sakura </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura VIP300 </td><td> Sakura </td><td></td><td> Procesador automático de parafina </td></tr><tr><td> Estación de parafina incrustación </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Reactivos específicos y equipos.

colección protocolo de páncreas humano

Collection Protocol for Human Pancreas

Esta disección y el procedimiento de muestreo fue desarrollado para la Red de Donantes de Órganos de páncreas con diabetes (nPOD) programa para estandarizar la preparación de páncreas se recuperó de los donantes de órganos cadavéricos. El páncreas se divide en 3 grandes regiones (cabeza, cuerpo, cola), seguidos de las secciones transversales de serie en toda la medial al eje lateral. Secciones alternas se utilizan para parafina fijo y frescas bloques congelados y muestras remanentes se pican para complemento preparaciones de muestras congeladas, ya sea con o sin inhibidores de RNAsa, para el ADN, ARN, o aislamiento de las proteínas. El objetivo general del procedimiento de disección de páncreas es de probar todo el páncreas, mientras que el mantenimiento de la orientación anatómica. Endocrino heterogeneidad celular en términos de composición islote, tamaño, y los números se informó de islotes humanos en comparación con 1 islotes de roedores. La mayoría de los islotes humanos de la cabeza del páncreas, regiones del cuerpo y la cola están compuestos de insulina-containing células beta seguido por las menores proporciones de glucagón que contiene alfa-células y que contienen somatostatina-delta-células. Polipéptido pancreático que contienen las células del PP y la grelina que contienen células épsilon, pero también están presentes en pequeñas cantidades. En contraste, la región uncinado contiene islotes que están compuestos principalmente de pancreáticos polipéptido que contienen células PP 2. Estas variaciones de los islotes regionales surgen de las diferencias de desarrollo. El páncreas se desarrolla a partir de las yemas de páncreas ventral y dorsal del intestino anterior y después de la rotación del estómago y el duodeno, se mueve el lóbulo ventral y se fusiona con el dorsal 3. El lóbulo ventral forma la parte posterior de la cabeza incluyendo el proceso uncinado mientras que el lóbulo dorsal da lugar a que el resto del órgano. La variación de páncreas Regional se informó también a la región de la cola que tiene una mayor densidad de islotes en comparación con otras regiones y los componentes derivados del lóbulo dorsal-se someten a una atrofia selectiva de la diabetes tipo 1 <sa&gt; 4,5. Órganos y tejidos adicionales a menudo son recuperados de los donantes de órganos y son los ganglios linfáticos, el bazo páncreas y páncreas no los ganglios linfáticos. Estas muestras se recuperaron con formatos similares como para el páncreas con la adición de aislamiento de células crioconservados. Cuando el duodeno proximal se incluye con el páncreas, la mucosa duodenal puede ser coleccionada para los bloques de parafina y congeladas y preparaciones picadas se congelaron.

Este video muestra la disección de un procedimiento para la tramitación de páncreas humano en los formatos de almacenamiento. Orientación anatómica se mantiene a lo largo de las regiones pancreáticas para permitir la definición de la composición islote regional y densidad.

Colección Protocolo de páncreas humano

Este procedimiento de disección y muestreo fue desarrollado para el programa Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) con el fin de estandarizar la preparación...

El objetivo general de este procedimiento es diseccionar el páncreas humano de manera que se mantenga la orientación anatómica. Esto se logra eliminando el duodeno y el bazo del páncreas, y luego retirando la grasa y los vasos excesivos del páncreas. El segundo paso consiste en pintar la superficie anterior con tinta azul y la superficie posterior con tinta negra.A continuación, el páncreas se divide en tres regiones. Cada región se corta transversalmente en lonjas uniformes y se coloca en casetes de parafina, moldes de OCT o se tritura más finamente y se coloca en viales. Finalmente, se recogen muestras de las tres regiones del páncreas, manteniendo la orientación anatómica correcta para análisis posteriores.Este método puede ayudar a abordar preguntas clave en la investigación de la diabetes tipo uno, como los mecanismos subyacentes a la pérdida de masa o función de las células beta, y la naturaleza del ataque de las células inmunitarias. La demostración visual del método de procesamiento del páncreas es fundamental, ya que mantener la orientación in vivo del páncreas requiere atención al detalle. La procedimiento será demostrado por Linda Snyder, histotecnóloga, y Emily Montgome

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Lograr una alta calidad y la cantidad adecuada de islotes humanos es uno de los requisitos importantes para el trasplante de islotes exitosos. En este video se describe paso a paso los procedimientos para el aislamiento de los islotes pancreáticos humanos (I parte: la digestión y la acumulación de tejido de páncreas), utilizando un método modificado automatizado.

Aislamiento humanos islote pancreático: Parte I: La digestión y la acumulación de tejido pancreático

Lograr una alta calidad y la cantidad adecuada de islotes humanos es uno de los requisitos importantes para el trasplante de islotes exitosos. En este video se describe paso a paso los procedimientos para el aislamiento de los islotes pancreáticos humanos (parte II: el saneamiento y la cultura de los islotes), utilizando un método modificado automatizado.

De páncreas humano de aislamiento Islet: Parte II: Purificación y Cultura de los islotes

La oferta de la diabetes tipo 2 isletas para la investigación es insuficiente. Aquí compartimos nuestro protocolo para el aislamiento de islotes de pacientes sometidos a pancreatectomía parcial. Este enfoque representa un lugar único para la obtención de islotes de diabetes tipo 2 y clínicamente emparejado sujetos no diabéticos en un número suficiente de estudios básicos y clínicos.

El aislamiento de islotes humanos de pacientes parcialmente Pancreatectomized

Este vídeo muestra los procedimientos para la caracterización de los islotes pancreáticos humanos con hematoxilina y eosina (H &amp; E) e inmunohistoquímica (IHC). Secciones de páncreas de la cabeza, el cuerpo y las regiones de la cola se tiñen tanto por H &amp; E y de IHC para determinar la composición endocrina islote (insulina, glucagón y polipéptido pancreático), la replicación celular (Ki 67), e infiltrado inflamatorio (H &amp; E, CD3). La región se localiza uncinado con IHC para el...

Protocolos de tinción de islotes pancreáticos humanos

Un protocolo para aislar, cúmulos cultura, y la imagen de células de los islotes (CCI) derivadas de células pancreáticas fetales humanas se describe. El método se detallan los pasos necesarios para generar los CCI a partir de tejido, la cultura como monocapas o en suspensión en forma de agregados, y la imagen de los marcadores de proliferación y las decisiones del destino celular pancreáticas.

El aislamiento, la cultura, y de imágenes de Human Fetal pancreáticas grupos de células

retos críticos para el campo de investigación de la diabetes son comprender los mecanismos moleculares que regulan la replicación de las células β de los islotes y desarrollar métodos para estimular la regeneración de las células β. En este documento un método de alto contenido de cribado para identificar y evaluar se presenta la actividad de replicación promotoras de células β de moléculas pequeñas.

Un alto contenido<em&gt; In Vitro</em&gt; Islotes pancreáticos de células β plataforma de descubrimiento de replicación

Aquí, presentamos un pasivo de las secciones de páncreas humano de imagen en tres dimensiones (3D) mediante protocolo optimizado métodos de compensación. Este manuscrito muestra estos procedimientos para pasivo óptico claro seguido por múltiples inmunofluorescencia que manchaba para identificar los elementos claves de las redes neuronales autonómicas y sensoriales inervan islotes humanos.

Proyección de imagen 3D de alta resolución de la red Neuro-insular del páncreas humano

Este protocolo de aislamiento de islotes describió una novedosa vía de inyección de colagenasa para digerir el tejido exocrina y un procedimiento de gradiente simplificado para purificar los islotes de ratones. Implica digestión enzimática, separación/purificación de gradientes y selección manual de islos. El aislamiento exitoso puede producir entre 250 y 350 islotes de alta calidad y completamente funcionales por ratón.

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Aquí presentamos un protocolo para aislar células de islote pancreático de ratón para la detección de las inducciones de ROS por los xenobióticos con el fin de identificar los potenciales químicos xenobióticos diabetogenic.

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Sistema de pseudoislotes humanos para la evaluación sincrónica de la dinámica de biosensores fluorescentes y perfiles de secreción de hormonas

Este protocolo describe un método estandarizado para la extracción quirúrgica, la digestión enzimática y la purificación con gradiente de densidad de islotes pancreáticos de rata Lewis, permitiendo preparaciones de alto rendimiento y alta pureza para su uso directo en trasplantes o estudios in vitro .

Aislamiento y purificación de islotes pancreáticos a partir de ratas Lewis mediante digestión enzimática y separación por gradiente de densidad

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Colección Protocolo de páncreas humano

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