Name: Una evaluación cuantitativa de la migración celular mediante el ensayo de la canción Motilidad Phagokinetic (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 30 s
Description: Aprende a medir cuantitativamente la motilidad celular mediante el ensayo de canción fagocinética utilizando nanopartículas de oro. Este método permite visualizar y cuantificar el movimiento celular aleatorio con microscopía estándar.

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Este trabajo fue apoyado por becas de los Institutos Nacionales de Salud (AI050677, HD-051998, y GM103433), Malcolm Feist una beca de investigación cardiovascular, y la American Heart beca predoctoral Asociación (10PRE4200007).

1. Preparación de gelatina cubreobjetos recubiertos <ol><li> Coloque los lavados con ácido cubreobjetos de vidrio (15 mm de diámetro) en un plato de plástico estéril mm 100 (ES). Coloque 8-9 cubreobjetos por placa y asegurarse de que no se toquen entre sí o los lados del plato .. </li></ol> Nota: cubreobjetos, agujas y pinzas necesitar ser estériles para eliminar posibles microorganismos contaminantes, así como endotoxinas que afectan las funciones celulares, incluyendo la motilidad. <ol start="2"><li> Pesar el polvo de gelatina y resuspender el polvo en agua desionizada para preparar una solución de gelatina con una concentración final de 0,5 g/300 ml. A continuación, la solución de gelatina tiene que ser esterilizados en autoclave. </li><li> Pipetear 2-3 gotas de gelatina (~ 100-150 ml) a cada cubreobjetos. </li></ol> Nota: Tenga cuidado de no permitir que la gelatina para tocar el plato o usted no será capaz de eliminar los cubreobjetos del plato. <ol start="4"&gt; <li> Hornear los cubreobjetos recubiertos de gelatina en la placa de 100 mm en un horno a 90 ° C durante 10 min. </li><li> Quite el exceso de gelatina mediante pipeteo suave. </li><li> Secar los cubreobjetos en la placa de 100 mm en el horno a 70 º C durante 45 min. </li><li> Una vez seco, quite los cubreobjetos de la placa de 100 mm con una solución estéril, libre de endotoxinas aguja y pinzas (la aguja se utiliza para empujar suavemente el cubreobjetos para que sea accesible para las pinzas para quitar suavemente). </li><li> Coloque individuales recubiertos de gelatina cubreobjetos en pocillos separados de una placa de 24 pocillos. </li></ol> 2. Preparación de oro coloidal cubreobjetos recubiertos <ol><li> Pesar una cantidad apropiada de ácido cloroaúrico (trihidrato de ácido tetracloroáurico; HAuCl 4 · 3H 2 O) y luego volver a suspender en agua desionizada estéril para preparar una solución final de 14,5 mM (tóxico). Preparar 1,5 ml de la solución por 8-9 cubreobjetos. </li></ol> Advertencia: el ácido cloroaúrico es hbrazada si se ingiere, causa quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves y pueden causar una reacción alérgica en la piel. Tóxico en caso de ingestión. <ol start="2"><li> Pesar una cantidad adecuada de citrato de sodio (trisódico dihidrógeno 2-hidroxipropano-1, 2,3-tricarboxilato; Na 3 C 6 H 5 O 7) y luego volver a suspender el polvo en agua desionizada para obtener una solución final de 0,5%. Preparar 1 ml de la solución por 8-9 cubreobjetos. </li></ol> Advertencia: el citrato de sodio puede causar irritación de ojos y piel. También puede causar irritación del tracto respiratorio y digestivo. <ol start="3"><li> En una solución estéril, libre de endotoxina vaso de precipitados se combinan 1,5 ml de la estéril 14,5 mM HAuCl 4 solución y 13,5 ml de agua desionizada estéril, y el resultado debe producir una solución de color amarillo pálido. Los volúmenes mencionados permitirá 8-9 cubreobjetos de oro coloidal que se harán. </li><li> Mientras continua la agitación, calentar la solución en una placa caliente hasta que comience a baceite. </li></ol> Advertencia: El calentamiento de la solución se debe realizar en la campana de humos, como vapores puede ser dañino / tóxicos. Los vapores son destructivas para el tejido de las membranas mucosas y las vías respiratorias superiores. <ol start="5"><li> Retirar el vaso de la placa caliente. </li><li> Mientras se agita, añadir 0,7 ml de la solución de citrato de sodio 0,5%. El volumen mencionado permitirá 8-9 cubreobjetos de oro coloidal que se harán. </li><li> Mantener la agitación esta solución combinada durante aproximadamente 2 min (Nota: el color de la solución cambia gradualmente de color amarillo pálido, para borrar, a gris, a púrpura, a púrpura oscuro, antes de llegar a un vino tinto o, preferiblemente, color herrumbre) . Este producto es la solución de oro coloidal. </li><li> Se enfría la solución de oro coloidal en una pipeta de 10 ml para 1-2 min (con el fin de mantener la capa de gelatina sobre el cubreobjetos de fusión cuando la solución de oro coloidal se añade) y luego añadir 1.0-2.0 ml de la colloidal de solución de oro sobre cada cubreobjetos recubiertos con gelatina previamente colocado en un plato de 24-pocillos (es) (la cantidad de la solución de oro coloidal que se agrega a los cubreobjetos recubiertos de gelatina depende de lo bien que las partículas de oro se precipita en la solución - véase comentarios a continuación.) </li></ol> Nota: Debido a que puede haber variaciones en la eficiencia de la precipitación de partículas de oro, se aconseja añadir primero 0.5-1 ml de la solución de oro coloidal a los cubreobjetos recubiertos con gelatina y a continuación la cápsula 24-bien en la incubadora durante 0,5 hr . Después de este tiempo de incubación, los cubreobjetos se examinan bajo el microscopio de luz para la densidad adecuada de las partículas de oro sobre los cubreobjetos. Véase la Figura 1 para 20x imágenes de microscopía de ejemplos de demasiado bajo y demasiado alto una concentración de partículas de oro. Véase la Figura 2 para las imágenes de microscopía 40x de una concentración ideal de partículas de oro (al menos para uso con monocitos). El optimal densidad de las nanopartículas de oro en el portaobjetos debe ser determinado experimentalmente para cada tipo de células utilizadas, como las características de las diferentes células dictará su fuerza de movimiento en los cubreobjetos. Si la concentración de partículas de oro es insuficiente, agrega un adicional de 0.5-1 ml de la solución de oro coloidal a los cubreobjetos recubiertos con gelatina. Dependiendo del tamaño de la célula, la concentración adecuada de partículas de oro pueden variar y, por lo tanto en última instancia dependerá del tamaño de la célula examinado para la motilidad. Por ejemplo, con los monocitos humanos que son de pequeño tamaño células (~ 10-20 micras 28), una mayor concentración de partículas de oro se requería en nuestros análisis. La distribución adecuada de las nanopartículas de oro proporciona al investigador la capacidad de distinguir fácilmente y eficientemente los bordes de las pistas celulares. Una concentración de partículas de oro que es demasiado alta dificulta la capacidad de las células para moverse y por lo tanto para medir con precisiónsu motilidad, mientras que una concentración de partículas de oro que es demasiado bajo límites de capacidad de los de delinear un registro preciso de la motilidad. Nota Importante: Si la síntesis de nanopartículas de oro es problemático, sintetizado nanopartículas de oro están disponibles comercialmente en tamaños desde 5 nm a 400 nm. Adicionalmente, microesferas fluorescentes también se han utilizado en estudios de motilidad de las células 29. Sin embargo, el uso de estas microesferas requiere un microscopio de fluorescencia para el análisis de la migración celular. <ol start="9"><li> Colocar el plato 24-así coloidales con cubreobjetos recubiertos de oro en una incubadora a 37 ° C e incubar entre 1 hr durante la noche. </li><li> Después de la incubación, enjuague / eliminar oro no unido por inmersión de los portaobjetos (3x) en solución salina tamponada con fosfato estéril (PBS, pH 7,4). </li><li> Coloque estos coloidales recubiertas de oro en un cubreobjetos limpio de 12 pocillos placa (s) que contiene PBS. </li><li> Almacenar estos cubreobjetos a 4 ° C hasta el momento deutilizar (Parafilm la placa antes de colocarlos en el refrigerador). </li></ol> Nota importante: Siempre mantenga las coloidales recubiertas de oro cubreobjetos en algún tipo de líquido / medios de comunicación como las partículas de oro pueden desprenderse de los cubreobjetos si se deja secar. Los cubreobjetos de oro coloidal se debe utilizar dentro de 2-3 meses a partir de la fecha en que fueron hechas. Control de calidad: En un solo ensayo phagokinetic motilidad pista, es crítico utilizar cubreobjetos que se caracterizan por una concentración similar de partículas de oro. Este punto simple permitirá a las diferencias cuantitativas en la motilidad celular entre las muestras a ser solamente debido a la naturaleza del tratamiento y no las propiedades físicas de las coloidales de oro revestido con cubreobjetos. Somos partidarios de cubreobjetos usando sólo realizadas al mismo tiempo en experimentos individuales, aunque se ha demostrado que siempre que la densidad de las nanopartículas de oro son iguales, el uso de cubreobjetosa partir de diferentes preparaciones es apropiado. 3. El análisis de la motilidad celular <ol><li> Colocar las coloidales de oro revestido con cubreobjetos en un medio apropiado celulares para las células de interés. </li><li> Transferir las células tratadas adecuadamente sobre las coloidales de oro revestido con cubreobjetos colocados en una placa de 24-pocillos (es) </li></ol> Nota: El número de células transferidas al pozo individual necesita ser determinado para cada tipo de célula estudiado. Idealmente, las células deben ser distribuidas por igual en el oro coloidal recubierto con cubreobjetos, que a su vez permitirá el análisis estadístico de las pistas sólo creado por una sola célula. Si las células se sembraron en placas a una concentración demasiado elevada, se vuelve altamente probable que las pistas superpuestas de células múltiples se verá. Pistas superpuestas no pueden cuantificarse con precisión y, por lo tanto, no pueden tenerse en cuenta en el análisis final del movimiento de las células de la prueba. Superposición de pistas como resultado dela participación de múltiples celdas generalmente son fáciles de observar, como fusionado o cruzado pistas (en el campo de análisis) en la que dos o más células pueden ser observados en la misma área contigua borra. <ol start="3"><li> Incubar a 37 ° C / 5% de CO 2 durante 24 horas (o para cualquier momento adecuado; por ejemplo, hemos analizado la motilidad monocitos entre 6 hr y 24 hr células post-tratamiento y endoteliales en 12 horas después del tratamiento). El marco de tiempo óptimo para determinar y medir la motilidad celular variará con el tipo de célula estudiado y, por lo tanto debe ser determinado experimentalmente para cada tipo de célula (un buen punto de partida, sin embargo, es 6 a 12 horas después del tratamiento). </li></ol> Nota: Si experimentales coloidales de oro cubreobjetos recubiertos necesitan ser almacenados y / o analizados en un momento posterior, las células y nanopartículas de oro necesitan ser fijados sobre los cubreobjetos. Para llevar a cabo esta etapa de fijación; Paso siguiente 3.3, primer lavado cubreobjetos con cuidado 2 veces con 1xPBS (inmersión de cubreobjetos es preferible, como una eliminación de las nanopartículas de oro de cubreobjetos debe evitarse), a continuación, utilizar un método de fijación de células estándar, tal como la incubación con paraformaldehído al 3% a temperatura ambiente. Después de una incubación de 15-min, el paraformaldehído al 3% deben ser retirados y los cubreobjetos se lavaron cuidadosamente 3 veces con 1x PBS. Los cubreobjetos fijos se pueden almacenar en un refrigerador. <ol start="4"><li> Utilizando un microscopio de luz, capturar imágenes de las pistas creadas por una sola célula en movimiento (Nota: El aumento que se usa para tomar fotografías de pistas celulares ciertamente variar en función del tipo de células bajo investigación). Ejemplos de pistas celulares creadas por las células no móviles y móviles sobre coloidales recubiertas de oro cubreobjetos se muestra en la Figura 2. </li></ol> Nota: Las nanopartículas de oro de tamaño utilizado en el ensayo de motilidad pista phagokinetic se ha encontrado para ser completamente no tóxico para las células 30. Si es necesario, La viabilidad de las células examinadas se puede evaluar por tinción con azul de tripano o examinar para otros marcadores de viabilidad celular. Habría que tener en cuenta la necesidad de fijación, tipo de fijación, etc, si este paso debe llevarse a cabo. <ol start="5"><li> Usando el software libremente disponible, tales como el software ImageJ ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> ) o NIH Image ( <a href="http://rsb.info.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsb.info.nih.gov/nih-image/</a> ), ambos desarrollados en la Los Institutos Nacionales de la Salud, o ImageTool ( <a href="http://ddsdx.uthscsa.edu/dig/itdesc.html" target="_blank">http://ddsdx.uthscsa.edu/dig/itdesc.html</a> ), desarrollado en la Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio, el área promedio (en unidades arbitrarias) de oro coloidal aprobado por 10-20 o más células (por muestra) se determina para cada grupo experimental de las imágenes capturadas. Estadísticas entonces se puede realizar en tél recogió los resultados. Por ejemplo, los resultados pueden ser graficados como media ± el error estándar de la media (SEM) con t de Student pruebas realizadas, y un valor de p &lt;0,05 se utilizan como medida de significación estadística entre las muestras. Las figuras 3 y 4 pasos muestran en la análisis de la zona de oro coloidal se aclaró por la célula. </li></ol>

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<li>Brooks, D. M., Brooks, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Invasion+Assay+Using+Matrigel%28R%29%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">In Vitro Invasion Assay Using Matrigel(R).</a> Methods Mol. Med. 58, 61-70 (2001).</li>
<li>Kuo, J. C., Wang, W. J., Yao, C. C., Wu, P. R., Chen, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+suppressor+DAPK+inhibits+cell+motility+by+blocking+the+integrin-mediated+polarity+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor suppressor DAPK inhibits cell motility by blocking the integrin-mediated polarity pathway.</a> J. Cell Biol. 172, 619-631 (2006).</li>
<li>Benazeraf, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+random+cell+motility+gradient+downstream+of+FGF+controls+elongation+of+an+amniote+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A random cell motility gradient downstream of FGF controls elongation of an amniote embryo.</a> Nature. 466, 248-252 (2010).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El ensayo de la motilidad phagokinetic pista presentado en este artículo es un método simple y altamente eficaz para el análisis cuantitativo de la migración celular. Debido a múltiples tipos de células pueden ser analizados 9-17, este método tiene el potencial de uso amplio en múltiples disciplinas. El uso de coloidales cubreobjetos de vidrio recubiertas de oro permite la medición de un área de la pista se aclaró por una célula en movimiento. El ensayo puede medir el efecto de diferentes estímulos (es de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> El número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Los cubreobjetos de vidrio (15 mm) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-545-83 </td><td></td></tr><tr><td> La gelatina 300 Bloom </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G-1890 </td><td></td></tr><tr><td> Trihidrato ácido tetracloroáurico </td><td> Fisher Chemical </td><td> G54-1 </td><td> 14,5 mM (una solución de trabajo final) </td></tr><tr><td> Citrato de Sodio </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP327-500 </td><td> 0,5% (una solución de trabajo final) </td></tr><tr><td> Paraformaldehído </td><td> Fisher Scientific </td><td> O4042 </td><td> 3% (una solución de trabajo final) </td></tr><tr><td> 100 mm placa de cultivo tisular </td><td> Sarstedt </td><td> 83,1802 </td><td></td></tr><tr><td> Placas de 12 pocillos </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-29 </td><td></td></tr><tr><td> Placas de 24 pocillos </td><td> Fisher Scientific </td><td> 07-200-84 </td><td></td></tr><tr><td> Techne Horno Hybridiser HB-1D </td><td> LabPlanet </td><td> 2040500 </td><td> El horno de laboratorio estándar será suficiente </td></tr><tr><td> 10 ml Pipetas serológicas </td><td> Sarstedt </td><td> 86.1254.001 </td><td></td></tr><tr><td> Pipet-Aid Filler / Dispenser </td><td> Drummond </td><td> 13-681-15 </td><td></td></tr><tr><td> P200 Manual de un canal de pipeta </td><td> Rainin </td><td> PR-200 </td><td></td></tr><tr><td> 200 ml Consejos Barrera </td><td> CLP </td><td> BT200 </td><td></td></tr><tr><td> ImageJ software </td><td> <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/" target="_blank">htt</a>p :/ / rsb.info.nih.gov / ij / </td><td></td><td> Licencia: Dominio Público </td></tr><tr><td> Nikon Eclipse TE300 con un CoolSNAPfx fotométricas monocromo de 12-bit CCD cámara </td><td> Nikon </td><td></td><td> Discontinued; La especificación más comparable tiene Nikon Eclipse Ti, pero un extremo inferior Nikon 80i será adecuado también. Otras marcas también ofrecen microscopios comparables. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Nota: Los reactivos y equipos que figuran a continuación han sido utilizados por nosotros en nuestros diversos estudios. Otros suministros, proveedores, reactivos y equipo puede utilizarse, siempre que tienen especificaciones similares. </td></tr></tbody></table>

una evaluación cuantitativa de la migración celular mediante el ensayo de la canción motilidad phagokinetic

A Quantitative Evaluation of Cell Migration by the Phagokinetic Track Motility Assay

Motilidad celular es un proceso biológico importante para ambos organismos unicelulares y multicelulares. Es esencial para el movimiento de los organismos unicelulares hacia una fuente de nutrientes o fuera de las condiciones inadecuadas, así como en organismos multicelulares para desarrollo de tejidos, la vigilancia inmunológica y la cicatrización de heridas, sólo por mencionar algunos papeles 1,2,3. La desregulación de este proceso puede conducir a graves enfermedades neurológicas, cardiovasculares e inmunológicos, así como la formación exacerbada tumor y diseminarse 4,5. Molecularmente, la polimerización de actina y reciclado del receptor se ha demostrado que desempeñan papeles importantes en la creación de extensiones celulares (lamellipodia), que impulsan el movimiento de avance de la célula 6,7,8. Sin embargo, muchas cuestiones biológicas acerca de la migración de células permanecen sin respuesta. El papel central de la motilidad celular en la salud humana y la enfermedad pone de relieve la importancia de comprender el mec específicohanisms involucrados en este proceso y hace que los métodos precisos para la evaluación de la motilidad celular particularmente importante. Microscopios se utilizan generalmente para visualizar el movimiento de las células. Sin embargo, las células se mueven más lentamente, por lo que la medición cuantitativa de la migración de células de un proceso consume recursos que requieren costosas cámaras y software para crear cuantitativos Caducada tiempo películas de células móviles. Por lo tanto, la capacidad de realizar una medición cuantitativa de la migración celular que es rentable, no laborioso, y que utiliza el equipo común de laboratorio es una gran necesidad de muchos investigadores. El ensayo de pista de la motilidad phagokinetic utiliza la capacidad de una célula en movimiento para eliminar partículas de oro de su camino para crear una pista medible sobre un cubreobjetos de vidrio revestida con oro coloidal 9,10. Con el uso de software de libre disposición, múltiples pistas pueden ser evaluadas para cada tratamiento para lograr requisitos estadísticos. El ensayo puede ser utilizado para evaluarmotilidad de muchos tipos de células, tales como células de cáncer de 11,12, fibroblastos, neutrófilos 9 13, células del músculo esquelético, queratinocitos 14 15 16, los trofoblastos, células endoteliales y monocitos 17, 10,18-22. El protocolo implica la creación de diapositivas recubierto con nanopartículas de oro (Au °) que son generados por una reducción de ácido cloroaúrico (Au 3 +) por citrato de sodio. Este método fue desarrollado por Turkevich et al. En 1951 23 y luego mejoró en los años 1970 por Frens et al. 24,25. Como resultado de esta etapa de reducción química, partículas de oro (10-20 nm de diámetro) precipitar a partir de la mezcla de reacción y se puede aplicar a cubreobjetos de vidrio, que son entonces listo para su uso en los análisis de la migración celular 9,26,27. En general, el ensayo de motilidad phagokinetic track es una medida rápida, fácil y cuantitativa de la motilidad celular. Además, sepuede ser utilizado como un simple ensayo de alto rendimiento, para uso con tipos de células que no son susceptibles de tiempo-caducada formación de imágenes, así como otros usos, dependiendo de las necesidades del investigador. En conjunto, la capacidad para medir cuantitativamente la motilidad celular de múltiples tipos de células sin la necesidad de costosos microscopios y software, junto con el uso de equipo de laboratorio común y los productos químicos, hacer el ensayo de pista de la motilidad phagokinetic una buena elección para los científicos con un interés en comprender celular motilidad.

Se muestra un ejemplo de las imágenes tomadas con un microscopio óptico que muestra un área de la pista se aclaró por una sola célula (un monocito de nuestros experimentos se muestra en la Figura 2). No móviles células crean característica pequeño óvalo, o en forma de círculo alrededor de sí mismos-tractos que indican un bajo nivel basal de circulación de estas células no estimuladas (figuras 2A y 2B). En contraste, las células muy móviles [en nuestro sistema, el citomegalovirus humano ...

El ensayo de motilidad phagokinetic track es un método usado para evaluar el movimiento de las células. Específicamente, el ensayo mide la quimiocinesis (motilidad celular aleatoria) en el tiempo de una manera cuantitativa. El ensayo se aprovecha de la capacidad de las células para crear una pista medible de su movimiento en coloidales de oro revestido con cubreobjetos.

Una evaluación cuantitativa de la migración celular mediante el ensayo de la canción Motilidad Phagokinetic

La motilidad celular es un proceso biológico importante tanto para los organismos unicelulares como para los multicelulares. Es esencial para el movimiento de los unicelulares...

El objetivo general de este procedimiento es poder medir cuantitativamente la motilidad celular a lo largo del tiempo mediante un ensayo de motilidad celular basado en nanopartículas de oro. Esto se logra primero preparando láminas de vidrio para un recubrimiento de nanopartículas de oro. Específicamente, las láminas libres de endotoxinas se recubren con gelatina y luego se hornean.El segundo paso consiste en reducir el ácido cloráurico, lo que generará nanopartículas de oro y permitirá recubrir uniformemente las laminillas recubiertas con gelatina con la solución. A continuación, las células se colocan sobre las laminillas recubiertas con nanopartículas de oro durante el período de tiempo deseado del experimento. Posteriormente, la gelatina desplazará las nanopartículas de oro, creando rastros.El paso final consiste en la monitorización y cuantificación de la motilidad celular mediante microscopía para obtener imágenes de las trayectorias creadas por las células en movimiento. Finalmente, se realizan mediciones del área de las trayectorias utilizando software de acceso gratuito. Una de las principales ventajas de esta técnica frente a los métodos existentes, como la imagenología c

a-quantitative-evaluation-cell-migration-phagokinetic-track-motility

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Se describe un protocolo de la microscopía de campo claro intravital para medir la dinámica de los neutrófilos interacciones célula endotelial durante el reclutamiento de neutrófilos en respuesta a la fuente de un quimioatrayente de neutrófilos en vivo. Rastreo de neutrófilos intraluminal, la migración y la quimiotaxis transendotelial en tejido de ratón músculo cremáster se visualizan con la fotografía de vídeo de tiempo transcurrido y el seguimiento con ImageJ.

Seguimiento de Rastreo de neutrófilos intraluminal, la migración transendotelial y la quimiotaxis de los tejidos por microscopía de vídeo intravital

Este método permite la monitorización de las células en tiempo real y las mediciones cuantitativas de los diferentes parámetros de la migración, como la velocidad, el desplazamiento y la velocidad. A diferencia de los métodos tradicionales, este enfoque en tiempo real no se basa en las mediciones cuantitativas de migración de punto final, sino que permite el seguimiento y el cálculo de diferentes parámetros de forma continua.

Análisis cuantitativo de la migración desordenada de las células mediante microscopía de Time-lapse vídeo

Se presenta un ensayo in vivo la migración ex célula que permite la cuantificación precisa de los nervios potencial de migración de células de la cresta entérica en la presencia de varios factores de crecimiento.

Un ensayo de migración celular cuantitativa para murinos entéricas Neuronales Progenitores

De uso general, se describen métodos muy accesibles para el examen de la migración celular y la invasión in vitro. El primer método es el ensayo de cierre de la herida de células que mide la motilidad celular. El segundo método es la migración y la invasión de ensayo Transwell que evalúa la quimiotaxis y la capacidad invasiva de las células.

En la migración celular y la invasión ensayos in vitro

Un método cuantitativo para estudiar la migración espontánea de las células en un microambiente confinado unidimensional se describe. Este método tiene la ventaja de canales microfabricados y se puede utilizar para estudiar la migración de gran número de células bajo diferentes condiciones en los experimentos individuales.

Estudio de la Migración celular en Canales Microfabricated

La migración celular es un fenómeno biológico que está involucrada en una gran cantidad de fisiológicos, tales como la curación de heridas y las respuestas inmunitarias, y los procesos fisiopatológicos, como el cáncer. El ensayo de migración de matriz de colágeno 3D es una herramienta versátil para analizar las propiedades migratorias de diferentes tipos de células dentro de un entorno fisiológico-como 3D.

Análisis de la migración de células dentro de una matriz de colágeno tridimensional

Muchos genes regulados al alza estimulan la migración y la invasión de las células tumorales, lo que lleva a un mal pronóstico. Es fundamental determinar qué genes regulan la migración y la invasión de las células tumorales. Este protocolo presenta un método para investigar los efectos del aumento de la expresión de un gen en la migración e invasión de células tumorales en tiempo real.

Medición cuantitativa en tiempo real de la migración e invasión de células tumorales después de la transfección de ARNm sintético

Este procedimiento describe cómo visualizar, rastrear y cuantificar Acanthamoeba spp. motilidad.

Cuantificación de Acanthamoeba spp. Motilidad

Este protocolo proporciona un método de aislamiento primario de células T murinas y microscopía de lapso de tiempo de la migración de células T en condiciones ambientales específicas con análisis cuantitativo.

Ensayo de migración in vitro en tiempo real para linfocitos T murinos CD8+ primarios

La cuantificación de la inflamación celular en el SNC lesionado / patológica por citometría de flujo se ve complicada por los residuos de lípidos / mielina que puede tener un tamaño similar y la granulación de las células, disminuyendo la sensibilidad / precisión. Hemos avanzado un método de preparación de células para eliminar los restos de mielina y mejorar la detección de células por citometría de flujo en la médula espinal lesionada.

Evaluación cuantitativa de las células inmunes en el tejido de la médula espinal lesionada por citometría de flujo: un nuevo uso de un método de purificación celular

Aprende a medir cuantitativamente la motilidad celular mediante el ensayo de canción fagocinética utilizando nanopartículas de oro. Este método permite visualizar y cuantificar el movimiento celular aleatorio con microscopía estándar.

Una evaluación cuantitativa de la migración celular mediante el ensayo de la canción Motilidad Phagokinetic

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