Modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

Hola, mi nombre es William Sang. Vengo del laboratorio del Dr. Edgar Engelman en el Departamento de Patología de la Universidad de Stanford. También soy residente de cirugía en la Universidad de California en San Francisco.

Hoy te voy a mostrar cómo establecer un modelo ortotópico de ratón de cáncer colorrectal. Este modelo es útil para estudiar la progresión natural del cáncer colorrectal y para probar nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer colorrectal. Esto contrasta con el modelo tradicional de tumor subcutáneo.

El modelo de tumor subcutáneo es menos que ideal en el sentido de que las células tumorales que crecen debajo de la piel tienen un fenotipo alterado y con frecuencia no progresan ni hacen metástasis. De hecho, la respuesta del tumor a la terapia puede variar ampliamente dependiendo de si las células tumorales se implantan en una ubicación subcutánea o ortotópica. Se pueden utilizar dos técnicas para establecer un modelo ortotópico de ratón de cáncer colorrectal.

Una técnica consiste en la inyección de una suspensión de células de cáncer colorrectal en la pared SQL. La otra técnica consiste en el trasplante de un trozo de tumor subcutáneo al ciego. Ambas técnicas son similares e implican los siguientes pasos, uno, la preparación de la célula o del tumor.

Dos, preparación en ratón, laparotomía y exposición del ciego. Tres inyecciones de células o trasplante de tumor, y cuatro de ratón cierre y recuperación de la pared abdominal. Empecemos.

Por lo tanto, para el procedimiento de hoy, tenemos una serie de instrumentos diferentes que utilizamos. Se trata de pinzas, tijeras, un portaagujas normal, un portaagujas Castro Viejo ne. Y lo que es más importante para el procedimiento, tenemos una pieza precortada de gasa estéril.

Las células de cáncer colorrectal se cultivan y se cosechan cuando están subconfluentes, se prepara una suspensión de una sola célula en solución salina tamponada con fosfato y se mantiene en hielo. Se practica la eutanasia a una malicia con un tumor colorrectal subcutáneo previamente establecido. El tumor subcutáneo se extirpa mediante una técnica estéril y se divide en trozos de dos a tres milímetros.

Las piezas tumorales se mantienen en solución salina tamponada con fosfato sobre hielo. En nuestro laboratorio, utilizamos un anestésico inhalado de flúor. Alternativamente, se pueden usar anestésicos inyectables para lograr el mismo efecto.

La profundidad de la anestesia se evalúa mediante el pellizco de los dedos del pie. No debe haber un reflejo de retirada al pellizcar el dedo del pie. Es posible que se administren antibióticos en este punto.

El ratón anestesiado, que previamente fue afeitado, está correctamente colocado. El abdomen se prepara tres veces con una solución de Betadine, y luego el abdomen y el sitio quirúrgico se cubren de manera estéril. Se hace una pequeña muesca en la piel.

La musculatura de la pared abdominal se injerta y se levanta. Se lesiona la cavidad abdominal y se utiliza una sola hoja de las tijeras para empujar el contenido intraabdominal. La incisión se extiende de dos a tres centímetros.

El secum con su bolsa de terminación ciega se identifica y se exterioriza. El secum está aislado del resto del ratón. Utilizando una gasa estéril precortada, se utiliza solución salina tibia para mantener el ciego húmedo.

Se utiliza una aguja de calibre 27 o más fina para inyectar un volumen de 50 microlitros de células en la pared SQL. Se retira la aguja. Se inspecciona el sitio de inyección para garantizar que no haya fugas además de la inyección de células en la pared SQL, un enfoque alternativo es trasplantar el tumor al ciego.

Se coloca una forma de ocho puntos en el ciego con una sutura de tamaño de seis o siete oh. La pared seca está ligeramente dañada. A continuación, la pieza tumoral se coloca correctamente.

La puntada está atada. El secum se devuelve a la cavidad abdominal. La pared abdominal del ratón se cierra con tres puntos interrumpidos con suturas de tres o cuatro oh.

Alternativamente, se puede utilizar un punto de sutura simple, analgésicos postoperatorios y se puede administrar un bolo líquido. En este punto, se permite que el ratón se recupere de la anestesia con anestésicos inhalados. Por lo general, el ratón se recupera de la anestesia en 30 segundos.

Acabo de mostrarles cómo establecer un modelo ortotópico de ratón de cáncer colorrectal. El tiempo hasta el desarrollo de tumores primarios y metástasis hepáticas dependerá de la técnica utilizada, la línea celular utilizada y la especie de ratón utilizada. Este modelo es útil para estudiar la progresión natural del cáncer colorrectal y para probar nuevas terapias contra el cáncer colorrectal.

Así que eso es todo. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.