Name: Modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Aprende a establecer un modelo ortotópico de cáncer colorrectal en ratón mediante inyección de células o trasplante de tumor en el ciego. Este método permite estudiar la progresión natural de la enfermedad y evaluar nuevos agentes terapéuticos.

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Departamento de Cirugía, Universidad de California en San Francisco Raymond Shaheen, MD

I. Preparación de la célula <ol><li> Las células de cáncer colorrectal en un cultivo y cosecha, cuando subconfluentes. </li><li> Una suspensión de células individuales se prepara en tampón fosfato salino y mantener en hielo. </li></ol> II. Preparación del tumor <ol><li> Un ratón con un tumor establecido con anterioridad por vía subcutánea colorrectal es la eutanasia. </li><li> El tumor se elimina por vía subcutánea mediante una técnica estéril y se divide en trozos 2-3 mm </li><li> Las piezas de tumor se mantienen en solución salina de fosfato en el hielo. </li></ol> III. Preparación del ratón Nota: En nuestro laboratorio utilizamos isoflurano inhalado para anestesiar el ratón, como alternativa, se puede utilizar anestésicos inyectables para lograr el mismo efecto <ol><li> La profundidad de la anestesia se evaluó mediante una pizca dedo del pie. No debe haber retirar reflejo con el sujetador del pie. </li><li> Se pueden administrar antibióticos en este momento. </li><li> El ratón anestesiado, el cual fue previamente afeitado, está colocada adecuadamente. </li><li> El abdomen está preparado con una solución de betadine. </li><li> El abdomen y el lugar de la cirugía están cubiertas de una manera aséptica. </li></ol> IV. Laparotomía <ol><li> Una pequeña incisión se hace en la piel </li><li> La musculatura de la pared abdominal es agarrado y levantado </li><li> La cavidad abdominal se introduce y una sola hoja de la tijera se utiliza para empujar el contenido intra-abdominal de distancia </li><li> La incisión se extiende a 2-3 cm </li></ol> V. La exposición del ciego <ol><li> El ciego con su bolsa de poner fin a ciegas se identifica y se exterioriza </li><li> El ciego está aislado del resto del ratón utilizando una pre-cortado, gasa estéril </li><li> Solución salina caliente se utiliza para mantener la humedad del ciego </li></ol> VI. La inyección de células en la pared del ciego <ol><li> A 27 G o una aguja fina se utiliza para inyectar un volumen de 50 l de las células en la pared del ciego </li><li> Se retira la aguja </li><li> El sitio de la inyección es inspeccionado para asegurar que no se escape </li><li> El ciego es devuelto a la cavidad abdominal </li></ol> VII. Trasplante de un tumor en el ciego Nota: Además de la inyección de células en la pared del ciego, una alternativa es el trasplante del tumor en el ciego <ol><li> Una figura de ocho punto se coloca en el ciego con 6-0 o 7-0 suturas de tamaño </li><li> La pared del ciego está ligeramente dañado </li><li> A continuación, la pieza tumor se localice </li><li> El punto está atado </li><li> El ciego es devuelto a la cavidad abdominal </li></ol> VIII. Cierre de la pared abdominal del ratón y la recuperación <ol><li> La pared abdominal del ratón se cierra con tres puntos de sutura interrumpida con 3-0 o 4-0 suturas de tamaño </li><li> Alternativamente, se puede utilizar una puntada simple funcionamiento </li><li> Post-operatorio analgésicos y un bolo se puede dar en este momento </li><li> El ratón se le permite recuperarse de la anestesia. </li></ol> Nota: Con los anestésicos inhalados esto normalmente toma 30 segundos IX. Resultados - tumor primario y metástasis hepáticas <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> Del tumor primario - se muestra in situ (A) y con evidencia de neovascularización (B), en la tinción H &amp; E, los tumores son localmente invasivos (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> Metástasis hepática - muestra ex vivo (D)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

Aunque los modelos de ratón de tumores subcutáneos son fáciles de establecer y supervisar, está claro que este modelo no se puede replicar el sitio anatómico original de cáncer colorrectal. Debido a la diferencia en el microambiente de las células de cáncer colorrectal que crecen bajo la piel se ha demostrado que un cambio de fenotipo y casi siempre fallan en el progreso y la metástasis 1,2. De hecho, la respuesta del tumor a la terapia puede variar enormemente dependiendo de si las células cancerosas se implantan en un embarazo ...

<table><tbody><tr><td>Medios y componentes para cultivo celular</td><td></td><td></td><td>variarán según la línea celular utilizada</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>también vendida por varios otros proveedores</td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 15 mL, polipropileno</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 6 pocillos con tapa</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de iris, rectas, con puntas dentadas</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>es recomendable tener un par de estos instrumentos</td></tr><tr><td>Tijeras de disección de iris, rectas, afiladas</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas (regular)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>los instrumentos deben esterilizarse periódicamente en autoclave, pero también pueden esterilizarse mediante inmersión en Cidex</td></tr><tr><td>Sutura 6-0 o 7-0</td><td></td><td></td><td>para ciego; cortesía del Departamento de Cirugía, UCSF</td></tr><tr><td>Sutura 3-0 o 4-0</td><td></td><td></td><td>para pared abdominal; cortesía del Departamento de Cirugía, UCSF</td></tr><tr><td>Máquina de anestesia / Isoflurano</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>también vendida por varios otros proveedores</td></tr><tr><td>Almohadilla térmica desechable, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>Cinta, naranja, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>para inmovilizar al ratón anestesiado</td></tr><tr><td>Afeitadora Pro-Cord/Sin cable</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>para afeitar el pelaje del ratón</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos</td></tr><tr><td>Gasa 2 x 2, de 3 capas</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos</td></tr><tr><td>Campo estéril, barrera, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos</td></tr><tr><td>Aplicadores con punta de algodón, 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>también puede adquirirse en cualquier tienda de suministros médicos</td></tr><tr><td>Jeringa, 10 cc, punta Luer lock</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa, 1 cc, tuberculina, punta deslizante</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Aguja 27 1/2 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Aguja 30 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

El modelo tradicional por vía subcutánea tumor es menos que ideal para estudiar el cáncer colorrectal. Ortotópico modelos de ratón de cáncer colorrectal, que cuentan con las células cancerosas que crecen en su ubicación natural, reproducir enfermedades humanas con alta fidelidad. Dos técnicas se pueden utilizar para establecer este modelo. Ambas técnicas son similares y requieren de anestesia del ratón y la laparotomía para la exposición del ciego. Una técnica consiste en la inyección de una suspensión de células cancerosas de colon en la pared del ciego. Las células cancerosas son los primeros en cultivo, cosecha cuando subconfluentes y preparada como una suspensión de células individuales. Un pequeño volumen de las células se inyectaron lentamente para evitar fugas. La otra técnica consiste en el trasplante de un trozo de tumor subcutáneo en el ciego. Un ratón con un tumor establecido con anterioridad por vía subcutánea colorrectal es la eutanasia y el tumor se extirpa mediante una técnica estéril. La pieza del tumor se divide en trozos pequeños para el trasplante a otro ratón. Antes del trasplante, la pared del ciego está ligeramente dañado para facilitar la infiltración de células tumorales. El tiempo necesario para el desarrollo de los tumores primarios y metástasis hepáticas pueden variar dependiendo de la técnica, la línea celular, y las especies de ratón utilizada. Este modelo de ratón ortotópico es útil para estudiar la evolución natural del cáncer colorrectal y ensayo de nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer colorrectal.

Dos técnicas se pueden utilizar para establecer este modelo: la inyección de una suspensión de células de cáncer en la pared del ciego o el trasplante de un trozo de tumor subcutáneo en el ciego. Este modelo es útil para el estudio de la evolución natural del cáncer colorrectal y ensayo de nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer colorrectal.

Modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

El modelo tradicional de tumor subcutáneo es menos que ideal para estudiar el cáncer colorrectal. Los modelos ortotópicos de cáncer colorrectal en ratones, que presentan...

Hola, mi nombre es William Sang. Soy del laboratorio del Dr. Edgar Engelman en el Departamento de Patología de la Universidad de Stanford. También soy residente de cirugía en la Universidad de California en San Francisco.Hoy les voy a mostrar cómo establecer un modelo ortotópico de cáncer colorrectal en ratones. Este modelo es útil para estudiar la progresión natural del cáncer colorrectal y para probar nuevos agentes terapéuticos contra este tipo de cáncer. Esto contrasta con el modelo tradicional de tumor subcutáneo.El modelo de tumor subcutáneo es menos que ideal, ya que las células tumorales que crecen bajo la piel presentan un fenotipo alterado y con frecuencia no logran progresar ni metastatizarse. De hecho, la respuesta del tumor al tratamiento puede variar ampliamente dependiendo de si las células tumorales se implantan en una ubicación subcutánea o en una ubicación ortotópica. Se pueden utilizar dos técnicas para establecer un modelo ortotópico de cáncer colorrectal en ratones.Una técnica consiste en la inyección de una suspensión de células de cáncer colorrectal en la pared SQL. La otra técnica implica el trasplante de un fragmento de tumor subcutáneo al ciego. Ambas técn

orthotopic-mouse-model-of-colorectal-cancer

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video describe el protocolo para generar un modelo de ratón de cáncer colorrectal de xenoinjerto ortotópico derivado del paciente para estudiar la progresión de las células de cáncer colorrectal en ratones diabéticos/con inmunodeficiencia combinada grave (NOD/SCID) no obesos. Este modelo murino ayuda a comprender el crecimiento del tumor primario y el patrón de metástasis.

Generación de un modelo de ratón PDOX de cáncer colorrectal: estudio de la progresión del cáncer colorrectal en un modelo murino

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Marcaje de células organoides del CCR: un método para generar células organoides de cáncer colorrectal transducidas por lentivirus GFP

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Modelos de ratón con metástasis espontánea: una plataforma para estudiar el potencial metastásico de las células de cáncer colorrectal inyectadas ortotópicamente

El video describe la técnica de inyección intracónica de células cancerosas para desarrollar un modelo de ratón ortotópico con tumores altamente uniformes. Por lo tanto, el modelo ortotópico de ratón permite una simulación realista de la metástasis, proporcionando una herramienta valiosa para estudiar los cambios fenotípicos durante el crecimiento y la diseminación del tumor.

Inyección de células tumorales trazadas: una técnica para administrar células cancerosas para establecer un modelo de ratón de cáncer colorrectal ortotópico

El objetivo de este protocolo es aplicar imágenes de resonancia magnética mejorada con contraste dinámico (DCE-MRI) para xenoinjertos ortotópicos de tumores pancreáticos en ratones. La DCE-MRI es un método no invasivo para analizar la microvasculatura en un tejido diana, y útil para evaluar la respuesta vascular en un tumor después de una terapia novedosa.

Dynamic Contrast mejorada de imagen de resonancia magnética de un modelo ortotópico de cáncer pancreático del ratón

La capacidad de los clones metastásicos para colonizar sitios distantes depende de su capacidad de proliferación y/o de su capacidad para sobrevivir en el microambiente del huésped sin una proliferación significativa. En este trabajo se presenta un modelo animal que permite la visualización cuantitativa de ambos tipos de colonización hepática por clones metastásicos.

Avanzada modelo animal de colorrectal metástasis en hígado: Técnicas de imagen y propiedades metastásicas de los clones

Describimos el establecimiento de tumores colorrectales ortotópicos mediante la inyección de células tumorales o organoides en el ciego de ratones y el subsiguiente aislamiento de células tumorales circulantes (CTC) de este modelo.

Aislamiento de células tumorales circulantes en un modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

Se presenta un protocolo para el establecimiento de un modelo genético de ratón de cáncer colorrectal por infección segmentaria de adenovirus y su vigilancia mediante colonoscopia de alta resolución.

Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

Este protocolo describe la generación de modelos de xenoinjerto ortotópico derivados del paciente inculcando intravesicamente células carcinoma de células uroteliales de alto grado o inyectando intrarectalmente células cancerosas colorrectales en combinación diabética/grave no obesa ratones de inmunodeficiencia (NOD/SCID) para el crecimiento tumoral primario y metástasis espontáneas bajo la influencia de células estromales de ganglios linfáticos, lo que imita la progresión de las enfermedades...

Modelos de xenoinjerto ortotópico derivados del paciente para el carcinoma de células uroteliales humanas y el crecimiento tumoral del cáncer colorrectal y la metástasis espontánea

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La implantación ortotópica de células cancerosas derivadas de pacientes en ratones recapitula el cáncer colorrectal avanzado

Este estudio se centra en la inducción subcutánea in vivo de células luminiscentes de cáncer colorrectal en un modelo murino y la posterior medición de la luminiscencia mediante un sistema de imagen. El procedimiento tiene como objetivo establecer un modelo de crecimiento tumoral reproducible para el seguimiento en tiempo real y la evaluación terapéutica.

Inyección subcutánea de células de cáncer colorrectal humano en ratones desnudos atímicos para evaluar la eficacia antitumoral

Aprende a establecer un modelo ortotópico de cáncer colorrectal en ratón mediante inyección de células o trasplante de tumor en el ciego. Este método permite estudiar la progresión natural de la enfermedad y evaluar nuevos agentes terapéuticos.

Modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

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