Controlado lesiones laceración cervical en ratones

El objetivo general del experimento es generar una lesión de laceración reproducible de la médula espinal del ratón. Esto se logra exponiendo la lámina cervical posteriormente cuando el animal se coloca en el aparato del sistema de lesiones de Louisville. Como segundo paso, se utiliza un dispositivo estabilizador especialmente diseñado para la fijación de la vértebra objetivo de la columna vertebral del ratón.

A continuación, se identifica la médula espinal diana entre los arcos laminares tras la extirpación del ligamento flavum al final. La sección del hemi dorsal cervical a una profundidad de 0,75 milímetros se crea con precisión con el uso de una cuchilla oscilante y un micro destornillador. La mayor ventaja de la técnica que hemos desarrollado en el laboratorio es la creación de un método muy preciso para producir una lesión medular por laceración.

Esto es importante porque las técnicas que se han utilizado hasta ahora, es decir, las tijeras o el bisturí, han creado problemas que son métodos incompletos e inexactos de lesión medular. Ahora tenemos métodos para evitar la contusión de la médula espinal, el desplazamiento de la médula espinal lejos del dispositivo lacerante y la hemorragia excesiva que se produce en la lesión de la médula espinal. Mediante el uso de esta técnica, somos capaces de crear un método muy preciso que evita el método de estimación visual de la profundidad de la lesión medular.

Mediante el uso de esta técnica, creemos que podemos revolucionar los métodos experimentales de lesión de la médula espinal utilizados en el modelo de laceración, que puede ser inherentemente importante en la regeneración de los axones, así como en la creación de una cura para la lesión de la médula espinal. Comenzando este procedimiento esterilizando los siguientes instrumentos quirúrgicos, dos o tres pares de pinzas, tres pares de microtijeras, una aguja de calibre 30, una sutura micro URS y un portaagujas, clips para la piel y un aplicador de clips. Luego desinfecte el estabilizador de la columna vertebral y anestesie al ratón con un cóctel de ketamina, xilacina o trietanol intraperitoneal.

A continuación, afeita el pelo del cuello del ratón. Limpiar la piel con una solución de povidona yodada y alcohol al 70%. A continuación, transfiera el ratón a la mesa de operaciones con una almohadilla térmica precalentada.

Aplique ungüento oftálmico en los ojos para prevenir la sequedad de la córnea. Después de la inducción anestésica, realice una incisión en la piel de la línea media cervical posterior desde el opuesto hasta la grasa subcutánea de la columna cervical inferior. Bajo el microscopio, haga una incisión en la piel de la línea media entre los músculos trapecios en C dos y retraiga lateralmente los músculos semifinalistas de la cabeza.

A continuación, extienda la disección del músculo de la línea media codularmente a la apófisis espinosa T dos que sirve como un punto de referencia confiable. Separa los músculos de la apófisis espinosa T. A continuación, retire la porción cartilaginosa de la apófisis espinosa T dos.

Después, diseccione los músculos paraespinales de los arcos laminares bilateralmente desde C cuatro hasta T dos con un par de microtijeras. Comienza adyacente a las apófisis espinosas y se extiende sobre ambos arcos laminares hasta las articulaciones facetarias. Después de exponer las facetas laterales, coloque el ratón en el canal en forma de U del estabilizador de la columna vertebral del ratón.

A continuación, coloque los brazos de acero inoxidable del estabilizador del ratón por debajo de las facetas expuestas bilateralmente. Una vez que los brazos estén en su lugar, apriete los tornillos de mariposa de los brazos de acero para inmovilizar la columna vertebral bajo el microscopio. Retire el ligamento entre los arcos laminares C cinco y C seis para exponer la duramadre subyacente entre el espacio interlaminar.

Utilice una aguja de calibre 30 para crear una pequeña dur otomía y unas micro tijeras para expandir la dura. La médula espinal ya está lista para someterse a la lesión de laceración controlada. En este procedimiento, coloque el estabilizador de la columna vertebral y el ratón en la etapa del aparato del sistema de lesiones de Louisville en la que se adjunta una cuchilla con su posición controlada por microcontroladores.

Capaz de tres rangos de movimiento para realizar una lesión de sección HEMI dorsal entre la lámina C cinco a seis con una cuchilla plana de 2,3 milímetros unida al oscilador. Ajuste la amplitud de la cuchilla oscilante a 0,5 milímetros, ya que las amplitudes más bajas pueden disminuir la facilidad de laceración completa del cordón. Luego encienda el interruptor vibrador de cuchilla debajo del microscopio, coloque la médula espinal del mouse directamente debajo de la cuchilla vibratoria.

A continuación, eleve la plataforma hacia la cuchilla oscilante con el registro de control del microcontrolador. La posición cero cuando la cuchilla apenas toca la vena dorsal de la médula espinal, la profundidad de la laceración de la médula espinal se mide en relación con la posición cero. A continuación, eleve la posición del escenario con el control del microcontrolador.

Un giro de 360 grados de la perilla del microcontrolador eleva el escenario en 0,25 milímetros. Por lo tanto, se crea una lesión de la sección dorsal del hemi de 0,75 milímetros girando la perilla del microcontrolador tres veces a medida que la cuchilla comienza a lacerar la médula espinal y lubricar el campo quirúrgico con irrigación salina. Una vez que se haya alcanzado la profundidad predeterminada, apague el interruptor del vibrador, baje la etapa que soporta el mouse y la abrazadera de la cuchilla de corte.

Extraiga la sangre irrigando con solución salina sobre el sitio quirúrgico. A continuación, seca la zona con bastoncillos de algodón, ya que la hemostasia suele producirse en un minuto. Al final, retire el ratón del estabilizador de la columna vertebral y cierre la piel con acero inoxidable.

Clips de Michelle. La columna cervical se fija colocando los brazos debajo de las facetas laterales y luego bloqueando los tornillos de mariposa como se muestra en esta figura, la duramadre queda expuesta entre el laminado de C cinco a seis C, seis a siete y C siete a T uno sin ninguna remoción de hueso. Aquí se muestran las vistas sagitales de cuatro laceraciones de la médula espinal dorsal a profundidades de 0,5, 0,8, 1,1 y 1,4 milímetros.

Indican el alto grado de precisión utilizando esta técnica. Uno de los problemas que ha sido inherente a la creación de lesiones medulares ha sido la falta de estabilización de la columna cervical. Utilizando el estabilizador de columna que ha sido desarrollado por nuestro grupo, ahora somos capaces de crear una columna cervical absolutamente inmóvil.

Esto permitirá la mejora de la lesión de la médula espinal mediante la contusión de la médula espinal, inyecciones de la médula espinal, así como el trasplante de células en la médula espinal para todos los métodos de investigación de la médula espinal.