Name: Un modelo de pez cebra de la diabetes mellitus y la memoria metabólica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Aprende a generar un modelo de diabetes mellitus tipo 1 en pez cebra para investigar la memoria metabólica y sus bases epigenéticas in vivo. Este método permite estudiar la persistencia de complicaciones diabéticas.

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Este trabajo fue apoyado por una beca de investigación de la Fundación Familia Iacocca, Rosalind Franklin University fondos iniciales, y los Institutos Nacionales de Salud Grant DK092721 (a RVI). Los autores desean dar las gracias a Nikki intina para la ayuda en la preparación de manuscritos.

Todos los procedimientos se realizaron siguiendo las pautas descritas en &quot;Principios de Cuidado de Animales de Laboratorio&quot; (Institutos Nacionales de la Salud de la publicación no. 85-23, revisado 1985) y la aprobación Universidad Rosalind Franklin Cuidado de Animales institucional y el uso de animales Comité de protocolo 08-19. Hay 2 abreviaturas importantes que se utilizan en este manuscrito. 1) DM: se refiere a los peces que se encuentran en un estado de hiperglucemia aguda (300 mg / dl) y han sido por lo menos 3 semanas. 2) MM: se refiere a los peces que fueron 21 días (ver protocolo) DM pescado y se deja restaurar el control glucémico mediante la regeneración del páncreas. Esto se logra dentro de (14) días a partir de la eliminación del fármaco. Los peces se consideran peces MM desde este punto en adelante. También es importante tener en cuenta que el pescado que se conoce como control se tratan de manera idéntica como pescado DM o MM en términos del número de inyecciones (solución salina solamente), los tiempos de incubación a las temperaturas diferentes y el número y el momentode las amputaciones de la aleta caudal. 1. Generación de pez cebra con diabetes mellitus, Fish DM <ol><li> Preparar la recuperación y tanques de agua anestésicos. La recuperación es agua peces de agua normal. Para agregar suficiente agua anestésico 2-fenoxietanol para que una dilución 1:1.000 en los peces de agua normal se alcanza. </li><li> Preparar una solución de 0,3% (en una campana de humos) de estreptozocina (STZ) mediante la adición de 6 mg de STZ a 2 ml de cloruro de sodio 0,09% e inmediatamente colocar la solución en hielo. Esto proporcionará suficiente solución de inyección para la inyección de aproximadamente 20 peces en 20 min. Si supera los 20 minutos, detener y hacer una nueva solución STZ antes de continuar. En una alícuota separada tubo suficiente solución salina para peces de control. Una vez que la STZ se solubiliza todos los pasos subsiguientes no requieren el uso campana de humos. </li><li> Llene una jeringa de ½ cc equipada con una aguja de calibre 27 1/2 con las soluciones de STZ o control que garantice que no haya burbujas de aire atrapadas. </li><li> AnestesiaTize cada pez individual colocando el pez en el agua anestésico, y espere hasta que su movimiento de natación cesa (1-2 min). </li><li> Una vez anestesiaron brevemente colocar el pescado sobre una toalla de papel para absorber el exceso de agua, colocar el pescado en peso barco y medir la masa de los peces. </li><li> Coloque el pescado en una superficie firme (tapa plato Petri) para inyección. </li><li> Inyectar la STZ o solución de control en la cavidad peritoneal de los peces mediante la inserción de la aguja más allá del bisel en la cara posterior del peritoneo ventral. </li><li> 0,35 mg / g (350 mg / kg) de STZ deben ser entregados a cada pez y el volumen de la solución de 0,3% requerido se puede calcular de la siguiente manera. <ol class="lalpha"><li> Multiplicar la masa de pescado (g) por 0,35 para obtener la cantidad de STZ en mg requerida. </li><li> dividir el producto generado por encima de 3 para producir el volumen de la solución de 0,3% requerido para la inyección en l. Muestra: Para un pez 0,5 g: a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) 0,0175 / 0,058 = 3 ml= 58 l. El mismo volumen sin la STZ sería inyectado para un control de los peces. Una hoja de volúmenes a inyectar por masa de pescado se genera y se utiliza como referencia rápida. </li></ol></li><li> Después de la inyección colocar los peces en el tanque de recuperación de agua y supervisarlos para la actividad de natación normal. Una vez que esto se ha logrado el pescado se transfiere a un tanque vida normal que se mantiene en el intervalo de temperatura reducida de 22 ° C - 24 ° C. Esta reducción de temperatura es crítico para la inducción eficiente de la hiperglucemia (diabetes mellitus, DM). </li><li> Aunque la hiperglucemia se detecta dentro de 24 horas de la primera inyección, con el fin de inducir un estado de hiperglucemia prolongada muy alto el pez cebra requieren una fase de inyección frecuente inducción seguida de inyecciones semanales de mantenimiento tal como se muestra a continuación. </li></ol> Semana 1: 3 inyecciones (día 1, 3, 5), Semana 2: 1 inyección (día 12), Semana 3: 1 inyección (día 19), Semana 4 (Día 21) Realizarensayo de interés. En este punto, el pez cebra se considera que han estado en un estado de hiperglucemia prolongada y mostrar las complicaciones diabéticas de la retinopatía, la nefropatía y la regeneración también se deteriora la aleta. Estos se conocen como peces DM. Además, si se desea, el pescado se puede mantener en el estado hiperglucémico con inyecciones semanales de mantenimiento. Aproximadamente el 5% la muerte durante este proceso se debe esperar. 2. Extracción de sangre y el nivel de glucemia en ayunas (FBGL) Determinación <ol><li> Cada grupo de peces DM y control debe incluir suficiente pescado para determinar con precisión la FBGL promedio del grupo en este ensayo requiere que estos peces que ser sacrificado. </li><li> Preparar una etiqueta tubo de PCR para cada muestra de sangre que contiene 5 l de solución salina normal estéril. </li><li> Para la recolección de sangre, anestesiar los peces que el anterior, retire toda el agua, colocar el pescado sobre un portaobjetos de microscopio y utilizando un bisturí, quitar la cabeza de los pecesen la base del opérculo. </li><li> Recoger la sangre (hasta 2 l) que se libera de los peces en la diapositiva y rápidamente añadirlo a la 5 l de solución salina normal estéril pipeteando arriba y abajo para asegurarse de que la sangre no obstruye. Colocar inmediatamente la muestra en hielo. </li><li> Determinar el volumen de muestra de sangre mediante la medición del volumen total del líquido (solución salina + sangre) y después de restar la 5 l de solución salina. </li><li> Transferir 5 l de la sangre diluida a partir de cada tubo de PCR en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml y determinar la concentración de glucosa en sangre usando el Kit de Ensayo de Glucosa QuantiChrome. Esto se realiza siguiendo el protocolo del fabricante, sin excepción. Resultados esperados: normal / pescado de control 60 mg / dl y DM pescado 310 mg / dl. </li></ol> 3. Aleta caudal Regeneración Estudios <ol><li> Anestesiar pescado que se describe en 1.0-1.4. </li><li> Coloque el pescado en una tapa de la placa Petri y amputar la aleta caudal en una línea recta con un tamaño estéril10 escalpelo proximal a la primera lepidotrichia punto de ramificación durante la visualización de la aleta a través de un microscopio de disección. </li><li> Permiten a los peces recuperar como en 1,10 pero colocar el pescado a 33 º C para la fase de crecimiento regenerador del ensayo. Esta es una temperatura establecida para el análisis acelerado de la regeneración de la aleta. </li><li> Las aletas se pueden obtener imágenes en cualquier momento posterior a la amputación sin embargo que examinan rutinariamente el crecimiento regenerador a las 24, 28 y 72 horas después de trans-sección. </li><li> Anestesie pescado como antes (ver 1,0-1,4), coloque el pescado en un microscopio equipado con una cámara (nosotros usamos una Nikon SMZ-1500 equipado con una cámara Q-imagen) y recoge todas las imágenes de la aleta con una ampliación 1X con NIS elementos software . La aleta debe extenderse para formación de imágenes de modo que se extienda totalmente sin estirar o dañar el tejido y debe estar libre de cualquier gota de agua. Por consistencia siempre colocar el lado dorsal hacia la derecha. </li><li> Imprime imágenes y medir el gro regenerativaárea wth utilizando software Image J y el uso de una almohadilla de dibujo. Trace alrededor de toda el área de nuevo crecimiento y determinar el área. Cada medición se realizó cinco veces y se promediaron para asegurar la precisión de localización. Es importante que las imágenes utilizadas no tienen sombras o gotitas de agua dado que contribuyen a errores en la medición de la zona de derivación. </li><li> Medir la longitud de la zona de la amputación a lo largo del eje dorsal-ventral y dividir la superficie determinada en un 3,6 por esta medida. Esto permite que los peces de diferentes tamaños para ser comparados directamente. </li></ol> 4. Generación de Memoria Metabólica (MM) El pez cebra <ol><li> Iniciar un grupo de peces DM y sus controles apropiados como se describe en la sección 1. </li><li> A los 21 días determinar la FBGL para un subconjunto del grupo y dividir el pescado DM en 2 subgrupos. Continuar con inyecciones semanales STZ para uno de los grupos como los controles de DM para la duración del experimento. Cesar la inyección de STZ para el segundo grupo y incue el pescado a temperatura normal. Dentro de los 14 días estas pez cebra restaurará la insulina y la glucosa sanguínea normal de control a través de la regeneración del páncreas. Estos peces se llaman ahora MM (pescado memoria metabólica). </li><li> En el día 30 después de la eliminación del fármaco amputar las aletas caudales de control, DM y MM pescado a través del método descrito en el punto 3.2. </li><li> Volver pescado a las condiciones normales de agua para la regeneración de aleta durante 30 días. Esto permite el crecimiento de lo que el tejido plazo, memoria metabólica. </li><li> Al día 60 realizar una amputación segundos (como se describe en 3,2) en el tejido que se regenera en el período de 30 a 60 días y realizar el ensayo de regeneración aleta caudal (03.01 a 03.07) Figura 1. </li><li> Aislar tejido y realizar el ensayo de interés. Véase la Tabla 1 para un resumen de protocolo. </li></ol>

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

La diabetes mellitus es una enfermedad de desregulación metabólica, diagnosticado inicialmente como la hiperglucemia, que finalmente resulta en daño del vaso sanguíneo que conduce a muchas complicaciones que todos persistir incluso después de la euglucemia se logra mediante la intervención farmacéutica. Esta persistencia de las complicaciones que se conoce como memoria metabólica y varios estudios recientes han examinado el papel que juegan los mecanismos epigenéticos en este fenómeno. Aquí se han detallado un protocolo...

La diabetes mellitus (DM) es un problema de salud grave y creciente que da lugar a la esperanza de vida reducida debido a la enfermedad microvascular específica (retinopatía, nefropatía, neuropatía, curación lenta de heridas) y macrovasculares (enfermedad cardiaca y accidente cerebrovascular) Complicaciones 1. Una vez iniciadas, las complicaciones diabéticas continuará progresando sin interrupciones, incluso cuando el control glucémico se consigue 2,3 y este fenómeno se ha denominado memoria metabólica o el efecto legado. La presencia de este fenómeno fue reconocido clínicamente durante la década de 1990 como el &quot;The Diabetes Control and Complications Trial (DCCT)&quot; progresado y ya ha recibido el apoyo de múltiples ensayos clínicos adicionales 4,5,6,7,8,9,10, 11,12,13,14. Los modelos animales de DM han sido críticos para los descubrimientos relacionados con la fisiopatología de las complicaciones diabéticas y la memoria metabólica. De hecho, la persistencia de las complicaciones diabéticas se documentó por primera vez en un modelo canino de diabéticaretinopatía que desde entonces ha sido apoyado por varias líneas de evidencia experimental utilizando una variedad de sistemas de cultivo in vitro y modelos animales 15,16,17,18,19,20,21. Estos estudios muestran claramente que un período inicial de resultados hiperglucémicos en anomalías permanentes (incluyendo la expresión génica aberrante) de los órganos diana y / células mecánicamente sugiere la participación del epigenoma. Epigenomas consistirá en todas las modificaciones de la cromatina para un determinado tipo de células y son responsables de perfil único gen de una célula de expresión. Las modificaciones cromosómicas son dinámicos durante el desarrollo, la diferenciación de células de soporte, responden a estímulos externos, están mitóticamente establemente heredados 22,23 y puede ser alterado en la enfermedad 24,25,26. Estos mecanismos epigenéticos incluyen: después de la traducción modificaciones de las histonas y no histonas variante canónica de inclusión en octomers, cambios en la cromatina de acceso a través de la metilación del ADN y los genescontrol de la expresión a través de no codificante RNAs micro 27,28,29,30. En conjunto, los procesos epigenéticos permitir que las células / organismos para responder rápidamente a las cambiantes estímulos ambientales 31,32,33, también confieren la capacidad para la célula &quot;aprende&quot; estos encuentros, una vez que el estímulo se retira 23,22. Por lo tanto, como alteración de perfiles de expresión génica que resultan de los procesos epigenéticos son estables en ausencia de la señal (s) que los inició y se heredables a través de la división celular, que han adquirido gran interés como mecanismos moleculares subyacentes de patologías humanas, incluyendo la memoria metabólica. Los resultados que surgen en el contexto de la MS y la epigenética avances paralelos en otras enfermedades en las que una gran cantidad de cambios epigenéticos inducidos por la hiperglucemia producen notables cambios persistentes en las redes transcripcionales de las células (revisado en 34,35,36,37,38). El pez cebra ha sido durante mucho tiempo un organismo modelo principal para estudiantesdy desarrollo de los vertebrados sin embargo en los últimos 15 años ha experimentado un crecimiento exponencial en la utilización de este organismo para el estudio de las enfermedades humanas. 39. Modelos de pez cebra de la enfermedad humana han establecido que abarca una amplia gama de patologías humanas, incluyendo trastornos genéticos y las enfermedades adquiridas 40,41,42. Las muchas ventajas del pez cebra con respecto a otros organismos vertebrados modelo incluyen alta fecundidad, corto tiempo de generación, la transparencia a través de la edad adulta temprana, la reducción de los costos de vivienda y una serie de herramientas para la manipulación de genes. Además, debido a la conservación extensa de las vías genéticas y la fisiología celular entre los vertebrados y de la capacidad para llevar a cabo exámenes de drogas de alto rendimiento, el pez cebra se ha utilizado con éxito para el descubrimiento farmacéutico. Hemos desarrollado un modelo de pez cebra adulto de diabetes mellitus tipo I que usaban el medicamento diabetogénico, estreptozocina. Hemos caracterizado este modelo para mostrar que el pez cebra diabético not sólo muestran las conocidas complicaciones secundarias humanos pero, además, exponer regeneración extremidad afectada (regeneración aleta caudal) como consecuencia del medio ambiente hiperglucémico. Además, se ha informado que el pez cebra hiperglucémico volver a normalizar la glucemia dentro de las 2 semanas de eliminación del fármaco debido a la regeneración de células beta pancreáticas endógenas resultantes en un estado glucémico fisiológicamente normal. Sin embargo, en contraste, la regeneración de miembros en estos peces sigue siendo afectada en la misma medida que en el estado diabético agudo indicando esta complicación persiste y es susceptible a la memoria metabólica. El principal impulso para la generación de este modelo era proporcionar un sistema para estudiar los componentes epigenéticos mitóticamente estables que soportan el fenómeno de memoria metabólica en ausencia del ruido de fondo del entorno hiperglucémico anterior. A la conclusión del protocolo al que aquí los tejidos de pez cebra o selectivos y pueden ser procesados ​​por cualquier ensayo adecuado para la researchers necesita. Hemos utilizado con éxito este procedimiento para identificar los cambios persistentes en todo el genoma en la metilación del ADN inducidos por la hiperglucemia que se mantienen en la memoria de estado metabólico 21. Creemos que este modelo de pez cebra de diabetes mellitus tipo I tiene varias ventajas sobre los sistemas innovadores de otros modelos de examen de memoria metabólica. 1) Todos nuestros estudios pueden llevarse a cabo in vivo y como el pescado hiperglucémico anterior volver a la euglucemia a través de la regeneración de la producción de insulina endógena, que no requieren inyecciones de insulina exógena. Por lo tanto, esto evita los picos y valles de complicación en el control glucémico que pueden ocurrir en los animales que necesitan insulina exógena. 2) Como se ha descrito anteriormente, la estimulación de fondo desde el estado diabético anterior (es decir, la presencia continuada de la glucosilación avanzada de productos finales y reactivos marcadores de especies de oxígeno) son eliminados y por lo tanto, se puede examinar el puramente epigfactores Enetic de memoria metabólica. 3) Los experimentos se pueden realizar rápidamente, ya que toma aproximadamente 80 días a partir de la inducción de diabetes hasta que el examen memoria metabólica. 4) la regeneración Aleta caudal es experimentalmente muy accesible y permite una fácil manipulación genética y experimental para el que hay una gran variedad de herramientas. 5) la regeneración Aleta caudal proporciona un método muy simple y cuantificables para evaluar la memoria metabólica y por lo tanto permitirá el descubrimiento de fármacos futuro.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Estreptozocina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S0130 </td><td></td></tr><tr><td> 2 fenoxietanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P1126 </td><td></td></tr><tr><td> Bisturí (tamaño 10) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 089275A </td><td></td></tr><tr><td> Platos de Petri </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-13 </td><td></td></tr><tr><td> ½ cc jeringa, con una aguja de calibre 27 1/2 </td><td> Fisher Scientific </td><td> 305620 </td><td></td></tr><tr><td> QuantiChrome glucose kit de ensayo. </td><td> Sistemas de bioensayo </td><td> DIGL-100 </td><td></td></tr><tr><td> Cloruro de Sodio </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S3014 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio de disección </td><td> Nikon </td><td> TMZ-1500 </td><td> Cualquier microscopio de disección está bien. </td></tr><tr><td> Cámara de Imagen </td><td> Nikon </td><td> Q imágenes </td><td> Cualquier cámara es adecuada. </td></tr><tr><td> Image J software </td><td> Los Institutos Nacionales de la Salud </td><td> NIH Image </td><td></td></tr><tr><td> Elementos NIS </td><td> Nikon </td><td></td><td> Cualquier software de imágenes es adecuado. </td></tr></tbody></table>

un modelo de pez cebra de la diabetes mellitus y la memoria metabólica

A Zebrafish Model of Diabetes Mellitus and Metabolic Memory

La diabetes mellitus afecta actualmente a 346 millones personas y se prevé que aumente a 400 millones para el 2030. Evidencia desde el laboratorio y ensayos clínicos grandes escala ha revelado que el progreso complicaciones diabéticas sin obstáculos a través del fenómeno de la memoria metabólica incluso cuando el control glucémico se logra farmacéuticamente. La expresión génica puede ser alterada de forma estable a través de cambios epigenéticos que no sólo permiten a las células y los organismos para responder rápidamente a las cambiantes estímulos ambientales pero también confieren la capacidad de la célula de &quot;memorizar&quot; estos encuentros, una vez que el estímulo se retira. Como tal, los papeles que desempeñan estos mecanismos en el fenómeno de memoria metabólica se están estudiando actualmente. Hemos informado recientemente el desarrollo de un modelo de pez cebra de tipo I diabetes mellitus y caracterizado este modelo para demostrar que el pez cebra diabético no sólo mostrar las complicaciones conocidas secundarias, incluyendo los cambios asociadoscon la retinopatía diabética, nefropatía diabética y curación de la herida, pero también presentan regeneración afectada aleta caudal. Este modelo es único en que el pez cebra es capaz de regenerar su páncreas dañada y restaurar un estado euglucémico similar a lo que sería de esperar en post-trasplante de pacientes humanos. Además, múltiples rondas de amputación aleta caudal permiten la separación y el estudio de los efectos epigenéticos puros en un sistema in vivo sin posibles factores de complicación desde el estado diabético anterior. Aunque la euglucemia se consigue después de la regeneración de páncreas, la complicación de la diabetes secundaria de la regeneración de la aleta y la curación de heridas de piel persiste indefinidamente. En el caso de la regeneración de aleta alterada, esta patología se conserva incluso después de múltiples rondas de regeneración de aleta en los tejidos hija de aleta. Estas observaciones apuntan a un proceso subyacente epigenética existente en la memoria de estado metabólico. A continuación se presentan los métodos necesarios para pasar satisfactoriamente geneRate los grupos de memoria diabéticos y metabólicos de los peces y discutir las ventajas de este modelo.

El tipo I de pez cebra diabético no sólo muestran las complicaciones secundarias conocidas de la retinopatía y nefropatía, sino también, exhiben una complicación adicional: la regeneración alteración aleta caudal. Esta complicación más tarde persiste debido a la memoria metabólica en los peces que han restaurado el control normal de la glucosa después de un período de hiperglucemia. En la Figura 2A (control) y la Figura 2B (memoria metabólica) imágenes representativas de la regeneración...

Memoria metabólica es el fenómeno por el cual las complicaciones diabéticas persistir y progresar sin obstáculos, incluso después de euglucemia se logra farmacéuticamente. Aquí se describe un modelo de pez cebra diabetes mellitus, que es la única que permite el examen de los componentes epigenéticos mitóticamente transmisibles de memoria metabólica<em&gt; In vivo</em&gt;.

Un modelo de pez cebra de la diabetes mellitus y la memoria metabólica

Diabetes mellitus currently affects 346 million individuals and this is projected to increase to 400 million by 2030. Evidence from both the laboratory ...

El objetivo general de este procedimiento es generar un modelo de pez cebra de diabetes mellitus tipo uno, que puede utilizarse para descubrir la base molecular de las complicaciones de la diabetes mellitus y, más importante aún, determinar la base genética de su persistencia. Esto se logra primero induciendo hiperglucemia mediante una serie de inyecciones del fármaco diabetogénico STZ y la incubación de los peces a una temperatura reducida. A continuación, tras tres semanas, se determinan los niveles de glucosa en sangre en ayunas para asegurar que se haya inducido el estado hiperglucémico y se suspende el fármaco para iniciar la recuperación de las células beta.Luego, se amputa la aleta caudal y se permite su regeneración para aislar los componentes genéticamente transmisibles de la memoria metabólica y eliminar posibles factores complicantes del entorno hiperglucémico previo. Finalmente, se realiza un ensayo de regeneración de la aleta para documentar una reducción persistente en la regeneración de la aleta e identificar los cambios inducidos en el tejido seccionado mediante un ensayo de interés. La principal ventaja del modelo de pez cebra diabético frente a los modelos existen

a-zebrafish-model-of-diabetes-mellitus-and-metabolic-memory

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video describe la técnica de creación de un modelo de pez cebra para la diabetes mellitus tipo 1 con la ayuda del medicamento Streptozocin, para estudiar la fisiopatología de las complicaciones diabéticas y la memoria metabólica.

Tratamiento con estreptozocina: un modelo de pez cebra con diabetes mellitus tipo 1

Debido a que muchos modelos de pez cebra de enfermedades neurológicas y no neurológicas se estudian en los peces adultos en lugar de el embrión / larvas, hemos desarrollado un ensayo cuantitativo regenerativa línea lateral que se puede aplicar a modelos de enfermedad de pez cebra adultos. El ensayo implicó resolución en el neuromast 1) y 2) los niveles de células cabello individual.

Un ensayo para la línea lateral de regeneración en adultos de pez cebra

El pez cebra es un importante organismo modelo para el estudio de la homeostasis energética.  Mediante la utilización de un indicador redox sensible a NADH2, alamar Blue, hemos desarrollado un ensayo que mide la tasa metabólica de las larvas de pez cebra en un formato de placa de 96 pocillos y se puede aplicar al descubrimiento de fármacos o genes.

High Throughput<em&gt; Danio rerio</em&gt; Ensayo gasto energético

El pez cebra está emergiendo como un modelo valioso de procesamiento de lípidos en la dieta y enfermedades metabólicas. Se describen los protocolos de alimentación para larvas ricas en lípidos, imágenes en vivo de análogos lipídicos fluorescentes en la dieta y cuantificación de la ingesta de alimentos. Estas técnicas se pueden aplicar a una variedad de técnicas de detección, imágenes e indagación basada en hipótesis.

La alimentación de las larvas de pez cebra paradigma para la alta en grasas: Alimentación, imágenes en vivo, y Cuantificación de la ingesta de alimentos

Este trabajo describe métodos para establecer modelos de hiperglucemia aguda y crónica en el pez cebra. El objetivo es investigar el impacto de la hiperglucemia sobre los procesos fisiológicos, tales como la neurogénesis constitutiva y la inducida por lesión. El trabajo también destaca el uso de pez cebra para seguir moléculas radiomarcadas (aquí, [ 18 F] -FDG) utilizando PET / CT.

Modelos agudos y crónicos de la hiperglucemia en el pez cebra: un método para evaluar el impacto de la hiperglucemia en la neurogénesis y la biodistribución de las moléculas radiomarcadas

Aquí, discutimos un protocolo de método que permita un fácil análisis de la vasculatura retiniana del pez cebra adulto tg(fli:EGFP) como una lectura rápida en entornos de patologías vasculares a largo plazo vinculados a la neoangiogénesis y cambios estructurales.

Estudiar la Diabetes a través de los ojos de un pez: Microdissection, visualización y análisis de la vasculatura de retina de pez cebra de adulto tg(fli:EGFP)

Presentamos una cámara conductual diseñada para evaluar el rendimiento cognitivo. Proporcionamos datos que muestran que una vez adquirido, el pez cebra recuerda la tarea 8 semanas después. También mostramos que el pez cebra hiperglucémico ha alterado el rendimiento cognitivo, lo que indica que este paradigma es aplicable a los estudios que evalúan la cognición y la memoria.

La tarea de comportamiento de elección de tres cámaras utilizando el pez cebra como sistema modelo

Este protocolo no invasiva induce hiperglucemia en el pez cebra durante un tiempo de hasta 8 semanas. Usando este protocolo, un estudio profundizado de los efectos nocivos de la hiperglucemia puede ser hecho.

Inmersión alternativa en glucosa para producir hiperglucemia prolongada en el pez cebra

Una forma rápida de pantalla para los modificadores de melanoma utilizando un modelo de pez cebra tumor autóctona se presenta. Se aprovecha de la miniCoopR vector que permite la expresión de los genes candidatos de melanoma en los melanocitos. Un método para obtener gratis melanoma curvas de supervivencia, un ensayo de invasión, un protocolo para la tinción de anticuerpos de los melanocitos de escala y un ensayo de trasplante de melanoma se describen.

La detección de Modificadores melanoma utilizando un modelo de pez cebra Tumor autóctona

Se describe un protocolo para infusiones de glucosa y crónicas Intralipid en ratas. Este modelo puede ser utilizado para estudiar el impacto del exceso de nutrientes en la función del órgano y los parámetros fisiológicos.

Un modelo de infusión de nutrientes crónica en la rata

Aprende a generar un modelo de diabetes mellitus tipo 1 en pez cebra para investigar la memoria metabólica y sus bases epigenéticas in vivo. Este método permite estudiar la persistencia de complicaciones diabéticas.

Un modelo de pez cebra de la diabetes mellitus y la memoria metabólica

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