Modelos de ratón para Arteriosclerosis Graft

El objetivo general del siguiente experimento es trasplantar un vaso donante en la aorta abdominal de un receptor. El primer paso es diseccionar la aorta torácica del ratón donante. A continuación, se crean sitios anastomóticos en la aorta abdominal del ratón receptor.

A continuación, el vaso donante se implanta en la aorta abdominal receptora. En última instancia, se puede acceder al trasplante exitoso mediante la función motora intacta de la extremidad posterior del ratón receptor. Así que este modelo nos va a ayudar a entender la patogenia de la esclerosis arterial del injerto.

Y es un reto técnico, que requiere mucha práctica y que el paciente sea perfecto. Por lo tanto, la demostración del procedimiento estará a cargo del Dr. Chen y su asistente Louanne. Para comenzar, confirme la profundidad adecuada de la anestesia en el ratón donante.

Una vez anestesiado, coloque el ratón en posición supina sobre una bandeja bajo un microscopio quirúrgico. Limpie el tórax con lavados repetidos de yodo y alcohol después de exponer el corazón y enjuagarlo con solución salina, extirpe el corazón y los pulmones para exponer toda la longitud de la aorta torácica. Una vez visualizada, comience a diseccionar cuidadosamente la aorta torácica lejos del tejido circundante.

Cuando se alcancen las ramas lumbares, látelas cerca de la aorta con una sutura de seda antes de cortarlas. Cuando se libere del tejido circundante, extirpe toda la aorta torácica. Una vez aislada, enjuague la aorta donante con solución salina heparinizada y guárdela en esta solución en hielo hasta el trasplante.

Después de asegurar una anestesia adecuada en el ratón receptor, afeitar el pelaje de la región abdominal anterior. Cubra los ojos con ungüento oftálmico y limpie el área como se vio antes. Cuando esté listo, coloque el mouse en posición supina en una bandeja debajo de un microscopio operativo.

Haga una incisión en la pared abdominal en la línea media desde el xifoides hasta el pubis, y luego use un retractor para separar la pared y exponer la cavidad abdominal. Una vez expuestos, envuelva los intestinos en una gasa humedecida con solución salina y empújelos hacia arriba y lejos de la cavidad abdominal. Use más gasa humedecida con solución salina para envolver las áreas abdominales restantes y úsela para retraer el recto hacia el lado derecho del abdomen. A continuación, mueva los órganos reproductivos hacia abajo.

Recuerde mantener húmedos los tejidos expuestos aplicando solución salina. Identificar regularmente la aorta infrarrenal localizada proximal al vaso renal y distal a la bifurcación aórtica roma. Diseccionarlo cuidadosamente para separarlo de la vena inferior cva.

Identifique, lige y corte todas las ramas pequeñas que se originan en este segmento de la aorta. Una vez aislado el segmento aórtico, se coloca una pinza vascular en cada extremo a una distancia aproximada de cinco milímetros. A continuación, cree los sitios anastomóticos seccionando la aorta abdominal entre las pinzas.

Con unas microtijeras afiladas, reseca un pequeño segmento de la aorta desde un extremo cortado para acomodar el injerto aórtico del donante. Enjuague los segmentos aórticos entre las pinzas con solución salina heparinizada para eliminar la sangre residual. Recuerde irrigar periódicamente ambas muestras aórticas con solución salina heparinizada durante todo el procedimiento.

A continuación, seccione ambos lados de la aorta donante para crear un injerto de segmento de 2,5 milímetros de longitud para el trasplante. Coloque el injerto aórtico del donante en su posición, alineando los extremos proximal y distal para suturas continuas. Coloque primero las suturas de los tirantes en las posiciones de las tres y las nueve en punto de ambos extremos.

A continuación, una los bordes cortados con tres o cuatro suturas continuas y ata las suturas continuas a las suturas atirantadas con un nudo doble para suturas interrumpidas. Construya cuatro sitios de anastomosis en las posiciones de las tres y las nueve en punto de ambos lados del injerto. Primero. A continuación, une los bordes cortados con tres o cuatro puntos colocados entre cada uno de estos sitios.

Una vez que las suturas estén en su lugar, suelte la pinza distal para permitir el flujo retrógrado en el injerto. Identifique los sitios de sangrado y haga puntos adicionales en tres minutos. Cuando se logre una hemostasia satisfactoria, libere el amperaje de pinza proximal.

La permeabilidad de los injertos puede confirmarse por la presencia de pulsaciones vigorosas. Si la pulsación disminuye, inyecte heparina en el vaso para prevenir la trombosis. Cuando esté listo, regrese los intestinos a la cavidad abdominal y suture las capas musculares y de piel para cerrarlas.

Coloque el ratón receptor en una jaula tibia y limpia y vigile durante una o dos horas hasta que recupere la conciencia. Evaluar la función motora del ratón después de la recuperación y nuevamente, al segundo día, una cirugía de trasplante es exitosa si no se observa disfunción de las extremidades traseras. El análisis histológico de los injertos de arteria tomado cuatro semanas después de la cirugía reveló un aumento del grosor de la pared del vaso en las receptoras de un donante masculino.

Sin embargo, no se observó arteriosclerosis de injerto en el grupo de hombre a hombre. En este ejemplo, la arteria torácica de un donante masculino se trasplantó a un ratón con interferón gamma knockout, y luego se indujo la expresión de interferón gamma en el ratón receptor. Antes de que se tomaran las muestras.

Unas semanas más tarde, el análisis histológico de los injertos de arteria muestra que no se observó arteriosclerosis del injerto en el grupo tratado. Ahora ya sabes cómo hacer esta cirugía. Sigue intentándolo.