5/6th nefrectomía en combinación con dieta alta en sal y el óxido nítrico sintasa inhibición para inducir la enfermedad renal crónica en la rata Lewis

El objetivo general de este procedimiento es inducir enfermedad renal crónica en la rata Lewis. Esto se logra administrando primero el bloqueador de óxido nítrico, NG Nitro, L arginina o LNNA durante un período P de cuatro semanas. A continuación, se extirpa todo el riñón derecho.

Luego, una semana después, se extirpan dos tercios del riñón izquierdo. Finalmente, mientras se trata con LNNA y una dieta alta en sal, se hace un seguimiento del desarrollo de insuficiencia renal en la rata a lo largo del tiempo. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran la enfermedad renal crónica establecida a través de la recolección de orina para la medición de proteínas y hematocrito y UIA en sangre, plasma y/o orina y presión arterial sistólica.

La función renal se determina en última instancia por la inulina y la tasa de aminoácidos paraaminoácidos de la cadera, o aclaramiento de HAP. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la nefrología, como una mejor comprensión de la patología de la ERC, y se puede utilizar para estudiar el efecto de las intervenciones terapéuticas cuatro semanas antes del procedimiento inicial de nefrectomía. Comience a administrar 20 miligramos por litro del inhibidor de la óxido nítrico sintasa LNNA en el agua de bebida de la rata.

De acuerdo con esta línea de tiempo. Antes de comenzar el procedimiento, use alcohol al 70% para desinfectar la mesa. Para prepararse para la cirugía, comience por esterilizar los siguientes instrumentos: una manta, una pinza de tejido de estudiante de 12 centímetros con uno o dos dientes, una pinza de patrón estándar de estudiante, dos pinzas simkin, una tijera de mayo, una tijera de iris de estudiante y un soporte de aguja Olson heger con tijeras.

A continuación, tenga listo el siguiente inventario. Una mesa de operaciones con almohadilla calefactora y lámpara de oxígeno y tejidos de flúor iso. Una máquina de afeitar, los instrumentos quirúrgicos estériles de cinco por cinco y 10 por 10, gasas estériles, 70% de alcohol, solución de cloruro de sodio al 0,9%, una jeringa de un mililitro, agujas de 25 agujas, almohadillas de espuma de gel 4.0 y 5.0, suturas de Vicryl, 0.03 miligramos por kilogramo, buprenorfina y una jaula limpia para las ratas después de la cirugía.

Después de inducir la anestesia en una cámara de inducción con 4% de flúor iso y administrar pre analgesia. Si es necesario, transfiera la rata a la almohadilla térmica en su lado izquierdo sobre la mesa y ventile con un cono de nariz con una mezcla de 2% de isof, flúor y un litro de oxígeno. Afeita el flanco de la rata y usa alcohol para desinfectar el sitio quirúrgico.

Dado que la cirugía se lleva a cabo en un ambiente semiestéril, desinfectamos la piel roja solo con alcohol para una preparación más estéril. Se puede usar frotar con Betadine, colocar una gorra para la cabeza y una mascarilla, luego lavarse y desinfectarse las manos antes de ponerse guantes quirúrgicos estériles. A continuación, con unas pinzas anatómicas y unas tijeras romas, haz una incisión de uno a un centímetro y medio paralela a las costillas.

Luego, con una disección roma de los músculos de la espalda, exponga el riñón derecho. Una vez que el polo inferior del riñón sea visible, use las pinzas pequeñas y romas para agarrar con cuidado el tejido graso perren. Luego use fórceps para tirar suavemente de la grasa perren, teniendo cuidado de no perturbar la glándula suprarrenal y exteriorizar el riñón para separar el riñón de la glándula suprarrenal.

Coloque una pinza en el sitio medial del tejido graso y mueva suavemente el tejido hacia arriba entre la glándula suprarrenal y el riñón. Coloque suavemente el riñón sobre una gasa y limpie cualquier grasa circundante y tejido conectivo. Identifique la arteria y la vena renal y de forma vaga.

Coloque una ligadura con un solo nudo alrededor de los vasos para evitar que la ligadura se deslice. Después de cortar, mueva el nudo suelto con cuidado a lo largo de los vasos hacia la aorta, aproximadamente 0,5 centímetros para crear espacio entre el riñón y el nudo. A continuación, haz dos nudos dobles sin cortar los extremos de la ligadura.

Si la profusión se detiene con éxito, el color del riñón se volverá marrón inmediatamente. A continuación, corte los vasos renales cerca del riñón y extráigalo. Tire suavemente de los extremos largos de la ligadura para comprobar si hay sangrado de los vasos renales.

La ligadura debe permanecer en su lugar en el vaso. Corta los extremos largos de la ligadura. Los vasos renales remanentes se retraerán hacia la cavidad abdominal.

Utilice inmediatamente las suturas de running 5.0 Vicryl para cerrar el músculo esquelético en la extremidad trasera. Por vía intramuscular, inyecte 0,03 miligramos por kilogramo de buprenorfina. A continuación, utilice las suturas intracutáneas 4.0 Vicryl para cerrar la piel.

A continuación, seque el riñón extirpado y péselo. Permita que la rata se recupere en una jaula solitaria limpia, colocada a mitad de camino sobre una almohadilla térmica con acceso a comida y agua, y vigílela de acuerdo con el protocolo de texto. Siete días después.

En preparación para una segunda cirugía, calcule el peso de aproximadamente dos tercios del riñón derecho y prepare pequeños trozos de espuma de gel. Repita el procedimiento mostrado para exteriorizar el riñón izquierdo y separar la glándula suprarrenal de él. Coloque unas tijeras afiladas alrededor del polo superior del riñón izquierdo y reseque el polo superior de una sola vez, cubra inmediatamente con un trozo de espuma de gel y ejerza una presión leve con una gasa estéril.

A continuación, reseca el polo inferior del riñón y cúbrelo de forma similar para evitar la formación de coágulos en la piel. Levante el riñón y use una gasa estéril para mantener una presión leve sobre ambas almohadillas de espuma de gel hasta que se detenga el sangrado. Si el sangrado persiste en otra almohadilla de espuma, coloque el riñón remanente con las almohadillas de espuma de gel adherentes dentro del abdomen y cierre el músculo y la piel.

Siga el mismo procedimiento descrito anteriormente para monitorear la recuperación y albergar a la rata. Después de la nefrectomía subtotal, queda aproximadamente una sexta parte de la masa renal total. Esta figura muestra el porcentaje calculado de masa renal extirpada del riñón derecho con media y desviación estándar.

En nuestros experimentos anteriores en la semana siguiente, se produce una hipertrofia de nefrectomía conjunta del riñón izquierdo, lo que resulta en una ligera subestimación de la cantidad preferida de tejido renal que debe extirparse, que se basó en el peso calculado del riñón derecho. Sin embargo, dado que no es posible determinar el peso del riñón izquierdo, esta es la forma más precisa de extirpar alrededor de 56 de la masa renal. La progresión de la insuficiencia renal se rastrea mediante la recolección de orina para la medición de proteínas y creatinina, sangre para la urea plasmática y la creatinina y la presión arterial sistólica.

Se puede calcular el aclaramiento de creatinina, pero se tiende a subestimar la disminución de la TFG debido a la extensa secreción tubular de creatinina en ratas, lo que subraya la importancia del método de referencia para determinar la función renal por aclaramiento de inulina y HAP. El aclaramiento de inulina y PIH se calcula a partir de su concentración en la muestra de orina, el caudal urinario y su concentración plasmática. Con el tiempo, las ratas con enfermedad renal crónica o ERC desarrollan hipertensión, anemia EMIA, urea proteica, una disminución significativa en la tasa de filtración glomerular y un flujo plasmático renal efectivo.

Después de seis semanas se ha desarrollado la ERC establecida, que es un punto de tiempo adecuado para probar las intervenciones de rescate con mayor tiempo, se observa una fuerte progresión de la hipertensión y la urea proteica, mientras que el hematocrito y la función renal muestran un deterioro leve. Otros síntomas en los que no nos centramos en nuestros experimentos son el trastorno y el metabolismo del fosfato de calcio y los lípidos, y muchos otros que dependen de la cepa de las ratas. El desarrollo de la ERC puede variar marcadamente con la rata de Lewis utilizada aquí.

Se añadió una dieta alta en sal y un bloqueador de óxido nítrico para inducir hipertensión y disfunción endotelial. Una vez pequeño paso. Esta técnica se puede realizar en aproximadamente 50 a 20 minutos si se realiza correctamente.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo inducir la enfermedad renal crónica en los rojos sueltos mediante la realización de una nefrectomía subyugada escalonada.