5/6th nefrectomía en combinación con dieta alta en sal y el óxido nítrico sintasa inhibición para inducir la enfermedad renal crónica en la rata Lewis

El objetivo general de este procedimiento es inducir enfermedad renal crónica en la rata Lewis. Esto se logra primero administrando el bloqueador del óxido nítrico, NG Nitro, L arginina, o LNNA durante un período de cuatro semanas. A continuación, se extirpa por completo el riñón derecho.

Luego, una semana después, se extraen dos tercios del riñón izquierdo. Finalmente, mientras se trata con LNNA y una dieta rica en sal, se sigue la evolución de la insuficiencia renal en la rata a lo largo del tiempo. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestren una enfermedad renal crónica establecida mediante la recolección de orina para la medición de proteínas y hematocrito, así como de la AIU en sangre, plasma y/o orina y la presión arterial sistólica.

La función renal se determina finalmente mediante la inulina y la tasa de ácido paraaminohipúrico, o aclaramiento de PAH. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la nefrología, como una mejor comprensión de la patología de la ERC, y puede utilizarse para estudiar el efecto de intervenciones terapéuticas. Cuatro semanas antes del procedimiento inicial de nefrectomía, comenzar a administrar 20 miligramos por litro del inhibidor de la óxido nítrico sintasa LNNA en el agua de bebida de la rata.

De acuerdo con esta cronología. Antes de comenzar el procedimiento, utilice alcohol al 70 % para desinfectar la mesa. Para prepararse para la cirugía, comience por esterilizar los siguientes instrumentos: una pinza para tejidos estudiantil con una manta de 12 centímetros y uno o dos dientes, una pinza estudiantil de patrón estándar, dos pinzas de Simkin, una tijera Mayo, una tijera estudiantil para iris y un portagujas Olson Heger con tijeras.

Luego prepare el siguiente inventario. Una mesa de operaciones con almohadilla térmica y lámpara de oxígeno e isoflurano, tejidos. Una afeitadora, los instrumentos quirúrgicos estériles, gasas estériles de 5 por 5 y 10 por 10, alcohol al 70 %, solución de cloruro de sodio al 0,9 %, una jeringa de un mililitro, agujas de calibre 25, almohadillas de espuma de gel, suturas Vicryl 4.0 y 5.0, buprenorfina 0,03 miligramos por kilogramo y una jaula limpia para las ratas después de la cirugía.

Después de inducir la anestesia en una cámara de inducción con 4% iso fluorina y administrar preanalgesia. De ser necesario, transfiera la rata a la almohadilla calefactora sobre su lado izquierdo sobre la mesa y ventile con una boquilla nasal usando una mezcla de 2% isof, fluorina y un litro de oxígeno. Afeite el flanco de la rata y use alcohol para desinfectar el sitio quirúrgico.

Dado que la cirugía se realiza en un entorno semiestéril, desinfectamos la piel roja únicamente con alcohol para una preparación más estéril. Se puede usar frotis con Betadine, colocar una gorra quirúrgica y una mascarilla, luego lavar y desinfectar las manos antes de ponerse guantes quirúrgicos estériles. A continuación, utilizando fórceps anatómicos y tijeras romas, realice una incisión de uno a un centímetro y medio de longitud, paralela a las costillas.

Luego, mediante disección roma de los músculos de la espalda, exponga el riñón derecho. Una vez visible el polo inferior del riñón, use la pinza roma pequeña para agarrar cuidadosamente el tejido de grasa perirrenal. A continuación, use la pinza para tirar suavemente de la grasa perirrenal, teniendo cuidado de no alterar la glándula suprarrenal y exteriorizar el riñón para separarlo de la glándula suprarrenal.

Coloque una pinza en el sitio medial del tejido adiposo y mueva suavemente el tejido hacia arriba entre la glándula suprarrenal y el riñón. Coloque suavemente el riñón sobre una gasa y limpie cualquier tejido adiposo y conectivo circundante. Identifique la arteria y la vena renal y afírmelas ligeramente.

Coloque una ligadura con un nudo simple alrededor de los vasos para evitar que se deslice. Después de cortar, deslice cuidadosamente el nudo suelto a lo largo de los vasos hacia la aorta, aproximadamente 0,5 centímetros, para crear espacio entre el riñón y el nudo. A continuación, ate dos nudos dobles sin cortar los extremos de la ligadura.

Si se detiene con éxito la profusión, el color del riñón se volverá inmediatamente marrón. Luego corte los vasos renales cerca del riñón y extráigalo. Tire suavemente de los extremos largos de la ligadura para verificar si hay sangrado en los vasos renales.

La ligadura debe permanecer en su lugar sobre el vaso. Corte los extremos largos de la ligadura. Los vasos renales remanentes se retraerán hacia la cavidad abdominal.

Utilice inmediatamente suturas continuas de Vicryl 5.0 para cerrar el músculo esquelético en la extremidad posterior. Inyecte 0,03 miligramos por kilogramo de buprenorfina por vía intramuscular. Luego, utilice suturas intradérmicas de Vicryl 4.0 para cerrar la piel.

A continuación, seque el riñón extirpado y péselo. Permita que la rata se recupere en una jaula individual limpia, colocada a la mitad sobre una placa calefactora con acceso a alimento y agua, y vigílela de acuerdo con el protocolo descrito en el texto. Siete días después.

Como preparación para una segunda cirugía, calcule el peso de aproximadamente dos tercios del riñón derecho y prepare pequeños trozos de espuma de gel. Repita el procedimiento mostrado para exteriorizar el riñón izquierdo y separe la glándula suprarrenal de este. Coloque tijeras afiladas alrededor del polo superior del riñón izquierdo y reseque el polo superior de un solo corte, cúbralo inmediatamente con un trozo de espuma de gel y ejerza una ligera presión con gasa estéril.

Luego reseque el polo inferior del riñón y cúbralo de manera similar para prevenir la coagulación en la piel. Levante el riñón y utilice gasa estéril para mantener una presión suave sobre ambas almohadillas de gel espuma hasta que deje de sangrar. Si la hemorragia persiste en otra almohadilla de espuma, coloque el riñón remanente con las almohadillas de gel espuma adheridas dentro del abdomen y cierre el músculo y la piel.

Siga el mismo procedimiento descrito anteriormente para monitorear la recuperación y alojar la rata. Después de la nefrectomía subtotal, queda aproximadamente una sexta parte de la masa renal total. Esta figura muestra el porcentaje calculado de masa renal removida del riñón derecho con la media y la desviación estándar.

En nuestros experimentos previos durante la semana posterior, ocurre una hipertrofia del riñón izquierdo tras la nefrectomía de unión, lo que resulta en una ligera subestimación de la cantidad preferida de tejido renal que debe eliminarse, la cual se basó en el peso calculado del riñón derecho. Sin embargo, dado que no es posible determinar el peso del riñón izquierdo, esta es la forma más precisa de eliminar aproximadamente cinco sextas partes de la masa renal. La progresión de la insuficiencia renal se sigue mediante la recolección de orina para la medición de proteínas y creatinina, sangre para urea plasmática y creatinina, y la presión arterial sistólica.

La depuración de creatinina puede calcularse, pero tiende a subestimar la disminución del FGR debido a la intensa secreción tubular de creatinina en ratas, lo que resalta la importancia del método patrón para determinar la función renal mediante la depuración de inulina y PAH descrito completamente por Conners. La depuración de inulina y PIH se calcula a partir de su concentración en la muestra de orina, la velocidad de flujo urinario y su concentración plasmática. Con el tiempo, las ratas con enfermedad renal crónica o ERC desarrollan hipertensión, anemia EMIA, proteinuria, una disminución significativa en la tasa de filtración glomerular y en el flujo plasmático renal efectivo.

Después de seis semanas, se ha desarrollado una EPR establecida, lo que constituye un punto temporal adecuado para evaluar intervenciones de rescate con mayor duración; en este periodo se observa una progresión marcada de la hipertensión y de la proteinuria, mientras que el hematocrito y la función renal muestran un deterioro leve. Otros síntomas no enfocados en nuestros experimentos incluyen alteraciones en el metabolismo del calcio y del fosfato y de los lípidos, y muchos otros dependiendo de la cepa de ratas. El desarrollo de la EPR puede variar notablemente según la rata Lewis utilizada aquí.

Se añadió una dieta alta en sal y un bloqueador del óxido nítrico para inducir hipertensión y disfunción endotelial. Un solo paso. Esta técnica puede realizarse en aproximadamente de 50 a 20 minutos si se realiza adecuadamente.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo inducir la enfermedad renal crónica en los loose reds mediante una nefrectomía subcapsular escalonada.