Desprendimiento de Retina modelo en roedores por inyección subretiniana de Hialuronato de Sodio

El objetivo general de este procedimiento es crear desprendimientos retinianos experimentales con una altura de desprendimiento reproducible y sostenida, sin hemorragia subretiniana. Esto se logra primero incidiendo la conjuntiva temporal en el limbo posterior para separar la conjuntiva de la esclerótica. En el segundo paso, se utiliza la punta de una aguja de calibre 30 para realizar una incisión escleral auto-sellable y una punción corneal.

A continuación, se inyecta urinato de sodio en el espacio subretiniano para separar la retina neurosensorial del epitelio pigmentario retiniano subyacente. En el paso final, se aplica pegamento de cianoacrilato sobre la herida escleral y se vuelve a colocar la conjuntiva en su posición original, reduciendo así el riesgo de fuga de urinato de sodio. Finalmente, se examina el fondo del ojo mediante un cubreobjetos para confirmar la creación de un desprendimiento retiniano en bolo sin hemorragia subretiniana.

Los métodos existentes para reducir el desprendimiento de retina en roedores pueden provocar variabilidad en la altura y persistencia del desprendimiento de retina, lo que lleva a medir tasas inconsistentes de muerte celular. Con esta técnica, se pueden crear desprendimientos de retina ampollares y persistentes de forma reproducible con un riesgo reducido de hemorroides subretinianas, permitiendo así un modelo confiable de desprendimiento de retina en roedores. El desprendimiento de retina experimental en roedores es relativamente sencillo de realizar, tiene un curso temporal razonable y es bastante similar a la enfermedad humana.

Por lo tanto, es un excelente modelo para estudiar los mecanismos de muerte celular de los fotorreceptores y las terapias para prevenir la pérdida de la visión. En los trastornos degenerativos de la retina, sé que la variación en la muerte celular de los fotorreceptores en la retina desprendida hace ventajoso crear un desprendimiento reproducible sin hemorragia subretiniana. Esto se debe a que la mayor duración del desprendimiento de la retina o la ocurrencia de hemorragia subretiniana puede afectar la muerte celular de los fotorreceptores.

Después de anestesiar un ratón de ocho semanas de edad, corte los bigotes del animal y luego dilate la pupila con una solución que contiene 5% de fenilefrina y 0,5% de tropicamida bajo un microscopio quirúrgico. Corte la conjuntiva del animal, aplique anestesia tópica con una solución oftálmica de clorhidrato de proparacaína al 0,5%. Coloque al ratón en posición lateral con el hocico hacia el cirujano, y luego haga una incisión en la conjuntiva temporal en el limbo posterior, separando la conjuntiva de la esclerótica usando un par de pinzas.

Sujete la conjuntiva en el limbo para controlar el ojo. Luego, sostenga una aguja de calibre 30 con el bisel orientado hacia arriba. Utilice la punta de la aguja para crear un túnel a través de la esclerótica, penetrando la esclerótica hasta llegar a la coroides sin atravesar la retina.

A continuación, sosteniendo la aguja de calibre 30 paralela al iris, punce la córnea para reducir la presión intraocular. Ahora con el bisel orientado hacia abajo, inserte una aguja de calibre 33 conectada a una jeringa Hamilton de 10 microlitros en el espacio subretiniano e inyecte 3,5 microlitros de urinato de sodio.

Esto separará aproximadamente el 50 % de la retina neurosensorial del epitelio pigmentario retiniano subyacente. Utilizando fórceps, empuje la córnea alrededor de la punción corneal para permitir que el humor acuoso salga por la punción corneal, y luego use una espátula quirúrgica de celulosa para confirmar la ausencia de fugas por la herida escleral y reducir así el riesgo de fuga de urinato de sodio. Aplique pegamento de cianoacrilato sobre la herida escleral y luego vuelva a fijar la conjuntiva a su posición original.

Utilice un cubreobjetos para examinar el fondo de ojo y confirmar la creación de un desprendimiento retiniano en bolo sin hemorragia subretiniana. Finalmente, aplique una pomada antibiótica en el ojo para reducir el riesgo de infección. Mantenga al ratón sobre una almohadilla calefactora para prevenir la hipotermia.

Posterior a la presión arterial baja. Devuelva el animal a su jaula después de que despierte de la anestesia. Para evaluar la persistencia del desprendimiento de retina inducido mediante este protocolo, se realizaron secciones por criomicrotomía a los tres, siete y catorce días posteriores a la inducción del desprendimiento.

Se utilizaron seis ojos para cada punto temporal, hematoxilina y eosina. La tinción se empleó para visualizar las secciones, cada una de las cuales mostraba un bolo. Desprendimiento de retina que se acerca al cristalino.

Ningún ojo mostró signos de infección ni lesión del cristalino. Una vez dominada, esta cirugía puede realizarse en aproximadamente cinco minutos. Al intentar este procedimiento, es importante realizar cada paso con suavidad para evitar fugas de sodio, hemorragia subretiniana severa o lesión del cristalino, ya que todos estos factores pueden afectar la muerte de células fotorreceptoras en la retina desprendida. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo crear un desprendimiento de retina experimental en roedores con una altura reproducible y sostenida del desprendimiento, sin hemorragia subretiniana.