Desprendimiento de Retina modelo en roedores por inyección subretiniana de Hialuronato de Sodio

El objetivo general de este procedimiento es crear desprendimientos de retina experimentales con una altura de desprendimiento reproducible y sostenida sin hemorragia subretiniana. Esto se logra por primera incisión, la conjuntiva temporal en el limbo posterior para separar la conjuntiva de la esclerótica. En el segundo paso, se utiliza la punta de una aguja de calibre 30 para hacer una incisión escleral autosellante y una punción corneal.

A continuación, se inyecta orina de sodio en el espacio subretiniano para separar la retina neurosensorial del epitelio pigmentario de la retina subyacente. En el paso final, se coloca pegamento de cianoacrilato en la herida escleral y la conjuntiva se vuelve a unir a su posición original, lo que reduce el riesgo de fuga de orina de sodio en la sala. En última instancia, el fondo de ojo se examina con un cubreobjetos para confirmar la creación de un desprendimiento de retina en bolo sin hemorragia subretiniana.

Los métodos existentes para reducir el desprendimiento de retina en roedores pueden dar lugar a la variabilidad en la altura y la persistencia del desprendimiento de retina, lo que lleva a medir tasas de mortalidad celular inconsistentes. Con esta técnica, se pueden crear desprendimientos de retina ampollosos y persistentes reproducibles con un riesgo reducido de hemorroides subretinianas, lo que permite un modelo fiable de desprendimiento de retina en roedores. El desprendimiento experimental de retina en roedores es relativamente sencillo de realizar, tiene un curso de tiempo razonable y es bastante similar a la enfermedad humana.

Por lo tanto, es un gran modelo para estudiar los mecanismos de muerte de las células fotorreceptoras y las terapias para prevenir la pérdida de visión. En los trastornos degenerativos de la retina Se sabe que la variación de la muerte de las células fotorreceptoras en la retina desprendida, es ventajoso crear un desprendimiento reproducible sin hemorragia subretiniana. Esto se debe a que el aumento de la duración del desprendimiento de retina o la aparición de una hemorragia subretiniana pueden afectar a la muerte de las células fotorreceptoras.

Después de anestesiar a un ratón de ocho semanas de edad, recorte los bigotes del animal, luego dilate la pupila con una solución que contenga 5% de fenilrina y 0,5% trópico bajo un microscopio quirúrgico. Corte la clia del animal, aplique anestesia tópica, solución oftálmica de clorhidrato de propano al 0,5%. Coloque el ratón en posición lateral con la nariz hacia el cirujano y luego inci la conjuntiva temporal en el limbo posterior, separando la conjuntiva de la esclerótica con un par de pinzas.

Agarre la conjuntiva en el limbo para controlar el ojo. Luego, sosteniendo una aguja de calibre 30 con un bisel apuntando hacia arriba. Use la punta de la aguja para hacer un túnel a través de la esclerótica, penetrando la esclerótica en la coroides sin penetrar en la retina.

A continuación, sosteniendo la aguja de calibre 30 paralela al iris, perfore la córnea para reducir la presión intraocular. Ahora apuntando el bisel hacia abajo. Inserte una aguja de calibre 33 conectada a una jeringa Hamilton de 10 microlitros en el espacio subretiniano e inyecte 3,5 microlitros de orina de sodio.

Esto separará aproximadamente el 50% de la retina neurosensorial del epitelio pigmentario de la retina subyacente. Con fórceps, empuje la córnea alrededor de la punción corneal para permitir que el humor acuoso fluya fuera de la punción corneal y, a continuación, utilice una lanza quirúrgica de celulosa para confirmar la ausencia de fugas de la herida escleral y reducir el riesgo de fugas de orina de sodio. Coloque pegamento de cianoacrilato en la herida escleral y luego vuelva a unir la conjuntiva a su posición original.

Utilice un cubreobjetos para examinar el fondo de ojo y confirmar la creación de un desprendimiento de retina en bolo sin hemorragia subretiniana. Finalmente, aplique ungüento antibiótico en el ojo para reducir el riesgo de infección. Mantenga el mouse sobre una almohadilla térmica para evitar la temperatura corporal baja.

Posterior a la presión arterial baja. Regrese al animal a su jaula después de que se despierte de la anestesia. Para evaluar la persistencia del desprendimiento de retina realizado por este protocolo, se realizaron criosecciones a los días tres, siete y 14 después de la inducción del desprendimiento.

Se utilizaron seis ojos para cada punto de tiempo, hematina y eosina. Se utilizó la tinción para visualizar las secciones, cada una de las cuales mostraba un bolo. Desprendimiento de retina acercándose al cristalino.

Ningún ojo mostraba signos de infección o lesión en el cristalino. Una vez dominada, esta cirugía se puede realizar en unos cinco minutos Al intentar este procedimiento, es importante realizar cada paso con cuidado para evitar causar fugas de sodio, hemorragia subretiniana con mucha luz o lesión del cristalino, que pueden afectar la muerte de las células receptoras en la retina desprendida. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo crear un desprendimiento de retina experimental en roedores con una altura de desprendimiento reproducible y sostenida sin hemorragia subretiniana.