Name: In vivo MRI de 19F para el seguimiento de la célula (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-25T21:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Aprende a rastrear células marcadas con 19F en ratones mediante resonancia magnética in vivo. Este protocolo permite cuantificar células dendríticas inmunoterapéuticas sin señal de fondo confusa en entornos clínicos y preclínicos.

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Nos gustaría reconocer Nadine Henn y Arend Heerschap por su valiosa ayuda. Este trabajo fue apoyado por el Instituto Holandés de Medicina Regenerativa (NIRM, FES0908), el Encite programa FP7 de la UE (SALUD-F5-2008 a 201842) y TargetBraIn (SALUD-F2-2.012-279.017), una beca de la Fundación Volkswagen ( I/83 443), la Organización Holandesa para la Investigación Científica (Veni Vidi 700.10.409 y 917.76.363), ERC (Advanced Grant 269 019), y la Universidad de Radboud Nijmegen Medical Centre (AGIKO-2008-2-4).

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<li>Boehm-Sturm, P., Mengler, L., Wecker, S., Hoehn, M., Kallur, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+human+neural+stem+cells+with+19F+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of human neural stem cells with 19F magnetic resonance imaging.</a> PLoS One. 6, e29040(2011).</li>
<li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cytometry+of+antigen-specific+t+cells+using+%2819%29F%5BTitle%5D)+AND+%22MRI.+Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo cytometry of antigen-specific t cells using (19)F.</a> MRI. Magn. Reson. Med. , (2009).</li>
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<li>Boehm-Sturm, P., Pracht, E. D., Aswendt, M., Henn, N., Hoehn, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoehm-Sturm%2C+P+%22Proceedings+of+the+International+Society+for+Magnetic+Resonance+in+Medicine%22">Proceedings of the International Society for Magnetic Resonance in Medicine</a>. , Melbourne, Australia. (2012).</li>
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<li>Scheffler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pictorial+description+of+steady-states+in+rapid+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Concepts+Magn.+Res%22%5BJournal%5D)">A pictorial description of steady-states in rapid magnetic resonance imaging.</a> Concepts Magn. Res. 11, 291-304 (1999).</li>
<li>Firbank, M. J., Coulthard, A., Harrison, R. M., Williams, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+methods+for+measuring+the+signal+to+noise+ratio+on+MR+images%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">A comparison of two methods for measuring the signal to noise ratio on MR images.</a> Phys. Med. Biol. 44, 261-264 (1999).</li>
<li>de Chickera, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+dendritic+cells+with+SPIO+has+implications+for+their+subsequent+in+vivo+migration+as+assessed+with+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Labelling dendritic cells with SPIO has implications for their subsequent in vivo migration as assessed with cellular MRI.</a> Contrast Media Mol. Imaging. 6, 314-327 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses a revelar.

El protocolo descrito aquí describe el procedimiento general para el seguimiento in vivo de células 19 F resonancia magnética. A pesar de el método de co-incubación descrito, hay varios protocolos diferentes para etiquetar las células con un agente de 19 F. Sin embargo, la co-incubación se usa con más frecuencia y puede optimizarse por ejemplo, mediante la adición de agentes de transfección 6. El protocolo de etiquetado real de células dependerá del tipo de célula. Sólo...

En el seguimiento de células in vivo es esencial para la optimización y la supervisión de la terapia celular 1. Debido a su naturaleza no invasiva, tratamiento de imágenes ofrece excelentes oportunidades de observar las células in vivo. Imagen de Resonancia Magnética (IRM) es independiente de la radiación ionizante y permite una resolución de imagen superior y el contraste intrínseco de tejido blando. Seguimiento de células basada en RM ya se ha utilizado clínicamente para seguir las células dendríticas en pacientes con melanoma 2. MRI clínica convencional se lleva a cabo en el núcleo 1 H, presentes en el agua móvil en los tejidos. También es posible llevar a cabo resonancia magnética en otros núcleos activos, tales como 13 C, 19 F y 23 Na. Sin embargo, sólo el 19 F MRI se ha aplicado con éxito para el seguimiento in vivo de células, ya que ofrece la más alta sensibilidad después del 1 de H. La ausencia de la RM-detectable endógena 19 F en los tejidos permite una alta selectividad de la señal para lala detección de agentes de contraste exógenos 19 F y permite la cuantificación de la concentración de flúor directamente de los datos de imagen. Para una discusión detallada sobre 19F MRI, consulte 3-5. Una cuestión clave con 19 F RM es la necesidad de desarrollar y optimizar los marcadores adecuados de células 19 F, aunque se han desarrollado varias etiquetas, con una tendencia hacia los agentes multimodales 6. El protocolo se describe aquí se basa en los estudios realizados por nuestros grupos de 7-9, incluyendo los primeros artículos que describían in vivo cuantitativa 19 celular basada en RM F seguimiento 10,11. El procedimiento general de seguimiento celular utilizando 19 F RMN se resume en la Figura 1. Se describe un protocolo general para el etiquetado y la formación de imágenes de células dendríticas (DCs) utilizando un agente de contraste de perfluorocarbono a medida 8. El protocolo de formación de imágenes es generalmente aplicable a diferentes tipos de células, las etiquetas y los modelos animales. Lamodelo de tipo celular y animal descrito aquí debe tomarse sólo como un ejemplo, y por lo tanto no proporcionan información sobre el aislamiento de células y el etiquetado, sino que más bien se centran en el protocolo de obtención de imágenes. Las modificaciones serán necesarias para cada etiqueta, tipo de célula, modelo animal, y la configuración de la imagen, y estos se pueden encontrar en la literatura o pueden necesitar ser optimizado por los investigadores. Algunas modificaciones comunes se incluyen en la discusión.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><fuerte>REACTIVOS</fuerte></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MFCD00131855</td><td></td></tr><tr><td>TFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>76-05-1</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina (Ketavet)</td><td>Pfizer</td><td>778-551</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina (Rompun)</td><td>Bayer</td><td>QN05 cm92</td><td></td></tr><tr><td>Ophtosan </td><td>Produlab Pharma</td><td>2702</td><td>ungüento oftálmico</td></tr><tr><td colspan="4"><fuerte>Nombre del material</fuerte> </td></tr><tr><td>escáner de resonancia magnética</td><td>Bruker Biospec</td> Espectrómetro de RMN Bruker Biospec <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo mri de 19f para el seguimiento de la célula

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MRI permite el seguimiento cuantitativo de células sin el uso de la radiación ionizante. Es una técnica no invasiva que se puede aplicar a los seres humanos. Aquí se describe un protocolo general para el etiquetado de células, formación de imágenes y procesamiento de imágenes. La técnica es aplicable a diversos tipos de células y modelos animales, aunque en este caso nos centramos en un modelo típico de ratón para el seguimiento de las células inmunes murinos. Los temas más importantes para el etiquetado de las células se describen, ya que son relevantes para todos los modelos. Del mismo modo, los parámetros clave de formación de imágenes se enumeran, aunque los detalles pueden variar dependiendo del sistema de resonancia magnética y la configuración individual. Por último, se incluye un protocolo de tratamiento de la imagen para la cuantificación. Variaciones para esta y otras partes del protocolo, se evalúan en la sección de Discusión. Basándose en el procedimiento detallado se describe aquí, el usuario tendrá que adaptar el protocolo para cada tipo específico de células, etiqueta celular, modelo animal, y la configuración de imágenes. Tenga en cuenta que la pROTOCOLO también se puede adaptar para el uso humano, siempre y cuando se cumplan las restricciones clínicos.

Aquí se muestran los resultados típicos de un protocolo que implica la transferencia de 19 células marcadas con F mensajeras a un ganglio linfático de drenaje. Figura 2 muestra un espectro de RMN de 19 F 10 6 células marcadas utilizando una referencia TFA. La configuración de formación de imágenes se llevó a cabo como se describe en el protocolo (Figura 3). Para la formación de imágenes in vivo, se utilizó una referencia consistente en un cilind...

Se describe un protocolo general para el seguimiento de las células in vivo mediante resonancia magnética en un modelo de ratón con ex vivo las células marcadas. Un protocolo típico para el etiquetado de células, el procesamiento de adquisición de imágenes y la cuantificación se incluye.

In vivo MRI de 19F para el seguimiento de la célula

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

El objetivo general de este procedimiento es obtener imágenes y cuantificar el número de células marcadas con 19 F in vivo utilizando 19 FMRI. Esto se puede hacer en un entorno clínico o preclínico. Esto se logra marcando primero las células con un agente 19 F adecuado.En la mayoría de los casos, esto se hace ex vivo. El segundo paso es cuantificar el contenido de 19 F por celda, lo que se puede hacer usando 19 F y MR con una referencia conocida. Se supone que el contenido de 19 F por celda permanece constante durante el experimento, de lo contrario, se deben calcular los factores de corrección.A continuación, se obtienen imágenes del sujeto in vivo utilizando una H y 19 FMRI para localizar las células marcadas transferidas. Una referencia conocida y los parámetros de imagen apropiados son esenciales para la cuantificación a partir de los datos de imagen. El paso final es procesar los datos de la imagen para calcular el número de celdas.En la medida de lo posible, se pueden utilizar técnicas histológicas ex vivo u otras técnicas para corroborar los datos. En última instancia, se pueden utilizar 19 FMRI para el seguimiento celular in vivo para estudiar las células transferidas en té

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Investigación

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Para la evaluación de nuevas terapias con células madre es importante no invasiva vía las células inyectadas en vivo. Este video le mostrará cómo etiquetar células madre mesenquimales humanas embrionarias y con los agentes de contraste basados ​​en óxido de hierro en vivo para su posterior RM en vivo.

Etiquetado y hESCs hMSCs con nanopartículas de óxido de hierro para no invasivo en el seguimiento in vivo mediante RM

Este trabajo describe los procedimientos básicos de la no invasiva de animales pequeños MRI y...

No invasiva En Vivo Pequeños Animales MRI y MRS: Procedimientos básicos Experimental

El seguimiento de las células utilizando MRI ha ganado la atención notable en los últimos años. Este protocolo describe el etiquetado de las células dendríticas con flúor...

De las Migraciones células dendríticas mediante resonancia 19F / 1H Magnetic

La naturaleza de las interacciones entre las células madre hematopoyéticas y progenitoras (hspCs) y nichos de la médula ósea es poco conocido. Modificaciones de hardware personalizados y un protocolo de adquisición de múltiples pasos permiten el uso de dos fotones y microscopía confocal a la imagen ex vivo HSPCs etiquetados alojados dentro de las áreas de la médula ósea, las interacciones de seguimiento y el movimiento.

En Vivo Tracking 4-Dimensional de madre hematopoyéticas y células progenitoras en ratones adultos de calota de Médula Ósea

Los monocitos son reguladores clave de la inmunidad innata y desempeñan un papel crítico en la renovación del sistema fagocítico mononuclear periférico y en caso de inflamación. Este manuscrito describe el procedimiento de obtención de imágenes en tiempo real de la médula ósea calvaria del ratón para estudiar el mecanismo de movilización de monocitos.

Seguimiento de médula ósea de ratón monocitos<em&gt; En Vivo</em

Se describe un protocolo robusto para monitorear las poblaciones neuronales de Time-lapse vídeo-microscopía seguido basado en software de post-processing. Este método representa una poderosa herramienta para identificar acontecimientos biológicos en una población seleccionada durante los experimentos de imagen vivo.

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Ortotópico inyección intracraneal de células del tumor se ha utilizado en la investigación del cáncer para el estudio de la biología del tumor de cerebro, evolución, evolución y respuesta terapéutica. Presentamos la tomografía molecular fluorescencia de xenoinjertos tumorales, que proporciona en tiempo real imágenes intravital y cuantificación de un tumor masivo en modelos preclínicos de glioblastoma.

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Aprende a rastrear células marcadas con 19F en ratones mediante resonancia magnética in vivo. Este protocolo permite cuantificar células dendríticas inmunoterapéuticas sin señal de fondo confusa en entornos clínicos y preclínicos.

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