Guiada por imagen de ultrasonido de inyección intracardiaca de desarrollar un modelo de ratón de cáncer de mama metástasis cerebrales Seguido por Longitudinal MRI

El objetivo general de este procedimiento es utilizar la guía por ultrasonido para establecer un modelo de ratón de metástasis cerebral de cáncer de mama que luego pueda monitorizarse mediante resonancia magnética (MRI). Esto se logra recolectando células de cáncer de mama con tropismo cerebral e inyectándolas en el ventrículo izquierdo. Con la ayuda de la guía por ultrasonido, se monitoriza entonces el desarrollo de tumores intracraneales.

Mediante resonancia magnética (RM) y las metástasis se confirman mediante tinción con hematoxilina y eosina. En última instancia, la inyección precisa guiada por imágenes puede aumentar significativamente el éxito en el seguimiento, la formación y el desarrollo de metástasis cerebrales del cáncer de mama. La RM longitudinal permite un monitoreo no invasivo de la formación y el desarrollo del cáncer de mama.

Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Centro Médico de la Universidad del Suroeste de Texas. Para este protocolo, tenga listas las células M-D-A-M-B 2 31 B-R-G-F-P cultivadas en medio DMEM que contiene 10% FBS, 1% glutamina y 1% penicilina. Monitoree siempre el estado de las células y cambie el medio cada dos o tres días. Cuando se alcance el 80% de confluencia, use tripsina para despegar las células y recójalas.

Primero, retire completamente el medio antiguo mediante pipeta al vacío. Luego, agregue cinco mililitros de PBS para lavar suavemente las células hasta que todas queden cubiertas por el PBS. A continuación, retire el lavado.

A continuación, agregue 1,5 mililitros de tripsina al recipiente. Incline suavemente el recipiente para asegurarse de que todas las células queden cubiertas por la tripsina. Devuelva el recipiente al incubador celular a 37 grados Celsius.

Espere un minuto y observe las células bajo un microscopio. Si están redondeadas y flotando, se han desprendido. Añada tres mililitros de medio para detener la digestión y aspire la mezcla celular con una pipeta hacia un tubo de centrífuga.

Centrifugar la mezcla a 1.160 G durante cinco minutos. Luego, eliminar cuidadosamente el medio usando una pipeta de vacío. A continuación, resuspender suavemente las células en cinco mililitros de medio sin suero utilizando una pipeta, hasta que no se observe ningún pellet celular evidente y la solución parezca homogénea a 50 microlitros de la mezcla celular.

Añada 50 microlitros de azul de tripan una vez mezclado completamente. Añada alícuotas de 10 microlitros a varias láminas para recuento celular. Luego cuente las células a partir de los valores del contador de células.

Calcule y utilice el promedio de todos los conteos por onza. Ahora prepare una suspensión celular más precisa. Vuelva a centrifugarlas y resuspenda a 175.000 células por 100 microlitros de medio sin suero.

Luego, conserve las células en hielo para la inyección intracardiaca. Para este protocolo, utilice ratones hembra BC desnudos, de seis a ocho semanas de edad. Inicie sesión en el sistema de imágenes e inicialice el transductor.

7 0 4 a 40 megahercios. Inicie un nuevo estudio y complete los mensajes informativos en consecuencia. A continuación, anestesie al ratón y administre el anestésico mediante un cono nasal.

Durante la inyección guiada, ajuste la temperatura de la mesa de imagenología a 37 grados Celsius y sujete al ratón sobre la mesa en posición supina. Mantenga el gel de ultrasonido a 37 grados Celsius antes de la imagenología y aplique un poco sobre el tórax del ratón. Ahora coloque el transductor en el soporte y bájelo hasta la profundidad de imagenología deseada.

A continuación, mueva la platina hasta identificar el ventrículo izquierdo utilizando la aorta ascendente como punto de referencia, y bloquee la platina en la posición donde la imagen sea más nítida. Ahora aspire 100 microlitros de la mezcla celular fría en una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 22. Fije la jeringa cargada en el soporte para jeringas.

Luego mueva la jeringa hacia el pecho. Y antes de ingresar al ratón, muévala cuidadosamente de lado a lado hasta que la punta de la aguja esté dentro del campo de visión de la imagen. Ajuste la altura y el ángulo de la aguja para dirigirla hacia el ventrículo izquierdo, y cuando esté en posición, penetre rápidamente la aguja a través de las capas de piel y músculo hasta el ventrículo izquierdo.

Bajo la guía de la imagen ecográfica, un indicio de una inserción exitosa en el ventrículo izquierdo es el reflujo de sangre arterial de color rosa brillante hacia la jeringa. A continuación, inyecte lentamente la mezcla celular, retire la aguja, levante el transductor y limpie el gel ecográfico con gasa humedecida. Luego, suelte al animal de la cinta y transfiera al animal a una jaula limpia con una almohadilla precalentada.

Observe al ratón hasta que se recupere completamente y, posteriormente, revíselo diariamente durante unos días. Mediante una resolución plana de 78 micrones cuadrados, pueden identificarse lesiones hiperintensas en resonancia magnética con un diámetro de 310 micrones. Debido a que las metástasis en este estudio eran muy pequeñas y la necrosis y el edema eran mínimos, la lesión hiperintensa en las imágenes ponderadas en T2 representaba verdaderamente el tumor.

Los estudios longitudinales de MRI de gran tamaño permiten la evaluación no invasiva in vivo del crecimiento tumoral. La MRI de alta resolución fue capaz de detectar varias lesiones pequeñas tres semanas después de la inyección intracardiaca; en la semana cuatro, las lesiones observadas en el escaneo previo aumentaron todas de tamaño. Aparecieron más lesiones nuevas en las imágenes ponderadas en T2.

La tinción con H y E reveló lesiones metastásicas difusas o la H y E reveló lesiones metastásicas de tipo en racimo. Con frecuencia se observaron vasos ampliados alrededor del tumor, lo que indica que estaba ocurriendo una angiogénesis no por brotación. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar una inyección guiada por imagen de ultrasonido mediante aguja en el ventrículo izquierdo del corazón de un ratón.