Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

El objetivo general de este procedimiento es ocluir el flujo sanguíneo hacia una parte del corazón para producir una lesión por isquemia-reperfusión. Para simular un infarto de miocardio, esto se logra realizando primero una toracotomía para exponer la arteria descendente anterior izquierda o LAD. En el segundo paso, se ata una sutura alrededor de la DA para detener el flujo sanguíneo.

Luego, después de un período isquémico, se retira la sutura y la arteria se vuelve a fundir con sangre. En el paso final, se cierra la incisión quirúrgica. En última instancia, la gravedad del infarto de miocardio puede medirse mediante el análisis de los niveles séricos de biomarcadores y la histología del tejido cardíaco.

La principal ventaja de nuestro método existente para simular la infección por malardi es que es fácil encontrar el LED y colocar la sutura en la posición correcta. Bueno, la demostración visual es tan importante porque las manipulaciones son muy difíciles de aprender, y las descripciones escritas no transmiten bien la complejidad de esas manipulaciones. Este es un procedimiento bastante difícil y, en términos generales, las personas no tienen experiencia con él y tendrían problemas para identificar el LED o controlar el sangrado si comienza durante el procedimiento.

Bueno, una de las implicaciones es que este enfoque se puede utilizar para probar la eficacia de los compuestos terapéuticos en el tratamiento del infarto de miocardio. Debido a que se debe usar un modelo animal en estos enfoques para poder medirlo de manera efectiva, comienzo pegando con cinta adhesiva una longitud de dos sedas calientes, sutura de al menos 10 centímetros de largo a una plataforma quirúrgica. A continuación, enrolle la sutura alrededor de los incisivos superiores delanteros del ratón anestesiado, tire del ratón para tensarlo y luego pegue la cola a la plataforma y las patas a los lados del cuerpo del animal.

Después de limpiar los sitios quirúrgicos afeitados con Betadine y alcohol, coloque la plataforma con la cabeza del ratón apuntando hacia el extremo del banco y corte una incisión cervical mediana de 0,5 centímetros en la piel. Separe los lóbulos de la glándula tiroides en su isus para exponer el músculo Sterno OIDs donde se puede ver la tráquea debajo del músculo. A continuación, retire la aguja interior de un trócar de calibre 18 y luego use una mano para mover la lengua del mouse ligeramente hacia arriba con un par de pinzas curvas.

Encuentre la tráquea a través de la incisión en la piel cervical y luego use la otra mano para insertar suavemente el tubo de intubación con trócar hasta que se vea dentro de la tráquea. Ahora, configure un respirador para animales que ventile un 2% de isoflurano en oxígeno a un caudal de 0,4 litros por minuto para proporcionar ventilación artificial al animal, utilizando un conector en forma de Y modificado para conectar el tubo de intubación al ventilador, la posición correcta del tubo traqueal se puede confirmar juzgando la expansión torácica simétrica. Retire la cinta de la cola y gire suavemente el ratón para colocarlo en posición de decúbito lateral derecho para la cirugía posterior.

A continuación, vuelva a fijar la cola y las patas a la plataforma con cinta adhesiva para realizar la toracotomía. Primero, haga una incisión oblicua de aproximadamente un centímetro de largo y dos milímetros del borde esternal izquierdo en la dirección donde la pata delantera izquierda se encuentra con el cuerpo. Aproximadamente uno o dos milímetros por debajo de donde se unen la pierna y el cuerpo.

La vena torácica superficial está cerca de este sitio, y la incisión debe hacerse de manera que el extremo lateral de la incisión llegue hasta la vena, pero no corte en ella. Corta a través del músculo torácico para exponer las costillas que se encuentran debajo. Teniendo cuidado de evitar lesiones accidentales de la embarcación.

Luego abra la cavidad torácica con una incisión de seis a ocho milímetros en el tercer espacio intercostal, a un mínimo de dos milímetros del borde esternal donde se encuentra la arteria torácica interna, teniendo cuidado de no dañar la arteria. A continuación, inserte retractores torácicos caseros en la incisión y tire suavemente hacia atrás para abrir la incisión hasta que tenga de ocho a 10 milímetros de ancho. Teniendo cuidado de evitar el pulmón, el corazón ahora debe ser parcialmente visible debajo de los pulmones.

Use las pinzas curvas para levantar suavemente el pericardio, separarlo y luego deslizar el tejido detrás del retractor. Ahora use un endoscopio de disección para localizar la arteria coronaria descendente anterior izquierda, o LAD, que corre por el centro de la pared cardíaca desde cerca del vértice del corazón hasta el ventrículo izquierdo y aparece de color rojo brillante y fuertemente pulsando en la superficie del corazón. La vena cardíaca a veces se confunde con la LAD, sin embargo, una iluminación adecuada puede ayudar a distinguir los dos vasos.

Si la iluminación es demasiado brillante, puede ser difícil visualizar las diferencias de color entre los recipientes. A continuación, coloque un fragmento de algodón de uno a dos milímetros entre la aurícula izquierda y el ventrículo izquierdo. Para levantar la aurícula izquierda y ayudar a exponer el auricular izquierdo y aclarar su posición, use el tronco pulmonar para identificar el oráculo izquierdo para mantener el corazón en su lugar y simplificar la ligadura, aplique presión suavemente inmediatamente debajo del punto de ligadura previsto aproximadamente dos milímetros más abajo que la punta del oráculo izquierdo.

A continuación, utilice una aguja cónica para pasar una sutura de seda de seis piezas por debajo de la DA, teniendo cuidado de no entrar en la cámara del ventrículo izquierdo ni de dañar la DA. Haz un nudo doble suelto con la sutura, dejando un bucle de dos a tres milímetros de diámetro. A continuación, coloque un trozo de tubo de PE 10 de dos a tres milímetros de largo a través del bucle y apriete el bucle alrededor de la arteria y el tubo.

Asegure el lazo haciendo un nudo corredizo adicional, teniendo cuidado de no dañar la pared del ventrículo. Confirme la oclusión de la DA comprobando la aparición de un color pálido en la pared anterior del ventrículo izquierdo, que debería aparecer a los pocos segundos de la ligadura. Luego retire el retractor y pellizque la piel con una pinza de bulldog para cerrar temporalmente la herida después del período de isquemia, retire la pinza de bulldog e inserte los retractores de pecho para exponer la ligadura.

A continuación, desate el nudo y retire el tubo de PE 10 Después de 15 a 20 segundos, confirme la reperfusión observando un retorno del color rojo rosado en la pared anterior del ventrículo izquierdo. Por último, para cerrar la cavidad torácica, se cierra la incisión en el tercer espacio intercostal con cuatro suturas de seda aut. Tenga cuidado de mantener los pulmones alejados de la sutura mientras ata los nudos de sutura.

Aplique una ligera presión en el pecho con el soporte de la aguja para minimizar cualquier aire que pueda quedar atrapado en la cavidad torácica. A continuación, utilice suturas continuas de seda cuatro aut para cerrar todas las capas musculares del tórax y, a continuación, utilice suturas de nailon para cerrar la piel con otra sutura continua. Una vez finalizada la sutura, cese el flujo de isoflurano mientras el oxígeno continúa fluyendo.

Luego, después de monitorear cuidadosamente al animal hasta que reanude un patrón de respiración normal, extubar el ratón, retirando el tubo lentamente para evitar la aspiración de cualquier cavidad oral. La aplicación de secreciones de tinte azul en barbecho permite la resolución del área del corazón donde se produce la oclusión de la DA, mientras que los corazones que no están teñidos con tinte azul muestran solo el área de infarto después de 24 horas de infarto de reperfusión. Las áreas en blanco deben distinguirse de las áreas en riesgo en rojo y las áreas no en riesgo.

En el azul, el tamaño del infarto depende de la duración de la isquemia. Es importante destacar que los niveles oculares de troponina cardíaca son bajos en los animales operados simuladamente que se someten a todos los procedimientos quirúrgicos, excepto la isquemia y la reperfusión, en comparación con los animales que se someten a un infarto de miocardio. Esto indica que la cirugía simulada no produce una patología cardíaca significativa, mientras que la lesión por isquemia reperfusión es suficiente para producir elevación de este biomarcador ampliamente utilizado para el infarto de miocardio.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar una cirugía de sobreviviente en ratones para simular la infección por malardi Pues bien, siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como el histológico, la tinción del corazón para determinar el tamaño del infarto y la eficacia de diferentes terapias. Es importante recordar que, debido a que se trata de un procedimiento invasivo, es necesario controlar adecuadamente el dolor y la angustia, y es importante controlar ese dolor mediante el suministro de analgésicos de acuerdo con las pautas locales, las pautas institucionales y las pautas nacionales. Una cosa importante que debes recordar para este experimento es diseñarlo de manera que responda a tu pregunta específica.

Por ejemplo, si necesita tener un infarto grave, es posible que deba prolongar el período isquémico durante la cirugía.