Behavioral Valutazione del sistema vestibolare invecchiamento mouse

L'obiettivo generale dell'esperimento seguente è identificare le modifiche per bilanciare le prestazioni in un modello murino di invecchiamento. Ciò si ottiene addestrando prima i topi su un apparecchio per consentire ai topi di acclimatarsi ad esso, oltre ad apprendere il compito come secondo passo. I topi vengono testati sull'apparecchio per valutare la loro coordinazione motoria e il loro equilibrio.

Quindi i topi vengono sfidati con lo stimolo vestibolare e ritestati sull'apparato. Anche in questo caso, i risultati mostreranno i cambiamenti nel bilanciamento con l'età in base ai dati dell'asta del rotore e della trave di bilanciamento. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come il test del riflesso oculare vestibolare, che tiene traccia dei movimenti oculari, è che si tratta di un metodo semplice e non invasivo per misurare le prestazioni dell'equilibrio.

Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sui cambiamenti legati all'età per bilanciare le prestazioni nei topi, può essere applicato anche ad altri sistemi come l'erite e i disturbi neuromuscolari. A dimostrare che le procedure saranno Victoria Tongue, una dottoranda all'interno del mio laboratorio. Edward Dabney, un assistente di ricerca in laboratorio, e Thomas Burton, il manager del Bosch Institute Animal Behavioral Facility presso l'Università di Sydney.

Nel test dell'asta del rotore, i topi devono camminare lungo tasselli rotanti e acceleranti. Quando perdono l'equilibrio, attivano un sensore magnetico. I parametri segnati vengono registrati dall'apparato dell'asta del rotore.

Inizia con l'installazione dei tasselli in ciascuna corsia del rotore. Bacchetta. Tasselli di diverse dimensioni sono forniti per topi e ratti. Tuttavia, l'uso dei tasselli per topi funziona bene e impedisce ai topi di aggrapparsi ai tasselli invece di cadere.

Quindi posizionare le piattaforme di atterraggio magnetiche sul filo sotto ciascuna corsia dell'asta del rotore. Assicurarsi che le piattaforme non siano inclinate per toccare il pavimento e che siano il più vicino possibile alla parete magnetica sul lato destro senza toccarla. Infine, diapositiva due.

Pannelli di plastica trasparente davanti a ciascuna corsia dell'asta del rotore. Il pannello più corto viene posizionato sotto e il pannello più lungo viene posizionato sopra. Porta le gabbie per topi nella sala prove 10 minuti prima di iniziare le prove mentre i topi si acclimatano.

Immettere i parametri di prova per il test dell'asta del rotore accelerato. Innanzitutto, imposta la durata massima del test su 60 secondi. Quindi, imposta il numero di corsie da utilizzare o il numero di mouse da testare.

Quindi imposta le velocità. Impostare il test in modo che inizi a cinque giri/min e impostare il massimo a 44 giri/min. Fai in modo che la velocità aumenti di oltre 60 secondi.

Infine, impostare i parametri del tassello per l'uso di tasselli di ratto che ruotano in avanti. Quando i topi sono pronti, posizionare il primo gruppo da testare sui tasselli fissi per cinque minuti, lasciandoli acclimatare. Quindi spingere delicatamente i mouse verso la parte posteriore dell'asta del rotore e iniziare il test quando tutti i mouse sono rivolti nella giusta direzione.

L'erezione, dopo che i topi sono caduti, riportali nelle loro gabbie per 10 minuti con libero accesso a cibo e acqua tra le prove mentre i topi riposano, ripuliscono i rifiuti animali dalle corsie dei tasselli e dalle piattaforme di atterraggio. Ripristina anche le piattaforme di atterraggio per il prossimo test. Ripetere il processo per un totale di otto prove per topo.

Le prime tre-cinque prove vengono utilizzate come prove di allenamento. Dopo tutte e otto le prove, pulire accuratamente le corsie dei tasselli e le piattaforme di atterraggio dell'asta del rotore con etanolo al 70% e pulire i pannelli di plastica trasparente con un detergente delicato. In questo test, i topi camminano su una trave esposta lunga un metro e con un diametro di 14 millimetri lungo una leggera pendenza verso il loro obiettivo.

Una camera buia contenente la cupola dell'alloggiamento del soggetto Due telecamere sono posizionate su entrambi i lati del raggio di bilanciamento. Ognuno di essi è angolato per catturare l'intera lunghezza del raggio. Le registrazioni video documentano le prove sotto la trave.

Il pavimento è rivestito con materiale di imbottitura. I topi che cadono devono essere raccolti immediatamente e posizionati all'interno della scatola della porta per riprendersi. L'interno della scatola della porta è rivestito con un tovagliolo di carta per rimuovere facilmente i rifiuti animali tra un test e l'altro.

La scatola è abbastanza grande da poter essere inserita al suo interno una cupola dell'alloggiamento. Prima di testare un mouse, posizionalo nella casella della porta per due minuti. Se un topo tenta di lasciare la scatola della porta, copri l'apertura della trave per cinque secondi con una mano guantata per scoraggiarlo dall'andarsene di nuovo.

Successivamente, il mouse deve essere addestrato per l'attività. Posizionalo sulla trave appena fuori dalla scatola della porta e lascialo camminare fino alla scatola della porta. Quindi lascialo riposare per un minuto, quindi posizionalo più in basso nella trave e lascialo risalire.

Dai sempre al mouse un minuto nella casella della porta tra le prove di allenamento. Tieni il mouse sempre più in basso nella trave finché non si alza dalla linea di partenza senza assistenza. Ora per condurre un test, avvia la registrazione e poi posiziona il mouse sulla linea di partenza.

Interrompere la registrazione quando il mouse raggiunge la scatola o quando il mouse cade dal raggio tra una prova e l'altra. Lascia riposare il mouse per un minuto nella scatola della porta e, nel frattempo, pulisci l'urina o le feci dalla trave e dalla schiuma sottostante. Ogni mouse dovrebbe essere testato cinque volte in questo modo.

Per aggiungere un'ulteriore sfida vestibolare a questo test, applicare prima il rotatore, acclimatare i topi al suono del rotatore a tre hertz. Azionalo per 20 secondi. Quindi trasferire il mouse nella camera sul rotatore.

Se hai problemi ad abbassare il mouse nella camera, dai al mouse un oggetto a cui aggrapparti prima di abbassare entrambi nella camera. Una volta che il mouse è nella camera, rimuovere l'oggetto, riposizionare il coperchio e far funzionare il rotatore per 20 secondi. A tre hertz, avvia le registrazioni video mentre girano.

Dopo 20 secondi, spegnere il rotatore e fermare manualmente la ruota il più rapidamente possibile. Quindi sposta immediatamente il mouse sulla linea di partenza e consentigli di completare la prova. Come al solito, questo test può essere eseguito da una a tre volte prima che i topi smettano di collaborare.

Non dimenticare mai di pulire la trave di bilanciamento e di cambiare il tovagliolo di carta tra i mouse per l'asta del rotore. Metti alla prova il tempo per innamorarti di uno. Un topo di un mese e un topo di nove mesi sono aumentati costantemente durante le prove da uno a cinque e sono stati quindi considerati prove di addestramento.

Per l'analisi dei dati sono stati utilizzati i dati da cui il punteggio è stabilizzato, mostrati da una linea tratteggiata. I topi di un mese sono stati in grado di rimanere sul tassello rotante significativamente più a lungo dei topi di nove mesi. I dati provenienti da un campione di piccole dimensioni sono rappresentati come la media più o meno una deviazione standard.

Anche l'impatto della stimolazione vestibolare sull'equilibrio delle prestazioni era maggiore con l'età. Un 22° giro a tre hertz prima della prova aumenta il tempo impiegato per attraversare la trave di equilibrio tra la linea di partenza e quella di arrivo nei topi di nove e 13 mesi, ma non nei topi giovani. La significatività è stata valutata utilizzando misure ripetute in Nova con un test post hoc TUI.

Quando si esegue questo compito, è importante ricordare di trasferire l'animale dalla provocazione vestibolare all'apparato il prima possibile per ridurre al minimo la possibilità che l'animale si riprenda dallo stimolo prima di completare l'attività Seguendo questa procedura. Altre tecniche come la PCR, l'imaging del calcio e l'elettrofisiologia del patch clamp possono essere utilizzate per rispondere a ulteriori domande, come se i cambiamenti nelle prestazioni motorie e di equilibrio possano essere correlati con i cambiamenti nella funzione delle cellule ciliate vestibolari.