Name: Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 15 s
Description: Aprende el trasplante de riñón en ratón para estudiar el rechazo de aloinjertos mediante técnicas microquirúrgicas. Este modelo permite investigar mecanismos de rechazo agudo y crónico en inmunología.

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La financiación procedente del riñón Research UK, el Colegio Real de Cirujanos de Edimburgo y de la Sociedad Europea de Trasplante de Órganos apoyó este estudio.

Ética institucionales nacionales y locales apropiados deben estar en su lugar antes de realizar los experimentos con animales. Específicamente en el Reino Unido se llevaron a cabo los siguientes experimentos bajo los Animales (Procedimientos Científicos) de la Ley de 1986 Cuando dos microcirujanos están disponibles para funcionar a la vez que el cirujano donante debe realizar los pasos 1.1 a 1.16 luego 3.1 a 3.5, mientras que el cirujano realiza receptor 2.1 a 2.8 . Para un solo operador los pasos pueden ser seguidos secuencialmente. 1. Donantes Preparación Nota: El procedimiento que aquí se presenta es un donante C57BL / 6 BM12 y el receptor C57BL / 6 ratones machos de edades comprendidas entre 8 y 16 semanas de edad con un peso corporal superior a 20 g. Sin embargo, este procedimiento se puede realizar de forma reproducible en una variedad de cepas de ratón. Los datos presentados en la sección de resultados representativos se obtuvieron de ratones C57BL / 6, C57BL / 6 y BM12, los cuales ratones BALB / c. <ol><li> Realizar procedimientos using instrumentos quirúrgicos estériles y consumibles (autoclave), con los esfuerzos para mantener la zona de trabajo lo más estéril posible. Realizar la preparación de donantes simultáneamente con la preparación destinatario si dos cirujanos están disponibles. </li><li> Anestesiar al ratón con una inyección intraperitoneal (aguja 31G) de medetomidina (0,5 mg / kg) y clorhidrato de ketamina (200 mg / kg). Esto resulta en un plano anestésico que se mantiene durante 4 horas dando tiempo suficiente para que todo el procedimiento a realizar. Anestesia suplementaria no es necesario. </li><li> Confirme que el ratón está anestesiado (sin respuesta a la pizca dedo del pie). </li><li> Afeitarse el abdomen del ratón y eliminar los pelos sueltos con cinta adhesiva. </li><li> Coloca el ratón sobre su espalda sobre una estera climatizada cubierta estéril y sin apretar inmovilizar las extremidades con cinta adhesiva estéril. </li><li> Monitorear el ratón durante todo el procedimiento para las quemaduras térmicas. Si es posible utilizar una fuente de calor no eléctrico. </li><li> Aplique un lubricante ocular y sanitize la pared abdominal con una solución de yodo diluido. </li><li> Hacer una incisión en el abdomen para entrar en la cavidad peritoneal e inserte un 3 cm Calibri retractor abdominal. </li><li> Aplicar solución salina calentada para mantener los intestinos y el área quirúrgica húmedo y evitar el secado innecesaria de las vísceras. </li><li> Cubra el ratón con paños estériles y mover los intestinos a la izquierda del operador (el derecho del ratón) para exponer la aorta, la vena cava y el riñón izquierdo. </li><li> Aplicar una pinza de trinquete hasta el estómago y tire superiormente para exponer los principales vasos y riñón izquierdo totalmente. Empaque amortiguar hisopos estériles (2 mm x 2 mm) en el abdomen para retraer los tejidos fuera de la zona de la cirugía, tales como los lóbulos hepáticos, vesículas seminales y de intestino. </li><li> Aislar el riñón izquierdo de adventicia que rodea, la grasa y la glándula suprarrenal izquierda en la cavidad peritoneal por rodeos disección del tejido conectivo usando pinzas de punta fina. Coloque las puntas cerradas de la pinza entre las áreas que NEed a separar y lentamente permita que las puntas de fórceps para abrir disecar el espacio. </li><li> Aislar la vena renal izquierda ligando y luego dividiendo la vena adrenal y la vena gonadal izquierda izquierda con 9 / O de nylon. Coloque la sutura cerca de la vena renal. </li><li> Ligar y dividir el uréter con 7 / O sutura de seda cerca de la vejiga dejando la sutura termina de largo. Estos extremos largo de sutura se utilizarán cuando el riñón se cosecha y que sean necesarias para la anastomosis ureteral. </li><li> Movilizar y diseccionar plenamente la aorta y la vena cava superior y inferior a la arteria y vena renal utilizar fórceps de punta fina para diseccionar sin rodeos vasos linfáticos y grasa de la parte frontal y los lados de los vasos. </li><li> Encuentre el plano del tejido entre la aorta y la vena cava y propagarse lentamente las pinzas. Abra lentamente las puntas de la pinza de punta fina para extender el tejido con un mínimo trauma. </li><li> Ate un flojo 7 / O de seda alrededor de la aorta superior e inferior de la arteria renal pasando un buen ángulopinzas de punta alrededor de la parte posterior de los vasos y dibujo una sutura a través. Estas suturas se harán más estrictas antes de la recuperación del riñón para permitir la perfusión retrógrada de la Universidad de Wisconsin solución. </li></ol> 2. destinatario Preparación De acuerdo con el seguimiento de preparación de donantes pasos 1.2 a 1.8. <ol><li> Mover los intestinos a la derecha del operador (izquierda del ratón) para exponer la aorta, la vena cava. Cubra los intestinos con un bastoncillo empapado de solución salina estéril. </li><li> Realizar una nefrectomía derecha por ligación de la arteria renal derecha y la vena junto con 7/0 sutura de seda y luego dividir. </li><li> Ligar el uréter derecho con 7 / O sutura de seda y se dividen. </li><li> Movilizar y diseccionar plenamente la aorta y la vena cava inferior a la arteria y la vena renal como se describe en el paso 1.14 y 1.15. Asegurar la disección completa entre la aorta y la vena cava. Tenga cuidado para preservar la arteria espermática interna que se extiende por delante de la vena cava y aortA junto con el paquete linfático. </li><li> Identificar los vasos lumbares que se ejecutan en el retroperitoneo de la vena cava y la vena a la columna vertebral, se liga con 9 / O de seda en la continuidad, no hay necesidad de dividir los vasos. </li><li> Identificar suficiente espacio para colocar pinzas microvasculares con espacio para entre anastomosis vasculares. </li><li> Administrar heparina intravenosa (5 unidades) a través de la vena dorsal del pene. </li></ol> Recuperación de riñón 3. Donantes Apriete los lazos de seda 7 / S que se han colocado alrededor de la aorta inferior y superior para aislar el riñón de la circulación arterial. <ol><li> Infundir retrógradas frío desde 0,2 hasta 0,5 ml de solución de la Universidad de Wisconsin con una aguja (31G) en la aorta. </li><li> Divida la aorta dentro de las suturas y dividir la vena renal en su unión con la vena cava para extraer el riñón y la arteria renal con una longitud de aorta. Divida vasos lumbares derivados de la aorta, si están presentes, wligadura ithout. </li><li> Coloque el riñón en solución salina fría en un hisopo estéril en una placa de cultivo. </li><li> La eutanasia el ratón donante por dislocación cervical. </li></ol> 4. Trasplante de Riñón - Kidney Preparación <ol><li> Crear un parche aórtico dividiendo la pared de la aorta longitudinalmente justo enfrente de la arteria renal. Identificar los lúmenes de los vasos en el parche que necesitan ser ligado o evitar cuando se realiza la anastomosis arterial. </li><li> Colocar una sutura 10 de E / S del exterior al interior del lumen de la vena renal y superiormente una segunda sutura separada inferior. Las suturas utilizadas para dividir la vena adrenal y la vena gonadal se pueden utilizar para orientar la embarcación. </li><li> Coloque el riñón en el flanco derecho del receptor (Figura 1.1) y asegurar las suturas están en condiciones de garantizar las anastomosis vasculares se pueden completar sin las suturas se entrelaza en hisopos u otros instrumentos. </li></ol> 5. riñón Transplantación - Vascular Anastomosis Aplicar pinzas microvasculares primera inferiormente a continuación abarcan superiormente la vena cava y la aorta. <ol><li> Hacer un ventomy con una aguja (31G) por punción de la pared anterior de la vena cava. Flush sangre de la vena cava mediante la inyección de aproximadamente 50 l de 0,9% de NaCl. </li><li> Ampliar el venotomía usando fórceps de punta fina mediante la apertura de ellos dentro de la venotomía manera que la longitud es equivalente al diámetro de la vena renal del donante. </li><li> Coloque la sutura superiores 10 de E / S (que ya está en el lumen de la vena renal) primero en el vértice de la venotomía (Figura 1.2) y unirse a la pared posterior de la anastomosis en una sutura continua hasta que se alcanza el ápice inferior (figura 1.3). </li><li> Coloque el 10 de E / S de sutura inferior y atar primero con un solo nudo (Figura 1.4) luego atar a la sutura que va desde la pared trasera. </li><li> Uso de la sutura inferior crear el Wal frentel de la anastomosis (Figura 1.5) con una sutura continua y atar al extremo de sutura superior en el vértice superior, (Figura 1.6). </li><li> Crear una aortotomía recogiendo la pared de la aorta con una pinza y corte un parche elíptico con tijeras (aproximadamente el aortotomía debe ser una quinta parte de la circunferencia de la aorta y tres veces la luz de la arteria renal de longitud). </li><li> Coloque una sutura de 10 E / S en el punto superior del parche aórtico del exterior al interior (Figura 1.7) y pasar a través de la aorta para empatar fuera de los vasos en el vértice superior de la aortotomía. </li><li> Cree la anastomosis arterial con una sutura continua de comenzar superiormente (Figura 1.8) anastomosando el parche de donantes a la aorta destinatario, tenga cuidado de no constreñir la anastomosis mediante la vinculación de la sutura demasiado apretado (Figura 1.9). </li><li> Retire las abrazaderas vasculares inferiores primero y luego la pinza superior a reperfundir el riñón (Figura 1.10 y 1.11). Peristaltismo visible del uréter tal vez visto si se logra el suministro adecuado de sangre al uréter. </li></ol> 6. Trasplante de Riñón - Anastomosis ureteral <ol><li> Divida los archivos adjuntos de la vejiga de la pared abdominal. </li><li> Pasar una aguja (21G) de izquierda a derecha de la vejiga a través de ambas paredes. </li><li> Coloque puntas de fórceps rectos en el lumen de la aguja y pasar tanto a través de la vejiga de tal manera que las pinzas están pasando ahora de derecha a izquierda de la parte izquierda de la vejiga. </li><li> Dibujar la sutura en el uréter donante a través de la vejiga de tal manera que el uréter pasa en el defecto de la vejiga izquierda y luego fuera del lado derecho. </li><li> Suturar la adventicia del uréter a la adventicia de la vejiga con tres suturas interrumpidas simples alrededor del punto de entrada con 9 / O sutura de nylon en una aguja de cuerpo redondo. </li><li> Cortar el uréter proximal a la ligadura, abriendo así ªe uréter para permitir que la orina fluya y permitir que el extremo uréter se retraiga en el cuerpo de la vejiga. Visible producción de orina se puede observar a lo largo de con hemorragia de los vasos peri-ureteral. </li><li> Cierre el defecto de la vejiga lado derecho con un solo interrumpido 9 / O sutura de seda. </li></ol> 7. Recuperación y Cuidado Postoperatorio Vuelva a colocar las vísceras gastrointestinal en el abdomen en su orientación original y cierre de la pared abdominal mediante la aproximación de los músculos rectos con 6 E / S de sutura absorbible. <ol><li> Aproximar la piel con clips de la piel metálica. </li><li> Parcialmente invertir la anestesia con una inyección subcutánea de hidrocloruro de atipamazol (10 l / g). </li><li> Administrar analgesia por vía subcutánea hidrocloruro de buprenorfina (0,05 mg / kg) y para la inyección de fluido de soporte 1 ml de NaCl al 0,9% por vía subcutánea. </li><li> Recuperar el ratón en un armario de calentamiento a 28 ° C durante 24 a 48 horas. Observe el ratón para la enfermedad hasta elfinalización del experimento. </li><li> Retire los clips de la piel metálica 7 - 10 días después de la operación. </li><li> Una vez que el experimento se ha completado la eutanasia el ratón por dislocación cervical. </li><li> Retire y recoger el riñón contralateral y aloinjerto para el análisis histológico. </li></ol>

<ol><li>Guild, W. R., Harrison, J. H., Merrill, J. P., Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+homotransplantation+of+the+kidney+in+an+identical+twin%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+Am.+Clin.+Climatol+Assoc%22%5BJournal%5D)">Successful homotransplantation of the kidney in an identical twin.</a> Trans. Am. Clin. Climatol Assoc. 67, 167-173 (1955).</li>
<li>Wolfe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+mortality+in+all+patients+on+dialysis%2C+patients+on+dialysis+awaiting+transplantation%2C+and+recipients+of+a+first+cadaveric+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant.</a> N. Engl. J. Med. 341, 1725-1730 (1999).</li>
<li>Nankivell, B. J., Alexander, S. I. Rejection of the Kidney Allograft. N. Engl. J. Med. 363, 1451-1462 (2010).</li>
<li>Tse, G. H., Hughes, J., Marson, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+mouse+kidney+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%22%5BJournal%5D)">Systematic review of mouse kidney transplantation.</a> Transplant International. 26, 1149-1160 (2013).</li>
<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant.</a> Proc. 5, 721-725 (1973).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+liver%2C+kidney%2C+heart%2C+and+intestine+allograft+rejection+in+different+mouse+strain+combinations%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations.</a> Transplantation. 62, 1267-1272 (1996).</li>
<li>Qi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+cells+of+monocyte+lineage+prevents+loss+of+renal+microvasculature+in+murine+kidney+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Depletion of cells of monocyte lineage prevents loss of renal microvasculature in murine kidney transplantation.</a> Transplantation. 86, 1267-1274 (2008).</li>
<li>Dang, Z., Mackinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubular+atrophy+and+interstitial+fibrosis+after+renal+transplantation+is+dependent+on+galectin-3%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3.</a> Transplantation. 93, 477-484 (2012).</li>
<li>Jabs, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+the+Evolution+and+Mechanisms+of+the+Lesions+of+Kidney+Allograft+Rejection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in the Evolution and Mechanisms of the Lesions of Kidney Allograft Rejection in Mice.</a> Am. J. Transplant. 3, 1501-1509 (2003).</li>
<li>Lin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+of+C4+from+Donor+or+Recipient+Mouse+Fails+to+Prevent+Renal+Allograft+Rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Deficiency of C4 from Donor or Recipient Mouse Fails to Prevent Renal Allograft Rejection.</a> Am. J. Pathol. 168, 1241-1248 (2006).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La manera más bien descrito para realizar la anastomosis arterial es utilizar la aorta distal del donante, con la arteria renal en la continuación, de una manera de extremo a lado a la aorta destinatario. Se describe el uso de un parche de aorta, similar a la creación de reflejo &#39;Carrell parche&#39; que lleva a cabo en el trasplante de riñón humano que creemos que es más conveniente. Aunque los informes en la literatura de donante y receptor operativo de tiempo son escasos creemos que la utilización de un parche aór...

El trasplante renal con éxito para el tratamiento de la insuficiencia renal fue descrita por primera vez en 1955 entre los gemelos monocigóticos 1, desde entonces se ha convertido en un revolucionario tratamiento para los pacientes con insuficiencia renal terminal en todo el mundo, ofreciendo mejoras en duración y calidad de vida 2. Sin embargo la supervivencia del injerto a largo plazo se ha visto obstaculizada por una multitud de procesos patológicos que resultan en daños crónica del injerto 3. El rechazo del riñón trasplantado en el ser humano sigue siendo una causa importante de morbilidad, a pesar de las mejoras significativas en los regímenes immunosupporessive. El objetivo de desarrollar un modelo murino de trasplante renal es replicar de cerca el proceso y la patología que se encuentra en el trasplante renal humano 4. Skoskiewicz et al. Describe primero el modelo murino de trasplante renal en 1973 5. Aunque se requieren habilidades de microcirugía avanzados, es una valiosa tool por varias razones: el genoma del ratón ha sido bien caracterizada y hay una gran variedad de métodos y técnicas disponibles para los estudios del ratón experimentales. Muchos grupos utilizando el modelo de ratón de trasplante renal han utilizado el riñón trasplantado como un órgano que sustenta la vida, sin embargo, en otros estudios y en nuestra metodología descrita uno de los riñones naturales del ratón receptor se deja in situ durante la duración del experimento 4. El beneficio es que el ratón se somete a una única operación de la anestesia y reduciendo así la morbilidad para el ratón y el riesgo de muerte a partir de un segundo procedimiento. Además, el ratón no sufren de los efectos adversos de la insuficiencia renal progresiva. Aunque existen modelos de rechazo alogénico en otros órganos tales como el corazón y la piel, estos no siempre son directamente relevantes para el trasplante renal. Hay evidencia de que estos modelos provocan diferentes modos y dymica de rechazo, por ejemplo, el curso de tiempo de rechazo de aloinjerto cardíaco y en aloinjerto renal difiere significativamente en ciertas combinaciones de deformación 6. Hemos descrito patrones de rechazo de aloinjerto renal aguda en donantes BALB / c en ratones FVB / NJ no transgénicos, este modelo mostró la lesión mediada celular con acumulación de células T y macrófagos 7. Alternativamente también hemos descrito un modelo de daño crónico del aloinjerto que exhibe la fibrosis intersticial y atrofia tubular, esto resulta de trasplante de un riñón de ratones C57BL / 6 BM12 donantes C57BL / 6 en los destinatarios, ya que estos ratones se caracterizan por una sola MIS loci MHC de clase II -match 8. Múltiples aspectos del trasplante han sido estudiados utilizando el modelo murino de trasplante renal, incluyendo rechazo agudo, rechazo celular y humoral, lesión de reperfusión de isquemia, y probando nuevos agentes terapéuticos. Hemos modificado el t quirúrgicaechnique para reducir el tiempo de operación y mejorar la facilidad de la cirugía. Particularmente hemos descrito donante simultánea y preparación de receptor y una técnica de anastomosis vascular simplificada mediante la utilización de una anastomosis aórtica parche continuo. Este video y manuscrito proporcionarán puntos clave para ayudar en el establecimiento de esta técnica.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Tijeras de disección romas Herramientas de</td><td>ciencia fina</td><td>&nbsp; 14072-10</td><td>Para el corte de piel</td></tr><tr><td>Tijeras curvas Castoviejo</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>15017-10</td><td>Para corte de tejidos</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte y ndash; rectas</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>15000-08</td> Para corte de <td>suturas</td></tr><tr><td>Pinzas dentadas 1x2 dientes</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>2 x Pinzas de punta fina (Dumont No.5)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas angulares de punta fina (Dumont n.º 5/45)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td>Para disección roma</td></tr><tr><td>Pinza curva de punta fina (Dumont n.º 7)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11273-22</td><td>Útil para pasar alrededor de los vasos</td></tr><tr><td>Crile Curveed Haemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>1300-04</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de microclip con bloqueo</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>2 x Micro serrefines, ancho del resorte 2 mm, longitud de la mordaza 4 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Pinzas microvasculares</td></tr><tr><td>2 x Retractor de alambre Colibri de 3 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas Castroviejo con cerradura</td><td>Fine Science Tools</td><td>120660-01</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de pinzas para heridas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12031-07</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas para heridas de 7 mm</td><td>Fine Science Herramientas</td><td>12032-07</td><td>Retirar de 7 a 10 días después de la cirugía</td></tr><tr><td colspan="4">Equipo</td></tr><tr><td>Microscopio óptico OPMI</td><td>Carl Zeiss</td><td>S100</td><td></td></tr><tr><td>Unidad de cauterización térmica con punta fina</td><td>Geiger</td><td>150A</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla electrónica de calor</td><td>Cozee Cumfort</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Euroklav 23-S</td><td>Melag</td><td>n/a</td><td>Autoclave</td></tr><tr><td colspan="4">Desechable equipo</td></tr><tr><td>7/O Sutura trenzada de seda</td><td>Pearsall</td><td>30514</td><td></td></tr><tr><td>10/O Sutura de Dafilon (poliamida)</td><td>B-Braun</td><td>&nbsp; </td><td></td>G1118099</tr><tr><td>6/O Vicryl (plygalectin)</td><td>Ethicon</td><td>W9537</td><td></td></tr><tr><td>Aguja biselada regular, 1 pulgada, 21G</td><td>Bection, Dickinson and Company</td><td>305175</td><td>Para anastamosis ureteral</td></tr><tr><td>Aguja biselada regular, 5/8 pulgadas, 25G</td><td>Bection, Dickinson and Company</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>Aguja biselada regular, 1/2 pulgada, 30G</td><td>Bection, Dickinson and Company</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de insulina 1 ml, 29 G</td><td>Bection, Dickinson and Company</td><td>324827</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de insulina 0,3 ml, 30 G</td><td>Bection, Dickinson and Company</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>1 ml punta deslizante de jeringa</td><td>Bection, Dickinson and Company 300184</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 ml punta deslizante de jeringa</td><td>Bection, Dickinson and Company 302187</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hisopos de papel Wypall</td><td>Kimberley-Clark</td><td>L40</td><td>esterilizado en autoclave</td></tr><tr><td>Yemas de algodón</td><td>Johnson and Johnson n</td><td>/a</td><td>esterilizadas en autoclave</td></tr><tr><td>Cortinas lisas</td><td>Guardian</td><td>CB03</td><td>esterilizadas en autoclave</td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular 60mm x 15mm</td><td>Corning Incorporated</td><td></td> 430166 <td></td></tr><tr><td>Pin dispensador</td><td>B-Braun</td><td>DP3500L / 413501</td><td>Utilizado con NaCl 0.9%</td></tr><tr><td>Reactivos y Medicamentos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>(Lacri-Lube) Parafina blanda blanca 57,3%, aceite mineral 42,5% y alcoholes de lanolina 0,2%</td><td>Allergan Ltd</td><td>21956GB10X</td><td></td></tr> <tr><td>(Videne) Povidona yodada 10%</td><td>Ecolab Ltd</td><td>PL 04509/0041</td><td></td></tr> <tr><td>(Vetalar V) Clorhidrato de ketamina</td><td>Pfizer Animal Health</td><td>Vm 42058/4165</td><td>solución de 100 mg/ml (dosis 200 mg/kg)</td></tr> <tr><td>(Domitor) Clorhidrato de medetodidina&nbsp;</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4003</td><td>1 mg/ml (dosis 0,5 mg/kg)</td></tr> <tr><td>(Vetergesic) Clorhidrato de bupernorfina&nbsp;</td><td>Alsto Animal Health</td><td>Vm 00063/4002</td><td>0,3 mg/ml (dosis 0,05 mg/kg)</td></tr><tr><td>(Antisedán) Hidrochorro de atipazol</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4004</td><td>5 mg/ml (dosis 2 mg/kg)</td></tr><tr><td>Solución de la Universidad de Wisconsin</td><td>Belzer Bridge to Life</td><td>n/a</td><td>dosis aproximada 500 microlitros/ratón</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Baxter</td><td>FKE1323</td><td></td></tr><tr><td>sulfato de heparina</td><td>no patentado</td><td>N/A</td><td>5000 unidades/ml (dosis 5 unidades/ratón)</td></tr></tbody></table>

ratón trasplante de riñón: modelos de rechazo del aloinjerto

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

El rechazo del riñón trasplantado en humanos sigue siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad. El modelo murino de trasplante renal reproduce fielmente los procesos técnicos y patológicos que ocurren en el trasplante renal humano. Aunque existen modelos murinos de rechazo alogénico en órganos distintos del riñón, y son técnicamente más factibles, hay pruebas de que diferentes órganos provocan modos y dinámicas de rechazo dispares, por ejemplo, el curso temporal del rechazo en el aloinjerto cardíaco y renal difiere significativamente en ciertas combinaciones de cepas. Este modelo es una herramienta atractiva por muchas razones, a pesar de sus desafíos técnicos. Dado que los haplotipos de cepas endogámicas de ratón están bien caracterizados, es posible elegir combinaciones de donante y receptor para modelar el rechazo agudo del injerto mediante el trasplante a través de loci MHC de clase I y II. Por el contrario, al trasplantar entre cepas con haplotipos similares, se puede provocar un proceso crónico en el que el riñón del aloinjerto desarrolla fibrosis intersticial y atrofia tubular. Hemos modificado la técnica quirúrgica para reducir el tiempo quirúrgico y mejorar la facilidad de la cirugía, sin embargo, aún queda por superar una curva de aprendizaje para poder replicar fielmente el modelo. Este estudio proporcionará puntos clave en el procedimiento quirúrgico y ayudará en el proceso de establecimiento de esta técnica.

Rechazo de aloinjerto renal puede ser evaluada por análisis histológico de parafina embebido en secciones de tejido fijadas con methacarn del riñón trasplantado (Figura 2). El trasplante de riñones entre isoinjerto resultados ratones singénicos en la lesión por reperfusión isquémica renal, sin embargo por 4 semanas, los túbulos se han recuperado y son histológicamente comparables a los riñones nativos. El rechazo agudo puede ser modelado por C57BL / 6 trasplante de riñón en receptores BALB / c, dentro d...

Aquí, presentamos un protocolo para estudiar la inmunología del rechazo. El modelo quirúrgico presentado reporta un tiempo quirúrgico corto y una técnica concisa. Dependiendo de la combinación de cepa donante-receptor, el riñón trasplantado puede desarrollar rechazo celular agudo o daño crónico del injerto, definido por fibrosis intersticial y atrofia tubular.

Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Este video presenta un modelo de ratón de trasplante de riñón. Al utilizar las múltiples cepas endogámicas, que tienen clases de histocompatibilidad importantes conocidas, podemos recrear diferentes aspectos del rechazo del aloinjerto renal. Los datos presentados ilustran cómo este es un modelo útil En el estudio de estos mecanismos, esta caricatura esquemática muestra los principales pasos de este modelo.Se realiza una nefrectomía izquierda en un ratón donante y luego se prepara el riñón donante en un hisopo estéril. En una placa de cultivo, el ratón receptor se somete a una nefrectomía derecha antes de trasplantar el riñón del donante. El procedimiento se realiza utilizando instrumentos estériles esterilizados en autoclave y consumibles colocados dentro de un campo quirúrgico estéril.Si se operan varios animales, se utiliza un nuevo conjunto de instrumentos estériles para cada procedimiento o se esterilizan los instrumentos entre procedimientos. Usando un esterilizador de perlas, el operador usará una bata estéril, una mascarilla, un gorro y guantes. Un solo operador puede realizar este procedimiento preparando al donante hasta el punto de extracción del riñón.A continuación, se

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Investigación

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Medicina

Alogénico de piel el trasplante es un modelo estándar de ensayo de las respuestas de acogida de las células T a los antígenos MHC-donantes dispares. Este vídeo-artículo proporciona un tutorial visual de cada paso involucrado en la realización de un trasplante de BALB/c--&gt; C57BL / 6 la piel.

Trasplante de piel murina

ratones se han utilizado como modelo para estudiar muchas formas de trasplante, incluido el trasplante de córnea.  En este informe describimos un modelo murino para el trasplante de córnea tanto agudo como tardío.

Murino Trasplante corneal: un modelo para estudiar la forma más común de trasplante de órganos sólidos

Describimos un protocolo para el injerto de interposición aórtica en ratones. El objetivo del protocolo es proporcionar un modelo con el que estudiar los procesos patológicos y las estrategias terapéuticas relevantes para las reacciones aloinmunes en las arterias y los cambios arteriales resultantes que contribuyen al fracaso del trasplante de órganos.

Modelo de ratón de rechazo vascular inducida por aloinmune y Arteriosclerosis Trasplante

El objetivo de este manuscrito es describir los pasos necesarios para realizar un trasplante de riñón en un ratón, prestando especial atención a los detalles de la anastomosis arterial.

Riñón murino Trasplante Técnica

El propósito de este manuscrito y el protocolo es explicar y demostrar en detalle el procedimiento quirúrgico de trasplante ortotópico de riñón en ratas. Este método se simplifica para lograr la correcta perfusión del riñón del donante y acortar el tiempo de reperfusión mediante el uso de la técnica de anastomosis del manguito venoso y ureteral.

Trasplante de riñón de rata ortotópica: un enfoque quirúrgico novedoso y simplificado

Este protocolo presenta una nueva técnica quirúrgica de trasplante renal de ratón centrada en una estrategia de anastomosis arterial modificada. También se presenta una técnica de sutura vascular que incluye un método de anastomosis uréter-vejiga simple y seguro. Estas modificaciones acortan el tiempo de operación y mejoran la tasa de éxito del procedimiento de trasplante de riñón en ratones.

Una técnica quirúrgica modificada para el trasplante de riñón en ratones

El modelo de trasplante renal ortotópico de rata contribuye a investigar el mecanismo de rechazo del aloinjerto renal. El modelo actual aumenta la supervivencia de los receptores sin interferencia con el suministro de sangre y el reflujo venoso de la parte inferior del cuerpo utilizando una anastomosis de extremo a extremo de la implantación renal y un método de "túnel" de extremo a lado de anastomosis uréter-vejiga.

Un modelo de trasplante renal ortotópico de rata para el rechazo del aloinjerto renal

El protocolo de trasplante hepático auxiliar heterotópico en ratas descrito aquí ofrece una herramienta práctica de investigación para explorar los mecanismos de rechazo del aloinjerto hepático. Este modelo ayuda a aliviar los obstáculos quirúrgicos y el estrés animal del trasplante ortotópico de hígado en ratas.

Modelo de trasplante heterotópico auxiliar de hígado entero en rata que utiliza una hepaticoureterostomía para estudios de rechazo de aloinjertos

Este estudio establece dos modelos estandarizados de xenotrasplante murino para replicar específicamente el rechazo celular agudo y el rechazo agudo mediado por anticuerpos. Estos modelos sirven como una plataforma fiable para investigar los mecanismos del rechazo inmune de xenoinjertos, evaluar estrategias inmunosupresoras y avanzar en la investigación preclínica en xenotrasplantes.

Un modelo murino estandarizado con un flujo de trabajo de tres personas para estudiar el rechazo celular agudo y mediado por anticuerpos en xenotrasplantes

Nos en este documento presentamos un modelo de trasplante renal de rata para evaluar de forma no invasiva el rechazo agudo del aloinjerto mediante tomografía por emisión de positrones con 18F-fluorodesoxiglucosa.

Imagen no invasiva de rechazo agudo del aloinjerto después Rat Trasplante Renal Uso<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

Aprende el trasplante de riñón en ratón para estudiar el rechazo de aloinjertos mediante técnicas microquirúrgicas. Este modelo permite investigar mecanismos de rechazo agudo y crónico en inmunología.

Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto

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