Name: La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Aprende la técnica de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones para estudiar el remodelado cardíaco post infarto. Este método permite evaluar la función cardíaca mediante mediciones hemodinámicas invasivas in vivo.

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Este trabajo fue financiado por la subvención OT/13/090 de la KU Leuven y por la subvención G0A3114N de la FWO-Vlaanderen.

NOTA: Todos los procedimientos experimentales descritos en esta sección fueron aprobados por el Cuidado de Animales y el Comité Asesor de Investigación de la Universidad Católica de Lovaina Institucional (proyecto: 154/2013-B De Geest). 1. La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior <ol><li> Anestesiar el ratón por administración intraperitoneal de 40 mg / kg a 70 mg / kg de pentobarbital sódico. Asegúrese de que el ratón llega su plano adecuado de anestesia cuando ya no reacciona una pizca dedo del pie firme. Siempre confirme anestesia adecuada de esta manera antes de cualquier procedimiento quirúrgico o intervención. Utilice lubricante pomada oftálmica para evitar la sequedad de la córnea, mientras que bajo anestesia. Proporcionar analgesia preoperatoria 2-4 hr antes del inicio del procedimiento (buprenorfina 0,05 mg / kg SQ). <ol><li> Aplicar las técnicas de asepsia consistentes durante la cirugía supervivencia. Implementar procedimientos que inhiben a un microbiana con máximo grado posiblecontaminación de modo que la infección o la supuración significativa no se produce. Estos procedimientos incluyen el uso de instrumentos estériles y materiales estériles, la desinfección del área quirúrgica y la eliminación de la piel / pelo sobre el sitio quirúrgico y desinfección de este sitio. </li></ol></li><li> Intubar al ratón con una aguja roma de calibre 20 de elaboración propia. <ol><li> Ponga el ratón en posición supina con la hiperextensión de la cabeza. <ol><li> Enfocar la luz en la región del cuello. Levante la lengua con un pincet romo. La entrada de la laringe puede verse claramente. </li><li> Pasar la aguja roma a través de la laringe dentro de la tráquea bajo visión directa. Evaluar la intubación correcta conectando el ratón para el ventilador (volumen sistólico en l: 3 x peso corporal (g) + 155; frecuencia: 120 golpes por minuto). </li></ol></li><li> Por otra parte, mejorar la visualización de la intubación endotraqueal exponiendo primero atentamente la tráquea. <ol><li> Hacer una incisión de 5 mm mediados de cuello y retraertejido muscular justo por encima de la tráquea. </li><li> Realice la intubación usando un estereomicroscopio quirúrgico para la visualización directa de la tráquea. Levante la lengua e introduzca la aguja de calibre 20 auto-preparado embotado en la tráquea. Confirme intubación correcta conectando el ratón para el ventilador (volumen sistólico en l: 3 x peso corporal (g) + 155; frecuencia: 120 golpes por minuto). </li></ol></li></ol></li><li> Mantenga el ratón en posición supina y fijar el ratón con cinta. Realizar una cirugía en una almohadilla térmica para evitar la hipotermia. <ol><li> Afeitado y desinfectar la piel con Betadine. Tenga cuidado de que la extremidad posterior izquierda cruza la extremidad posterior derecha con el fin de obtener una vista mejor en el ventrículo izquierdo durante la cirugía. </li></ol></li><li> Hacer una pequeña incisión cutánea transversal hasta el esternón y separar la piel y los músculos subyacentes. </li><li> Tire de lado el m. pectoral menor y m. pectoral mayor con una sutura de seda 5-0. </li><li> Hacer una incision en el tercer espacio intercostal mediante la inserción de un pincet romo. </li><li> Mueva el pincet debajo de los músculos intercostales de lateral a medial hasta que se alcanza el esternón. Perforar la pared torácica empujando el pincet desde el interior a la piel. Complete la toracotomía cortando cuidadosamente el músculo intercostal justo por encima del pincet con una pequeña tijera. Utilice esta técnica para evitar la perforación de los pulmones. </li><li> Ponga una esponja sumergida en 0,9% de NaCl en la cavidad para proteger los pulmones. Introducir un esparcidor de la herida (retractor pecho) en el espacio intercostal para obtener la exposición del lado izquierdo del corazón. A partir de ahora, la aurícula izquierda, el ventrículo izquierdo y la arteria descendente anterior coronaria son visibles bajo el microscopio estereoscópico. </li><li> Realice una ligadura de la arteria descendente anterior coronaria con un solo 6-0 prolene ligadura sobre 1 mm por debajo de la punta de la aurícula izquierda. Esto es distal de la primera rama diagonal. NOTA: Como alternativa, 7-0 (00,05 mm de diámetro) o 8-0 roscas (0,04 mm de diámetro) se pueden utilizar. La aguja es una aguja Point círculo Taper C-1 13 mm 3/8. Ligadura exitosa de la arteria descendente anterior coronaria induce decoloración inmediata, lo que resulta en un miocardio aparece pálido en el territorio afectado. </li><li> Retire el separador de la herida (retractor en el pecho). <ol><li> Coloque tres 6-0 suturas Ti-Cron alrededor del espacio intercostal. Antes de apretar las suturas, retire la esponja de la cavidad torácica y volver a expandir los pulmones mediante el bloqueo de la salida del ventilador. Al hacerlo, los pulmones se vuelven a conectar con la pleura parietal. </li><li> Posteriormente, tirar de las suturas apretado y repetir reexpansión presionando hacia abajo en el pecho. Confirmar el cierre exitoso del tórax usando una pequeña cantidad de solución salina (no hay burbujas de aire deben considerarse cuando se aplica presión en el pecho). </li><li> Mira a través del músculo intercostal confirmar expansión normal de los pulmones. Vuelva a colocar los dos músculos pectorales, que actúa como unbarrera adicional para la prevención de un neumotórax. </li></ol></li><li> Cierre la piel con seda 5-0 suturas. </li><li> Desconecte el ratón del ventilador y permitir la recuperación sobre el cojín eléctrico. No deje a un animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal. No devuelva un animal que ha sido sometido a cirugía para la compañía de otros animales hasta que se recupere completamente. </li><li> Constantemente proporcionar analgesia postoperatoria (buprenorfina 0,05 mg / kg BID SQ durante al menos 48 horas después de la cirugía). </li></ol> 2. En vivo hemodinámico invasivo Mediciones en ratones <ol><li> Antes del procedimiento, sumergir el 1,0 francesa Millar catéter de presión en agua estéril a 37 ° C durante al menos 30 minutos para minimizar la deriva de la señal. Calibrar electrónicamente el sensor de presión a 0 mm Hg y 100 mm Hg y registrar datos en 2000 Hz. </li><li> Realizar la anestesia mediante la administración intraperitoneal de 1,4 g / kg de uretano. Compruebe queel ratón llega a su plano adecuado de anestesia cuando ya no reacciona una pizca dedo del pie firme. </li><li> Coloca el ratón anestesiado en posición supina. Asegure sus extremidades con cinta adhesiva. Mantenga la temperatura del cuerpo con una almohadilla térmica y monitor con una sonda rectal. Afeitarse la región del cuello y hacer una incisión en la línea media en la región del cuello para exponer la glándula tiroides. </li><li> Fijar el cuello con agujas dobladas. </li><li> Tire de un lado de la glándula salival y exponer la arteria carótida común derecha. El nervio vago, que se asemeja a un hilo blanco, se encuentra a lo largo de la arteria. Separe con cuidado la arteria carótida del nervio vago usando unas pinzas curvas. </li><li> Pasar un pinzas curvas debajo de la arteria carótida común derecha para separarlo de otros tejidos. Quitar el tejido conectivo alrededor de la arteria. </li><li> Pasar dos 6-0 cables de seda debajo de la arteria carótida común derecha. Hacer un nudo apretado en el alambre superior, que se coloca a la cabeza, cerrar y fijar con un Kocher (ligadura distal oclusiva). Pase el proxialambre mal dos veces de izquierda a derecha y fijar con 2 kochers (alambre no oclusiva proximal). </li><li> Mantenga la arteria carótida húmedo dejando caer un 0,9% de NaCl estéril. Seque el exceso de líquido con bastoncillos de algodón. </li><li> Hacer una incisión en la arteria carótida común derecha con una aguja de calibre 26 entre la ligadura distal y el alambre no oclusivo proximal. </li><li> Introducir el sensor de presión en la arteria. Verifique que no hay pérdida de sangre. Empuje suavemente el catéter de presión Millar 1.0 French adelante y ajustar el alambre no oclusiva proximal de tal manera que el catéter puede pasar cuidadosamente a través del cable por debajo de la clavícula. <ol><li> Minimizar la pérdida de sangre durante el ajuste del alambre no oclusivo proximal. No comprima el sensor de presión demasiado mientras avanzaba ya que es muy frágil. Como el hilo proximal no debe ocluir la arteria, el recipiente debe permanecer llena de sangre. </li></ol></li><li> Comience a grabar la señal de presión. Una señal de la presión arterial fluctuates en un ratón sano entre una presión diastólica de 60 a 70 mm Hg y una presión sistólica de 100 a 120 mm Hg. </li><li> Dirigir el catéter a través de la arteria innominada y a través de la aorta hacia el ventrículo izquierdo. La presión ventricular fluctúa entre 0 mm Hg y 100 a 120 mm Hg. Permitir que el catéter se estabilice el interior del ventrículo izquierdo. Grabar la señal durante 30 min a 60 min dependiendo de los requisitos experimentales. </li><li> Después de la terminación del experimento, en remojo el catéter en Alconox 1% durante 30 min. Lave el catéter con agua Milli-Q. Guarde el catéter en un bloque de espuma. </li><li> Recuperar datos del software de grabación para su posterior análisis. <ol><li> Para el análisis de datos, tenga en cuenta un intervalo de tiempo en que la señal de presión es estable. Elija por lo menos 10 ciclos cardíacos consecutivos de los datos registrados de interés. </li><li> Utilice software LabChart versión 8.0 o similar para analizar el ritmo cardíaco, la presión sistólica izquierda presión ventricular máxima, la mínima ventr izquierda diastólicapresión icular, la tasa pico de la contracción isovolumétrica ventricular izquierda (dP / dt max), la tasa pico de la relajación isovolumétrica ventricular izquierda (dP / dt min), la presión ventricular izquierda diastólica final, y la constante de tiempo de la ventricular izquierda isovolumétrica caída de presión (tau) 7. NOTA: La presión diastólica final corresponde a la presión en el punto de tiempo inmediatamente antes del aumento de la presión inducida por la contracción isovolumétrica. El cálculo de tau se basa en el ajuste de la presión ventricular izquierda en una curva de decaimiento monoexponencial, expresado como P (t) = p 0 e -t / tau + b, En esta fórmula, P (t) es la presión ventricular izquierda en el momento se ha llegado a t después de que el valor negativo máximo de dP / dt. El parámetro b corresponde a la asíntota teórico, que en un enfoque simplificado se puede suponer que es cero. Relajación isovolumétrica mejorada se traduce en un valor más pequeño de tau. </li></ol></li></ol&gt;

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Ninguno de los autores informa intereses financieros contrapuestos.

Cambios crónicos en la estructura y la función miocárdica, el desarrollo de la disfunción ventricular izquierda, y la progresión a la insuficiencia cardíaca pueden ser investigados en varios modelos murinos 12. La remodelación cardiaca y la disfunción puede ser inducida por lesión miocárdica o por sobrecarga de presión secundaria a la constricción de la aorta transversal, o pueden ser investigados en modelos genéticos de la miocardiopatía dilatada 12. Obviamente, el beneficio más pronunciado de los...

La insuficiencia cardíaca es un síndrome en el que el corazón no puede bombear sangre a un ritmo proporcional a las necesidades celulares de oxígeno en reposo o durante el estrés. Se caracteriza por retención de líquidos, dificultad para respirar y fatiga, en particular al esfuerzo. La insuficiencia cardíaca es un problema de salud pública creciente, la principal causa de hospitalización y una de las principales causas de mortalidad. La cardiopatía isquémica es la principal causa de insuficiencia cardíaca1.
La remodelación ventricular se refiere a los cambios en la estructura, el tamaño y la forma del ventrículo izquierdo. En otras palabras, la remodelación ventricular se refiere a una alteración de la arquitectura del ventrículo izquierdo. Esta remodelación arquitectónica del ventrículo izquierdo es inducida por una lesión (p. ej., infarto de miocardio), por sobrecarga de presión (p. ej., hipertensión arterial sistémica o estenosis aórtica) o por sobrecarga de volumen (p. ej., insuficiencia mitral). Dado que la remodelación ventricular afecta a la tensión de la pared, tiene un profundo impacto en la función cardíaca y en el desarrollo de insuficiencia cardíaca.
La pérdida de tejido miocárdico después de un infarto agudo de miocardio resulta en una disminución de la eyección sistólica y un aumento del volumen y la presión telediastólica del ventrículo izquierdo. El mecanismo de Frank-Starling, que implica que un aumento del volumen diastólico final da como resultado un aumento de la presión desarrollada durante la sístole, puede ayudar a restaurar el gasto cardíaco. Sin embargo, el aumento concomitante de la tensión de la pared puede inducir hipertrofia regional en el segmento no infartado, mientras que en el área infartada puede ocurrir expansión y adelgazamiento. Los estudios experimentales en animales muestran que el ventrículo infartado se hipertrofia y que el grado de hipertrofia depende del tamaño del infarto2. 
La pérdida de tejido miocárdico después de un infarto agudo de miocardio resulta en un aumento repentino de las condiciones de carga. El remodelado post-infarto se produce en el contexto de sobrecarga de volumen, ya que el tejido infartado estirado y dilatado aumenta el volumen del ventrículo izquierdo. Un aumento del volumen ventricular no solo implica un aumento de la precarga (estrés pasivo de la pared ventricular al final de la diástole), sino también un aumento de la poscarga (estrés total de la pared miocárdica durante la eyección sistólica). La poscarga se incrementa ya que se incrementa el radio sistólico. Por lo tanto, el remodelado ventricular post-infarto de miocardio se caracteriza por características mixtas de sobrecarga de volumen y sobrecarga de presión.
El miocardio consta de 3 componentes integrados: los cardiomiocitos, la matriz extracelular y la microcirculación capilar. Los 3 componentes están involucrados en el proceso de remodelación. Las metaloproteinasas de la matriz producidas por células inflamatorias inducen la degradación de los struts de colágeno de los intermiocitos y el deslizamiento de los cardiomiocitos. Esto conduce a la expansión del infarto caracterizada por el adelgazamiento y dilatación desproporcionados del segmento del infarto3. En etapas posteriores de la remodelación, se induce fibrosis intersticial, que afecta negativamente las propiedades diastólicas del corazón. 
El compartimento vascular y de cardiomiocitos en el miocardio debe permanecer equilibrado en el proceso de remodelación ventricular para evitar la hipoxia tisular4,5. El hecho de que la hipertrofia progrese a insuficiencia cardíaca o no puede depender fundamentalmente de este equilibrio entre el compartimento vascular y el de los cardiomiocitos en el miocardio. 
Un modelo de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratones se utiliza para investigar la remodelación ventricular y la función cardíaca después de un infarto de miocardio. Este modelo es fundamentalmente diferente en términos de objetivos y relevancia fisiopatológica en comparación con el modelo de ligadura transitoria de la arteria coronaria descendente anterior izquierda. En este último modelo de lesión por isquemia/reperfusión, la extensión inicial del infarto puede estar modulada por factores que afectan al rescate miocárdico tras la reperfusión6. Por el contrario, el área del infarto a las 24 horas después de la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda es fija. La función cardíaca en este modelo se verá afectada por 1) el proceso de expansión del infarto, la cicatrización del infarto y la formación de cicatrices; y 2) el desarrollo concomitante de dilatación del ventrículo izquierdo, hipertrofia cardíaca y remodelación ventricular.

<table><tbody><tr><td>Buprenorfina (Buprenex)</td><td>Bedford Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital sódico (Nembutal)</td><td>Ceva</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>VWR internationals</td><td>200065-400</td><td></td></tr><tr><td>5 - 0 sutura de seda</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson Medical</td><td>K890H</td><td></td></tr><tr><td>6 - 0 sutura de prolene&nbsp;</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson Medical</td><td>F1832</td><td></td></tr><tr><td>6 - 0 Ti- Sutura Cron</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson Medical</td><td>F1823</td><td></td></tr><tr><td>Uretano&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>94300</td><td></td></tr><tr><td>Alconox</td><td>Alconox Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ventilador, MiniVent Modelo 845</td><td>Hugo Sachs</td><td>73-0043</td><td></td></tr><tr><td>Retractor de tórax o retractor de tórax</td><td>Kent Scientific corporation</td><td>INS600240</td><td>ALM Autoretenedor, dentado, 7 cm de largo, 4 x 4 puntas en forma de "L", 3 mm x 3 mm</td></tr><tr><td>Catéter de presión Millar francés 1.0</td><td>Instrumentos Millar&nbsp;</td><td>SPR - 1000/NR</td><td></td></tr><tr><td>Powerlab</td><td>ADInstruments Pty Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabChart&reg; software</td><td>ADInstruments Pty Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonda rectal</td><td>ADInstruments Pty Ltd.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

La insuficiencia cardíaca es un síndrome en el que el corazón deja de bombear sangre a un ritmo acorde con las necesidades de oxígeno celular en reposo o durante el estrés. Se caracteriza por la retención de líquidos, falta de aliento, y la fatiga, en particular en el esfuerzo. La insuficiencia cardiaca es un problema creciente de salud pública, la principal causa de hospitalización, y una causa importante de mortalidad. La cardiopatía isquémica es la principal causa de insuficiencia cardíaca. Remodelación ventricular se refiere a cambios en la estructura, el tamaño, y la forma del ventrículo izquierdo. Esta remodelación arquitectónica del ventrículo izquierdo es inducida por lesión (por ejemplo, infarto de miocardio), por sobrecarga de presión (por ejemplo, hipertensión arterial sistémica o estenosis aórtica), o por sobrecarga de volumen. Desde la remodelación ventricular afecta el estrés de pared, tiene un profundo impacto en la función cardiaca y en el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Un modelo de ligadura permanente de la descendin anterior izquierdag arteria coronaria en ratones se utiliza para investigar el remodelado ventricular y la función cardiaca después de un infarto de miocardio. Este modelo es fundamentalmente diferente en términos de objetivos y relevancia fisiopatológica en comparación con el modelo de la ligadura transitoria de la arteria descendente anterior coronaria. En este último modelo de lesión por isquemia / reperfusión, la medida inicial del infarto puede ser modulada por factores que afectan recuperación miocárdica después de la reperfusión. En contraste, la zona del infarto a las 24 horas después de la ligadura permanente de la arteria descendente anterior coronaria es fijo. La función cardiaca en este modelo se verá afectado por 1) el proceso de expansión del infarto, la curación del infarto, y la formación de cicatrices; y 2) el desarrollo concomitante de la dilatación ventricular izquierda, hipertrofia cardiaca, y remodelación ventricular. Además del modelo de ligadura permanente de la arteria descendente anterior coronaria, la técnica de mea hemodinámica invasivamedicio- en ratones se presenta en detalle.

El grado de infarto de miocardio puede ser evaluada por azul de Evans / cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) doble tinción. TTC es un indicador redox, que se convierte en 1,3,5-triphenylformazan-rojo profundo en los tejidos debido a la actividad de diversas deshidrogenasas en presencia de NADH 8 viviente. La figura 1 muestra una sección representativa del corazón a las 24 horas después de la ligadura de la arteria descendente anterior coronaria. Zonas azules manchados indican regiones no...

La insuficiencia cardíaca es la principal causa de hospitalización y una de las principales causas de mortalidad. Se aplica un modelo de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratones para investigar el remodelado ventricular y la disfunción cardíaca después del infarto de miocardio. Se presenta la técnica de mediciones hemodinámicas invasivas en ratones.

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

El objetivo general de los siguientes experimentos es presentar la técnica de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratones. Este modelo se aplica para investigar el remodelado cardíaco y el desarrollo de insuficiencia cardíaca después de un infarto de miocardio. En la primera parte del video se demostrará el procedimiento de ligadura permanente, mientras que en la segunda parte, se mostrará la evaluación de la función cardíaca, utilizando mediciones hemodinámicas invasivas in vivo en ratones.El modelo de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda será demostrado por Marlin Locks, técnico superior de animales del Centro de Biología Vascular Molecular. Eja, estudiante de doctorado del grupo micro, presentará la técnica de mediciones hemodinámicas invasivas en ratones. Comience enfocando una luz en la región del cuello de un ratón sedado.A continuación, levante la lengua del animal con un alfiler romo para que se pueda visualizar claramente la entrada de la laringe. Pase una aguja desafilada de calibre 20 preparada por él mismo a través de la laringe hasta la tráquea y luego conecte el ratón al ventilador para evaluar que la intubación se colocó correctamente. Asegure el mouse a una almohadilla térmica para evitar la hipotermia.Teniendo cuidado de que la extremidad posterior izquierda cruce la extremidad posterior derecha para una mejor visión del ventrículo izquierdo durante la cirugía. A continuación, realice una pequeña incisión cutánea transversal hasta el esternón y separe la piel y los músculos subyacentes. Use una sutura de seda de cinco ceros para separar los músculos pectorales y luego inserte un juego de alfileres desafilados para hacer una incisión en el tercer espacio intercostal.Mueva el juego de clavos debajo de los músculos intercostales desde el lado lateral al medial hasta llegar al esternón. A continuación, empuje el clavo desde el interior hasta la piel para perforar la pared torácica. Finalmente, corte con cuidado el músculo intercostal justo por encima del clavo para completar la toracotomía.Tenga cuidado de evitar perforar los pulmones, coloque una esponja empapada con cloruro de sodio al 0,9% en la cavidad para proteger los pulmones y luego introduzca un retractor torácico en el espacio intercostal para exponer la aurícula izquierda, el ventrículo izquierdo y la arteria coronaria descendente anterior izquierda. Ahora ligar la arteria coronaria descendente anterior izquierda con una sola ligadura de prolina de seis ceros aproximadamente un milímetro por debajo de la punta de la aurícula izquierda y distal a la primera rama diagonal. Una ligadura exitosa inducirá una decoloración inmediata que dará como resultado una apariencia pálida de miocardio dentro del territorio afectado.Ahora coloque 3 6 0 suturas tron alrededor del espacio intercostal y retire la esponja de la cavidad torácica. Vuelva a expandir los pulmones bloqueando el flujo de salida del ventilador y, a continuación, apriete las suturas y presione el tórax para repetir la reexpansión. Utilice una pequeña cantidad de solución salina para confirmar la ausencia de burbujas de aire y el cierre exitoso del tórax.A continuación, examina el músculo intercostal para confirmar la expansión normal de los pulmones. Reposicione ambos músculos pectorales para que sirvan como una barrera adicional para la prevención de un neumotórax, y use cinco suturas de seda cero para cerrar la piel. A continuación, desconecte el ratón del ventilador, calentando al animal en la almohadilla térmica hasta que se haya recuperado por completo.Antes de comenzar las mediciones hemodinámicas, sumerja un catéter de presión French Miller 1.0 en agua estéril a 37 grados Celsius para minimizar la deriva de la señal Después de al menos 30 minutos, calibre electrónicamente el sensor de presión a cero y 100 milímetros de mercurio y registre los datos de referencia a 2000 hercios. A continuación, asegure el ratón anestesiado en posición supina sobre una almohadilla térmica, controlando la temperatura del animal con una sonda rectal. Afeita la región del cuello y luego haz una incisión en la línea media para exponer la glándula tiroides.A continuación, fije el cuello con agujas dobladas y separe la glándula salival para exponer la arteria carótida común derecha. Ahora identifique el nervio vago, que se asemeja a un hilo blanco y se encuentra a lo largo de la arteria, y use una pinza curva para separar cuidadosamente la arteria del nervio. Pase las pinzas curvas por debajo de la arteria carótida común derecha para separarla de los otros tejidos, eliminando cualquier tejido conectivo alrededor de la arteria.Luego pase 2 6 0 alambres de seda por debajo de la arteria carótida común derecha y haga un nudo apretado en el alambre superior. Coloca el alambre hacia la cabeza, ciérralo y fíjalo con una ligadura distal. A continuación, pase el alambre proximal dos veces de izquierda a derecha y fíjelo con dos alambres proximales no oclusivos en este momento también.Mantenga la arteria carótida húmeda goteando cloruro de sodio estéril al 0,9% sobre la arteria. A continuación, utilice una aguja de calibre 26 para hacer una incisión en la arteria carótida común derecha entre la ligadura distal y el alambre proximal no oclusivo. Introduzca el sensor de presión en la arteria.A continuación, empuje suavemente el catéter de presión hacia delante y ajuste el alambre proximal no oclusivo de tal manera que el catéter pueda pasar con cuidado a través del alambre, por debajo de la clavícula, y de modo que el vaso permanezca lleno de sangre. Ahora comience a registrar la señal de presión. En un ratón sano, la señal de presión arterial fluctúa entre una presión diastólica de 60 a 70 milímetros de mercurio y una presión sistólica de 100 a 120 milímetros de mercurio.Dirija el catéter a través de la arteria innominada y la aorta hacia el ventrículo izquierdo. La presión ventricular fluctuará entre cero y 100 a 120 milímetros de mercurio. Finalmente, después de permitir que el catéter se estabilice dentro del ventrículo izquierdo, registre la señal durante 30 a 60 minutos.Dependiendo de los requisitos experimentales, la extensión del infarto de miocardio se puede evaluar mediante la tinción doble TTC con azul de Evan. Aquí se muestran secciones representativas del corazón a las 24 horas después de la ligadura de la arteria coronaria descendente anterior izquierda. Las áreas teñidas de azul indican las regiones normales no isquémicas.Las áreas teñidas de rojo intenso indican las regiones isquémicas pero viables. Es decir, las zonas no infartadas en riesgo. Mientras que las áreas de color rojo pálido con tinción negativa indican las regiones infartadas, que suelen comprender entre el 50 y el 60% del área total de la pared del ventrículo izquierdo.La expansión del infarto se puede cuantificar evaluando el curso temporal de la longitud y el grosor del infarto. Aquí, se muestra una sección transversal representativa de un corazón teñida de rojo grave en el día 28 después de la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda. La expansión del infarto sustancialmente estirado corresponde a un aumento de la longitud absoluta del infarto y una disminución del espesor del infarto.En estos gráficos se muestra un registro representativo de la presión arterial y ventricular. La diferencia obvia entre las señales arteriales y las señales ventriculares es que la señal de la escalera desciende a aproximadamente cero milímetros de mercurio durante la diástole. Con este modelo, es importante tener en cuenta que la función cardíaca dependerá no solo de la pérdida de tejido miocárdico, sino también del proceso de expansión del infarto, en la cicatrización de los pedos y la formación de cicatrices, y en el desarrollo concomitante de dilatación del ventrículo izquierdo, hipertrofia cardíaca y remodelación ventricular.

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Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video muestra cómo utilizar un modelo rápido y fiable para estudiar los procesos patobiológicas y fisiopatológicos de la isquemia miocárdica.

LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

El procedimiento quirúrgico utilizado para inducir el infarto de miocardio experimental en ratones comienza con toracotomía izquierda entre la tercera y las costillas cuarta con el fin de visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo. La arteria coronaria izquierda se ligó, el pecho se cierra y el ratón se le permite recuperarse de manera espontánea.

Técnica modificada para la ligadura de la arteria coronaria en ratones

En este video, describimos un procedimiento quirúrgico para generar un modelo de ratón de infarto de miocardio mediante la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda.

Generación de un modelo murino de infarto de miocardio: un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en un modelo de ratón

Se introduce un método quirúrgico para inducir experimental de isquemia / reperfusión (I / R) lesión para simular el infarto de miocardio (MI) en modelos de ratón que permite una mayor claridad en el posicionamiento de la ligadura en la arteria descendente anterior izquierda (LAD) para aumentar la reproducibilidad de experimentos en ratones MI.

Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

Proporcionamos un método fiable para la ligadura de la arteria descendente anterior izquierda (LAD) en un modelo de ratón. Este método es comparativamente menos invasivo que otros métodos, ya que implica intubación endotraqueal, un abordaje de toracotomía del lado izquierdo y toracocentesis. Este método se puede utilizar como modelo para el infarto de miocardio (IM) agudo y crónico.

Murino descendente anterior (LAD) ligadura de la arteria coronaria: un modelo mejorado y simplificado para el infarto de miocardio

Aquí se describe un procedimiento quirúrgico que muestra cómo lograr la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente izquierda-anterior en ratones. Este modelo es de gran relevancia para investigar la fisiopatología del infarto de miocardio y los procesos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto de miocardio murino usando ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda

En este trabajo describimos un método sencillo y reproducible que puede inducir infarto de miocardio o lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones mediante ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación.

Inducción de infarto de miocardio y lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones

Hay varias diferencias entre los ventrículos derecho e izquierdo. Sin embargo, no se ha aclarado la fisiopatología del infarto del ventrículo derecho (RVI). En el presente protocolo, se introduce un método reproducible para la generación de modelos de ratón RVI, que puede proporcionar un medio para explicar el mecanismo de RVI.

Generación y caracterización del infarto de miocardio del ventrículo derecho inducido por ligadura permanente de la arteria coronaria derecha en ratones

Aquí se presenta un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria izquierda en ratones. Este modelo se puede utilizar para investigar la fisiopatología y la respuesta inflamatoria asociada después del infarto de miocardio.

Ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio

Numerosas manipulaciones genéticas y / o inyecciones intramiocárdica de genes, proteínas, células, y / o los biomateriales se superponen a la dimensión del tiempo en los estudios de agudos de isquemia / reperfusión y la remodelación crónica en ratones. Este video ilustra los procedimientos de microcirugía de la isquemia / reperfusión, la ligadura permanente de la arteria coronaria, y los estudios de inyección intramiocárdica.

Ligadura de las arterias coronarias y la inyección intramiocárdica en un modelo murino de infarto

Aprende la técnica de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones para estudiar el remodelado cardíaco post infarto. Este método permite evaluar la función cardíaca mediante mediciones hemodinámicas invasivas in vivo.

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca (Video) | JoVE Journal

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

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