Name: Alta definición Fourier Transform Infrared (FT-IR) espectroscópico de imágenes de cortes de tejidos humanos a la mejora de Patología (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Aprende a obtener imágenes infrarrojas de alta definición de muestras de tejido humano mediante espectroscopia FT-IR. Esta técnica sin etiquetas permite visualizar la bioquímica inherente para mejorar el diagnóstico patológico.

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Nos gustaría agradecer al Departamento de Patología de la Universidad de Illinois en Chicago por su apoyo financiero. Los servicios de histología e imágenes visibles fueron proporcionados por el Centro de Recursos de Investigación - Centro de Investigación de Histología e Imágenes de Tejidos de la Universidad de Illinois en Chicago, establecido con el apoyo del Vicerrector de Investigación, en particular, nos gustaría agradecer a Ryan Deaton y Andy Hall por su experiencia. También nos gustaría agradecer a Agilent Technologies, en particular a Frank Weston, por el apoyo y el préstamo de lentes IR adicionales.

1. La creación de un FT-IR Microscopio y adquisición de tejidos Imágenes <ol><li> Sección de un bloque de tejido incluido en parafina fijado en formol al 4 micras de espesor a una diapositiva compatible IR utilizando un microtomo. Alternativamente, la sección un nitrógeno tejido congelado líquido a 4 micras de espesor sobre una diapositiva compatible IR utilizando un criostato. NOTA: Por lo general, una sección de serie también será adquirida en un portaobjetos de vidrio y se tiñó con un especial (como hematoxilina y eosina (H &amp; E)) o tinción inmunohistoquímica. Además, las líneas celulares cultivadas pueden ser cultivadas en portaobjetos compatibles IR. Diapositivas compatibles IR pueden ser diapositivas reflectantes IR para imágenes reflexión modo (por ejemplo, diapositivas mirrir, oro) o IR diapositivas transparentes para la imagen modo de transmisión (por ejemplo, BaF2, CaF2). </li><li> Purgar el microscopio FT-IR y el espectrómetro utilizando aire seco o gas nitrógeno seco para eliminar el agua atmosférica del sistema. Espere al menos 45 minutos antes de la proyección de imagen para asegurar una minuciosa Purge. </li><li> Enfriar tanto el detector FPA (a 79 K) y el detector MCT interna en el microscopio FT-IR usando nitrógeno líquido. Enfriar los detectores aproximadamente cada 6 horas. ¡CUIDADO! El nitrógeno líquido es un fluido criogénico y puede causar quemaduras por frío, congelación y en espacios cerrados asfixia. </li><li> Montar la diapositiva muestra sobre la platina del microscopio para imágenes FT-IR. </li><li> Asegúrese de que la luz visible es &quot;ON&quot; y, a continuación, ya sea usando los binoculares o el programa de captura de la muestra (que proporciona una imagen en tiempo real visible del tejido), se centran en la muestra. </li><li> Abra el paquete de software de paquete como resoluciones a favor y haga clic en &quot;recoger&quot;, a continuación, haga clic en &#39;Diagnósticos&#39; y seleccione &#39;Alinear Espectrómetro&#39;. Asegúrese de que la trayectoria del haz al detector interno espectrómetro no esté obstruido. </li><li> Haga clic en &quot;Configuración de imagen&quot;. </li><li> En la pestaña de &#39;Electrónica&#39;, seleccione la &#39;velocidad&#39; adecuada &#39;Bajo SaRatio mpling (UDR) &quot;y&quot; ajustes de filtros &#39;en función del sistema. NOTA: En este ejemplo, el entorno es Velocidad = 2,5 KHz, UDR = 4 y Filtros = Ninguno. </li><li> En la pestaña &#39;Óptica&#39; aseguran que se seleccionan &quot;fuente de mitad de IR &#39;,&#39; apertura abierto &#39;y&#39; 100% atenuador de haz &#39;. </li><li> Para calibrar el sistema, en la pestaña &#39;Óptica&#39;, seleccione &#39;detector&#39; como &#39;tierra&#39;, &#39;Microscopio Detector&#39; como &#39;Izquierda&#39;, y luego seleccione ya sea &quot;transmitancia&quot; o &quot;Reflexión&quot; en &quot;modo de Óptica&quot; en función del tipo de la corredera que se utiliza. </li><li> Haga clic en Configuración, que abrirá la ventana &quot;Control Lancer &#39;. NOTA: Para el modo de reflexión siga las instrucciones en 1,12 y 1,13 y para el modo de transmisión sigue las instrucciones en 1.14 a 1.16. Continúe desde 1,17 tanto para la reflexión y transmisión. </li><li> Para el modo de reflexión, en y# 8216; &#39;clic&#39; Control de Lancer Raw &#39;. Utilizando la palanca de control de la etapa y ver la imagen en directo de la imagen interferograma FT-IR (imagen superior derecha), vaya a un área limpia en la diapositiva. </li><li> Ajuste el tiempo de integración a aproximadamente 8.000 cargos. A continuación, mover la etapa de encontrar un pedazo de tejido con la estructura, preferiblemente el borde de un tejido, y perfeccionar el enfoque de la imagen. Cambiar &quot;calor&quot; y las opciones de &#39;contraste&#39; para ayudar a formar una imagen para mejorar el enfoque, esto no tendrá ningún efecto en los datos de IR. Continúe desde 1,18. </li><li> Para el modo de transmisión, en haga clic en &#39;Control de Lancer&#39; en &#39;Raw&#39;. Utilizando la palanca de control de la etapa y ver la imagen en directo de la imagen interferograma FT-IR (imagen superior derecha), vaya a un área limpia de la diapositiva. </li><li> Ajuste el tiempo de integración a aproximadamente 8.000 cargos. </li><li> Ajustar la parte inferior de enfoque / objetivo condensador para aumentar el número de cuentas a su maximum. Ver la forma de la imagen inferior derecha en el control de Lancer para asegurarse de que es gaussiana en apariencia y relativamente uniforme. Ajuste el tiempo de integración de nuevo a alrededor de 8.000 cuentas. NOTA: Si cualquiera de los píxeles en la imagen interferograma FT-IR gire blanco, reducir el tiempo de integración. </li><li> Mover la etapa de encontrar un pedazo de tejido con la estructura, preferiblemente el borde de un tejido y perfeccionar el enfoque de la imagen. Opcionalmente, cambie las opciones calor y contraste para ayudar a formar una imagen para mejorar el enfoque, pero no tendrá ningún efecto en los datos de IR. </li><li> Utilizando la palanca de control de la etapa, vaya a un área limpia de la diapositiva. Pulse el botón &quot;Calibrar&quot;. Asegúrese de que el &#39;Out Of Range (FQ) «valor es menor que 50 y la diferencia entre el&#39; High Flux &#39;y cuenta&#39; Low Flux &#39;es al menos 4.000 recuentos. </li><li> Seleccione &quot;Aceptar&quot; dos veces. En las fichas de óptica seleccionar; &#39;MCT&#39; &#39;detector&#39; = &#39;Microsfrente Detector &#39;=&#39; derecho &#39;y haga clic en &quot;Configuración&quot;. En este punto habrá un interferograma FT-IR en la pantalla. Haga clic en &quot;Buscar Centerburst &#39;. Haga clic en &#39;OK&#39;. </li><li> En la pestaña &#39;Óptica&#39;, vuelva a seleccionar &#39;detector&#39; = &#39;tierra&#39;, &#39;Microscopio Detector&#39; = &quot;izquierda&quot; y seleccione &quot;Configuración&quot;. </li><li> En Control de Lancer - que la imagen es aún en un área limpia y haga clic en &#39;Calibrar&#39; de nuevo. Haga clic en &#39;OK&#39;. </li><li> A continuación, recoger una imagen de FT-IR de fondo para corregir la absorbancia de la atmósfera, del sistema y de diapositivas. Ve a la pestaña &#39;Electrónica&#39; y seleccione una resolución espectral adecuada, típicamente de 4 cm-1 o 8 cm -1 para el tejido. </li><li> Ve a la pestaña &quot;fondo&quot; y escriba 128 en &#39;Scans para co-add&#39;. Seleccione la opción &#39;Nuevo archivo ... &quot;botón y colocar el archivo de fondo en pliegue apropiadoer. Compruebe la pestaña &#39;Imaging&#39; para asegurarse de mosaicos es de 1 por 1. Haga clic en el &quot;fondo&quot;, esperar a que la exploración hasta el final y confirmar que desea guardar el archivo. Haga clic en una región en la imagen de fondo FT-IR y comprobar el espectro. </li><li> Para tomar una imagen grande mosaico de la muestra, seleccione la pestaña &#39;Imaging&#39; e introduzca el número de cuadros X e Y para el tamaño del mosaico que desea adquirir. </li><li> Haga clic en &quot;Configuración&quot; y en el Control Lancer utilizar la vista de IR en vivo para encontrar el área de interés. Si se toma un mosaico, centrar la transmisión en vivo en el medio de la zona de interés. Haga clic en &#39;OK&#39;. Ve a la pestaña &#39;Electrónica&#39; y escriba el número de exploraciones para co-add (normalmente un valor entre 2 y 16 exploraciones para el tejido). Haga clic en «Buscar». </li><li> Compruebe la imagen FT-IR recogido en la pantalla para asegurarse de que se ve enfocado. Haga clic sobre la imagen para que aparezca un espectro IR de ese lugar y comprobar que parece tener una señal aceptable al ruido. Acquire una imagen visible de la muestra. </li><li> Guarda la imagen y exportarla al formato requerido, tales como ENVI-IDL. </li></ol> 2. Adaptación de un microscopio FT-IR para capacidades de alta definición NOTA: La mayoría de los sistemas de FT-IR están equipadas con un objetivo aproximadamente con un aumento de 15x y 0,5 apertura numérica (NA). Para la imagen en modo de alta definición, un IR compatible 36X o 74X objetivo puede ser usado para dar difracción capacidades de imagen limitados. <ol><li> Retire 15X el objetivo del sistema desatornillando hacia la izquierda. </li><li> Atornillar ya sea en el objetivo 36X o 74X en su lugar. Alinear el objetivo antes de su uso. Utilice tubos de extensión de la lente para llevar el objetivo lo suficientemente cerca de la muestra. </li><li> Coloque el tejido bajo el nuevo objetivo y enfoque utilizando la luz visible ya sea utilizando los prismáticos o programa Capture de la muestra. NOTA: Imágenes de alta definición debe hacerse de modo de transmisión. La estrecha distancia de trabajo de laobjetivos en sí (1-2 mm) y muy poca profundidad de foco requiere centrarse despacio y con cuidado, teniendo tiempo para bajar el objetivo sin tocar la muestra. </li><li> Siga las instrucciones de 1,6 a 1,11. NOTA: Debido a ser mucho más difícil de enfocar y mucho menos luz que llega al detector, el siguiente protocolo se ajusta basándose en 1.14. </li><li> En el modo de transmisión, haga clic en &#39;Raw&#39;. Utilizando la palanca de control de la etapa y ver la imagen en directo de la imagen interferograma FT-IR (imagen superior derecha), mover a los tejidos y centrarse (idealmente en un borde). NOTA: Esto puede ser difícil, por lo tanto, ajustar el &quot;calor&quot; y las opciones de &#39;contraste&#39; para ayudar a formar una imagen para mejorar el enfoque (estas opciones no afectan a los datos IR). </li><li> Una vez centrado, con el joystick de control de la etapa y la vista IR vivo traslado a una zona limpia de la diapositiva. Ajuste el tiempo de integración a aproximadamente 8.000 cargos. Ajustar la parte inferior de enfoque objetivoaumentar el número de recuentos a su máximo. Ajuste el tiempo de integración de nuevo a alrededor de 8.000 cuentas. </li><li> Mover la etapa de encontrar un pedazo de tejido con la estructura, preferiblemente el borde de un tejido, y perfeccionar el enfoque de la imagen. </li><li> Si mosaicos de una imagen en alta resolución, ajuste la etapa para permitir el movimiento correcto requerido a través de distancias para los mosaicos de precisión. Para cambiar los ajustes de distancia de la etapa, vaya a &#39;fase de instalación &quot;en el Control Lancer y ajustar la configuración de alineación horizontal y vertical para permitir la creación de mosaicos correcta. </li><li> Utilizando la palanca de control de movimiento etapa a una zona limpia de la diapositiva. Pulse el botón &quot;Calibrar&quot;. Asegúrese de que el fuera de rango (FQ) valor es inferior a 50, tanto para 36X y 74X objetivos. Asegúrese de que la diferencia entre el alto flujo y los valores Low Flux es de al menos 1.000 cuentas para el objetivo 74X y 2000 conteos para el objetivo de 36X. </li><li> Continuar 1,19-1,27. El número de exploraciones en 1,23 y1.25 tendrá que ser ajustado debido a la señal reducida a aproximadamente 256 exploraciones para la imagen de fondo y de 16 a 128 barridos para la imagen de los tejidos. </li></ol> 3. Visualización de y clasificar al espectro IR Conjuntos de datos NOTA: En esta sección, vamos a discutir la forma de visualizar y extraer datos de imágenes espectrales utilizando el procesamiento de imágenes geoespaciales y análisis de software tales como ENVI + IDL, sin embargo, el proceso es muy similar para cualquier software alternativo, como MATLAB, el software libre como Cytospec o el propio software del desarrollador instrumento. Hay algunas diversas técnicas de procesamiento espectral que se pueden realizar en los datos infrarrojos. <ol><li> Abrir el procesamiento de imágenes geoespaciales y software de análisis y cargar el archivo de datos IR. </li><li> Aplicar un algoritmo de corrección de línea de base a los datos de IR seleccionando &quot;Herramientas espectrales&quot; y desplácese hacia abajo y haga clic en &quot;espectros de absorción&quot;. Observar un menú emergente y seleccione &quot;corre Línea Basección &quot; NOTA: La corrección de línea de base eliminará una pendiente de compensación de línea de base a partir de los datos debido a la dispersión </li><li> Realizar la normalización espectral, por ratioing los datos a un cierto pico espectral (típicamente de amida I (1650 cm -1) o amida II (1550 cm -1)) o área bajo una región definida de los espectros. Para ello, seleccione &quot;Normal espectros&quot; en el capítulo &quot;Absorbancia Spectra&quot; Opciones del menú. NOTA: Spectral normalización se lleva a cabo de modo que las diferencias en los espectros son verdaderas diferencias bioquímicas y no debido a espesor o diferencias de densidad entre las muestras. </li><li> Usa un algoritmo de reducción de ruido para eliminar el ruido de los espectros 28 si es necesario. NOTA: Hay varios enfoques disponibles por los cuales la corrección de línea de base, la normalización espectral y la reducción de ruido se pueden lograr, con la mayoría del software que tiene algoritmos automatizados construidos en Además, hay un número emergente de enfoques que corregir para.aberraciones espectrales, que han sido discutidos en detalle 29-42; Sin embargo, la comunidad aún no está de acuerdo en cuales de ellas son necesarias. </li><li> Observar una lista de todas las frecuencias IR recogidos dentro de la imagen (típicamente de un rango espectral de 900 a 4000 cm -1). Haga clic en las frecuencias que corresponden a biomoléculas específicas para observar una imagen del tejido en la frecuencia seleccionada. <ol><li> Por ejemplo, haga clic en la banda de 1650 cm -1 para observar la distribución de las proteínas en la muestra. Alternativamente, haga clic en la banda de 1080 cm -1 para observar la distribución de los ácidos nucleicos en la muestra. Utilice el número de onda 1650 cm -1. </li></ol></li><li> Crear imágenes adicionales mediante el cálculo de coeficientes espectrales pico de altura, relaciones de área de pico, etc., que permitan la visualización de los diferentes componentes biomoleculares. Haga clic en &quot;Herramientas espectrales &#39;y luego seleccione&#39; Ratios altura del pico&quot; o &quot;Calcular el área de imagen &#39;para crear imágenes. </li><li> Busque en la sección de tejido adyacente correspondiente que se tiñeron utilizando un sistema de imágenes de diapositivas todo único que captura imágenes de campo claro. Junto a la imagen IR, que aparezca la imagen digital del tejido teñido con un programa de imagen visible. </li><li> Haga clic derecho sobre la imagen en una región de interés y seleccione el perfil de Z &#39;. Esto le dará a la información espectral en el píxel seleccionado. </li><li> Mira los espectros IR de múltiples píxeles de varias clases, tales como la comparación de tipos celulares, estados de enfermedad. Marcar píxeles específicos sobre la imagen utilizando el &#39;regiones de interés &quot;herramienta (ROI). Para realizar esto, haga clic derecho sobre la imagen y selecciona &quot;herramienta de ROI. Crear las clases que estén etiquetados, por ejemplo normal, displasia, y clases de cáncer. A continuación, seleccione &quot;Tipo de retorno de la inversión &#39;-&#39; Point &#39;. A continuación, seleccione la clase para seleccionar píxeles para y se basan en los píxeles correspondientes en la imagen IR. Derivar los espectros promedio fo cada una de las clases utilizando la herramienta &#39;ROI promedio&#39;. </li><li> Comparación de los espectros obtenidos por el trazado de en software de gráficos. </li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

FT-IR es una modalidad emergente de libre de etiquetas de imágenes bioquímica de las secciones de tejido, con el potencial de tener un papel importante en la mejora del nivel actual de diagnóstico en la patología. El actual estándar de oro para la patología requiere tejidos para realizar una biopsia, se fijaron en formol, embebidos en parafina, seccionadas varias veces, y se tiñeron con múltiples manchas. Un patólogo altamente capacitado tiene que evaluar subjetivamente visualmente la estructura del tejido y la morfología celular para determinar un diagnóstico. Aquí te mostramos cómo recoger imágenes infrarrojas de alta resolución desde el mismo tipo de secciones y discutir algunos de los enfoques computacionales para examinar las diferencias químicas entre los tipos de células y estados de enfermedad. Los pasos críticos dentro de este protocolo son asegurar que los tejidos se centran mucho cuidado y que el sistema está bien calibrados para asegurar que los datos espectroscópicos de muy alta calidad. El cuidado al configurar el sistema es particularmente criti<html> cal cuando se trabaja con objetivos de gran aumento. Para ayudar en la solución de problemas, la siguiente lista cubre algunos de los potenciales dificultades encontradas; Problema: Baja intensidad de IR cuando se generan imágenes en la reflexión. Solución: Compruebe la orientación de diapositivas IR como el revestimiento reflectante puede estar en el lado equivocado de la diapositiva. Problema: Baja señal / señal de alerta roja en el Control de Lancer. Solución: detectores frescos con LN2. Se requiere de nitrógeno líquido para los detectores FPA para funcionar y requiere periódicamente rellenada. Problema: Velocity errores error / movimiento. Solución: Cambiar espectrómetro y reducir las vibraciones. Las vibraciones harán que el espejo móvil en el interferómetro a ser perturbado. Problema: los picos de vapor de agua en los datos. Solución: Aumentar la purga del sistema y proteger la muestra de aire. Problema: centerburst válido. Solución: Encuentra centerburst nuevo. e_content &quot;&gt; Problema:. diferencia de bajo flujo en la transmisión, a pesar de que se centró Solución:. Ajuste condensador inferior Esto ocurrirá cuando la luz IR no se está enfocada a un punto en la muestra. En este trabajo, nos hemos centrado en la forma de adquirir imágenes de alta definición IR de los tejidos, ya sea en el modo de transmisión o transflectancia. La naturaleza de las imágenes FT-IR, es que hay múltiples modificaciones que se pueden hacer a la adquisición de datos, tales como, el tipo de sustrato, la técnica de fijación, espesor de la muestra, la resolución espectral, interferómetro velocidad Espejo etc. El efecto de estos parámetros tiene ha discutido en extenso detalle recientemente 4,5,17,51. Hay una serie de modificaciones que pueden introducirse en el sistema de formación de imágenes incluyendo imágenes en modo ATR 10,24,26 y el uso de enfoques térmicas nanoescala 52,53 para permitir la formación de imágenes IR de alta resolución. La principal limitación con imágenes de infrarrojos de alta resolución es que el tiEMAS deben ser cuidadosamente preparados y lo suficientemente delgada para IR para pasar a través (típicamente 4 micras de espesor). Además, las imágenes de FT-IR de transmisión y reflectancia requiere las muestras a ser seco debido a la absorbancia de IR por el agua. Sin embargo, las imágenes de FT-IR tiene ventajas significativas sobre otras técnicas, ya que puede imagen muy rápidamente grandes áreas de tejido mientras que se derivan información bioquímica rica y detallada. Otras técnicas similares que se derivan información bioquímica de una manera libre de etiquetas incluyen la espectroscopia Raman, sin embargo el tiempo de adquisición de datos es mucho más lento para adquirir imágenes. Están surgiendo enfoques de imagen Nueva Raman incluyendo la dispersión Raman estimulada (SRS) y coherente Antistokes dispersión Raman (CARS); sin embargo, tienen rango espectral de acceso limitado o imágenes de una sola frecuencia. Los avances en la velocidad de adquisición de datos, la resolución espacial, y la disponibilidad de métodos de cálculo han sido de gran valor en la toma de FT-IR imaging un enfoque más factible para la traducción como una nueva herramienta de imagen en patología. Los recientes avances en la resolución espacial han sido especialmente importantes para la patología del tejido debido a tipos de células clave no son resolubles mediante sistemas de imágenes de FT-IR convencionales. El trabajo reciente de Reddy et al. mostró cómo modelar un sistema ideal para obtener la resolución espacial óptima de un sistema de imagen FT-IR 5. El ejemplo tejido renal se presenta en este trabajo se demuestra la importancia de una mayor resolución espacial con el fin de extraer información bioquímica de las estructuras glomerulares (Figura 3 y Figura 5). En el futuro, los nuevos avances en Quantum Cascade Lasers como muy brillantes fuentes de luz IR 54-57, imagen espectral 3D de 58 años, y los avances en el campo de las tecnologías de nanoescala IR 52,53,59,60 sostienen emocionantes nuevas vías de investigación que pueden tener enormes implicaciones en el futuro de la imagen de tejidos. <p clculo = &quot;jove_content&quot;&gt; Hemos presentado ejemplos de aplicaciones en enfermedades hepáticas y renales, donde hay una necesidad de información bioquímica adicional que puede ser de valor diagnóstico. La espectral Patología Laboratorio en el Departamento de Patología de la Universidad de Illinois en Chicago se centra en la traducción de las tecnologías de imágenes IR a mejorar el diagnóstico de enfermedades y la mejora de la predicción de la evolución del paciente. Imágenes FT-IR puede superar algunas de las limitaciones actuales en la práctica patología donde se requiere información cuantitativa y objetiva. En particular, el trabajo futuro se centra en la identificación de áreas en la práctica la patología actual donde las técnicas actuales no proporcionan sensibilidad diagnóstica adecuada o proporcionar información limitada. Existe una clara necesidad en la mejora de la práctica actual de la patología y hacia dar más información al patólogo sobre el estado de la enfermedad de un paciente, que puede ser alcanzable usando formación de imágenes de alta definición FT-IR.

Espectroscopia IR ha sido una herramienta de análisis disponible en alguna forma desde la década de 1930; Sin embargo, sólo se ha sido en la última década que el área de formación de imágenes de tejido con FT-IR se ha disparado. Los avances de la FT-IR para obtener imágenes de tejidos se han impulsado en gran parte por tres acontecimientos fundamentales: 1) aumento de la velocidad de adquisición de datos debido a la disponibilidad de un gran conjunto de plano focal (FPA) detectores que típicamente tienen miles de infrarrojos detectores sensibles 1 , 2, 2) el desarrollo de algoritmos de procesamiento de avanzada y capacidad de cálculo para manejar grandes datos hiperespectrales establece 3, y 3) el modelado de sistemas de imágenes FT-IR para maximizar la resolución espacial de 4,5. Ha habido numerosos alta calidad y muy extensos artículos que analizan el campo de la espectroscopia FT-IR recientemente 6-16, además de un artículo de Nature Protocolos que detalla los pasos para obtener el punto espectros o mapas de los tejidos 17. En este artículo, nos centraremos en la protocol para obtener imágenes de los tejidos utilizando un detector de 128 x 128 FPA en un sistema de FT-IR modificado con capacidades de alta definición. Imágenes FT-IR mucho tiempo se ha sugerido que es una herramienta potencialmente deseables para celular y imágenes de tejidos debido a la capacidad de obtener imágenes en las que cada píxel tiene una gran cantidad de información bioquímica. Formación de imágenes FT-IR se basa en el principio de que diferentes biomoléculas en una muestra absorberán cuantitativamente diferentes regiones del infrarrojo medio; esto permite la derivación de una &quot;huella digital bioquímica &#39;. Esta huella digital había sido demostrado en muchos estudios para alterar entre los diferentes tipos de células y estados de enfermedad. A diferencia de la patología en la práctica convencional, donde las manchas y marcadores inmunohistoquímicos necesitan ser utilizado para visualizar e identificar tipos de células y estructuras de tejido que se utilizan para guiar las opciones de diagnóstico y tratamiento, las imágenes de FT-IR se forman sobre la base de la bioquímica inherente del tejido. El techniq actualue tinción de tejido para el diagnóstico es que consume tiempo, destructivo, laborioso, y requiere experiencia subjetiva del patólogo, mientras que FT-IR ofrece el potencial para hacer de este proceso rápido, no destructivo, altamente automatizada, y más objetiva. Además, FT-IR proporciona una nueva ruta para la obtención de información bioquímica adicional que puede no ser fácilmente accesible a través de técnicas de tinción convencionales. Uno de los avances más emocionantes en los últimos años ha sido la disponibilidad de métodos de formación de imágenes de alta resolución que ahora se puede permitir la visualización y caracterización de los tipos de células y estructuras de tejido que son críticos para el diagnóstico de enfermedades integral. Una de estas técnicas es de reflectancia total atenuada (ATR) FT-IR que incorpora una lente de inmersión sólido (SIL) de un alto índice de refracción que permite la formación de imágenes de alta resolución 18, con muchos estudios muy interesantes que muestra sus aplicaciones 19-25. Además, wcomo ha demostrado recientemente que el aumento de la resolución espacial asociada con las imágenes de ATR puede permitir la visualización y clasificación de células endoteliales y mioepiteliales en el tejido mamario que forman un componente clave de diagnóstico de cáncer de mama 26. Mientras que las imágenes ATR es muy útil, esta técnica requiere que el SIL para hacer contacto con el tejido para formar imágenes FT-IR; por lo tanto, su uso es algo limitada para patología del tejido donde grandes regiones de tejidos deben ser reflejados rápidamente. Un segundo enfoque se demostró mediante el acoplamiento de un objetivo de gran aumento a un sistema de FT-IR existente que utiliza un sincrotrón como fuente luminosa de IR, es posible iluminar plenamente de FPA y la imagen con un tamaño efectivo de píxel de 0,54 x 0,54 m. Esto permitió a visualizar las estructuras clave en tejidos de mama y de próstata que no se puede resolver utilizando sistemas de FT-IR convencional 4. Si bien estos aumentos dramáticos en la imagen IR resolutio espacialn eran alucinantes, su uso sigue siendo limitado debido a que requiere un sincrotrón. Posteriormente, un sistema óptimo fue diseñado, que también podría permitir capacidades de imagen de alta definición con un tamaño de 1,1 x 1,1 m píxeles sin el requisito de una fuente de sincrotrón, sino más bien el uso de una fuente de IR GLOBAR tradicional 5. En este artículo, mostramos cómo modificar un sistema de imagen existente comercial FT-IR para permitir la difracción de imágenes IR limitado de tejidos con una señal aceptable a ruido utilizando múltiples objetivos IR (15X, 36X, 74X y). El tamaño efectivo de píxeles con los tres objetivos es de 5,5 x 5,5 m (15X), 2,2 x 2,2 m (36X) y 1,1 x 1,1 m (74X). A continuación damos algunos ejemplos de la importancia de los avances en la resolución espacial para la detección de la enfermedad en el hígado y el riñón biopsias 27.

<table><tbody><tr><td>Sistema FT-IR de la serie Cary 600</td><td>Agilent</td><td>Múltiples configuraciones&nbsp;</td><td>Existen sistemas alternativos de imágenes FT-IR</td></tr><tr><td>Objetivo ReflX ajustable 74X/0.65 NA IR</td><td>Óptica Edmund</td><td>66-592</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo ReflX ajustable 36X/0.5 NA IR</td><td>Óptica Edmund</td><td>66-586</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos MirrIR</td><td>Kevley Technologies</td><td>CFR</td><td>Para mediciones de modo de reflexión FT-IR</td></tr><tr><td>Portaobjetos de fluoruro de bario Laboratorios Internacionales de</td><td>Cristal</td><td>Múltiples tamaños</td><td>Para mediciones en modo de transmisión FT-IR</td></tr><tr><td>Portaobjetos de fluoruro de calcio</td> International <td>Crystal Laboratories</td><td>Múltiples tamaños</td><td>Para mediciones en modo de transmisión FT-IR</td></tr><tr><td>Nitrógeno seco/gas de aire seco</td><td>Múltiples proveedores de gas</td><td>Múltiples tamaños</td><td></td></tr><tr><td>Hexano</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Múltiples tamaños</td><td>Para desparafinizar tejido</td></tr><tr><td>Nitrógeno líquido</td><td>Múltiples proveedores de líquidos criogénicos</td><td>Múltiples tamaños</td><td></td></tr><tr><td>Software ENVI-IDL</td><td>Exelis-Vis</td> Otros paquetes de <td></td><td>software disponibles</td></tr><tr><td>Imager de portaobjetos completos</td>, <td>Scanscope (Aperio) o Nanozoomer (Hamamatsu)</td><td></td><td>Para obtener imágenes de portaobjetos manchados</td></tr></tbody></table>

alta definición fourier transform infrared (ft-ir) espectroscópico de imágenes de cortes de tejidos humanos a la mejora de patología

High-definition Fourier Transform Infrared (FT-IR) Spectroscopic Imaging of Human Tissue Sections towards Improving Pathology

De alta definición Transformada de Fourier de infrarrojos (FT-IR) imágenes espectroscópicas es un enfoque emergente para obtener imágenes detalladas que se han asociado información bioquímica. Imágenes FT-IR de tejido se basa en el principio de que las diferentes regiones de las infrarrojo medio son absorbidos por diferentes enlaces químicos (por ejemplo, C = O, CH, NH) dentro de las células o tejidos que luego pueden estar relacionados con la presencia y composición de biomoléculas (por ejemplo, lípidos, DNA, glucógeno, proteínas, colágeno). En una imagen FT-IR, cada píxel dentro de la imagen comprende un espectro de infrarrojos (IR) que puede dar información sobre el estado bioquímico de las células que a continuación pueden ser explotadas para el tipo celular o de tipo enfermedad de clasificación. En este artículo, nos muestran: cómo obtener imágenes infrarrojas de los tejidos humanos utilizando un sistema FT-IR, como modificar la instrumentación existente para permitir capacidades de imagen de alta definición, y cómo visualizar imágenes FT-IR. A continuación, presentamos algunas aplicaciones de FT-IRde la patología utilizando el hígado y el riñón como ejemplos. Imágenes FT-IR tiene aplicaciones interesantes en la prestación de una ruta nueva para obtener información bioquímica de las células y tejidos en una ruta que no cause interferencias enteramente etiqueta-libre hacia dar una nueva visión de los cambios biomoleculares como parte de los procesos de enfermedad. Además, esta información bioquímica potencialmente puede permitir un análisis objetivo y automatizado de ciertos aspectos de diagnóstico de la enfermedad.

Formación de imágenes FT-IR permite la derivación de imágenes IR de tejido que pueden dar diferentes contrastes dependiendo de la frecuencia IR de interés. Además, en una imagen IR, cada píxel se compone de todo el espectro IR, con diferentes picos correspondientes a diferentes biomoléculas que pueden dar información acerca de las propiedades bioquímicas de tipos de células o estados de enfermedad (Figura 1). Aquí, hemos demostrado cómo comparar las firmas espectrales entre las clases, clasificación automatizada sin embargo más avanzado es posible el uso de algoritmos adicionales 3,43-50, como la clasificación bayesiana, Random Forests, Redes Neuronales Artificiales y Análisis Cluster Jerárquico se puede realizar en la datos. Enfoques clasificación supervisada permitirán la construcción de un clasificador que puede ser entrenado para permitir el reconocimiento automático de tipos de células o estados de enfermedad. Enfoques de clasificación no se pueden utilizar para buscar natural difconferencias en el tejido o células debido a la variación de bioquímica. Instrumentación FT-IR ha evolucionado a lo largo de las últimas décadas, a partir de la medición en un punto único modo / mapeo usando IR aberturas opacos a modo de imagen usando objetivos Cassegrain, utilizando un objetivo que ilumina junto con un objetivo recolectar en el modo de transmisión o un solo objetivo que ambos se ilumina y se acumula en-modo de reflexión (Figura 2). Se ha demostrado recientemente que el objetivo recoger en el modo de transmisión podría ser cambiado para un mayor aumento y objetivo numérico de abertura para permitir la formación de imágenes IR de difracción limitada, que conduce a aumentos sustanciales en la resolución espacial de las imágenes IR recogidos 4,5. Los avances en la resolución espacial de las imágenes de tejidos han sido de vital importancia ya que ahora podemos identificar los tipos de células y estructuras de tejido, por ejemplo, las unidades funcionales del riñón, los glomérulos, mediante la adaptación de la casaSistemas de FT-IR (Figura 3). De alta definición de imagen FT-IR permite obtener imágenes más detalladas de los tejidos para ser examinados para identificar las regiones anormales e identificar diferencias bioquímicas entre diferentes tipos de células. En un núcleo de tejido hepático, es posible visualizar los hepatocitos y las regiones de la infiltración de fibrosis que divide dos áreas distintas de la displasia y cirrosis no displásico (Figura 4). Estamos trabajando para explotar este hacia la fabricación de herramientas de diagnóstico automatizados para uso en casos difíciles de enfermedad hepática. Es importante destacar que el aumento de la resolución espacial puede ahora nos permitirá aislar las características estructurales específicas que pueden ser modificados químicamente por la enfermedad antes de los cambios histológicos son evidentes. Por ejemplo, estamos enfocados en la identificación de los cambios bioquímicos en las estructuras glomerulares del riñón como la cápsula de Bowman, mesangio, la membrana basal glomerular y la membrana basal tubular, antes<html> cambios identificados por el patólogo se pueden observar (Figura 5). En particular, estamos interesados ​​en la identificación de los cambios asociados con la progresión de la nefropatía diabética y el rechazo crónico en pacientes trasplantados, donde las técnicas actuales no logran identificar los cambios de una manera lo suficientemente temprano para una intervención exitosa. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52332/52332fig1.jpg" /> Figura 1. imágenes FT-IR y el espectro de un núcleo de hígado. Imagen de (A) H &amp; E manchadas núcleo de la biopsia hepática e imágenes de absorbancia IR de la sección de serie del mismo núcleo en (B) 3286 cm -1 y (C) 2603 cm-1, que puso de relieve las diferentes características estructurales. (D) Espectro de IR típico de tejido, con picos importantes rotulados. Barra de escala = 100 micras.fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52332/52332fig2.jpg" /> Figura 2. Óptica detallan los modos de operación del microscopio FT-IR esquemáticos. (A) En el modo de transmisión, la muestra se ilumina a través del objetivo de fondo, y la luz que pasa a través de la muestra se recoge por el objetivo superior. (B) En el modo de reflexión, el objetivo superior sirve para iluminar la muestra y para recoger la luz reflejada. El objetivo final no se usa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52332/52332fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52332/52332fig3.jpg" /> Figura 3. Comparación de diferencamisetas objetivos de microscopio en las imágenes FT-IR de un glomérulo renal en 2925 cm -1. (A) 15X objetivas recogiendo con NA = 0,5 (tamaño 5.5 x 5.5 m pixel). (B) 36X objetivo de recogida con NA = 0,5 (tamaño 2.2 x 2.2 m pixel). (C) 74X recogiendo objetivo con NA = 0,65 (tamaño de 1,1 x 1,1 m píxeles). La barra de escala = 50 micras. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52332/52332fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52332/52332fig4.jpg" /> Figura 4. diferencias espectrales entre fibrosis y hepatocitos en un núcleo de hígado. (A) H &amp; E manchadas núcleo de biopsia de hígado. (B) Imagen de una sección de núcleo en serie escaneada en FT-IR (36X configuración objetiva). (C) Repespectros repre- de los hepatocitos y fibrosis, tomada desde regiones de tejido indicadas por las flechas en (A) y (B). Barra de escala = 100 micras. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52332/52332fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52332/52332fig5.jpg" /> Figura 5. Diferenciación de las características de la biopsia de tejido renal mediante el uso de alta definición de imagen FT-IR. (A) sección teñida de ácido periódico de Schiff con las características que se extrae la etiqueta. (B) de alta definición de imagen FT-IR de la región CH 2 estiramiento asimétrico (36X configuración objetiva) de una sección de serie del mismo tejido. (C) Características etiquetado en (A) extraído por medio de la imagen de FT-IR en (B) para poder químicamente differentiate las cuatro características del tejido. La barra de escala = 50 micras. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52332/52332fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

La imagen espectroscópica infrarroja por transformada de Fourier (FT-IR) es un enfoque rápido y sin etiquetas para obtener conjuntos de datos bioquímicos de células y tejidos. Aquí, demostramos cómo obtener imágenes FT-IR de alta definición de secciones de tejido para mejorar el diagnóstico de enfermedades.

Alta definición Fourier Transform Infrared (FT-IR) espectroscópico de imágenes de cortes de tejidos humanos a la mejora de Patología

High-definition Fourier Transform Infrared (FT-IR) spectroscopic imaging is an emerging approach to obtain detailed images that have associated ...

El objetivo general de este procedimiento es obtener imágenes infrarrojas de alta definición de muestras de tejido. Esto se logra primero seccionando las muestras de tejido sobre portaobjetos compatibles con infrarrojos. El segundo paso consiste en configurar un aparato de imagen de alta definición instalando los objetivos adecuados.A continuación, se registra el fondo del sustrato y se escanea la muestra de tejido. El paso final consiste en utilizar un software adecuado para el procesamiento y la visualización de los datos. En última instancia, se emplea la imagen infrarroja de alta definición para visualizar y obtener información bioquímica de tejidos biológicos de manera no perturbadora.La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como la microscopía óptica es que se puede estudiar la bioquímica inherente del tejido sin utilizar colorantes ni sondas. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la patología, como predecir la recurrencia de la nefropatía diabética y clasificar la progresión de las enfermedades hepáticas mediante la osteogénesis HEPA car. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el diagnóstico y pronóstico de enfermedades, dado que proporciona grandes cantidades de información bioquímica no disponible mediante la histopatología tradicional.Aunque este método puede utilizarse para el diagnóstico, también puede emplearse para rastrear los cambios en el proceso de cicatrización de heridas e identificar características clave de los tejidos, como las células madre en el tracto gastrointestinal y el cerebro. Realice un primer corte de un bloque de tejido fijado en parafina formalina al cuatro micrómetros de grosor sobre un portaobjetos compatible con infrarrojos utilizando un microtomo.A continuación, purgue el microscopio FTIR y el espectrómetro utilizando aire seco para eliminar el agua atmosférica del sistema. Luego enfríe tanto el detector de matriz de plano focal como el detector interno de telururo de mercurio y cadmio en el microscopio mediante nitrógeno líquido. Monte la portaobjetos de la muestra sobre la platina del microscopio para la obtención de imágenes FTIR, después de asegurarse de que la luz visible esté encendida, y enfoque la muestra utilizando el programa de captura de muestra.A continuación, abra el paquete de software del conjunto y haga clic en recolectar. Haga clic en diagnóstico y seleccione un espectrómetro de líneas. Luego, haga clic en configuración de imagen para calibrar el sistema.En la pestaña de óptica, seleccione el detector como detector de microscopio terrestre a la izquierda y luego seleccione transmitancia bajo el modo de óptica. Haga clic en configuración, lo que abrirá la ventana de control de lancer para el modo de transmisión en el control de lancer. Haga clic en sin procesar utilizando el joystick de control del escenario y observe en la vista en vivo la imagen del interferograma FTIR mientras se desplaza a un área limpia del portaobjetos.En este momento, ajuste el tiempo de integración a aproximadamente 8.000 cuentas y el objetivo condensador inferior. Para aumentar el número de cuentas a su valor máximo, observe la forma de la imagen en la parte inferior derecha en el control de lancer y asegúrese de que tenga un aspecto gaussiano y relativamente uniforme. Después de ajustar el tiempo de integración, mueva nuevamente la platina para encontrar un fragmento de tejido con estructura, preferiblemente el borde de un tejido.Luego perfeccione el enfoque de la imagen. Utilizando el joystick de control de la platina, muévase a un área limpia del portaobjetos. Presione el botón de calibración después de seleccionar.Vale, dos veces en la pestaña de óptica, seleccione detector igual a MCT y detector del microscopio igual a derecha. A continuación, haga clic en configurar. Una vez que el interferograma FTIR se visualice en la pantalla, haga clic en encontrar ráfaga central y aceptar.En la pestaña de óptica, vuelva a seleccionar detector igual a detector de microscopio de tierra igual a izquierda. Luego seleccione configuración. Después de asegurarse de que la imagen aún esté en un área limpia en el control de lancer, haga clic en calibrar nuevamente y en aceptar.Para recopilar una imagen FTIR de fondo, vaya a la pestaña de electrónica y seleccione una resolución espectral adecuada, que normalmente es de cuatro u ocho centímetros inversos. Para tejido, vaya a la pestaña de fondo y escriba 128 en escaneos para coadyuvar. Seleccione el botón de archivo nuevo y coloque el archivo de fondo en la carpeta correspondiente.Después de hacer clic en fondo y esperar a que finalice el escaneo, confirme dónde guardar el archivo. Haga clic en una región del fondo, la imagen de FTIR y verifique el espectro. En este momento, haga clic en configuración y, en el control de lancer, utilice la vista IR en vivo.Para encontrar el área de interés, vaya a la pestaña de electrónica y escriba el número de escaneos a combinar. Luego, haga clic en escanear. Para preparar el microscopio FTIR para análisis de alta definición, enrosque el objetivo de alta magnificación en lugar del objetivo de 15 x. En este punto, abra el software de procesamiento y análisis de imágenes y cargue el archivo de datos de IR.Aplique un algoritmo de corrección de línea base a los datos de IR seleccionando herramientas espectrales y desplácese hacia abajo y haga clic en espectros absorbentes. Cuando aparezca el menú emergente, seleccione corrección de línea base. Realice la normalización espectral seleccionando espectros normalizados dentro de las opciones del menú de espectros absorbentes.A continuación, observe una lista de todas las frecuencias de IR recopiladas dentro de la imagen. Haga clic en las frecuencias que corresponden a biomoléculas específicas para observar una imagen del tejido a la frecuencia seleccionada y crear imágenes que permitan la visualización de diferentes componentes biomoleculares. Haga clic en herramientas espectrales y luego seleccione las relaciones de altura de picos.Escanea la sección de tejido teñida correspondiente y adyacente utilizando un sistema separado de imagen de portaobjetos completo que capture imágenes de campo claro junto con la imagen de IR. Abre la imagen digital del tejido teñido con el programa de imagen visible. A continuación, haz clic con el botón derecho en la imagen en una región de interés y selecciona perfil Z para obtener la información espectral en el píxel seleccionado.Para marcar píxeles específicos en la imagen, haga clic con el botón derecho en la imagen y seleccione la herramienta de ROI. Cree las clases que deben etiquetarse, por ejemplo, clases de Meum y de la cápsula de Bowman. Luego, seleccione el tipo de ROI punto; a continuación, seleccione la clase para la que desea seleccionar píxeles y dibuje sobre los píxeles adecuados en la imagen de IR.Derive los espectros promedio para cada una de las clases utilizando la herramienta de ROI promedio. Finalmente, compare los espectros derivados mediante representación gráfica. En software de graficación, la imagenología FT IR permite obtener imágenes IR de tejidos que pueden proporcionar diferentes contrastes dependiendo de la frecuencia IR.Cada píxel está compuesto por todo el espectro con picos diferentes que corresponden a distintas biomoléculas, las cuales pueden proporcionar información sobre las propiedades bioquímicas de los tipos celulares o estados patológicos. La instrumentación de FTIR ha evolucionado desde mediciones en modo de mapeo de un solo punto, utilizando diafragmas opacos, hasta el modo de imagen, empleando objetivos de grano CASA, ya sea con un objetivo de iluminación acoplado a un objetivo de recolección en modo transmisión, o un único objetivo que ilumina y recolecta en modo reflexión. Los avances en resolución espacial para la obtención de imágenes de tejidos han sido de importancia crítica, ya que ahora es posible identificar tipos celulares y estructuras tisulares.En este caso, se observaron las unidades funcionales de los glomérulos renales en un fragmento de tejido hepático. Es posible visualizar hepatocitos y regiones de fibrosis infiltrante que dividen dos áreas distintas de displasia y cirrosis no displásica. Una mayor resolución espacial permite el aislamiento de características estructurales específicas que pueden estar modificadas químicamente por la enfermedad antes de que sean evidentes los cambios histológicos.Los cambios bioquímicos en las estructuras glomerulares renales, como la cápsula de Bowman, el epitelio, la membrana basal glomerular y la membrana basal tubular, pueden identificarse mediante imágenes de FTIR. Al realizar este procedimiento, es importante recordar deshidratar completamente las laminillas antes del escaneo siguiendo este procedimiento. Se pueden realizar otros métodos, como el análisis inmunoquímico tradicional, en la misma sección de tejido para correlacionar las firmas bioquímicas y la morfología tisular.Nuestro primer desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la imagenología de tejidos exploraran el estado biomolecular de tipos celulares pequeños y estructuras dentro de los tejidos. Después de ver este video, debería tener una comprensión básica de cómo obtener imágenes FTR de alta definición de muestras de tejidos y realizar un análisis espectral básico. No olvide que trabajar con nitrógeno líquido puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones de seguridad, como el uso de guantes resistentes al frío y gafas de seguridad, al realizar este procedimiento.

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Frecuencia de imagen óptica de dominio de<em&gt; Ex vivo</em&gt; Piezas de resección pulmonar: Obtención de One to One de imagen para estudio histopatológico de correlación

Los pasos clave de la función de las proteínas, en particular los cambios conformacionales de la columna vertebral y las reacciones de transferencia de protones, a menudo tienen lugar en la escala de tiempo de microsegundos a milisegundos. Estos procesos dinámicos pueden estudiarse mediante espectroscopía infrarroja por transformada de Fourier de barrido escalonado resuelto en el tiempo, en particular para proteínas cuya función es desencadenada por la luz.

Transferencia de Protones y Proteína Conformación Dinámica de proteínas fotosensibles por Time resuelto-Step-scan transformada de Fourier espectroscopia de infrarrojo

Se describe un protocolo para la fabricación de dispositivos microfluídicos plástico con puertos de vista transparentes para la proyección de imagen de luz visible e infrarroja.

Procedimiento suave litográfica para la producción de dispositivos microfluídicos plástico con puertos de vista transparentes a luz Visible e infrarroja

La microscopía de fuerza atómica-espectroscopía infrarroja (AFM-IR) proporciona una poderosa plataforma para estudios bacterianos, lo que permite lograr una resolución a nanoescala. Tanto el mapeo de los cambios subcelulares (por ejemplo, en la división celular) como los estudios comparativos de la composición química (por ejemplo, derivados de la resistencia a los medicamentos) se pueden realizar a nivel de una sola célula en bacterias.

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Un microscopio de transformada de Fourier de campo amplio, basado en un interferómetro birrefringente compacto y ultraestable, permite la adquisición paralela de espectros para todos los píxeles de un detector 2D. El enfoque en el dominio del tiempo permite el desenredo de señales fotoluminiscentes y Raman, y permite un mapeo Raman rápido (~5 ms/píxel) con resolución espacial de ~1 μm y espectral de 23 cm-1 .

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En vivo en el infrarrojo cercano fluorescencia (NIRF) imagen intravascular molecular de placa inflamatoria, un enfoque multimodal de imágenes de la aterosclerosis

Estimulación de alta definición transcraneal de corriente directa (HD-tDCS), con su anillo de 4x1-montaje, es una técnica de estimulación cerebral no invasiva que combina tanto los efectos neuromoduladores de TDCS convencionales con un aumento de focalidad. Este artículo proporciona una manifestación sistemática del uso de 4x1 HD-TDCS, y las consideraciones que se necesitan para la estimulación segura y eficaz.

Técnica y consideraciones en el uso de 4x1 Anillo de alta definición estimulación transcraneal de corriente directa (HD-tDCS)

Aprende a obtener imágenes infrarrojas de alta definición de muestras de tejido humano mediante espectroscopia FT-IR. Esta técnica sin etiquetas permite visualizar la bioquímica inherente para mejorar el diagnóstico patológico.

Alta definición Fourier Transform Infrared (FT-IR) espectroscópico de imágenes de cortes de tejidos humanos a la mejora de Patología (Video) | JoVE Journal

Alta definición Fourier Transform Infrared (FT-IR) espectroscópico de imágenes de cortes de tejidos humanos a la mejora de Patología

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