Un modelo del cochinillo de Neonatología encefalopatía hipóxico-isquémica

El objetivo general del siguiente experimento es demostrar un modelo de encefalopatía hipóxico isquémica perinatal en lechones. Este modelo se puede utilizar para la investigación de la lesión cerebral neonatal. En primer lugar, los lechones son sedados, ventilados y monitoreados en una configuración comparable a la de una unidad de cuidados intensivos neonatales.

La técnica descrita en el presente manuscrito utiliza el EEG integrado en amplitud para valorar la hipoxia. De acuerdo con la resiliencia de cada estudio individual, la hipoxia animal se induce de manera controlada, manteniendo la amplitud integrada, el EEG suprimido y asegurando la supervivencia. En este modelo de supervivencia de cuatro días, los animales son sacrificados a las 72 horas después de la hipoxia.

Finalmente, de acuerdo con el propósito del experimento, los resultados cerebrales y de otro tipo pueden evaluarse mediante imágenes de resonancia magnética, neuropatología y análisis de fluidos corporales y órganos. En este estudio, visualizamos paso a paso los procedimientos técnicos necesarios para establecer un modelo lechón de encefalopatía hipóxico isquémica neonatal. El resultado del desarrollo nervioso es una preocupación importante en todas las áreas de cuidados intensivos neonatales.

Los buenos modelos animales son esenciales para mejorar el tratamiento de las lesiones cerebrales neonatales. El modelo que está a punto de ver es una buena aproximación al curso clínico de la hipoxia. Por esta razón, los resultados se traducen bien al entorno clínico en el modelo aquí presentado, controlamos la gravedad y el momento de la agresión hipóxica, minimizando así la variación biológica.

Para complicar la interpretación de los estudios clínicos, utilizamos lechones de cría en tierra daneses a las 18 a 24 horas de edad postnatal. Pesan en promedio de 1000 a 2000 gramos, y su fisiología es en muchos aspectos comparable a la del recién nacido. Este modelo se puede utilizar para investigar los efectos del tratamiento en imágenes de resonancia magnética, neuropatología y biomarcadores en fluidos corporales como el líquido cefalorraquídeo, la orina y la sangre.

Es un modelo técnicamente desafiante para trabajar. A continuación, demostramos cada paso necesario para completar el modelo. El equipo necesario para iniciar la anestesia es una mascarilla para la administración de flúor sevo, jeringas de catéter de vena periférica con solución salina, propofol, fentanilo, relajante muscular y penicilina.

Un cabestrillo para abrir la boca, un intercambiador con punta de algodón y un laringoscopio veterinario con tubo endotraqueal con manguito Sloane spray de hoja recta, SIIS 3 0 2 0,5 y dos jeringas de bolsa autoinflable para inflar el manguito y estetoscopio. El flúor VO se administra mediante una mascarilla y se controla la profundidad de la anestesia. De acuerdo con el protocolo, se coloca un catéter venoso periférico en una vena del oído y se enjuaga con salan.

En este punto, el animal está sedado, pero respirando espontáneamente. La anestesia intravenosa se inicia administrando al fentanilo 30 microgramos por kilo, seguido de propofol, cinco miligramos por kilo y un miligramo por kilo de broon inmediatamente antes de la intubación. Para la intubación, el lechón se desplaza en posición supina.

La longitud del tubo endotraqueal se mide desde la punta del hocico hasta por encima del empuje esternal. Por lo general, alrededor de 13 centímetros, se usa un intercambiador de algodón para tirar de la epiglotis larga hacia adelante para que pueda levantarse. Se utiliza en el laringoscopio para permitir una visión completa de los cartílagos adenoides de las cuerdas vocales.

El aerosol sinusoidal se aplica localmente en la laringe para prevenir el espasmo. El tubo endotraqueal se avanza lentamente a través de las cuerdas vocales cuando se avanza, de acuerdo con la distancia premedida, el tubo endotraqueal está conectado a una bolsa autoinflable para ventilación manual, correcto. La colocación del tubo endotraqueal se confirma mediante la observación del movimiento simétrico del tórax, la osculación mediante estetoscopio, la confirmación visual de la niebla en el tubo y la curva de CO2 tida como se ve en blanco en el monitor.

Por último, el brazalete se infla para garantizar una vía respiratoria segura. El tubo endotraqueal ahora está conectado a un ventilador para ventilación mecánica. Por último, la infusión de propofol, cinco miligramos por kilo por hora, y fentanilo.

Se inicia el uso de 10 microgramos por kilo por hora. El ventilador está configurado en un modo de volumen controlado que entrega volúmenes corrientes de 10 mililitros por kilo para el equipo de monitoreo. El lechón tiene electrodos de ECG, oxímetro de pulso, sonda de temperatura rectal y equipo.

Para la monitorización de la presión arterial central, se coloca el oxímetro de pulso, seguido de la inserción de una sonda de temperatura rectal. El tórax se afeita antes de la colocación del electrodo. La pantalla muestra el ECG y la frecuencia cardíaca, la presión arterial central y la saturación de oxígeno.

El equipo necesario para la colocación de catéteres umbilicales es estéril, paño, bisturí, microinstrumentos, catéteres umbilicales tamaño 3,5 franceses y cinco jeringas francesas para la toma de muestras de sangre y el juego de suturas de lavado para la visualización de los vasos umbilicales. El cordón se corta a nivel de la piel. La vena umbilical se ve a la derecha de la imagen, y una de las dos arterias umbilicales se ve a la izquierda.

En primer lugar, se inserta el catéter arterial a una profundidad igual al peso del lechón en kilos multiplicado por tres más 10 centímetros. La posición correcta se verifica extrayendo sangre. Posteriormente, se inserta el catéter venoso a una profundidad de cinco centímetros.

Los catéteres se aseguran mediante sutura. Usando una sutura de tres artes, se afeita la cabeza para la colocación de electrodos. Para la monitorización de EEG integrada en amplitud, los electrodos parietales deben colocarse con al menos dos a cuatro centímetros entre ellos, el electrodo de referencia en la línea media y el electrodo de tierra en cualquier parte de la cabeza.

Las pruebas de impotencia revelan cuatro electrodos colocados correctamente con una buena relación señal/ruido. La parte inferior de la pantalla muestra el EEG en tiempo real, mientras que la pantalla superior muestra la amplitud comprimida en el tiempo integrada, EEG, el lechón ahora puede descansar durante 60 minutos antes de la inducción de la hipoxia. La hipoxia se inicia al cambiar a un ventilador, que suministra una mezcla de nitrógeno y 4% de oxígeno.

Se tarda una media de dos minutos en conseguir un trazado plano en el EEG integrado de amplitud correspondiente a una hipoxia significativa. Leucemia en el cerebro durante 45 minutos. Se regula la fracción de oxígeno inspirado.

Para mantener una amplitud EEG plana por debajo de siete microvoltios durante la hipoxia, el lechón inicialmente lo compensa aumentando la frecuencia cardíaca. A medida que la hipoxia continúa, el lechón comienza a descompensarse y la presión media del material disminuye. En este punto, es fundamental ajustar la fracción de oxígeno inspirado para garantizar la supervivencia.

Después de 45 minutos, la fracción de oxígeno inspirado se incrementa al 21%, lo que resulta en un aumento de la actividad cerebral. Después de la hipoxia, el lechón se extuba y se le permite despertar durante los próximos cuatro días. El lechón es cuidado por un técnico animal experimentado que alimenta al cerdo y lo califica neurológicamente a diario.

A las siete dos horas, el cerdo es sedado y ventilado. Una vez más, la resonancia genética y la espectroscopia son herramientas poderosas para examinar el cerebro. La resonancia magnética se complementa con un examen neuropatológico.

El cerebro se disecciona cuidadosamente en cada área, investigada por un neuropatólogo experimentado. Después de haber visto este video, debería tener una buena comprensión de cómo establecer un modelo de lechón de encefalopatía hipóxico isquémica neonatal. Con este modelo, se pueden investigar las preguntas pertinentes relacionadas con el diagnóstico y el tratamiento de la lesión cerebral neonatal.

En última instancia, optimizar el manejo de los lactantes afectados.