Name: Un modelo murino de irreversible y reversible obstrucción ureteral unilateral (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Aprenda a crear un modelo murino de obstrucción ureteral unilateral reversible e irreversible. Este método permite estudiar la lesión renal y la remodelación tisular tras la recuperación.

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El presente estudio fue financiado por subvenciones de Kidney Research UK (ST4/2011), Cunningham Trust (CT11/14), Mrs AE Hogg Charitable Trust for Kidney Research y el Renal Endowment Fund de la Royal Infirmary of Edinburgh.

Guía General: Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con los lineamientos y regulaciones impuestas por los Animales (Procedimientos Científicos) Ley de 1986. Este protocolo y el protocolo de vídeo que acompaña son tanto para una OUU estándar y un R-OUU, que se puede realizar en muchos cepas de ratón. En el video que acompaña, ambos procedimientos se llevan a cabo en ratones machos C57BL / 6 ratones de 8 semanas. Los datos presentados en la sección de resultados representativos se obtuvieron de machos FVB / n ratones. NOTA: Este protocolo y acompañando detalles del video de cómo realizar una OUU estándar y R-OUU utilizando el uréter izquierdo, sin embargo las mismas técnicas pueden ser fácilmente aplicadas al uréter derecho. 1. Preparación de los animales y laparotomía <ol><li> Realice todos los procedimientos con instrumentos estériles (en autoclave) y consumibles. </li><li> Inyectar clorhidrato de ketamina (70 mg / kg) y clorhidrato de medetomidina (1 mg / kg) por vía intraperitoneal para anestesiarel ratón. Nota: La duración del plano anestésico resultante es de 4 horas y no se requiere anestesia suplementaria. </li><li> Confirme la profundidad de la anestesia por la pérdida de los reflejos por ejemplo, pizca dedo del pie. </li><li> Eliminar todo el pelo que rodea el área de la incisión y preparar la piel para la cirugía abdominal a través de la aplicación de una solución de clorhexidina diluido. </li><li> Coloque el ratón sobre una almohadilla quirúrgica climatizada en posición supina y fijar las extremidades a la almohadilla con cinta adhesiva de baja adherencia. </li><li> Durante el procedimiento, supervisar el ratón para detectar signos de quemaduras térmicas como resultado de la almohadilla quirúrgica calentada. Si es posible utilizar una fuente de calor no eléctrico. </li><li> Administrar analgésico mediante una inyección subcutánea de hidrocloruro de buprenorfina (0.06mg / kg) y aplicar lubricante ocular para evitar el secado de la córnea. </li><li> Hacer una laparotomía media y una incisión de la línea alba avascular utilizando tejido que separa las tijeras para obtener acceso a la cavidad peritoneal. </li><li> Coloque el ratón e inserte un colibriretractor en la incisión. </li></ol> 2. Unilateral ureteral Obstrucción <ol><li> El uso de bastoncillos de algodón esterilizados exponer el uréter izquierdo desplazando los intestinos hacia el lado derecho de la cavidad abdominal y cubre con paños humedecidos. </li><li> Con unas pinzas en ángulo aislar y levantan el uréter izquierdo. </li><li> Para crear una obstrucción de la uretra, ligar el uréter izquierdo dos veces con 6 / O trenzado negro sutura de seda en cualquier lugar entre la vejiga y pelvis renal. Para los experimentos a largo plazo, el uso de sutura absorbible para todas las cirugías abdominales. Alternativamente, un clip de ligadura se puede aplicar con el uréter. </li><li> Para aislar la vejiga al uréter, divida el uréter entre los dos puntos de sutura. </li><li> Vuelva a colocar cuidadosamente los intestinos a la cavidad peritoneal. </li><li> Siga los pasos que se indican en la Sección 4 - Recuperación Post-Operativo y Cuidado para cerrar la incisión y revertir la anestesia. </li></ol> 3. Preparación para Reversible unilateral ureteral Obstrucción <ol><li> Preparar un ratón para la cirugía y aislar el uréter izquierdo tal como se detalla en los pasos 1.1 a 2.2 anteriormente. </li><li> Para crear una obstrucción de la uretra que puede ser revertida, ligar el uréter izquierdo dos veces con 6 / O trenzado negro sutura de seda cerca de la vejiga. Deja un extremo de la sutura superior siempre y cuando este se utiliza para anclar el tubo de plástico de pared suave en su lugar alrededor del uréter. </li><li> Hacer una hendidura longitudinal en una longitud de 5 mm de tubo de plástico de pared blanda, que puede ser extendió abierta para permitir que se aplique con el uréter. Cualquier tubo de plástico blando de silicona amurallada, con un diámetro interno de 1 mm y un diámetro exterior de 2 mm, se puede utilizar. </li><li> Coloque el tubo de plástico de paredes suaves suavemente alrededor del uréter. Asegúrese de que el largo de la sutura emerge desde el centro de la ranura en el tubo una vez que se cierra alrededor del uréter. </li><li> Coloque una longitud de 6 / O trenzado negro sutura de seda alrededor de la tubería de pared suave que encierra el uréter y ataruna vez. Ahora coloque el extremo largo de la sutura, emergiendo desde el centro de la ranura en el tubo, longitudinalmente a través de la tubería de manera que se sitúe en la parte superior de la sutura previamente atado. </li><li> Ate la sutura situado alrededor del tubo dos veces para anclar la tubería y el extremo largo de sutura en su lugar alrededor de la uretra. Nota: Para evitar la formación de adherencias en el uréter y el tubo de plástico de pared suave, una solución de reducción de la adhesión se puede aplicar a la zona alrededor de la tubería. </li><li> Vuelva a colocar cuidadosamente los intestinos a la cavidad peritoneal. </li></ol> Recuperación y Cuidados 4. Post-Operativo <ol><li> Cierre del peritoneo con puntada manta usando 5 / O trenzado negro sutura de seda y aproximar la piel con clips metálicos de la piel. </li><li> Para minimizar el riesgo de infección post-operatoria, aplicar un antiséptico tal como una solución de yodo / alcohol a la piel abdominal. </li><li> Parcialmente anestesia atrás con clorhidrato de atipamezol (2 mg / kg) por vía subcutánea. </li&gt; <li> Administrar fluidos por una inyección subcutánea de 1 ml de solución salina calentada. </li><li> Monitorear el ratón hasta que se haya recuperado la conciencia. </li><li> Deje que el ratón se recupere en una caja climatizada mantenido a 29 ° C durante 24 horas. Comida humedecida también se puede proporcionar para estimular la ingesta de líquidos y la nutrición. </li><li> Deje el ratón para recuperar para inducir un nivel deseado de obstrucción, típicamente de 7 días. </li><li> Para los experimentos de recuperación a largo plazo, proporcionar analgésicos en curso. Si el ratón se ha de recuperar por más de 7 días, retire los clips de la piel 7 días después de la cirugía. </li><li> Una vez que el nivel deseado de obstrucción ha sido inducida, ya sea invertir la OUU, como se describe a continuación, o la eutanasia el ratón por dislocación cervical y recoger los riñones para el análisis de la histopatología. </li></ol> 5. reversible unilateral ureteral Obstrucción <ol><li> Para realizar una R-OUU preparar un ratón, que ha sido objeto de preparación para R-OUU, para la cirugía como se describe en los pasos 10,1-1,7. </li><li> Si está presente, quitar los clips de la piel y dividir o eliminar las suturas en el peritoneo para obtener acceso a la cavidad abdominal. Nota: Si el uréter ha sido obstruido por un largo plazo clips piel experimento debería haber sido eliminado 7 días después de la aplicación. </li><li> Preparar el ratón y aislar el uréter izquierdo tal como se describe en los pasos 1.8 a 2.2. </li><li> Con unas pinzas en ángulo, liberar el tubo de plástico de paredes blandas de cualquier tejido granulomatoso que se hayan formado. </li><li> Cortar la sutura sujeta el tubo de plástico alrededor del uréter obstruido con un bisturí y retire el tubo. </li><li> Confirme éxito OUU mediante la evaluación de la presencia de hidronefrosis en el riñón izquierdo, el riñón también debería aparecer pálido. </li><li> Divida el uréter entre las suturas. </li><li> Coloque la longitud restante del uréter, que se adjunta en el riñón, en un pequeño trozo de gasa estéril. Esto será utilizado para recoger el sedimento urinario y las células muertas que drenará desde el uréter unand pelvis renal una vez que la sutura se retira. </li><li> Divida el uréter por encima, pero cerca, la sutura y permitir que el riñón para drenar en la gasa. Deja la sutura inferior, más cercana a la vejiga, intacto. Esto es para asegurar que no tendrá fugas de orina desde la vejiga y en la cavidad peritoneal. </li><li> Una vez que el uréter y pelvis renal han sido drenados, aplicar un largo 6 / O negro sutura de seda trenzada hasta el final de la longitud restante del uréter. Esto se utiliza para ayudar el uréter a la vejiga anastomosis realizada más tarde. </li><li> Siga los pasos de abajo para anastomose la longitud restante de uréter en la vejiga: <ol><li> Girar el uréter manera que se sitúe anterior a su posición original y se encuentra sobre el riñón. </li><li> Coloque un solo 9 / O monofilamento de poliamida viradas de sutura 2 mm desde el extremo del uréter tal que emerge en la dirección de la vejiga. Tener cuidado para asegurar que la sutura permanece en la capa muscular y no entra en el lumen del uréter. El wil sutura viradasl se utiliza para anclar el uréter en la vejiga. </li><li> Para crear un canal a través de la vejiga, pasar una aguja 21G en diagonal a través de la vejiga, tales que sale hacia el frontal (ventral) de la pared de la vejiga. </li><li> Descanse una aguja de ojos en el bisel de la aguja 21G. Utilice la aguja 21G para guiar la aguja de ojos a través de la vejiga. La aguja de ojos se utilizará para tomar el uréter a través de la vejiga. </li><li> Pasar el viradas de sutura 9 / O, aplicado con el uréter en el paso 5.11.2, a través de la primera incisión en la vejiga y hacia fuera a través de la pared de la vejiga adyacente al punto de entrada. Una vez que el uréter se pasa a través de la vejiga, esto será atado para anclar el uréter a la vejiga. </li><li> Coloque el largo 6 / O sutura de seda trenzada negro aplicada al extremo del uréter en el paso 5.10 través de la aguja de ojos. </li><li> Retirar cuidadosamente la aguja de ojos fuera de la vejiga garantizando al mismo tiempo que el uréter también se tira a través de la vejiga. </li><li> Una vez que el uréter emerge de The vejiga retire la aguja de ojos y aplicar una abrazadera a la larga de sutura en el extremo del uréter para evitar la retracción de nuevo en la vejiga. </li><li> Para anclar el uréter dentro de lugar en la vejiga, atar el 9 / O de poliamida de sutura monofilamento de pegajosidad, aplicada en el paso 5.11.5. </li><li> Aplicar individuales 9 / O poliamida suturas lazo monofilamento adicionales como se describe en los pasos 5.11.2 y 5.11.5 en dos localidades de todo el punto de entrada para anclar firmemente el uréter en la vejiga. </li><li> Con el dorso de tijeras abiertas, empuje la pared de la vejiga hacia atrás ligeramente para exponer más del uréter emergente. </li><li> Divida el uréter por encima de la sutura larga situada en el extremo del uréter. El uréter debe retraerse en el cuerpo de la vejiga. Es habitual observar orina que fluye fuera de la abertura en la vejiga, lo que confirma el lumen abiertos del uréter. </li><li> Cierre el orificio de salida en la vejiga con un monofilamento de poliamida de sutura 9 / O. </li></ol></li><li> Vuelva a colocar cuidadosamente los intestinos enla cavidad peritoneal. </li><li> Proporcionar cuidados postoperatorios, como se detalla en los pasos 4.1 a 4.8. </li><li> Deje que el ratón para recuperar hasta que se descomprime el riñón, por lo general 7 días. </li><li> En el punto final experimental, la eutanasia el ratón por dislocación cervical y recoger los riñones para el análisis histopatológico. </li></ol>

<ol><li>Chevalier, R. L., Forbes, M. S., Thornhill, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ureteral+obstruction+as+a+model+of+renal+interstitial+fibrosis+and+obstructive+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy.</a> Kidney Int. 75, 1145-1152 (2009).</li>
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<li>Manson, S. R., Niederhoff, R. A., Hruska, K. A., Austin, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BMP-7-Smad1%2F5%2F8+pathway+promotes+kidney+repair+after+obstruction+induced+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The BMP-7-Smad1/5/8 pathway promotes kidney repair after obstruction induced renal injury.</a> J Urol. 185, 2523-2530 (2011).</li>
<li>Chaves, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+effects+of+systemic+monocyte%2Fmacrophage+and+CD4%2B+T+cell+depletion+in+a+reversible+ureteral+obstruction+mouse+model+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Contrasting effects of systemic monocyte/macrophage and CD4+ T cell depletion in a reversible ureteral obstruction mouse model of chronic kidney disease.</a> Clin Dev Immunol. 2013, 836-989 (2013).</li>
<li>Haque, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+changes+in+MRI+markers+in+a+reversible+unilateral+ureteral+obstruction+mouse+model%3A+preliminary+experience%5BTitle%5D)+AND+%22J+Magn+Reson+Imaging%22%5BJournal%5D)">Longitudinal changes in MRI markers in a reversible unilateral ureteral obstruction mouse model: preliminary experience.</a> J Magn Reson Imaging. 39, 835-841 (2014).</li>
<li>Bai, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterially+transplanted+mesenchymal+stem+cells+in+a+mouse+reversible+unilateral+ureteral+obstruction+model%3A+in+vivo+bioluminescence+imaging+and+effects+on+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Med+J%22%5BJournal%5D)">Arterially transplanted mesenchymal stem cells in a mouse reversible unilateral ureteral obstruction model: in vivo bioluminescence imaging and effects on renal fibrosis.</a> Chinese Med J. 126, 1890-1894 (2013).</li>
<li>Chaabane, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+functional+decline+and+glomerulotubular+injury+are+arrested+but+not+restored+by+release+of+unilateral+ureteral+obstruction+%28UUO%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Renal functional decline and glomerulotubular injury are arrested but not restored by release of unilateral ureteral obstruction (UUO).</a> Am J Physiol Renal Physiol. 304, F432-F439 (2013).</li>
<li>Thornhill, B. A., Burt, L. E., Chen, C., Forbes, M. S., Chevalier, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+chronic+partial+ureteral+obstruction+in+the+neonatal+rat%3A+a+new+model+of+ureteropelvic+junction+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Variable chronic partial ureteral obstruction in the neonatal rat: a new model of ureteropelvic junction obstruction.</a> Kidney Int. 67, 42-52 (2005).</li>
<li>Thornhill, B. A., Chevalier, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+partial+unilateral+ureteral+obstruction+and+its+release+in+the+neonatal+and+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Variable partial unilateral ureteral obstruction and its release in the neonatal and adult mouse.</a> Methods Mol Biol. 886, 381-392 (2012).</li>
</ol>

Los autores no tienen competencia o conflictos de intereses a revelar.

La obstrucción del riñón puede afectar los riñones nativos o trasplantados y resulta en lesión renal y cicatrización. El modelo R-UUO es relevante para la enfermedad humana, ya que los pacientes a menudo presentan obstrucción del tracto renal secundaria a hipertrofia prostática, válvulas uretrales posteriores, etc., que requiere descompresión con pacientes que comúnmente quedan con insuficiencia renal residual significativa que no tiene opciones de tratamiento actuales y eventualmente puede conducir a una enfermedad rena...

El objetivo general del modelo experimental descrito aquí es inducir nefropatía obstructiva por obstrucción ureteral unilateral (UUO), que puede ser irreversible (UUO) o reversible (R-UUO). Se presenta un modelo simple e irreversible de UUO en el que el uréter izquierdo está obstruido permanentemente por ligadura con una sutura o por la aplicación de una pinza ligadura. Esto da lugar a una dilatación marcada del uréter junto con una reducción del flujo sanguíneo renal y de la filtración glomerular. La histología renal muestra dilatación tubular e inflamación y fibrosis renal intersticial cada vez más severas. La UUO irreversible es un modelo útil y ha sido adoptado por muchos investigadores en el estudio tanto de la inflamación renal como de la fibrosis. 1-4 Aunque el modelo irreversible de UUO requiere cierta experiencia quirúrgica, es relativamente sencillo y a menudo se utiliza para buscar información sobre la patogénesis de la lesión renal intersticial y la fibrosis subsiguiente. También se presenta un modelo R-UUO menos utilizado utilizando una modificación del método descrito originalmente por Tapmeier et al. 5 El modelo R-UUO tiene mucho potencial futuro para el estudio de los procesos inflamatorios e inmunológicos, la regeneración celular y tisular, así como la posterior remodelación tisular después de la eliminación de un estímulo perjudicial. 
El modelo R-UUO más desafiante ha sido utilizado por un número limitado de investigadores, con algunos grupos empleando una técnica quirúrgica significativamente diferente a la descrita aquí6,7, aunque con resultados interesantes. En el modelo R-UUO presentado, el uréter se liga para inducir una obstrucción ureteral completa durante un período de tiempo suficiente para inducir el nivel de lesión y fibrosis deseado: se eligieron 7 días de UUO en el método descrito aquí. La obstrucción ureteral se revierte y se permite que el riñón se descomprima durante un período de tiempo determinado por el investigador antes de que los ratones sean sacrificados y se extraiga el riñón para su análisis: se eligieron 7 días de descompresión en el método descrito aquí, aunque se elegiría un período más largo si se estaba estudiando la resolución de la inflamación y la fibrosis. Aunque el método descrito aquí requiere una experiencia quirúrgica significativa, ofrece varias ventajas sobre otros modelos R-UUO. La aplicación de un tubo de plástico de paredes blandas sobre el uréter obstruido evita la dilatación ureteral excesiva y esto facilita la posterior manipulación y anastomosis del uréter. Además, en el modelo R-UUO descrito, el uréter se divide, lo que permite la eliminación de cualquier sedimento urinario residual y desechos. Esto confirma que la luz restante del uréter está desobstruida y permeable antes de la anastomosis a la vejiga. 
Los experimentos que incorporan tanto los modelos UUO irreversibles como los reversibles pueden proporcionar a los investigadores una poderosa visión de los mecanismos moleculares y celulares tanto de la lesión como de la posterior resolución y regeneración. Por lo tanto, el modelo de R-UUO descrito aquí sería muy relevante para los investigadores interesados en la remodelación del tejido postinflamatorio y cómo se puede modular.

<table><tbody><tr><td>Tijeras de disección romas</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte &ndash; rectas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas dentadas</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas en ángulo x 2</td><td>Fine Science Tools</td><td>00649-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas rectas</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Retractor de alambre Colibri 3 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas Castroviejo con cerradura</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de pinzas para heridas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12031-07</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas para bobinar de 7 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>12032-07</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo micro portaagujas con cerradura</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>Picomicroscopio OPMI</td><td>Carl Zeiss</td><td>S100</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla electrónica</td><td>térmica Cozee Comfort</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>6/O sutura trenzada de seda</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-3287</td><td></td></tr><tr><td>9/O Sutura de Dafilon (poliamida)</td><td>B-Braun G1111434</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5/O sutura de seda trenzada</td><td>Harvard Apparatus</td><td>51-7680</td><td></td></tr><tr><td>Aguja biselada normal, 1 pulgada, 21 G</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305175</td><td></td></tr><tr><td>1 ml de punta deslizante de jeringa</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>300184</td><td></td></tr><tr><td>Hisopos de papel Wypall</td><td>Kimberley-Clark</td><td>L40</td><td>Esterilizado (Autoclave)</td></tr><tr><td>Bastoncillos de algodón</td><td>Johnson and Johnson</td><td>n/a</td><td>Esterilizados (Autoclave)</td></tr><tr><td>Cortinas lisas</td><td>Guardian</td><td>CB03</td><td>Esterilizado (autoclave)</td></tr><tr><td>Tubo de caucho de</td><td></td><td></td> silicona de pared blanda <td>Tubo de silicona: diámetro interno 1,0 mm; diámetro externo 2,0 mm; espesor de pared 0,6 mm</td></tr> <tr><td>(Lacri-Lube) Parafina blanda blanca 57,3%, aceite mineral 42,5% y alcoholes de lanolina 0,2%</td><td>Allergan Ltd</td><td>21956GB10X</td><td></td></tr> <tr><td>(Videne) Povidona yodada 10%</td><td>Ecolab Ltd</td><td>PL 04509/0041</td><td></td></tr>(<tr><td>Vetalar V) Clorhidrato de ketamina</td><td>Pfizer Animal Health</td><td>Vm 42058/4165</td><td>100mg/ml solución</td></tr> <tr><td>(Domitor) Clorhidrato de mesetomidina</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4003</td><td>1mg/ml</td></tr><tr><td>(Vetergesic) Clorhidrato de bupernorfina</td><td>Alsto Animal Health</td><td>Vm 00063/4002</td><td>0,3 mg/ml</td></tr> <tr><td>(Antisedán) Hidrochorro de atipamezol</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4004</td><td>5mg/ml</td></tr> <tr><td>(Adept) 4% Icodextrina</td><td>Baxter</td><td></td><td>Solución de reducción de adherencia</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Baxter</td><td>FKE1323</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo murino de irreversible y reversible obstrucción ureteral unilateral

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

La obstrucción del riñón puede afectar a los riñones nativos o trasplantados y provocar lesiones renales y cicatrices. Se presenta un modelo de nefropatía obstructiva inducida por obstrucción ureteral unilateral (UUO), que puede ser irreversible (UUO) o reversible (R-UUO). En el modelo UUO irreversible, el uréter puede estar obstruido durante períodos de tiempo variables con el fin de inducir una inflamación renal cada vez más severa y cicatrices fibróticas intersticiales. En el modelo R-UUO reversible, el uréter se obstruye para inducir hidronefrosis, dilatación tubular e inflamación. Después de un período de tiempo adecuado, la obstrucción ureteral se revierte quirúrgicamente mediante la anastomosis del uréter cortado previamente obstruido a la vejiga para permitir la descompresión completa del riñón y el restablecimiento del flujo urinario a la vejiga. El modelo UUO irreversible se ha utilizado para investigar varios aspectos de la inflamación renal y la cicatrización, incluida la patogénesis de la enfermedad y las pruebas de posibles terapias antiinflamatorias o antifibróticas. El modelo más desafiante de R-UUO ha sido utilizado por algunos investigadores y ofrece un potencial de investigación significativo, ya que permite el estudio de los procesos inflamatorios e inmunológicos y la remodelación del tejido en un riñón lesionado y cicatrizado después de la eliminación del estímulo perjudicial. Como resultado, el modelo R-UUO ofrece a los investigadores la oportunidad de explorar la resolución de la inflamación renal junto con aspectos clave de la reparación de tejidos. Estos modelos experimentales son relevantes para las enfermedades humanas, ya que los pacientes a menudo presentan una obstrucción del tracto renal que requiere descompresión y, por lo general, quedan con una insuficiencia renal residual significativa que no tiene opciones de tratamiento actuales y puede conducir a una eventual insuficiencia renal en etapa terminal.

La aparición de los cambios renales notablemente tras obstrucción ureteral y se convierte en más pálido y tenso a la palpación con el tiempo (Figura 1). Hay una creciente dilatación del uréter proximal a la obstrucción y la pelvis renal. El riñón se vuelve cada vez atrófica como la duración de los aumentos de nefropatía obstructiva con obstrucción prolongada que resulta en una marcada adelgazamiento de la corteza renal y médula. A raíz de la inversión de la obstrucción de la uretra, el color del riñón s...

El modelo murino de obstrucción ureteral unilateral irreversible (UUO) se presenta junto con el modelo de UUO reversible en el que la obstrucción ureteral se alivia mediante la anastomosis del uréter cortado en la vejiga. Estos modelos permiten el estudio de la inflamación y la cicatrización renal, así como la remodelación de los tejidos.

Un modelo murino de irreversible y reversible obstrucción ureteral unilateral

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Este video presenta un modelo de ratón de neuropatía obstructiva inducida por obstrucción ureteral unilateral que puede ser irreversible o reversible; se muestran datos histológicos que destacan el daño estructural resultante y su recuperación tras la reversión. Este dibujo esquemático ilustra los pasos principales de este modelo. Aquí observamos el uréter izquierdo, el riñón y la vejiga.Se induce una obstrucción ureteral unilateral estándar mediante la ligadura del uréter. Con el tiempo, el uréter se dilata y el riñón se vuelve hidronefrótico. Para realizar una obstrucción ureteral unilateral reversible, se liga el uréter cerca de la vejiga y se coloca un tubo plástico de pared blanda, mostrado en gris, alrededor del uréter en el punto de obstrucción.Con el fin de limitar la dilatación excesiva de la uretra, el riñón se vuelve hidronefrótico con el tiempo y luego se desobstruye en un punto temporal adecuado para el estudio. Siete días en este experimento, se retira el tubo de pared blanda y se secciona la uretra justo por encima del nivel de ligadura. La uretra desobstruida se anastomosa en la vejiga para permitir el flujo de orina, y el riñón generalmente se descomprime durante varios días.El modelo de obstrucción ureteral unilateral conocido como UUO puede utilizarse para estudiar el desarrollo del daño tisular y la fibrosis tras la nefropatía obstructiva. El modelo de obstrucción ureteral reversible abreviado como RUUO puede emplearse para obtener información sobre la remodelación tisular que podría seguir al daño. A continuación se muestra una representación de un experimento típico que incluye tanto los procedimientos UUL como nuestros procedimientos UUL.A los ratones se les realiza una LUL el día cero y siete días después. Los ratones se sacrifican para evaluar el grado de lesión o se desobstruyen los uréteres para realizar una RLUU. Luego, se permite que los riñones se descompriman durante siete días antes de obtener el tejido.El tejido puede evaluarse en busca de lesiones estructurales, infiltración de macrófagos, acumulación de miofibroblastos y fibrosis. A continuación se muestra un entorno quirúrgico típico. El procedimiento se realiza utilizando instrumentos y materiales desechables esterilizados en autoclave, colocados dentro de un campo quirúrgico estéril.Si se opera a varios animales, los instrumentos deben esterilizarse entre procedimientos mediante un esterilizador de perlas o se debe utilizar un juego nuevo de instrumentos para cada procedimiento. Los operadores deben usar bata estéril, mascarilla, gorro y guantes. Este ratón macho C57BL/6 de ocho semanas de edad ha sido anestesiado mediante una inyección intraperitoneal de clorhidrato de ketamina y meine.La profundidad de la anestesia se ha confirmado mediante la pérdida de reacción a un pellizco en el dedo del pie. Se ha afeitado y sanitizado el área quirúrgica utilizando una solución diluida de clorhexidina. Se ha aplicado lubricante ocular para prevenir el secado corneal.Se ha administrado clorhidrato de buprenorfina, un analgésico, mediante inyección subcutánea. La boca se ha colocado sobre una almohadilla quirúrgica estéril cubierta y calentada, y las extremidades se han inmovilizado utilizando tijeras separadoras de tejidos; luego se realiza una laparotomía media y se hace una incisión a lo largo de la línea avascular del codo. En este próximo capítulo se detallará cómo realizar una UUOA irreversible; se inserta un retractor calibrador en la incisión y se cubre al ratón con campos estériles.Se desplazan los intestinos y se cubren con gasa estéril humedecida para exponer el uréter izquierdo. Se expone y aísla el uréter utilizando fórceps angulados para inducir la obstrucción. El uréter se liga dos veces utilizando sutura de seda negra trenzada 6-0.La uretra puede obstruirse en cualquier punto entre la vejiga y la pelvis renal. A continuación, la uretra se divide entre las suturas. El siguiente capítulo detallará cómo realizar una obstrucción ureteral que pueda revertirse.Esta es la primera etapa de un RUUL. Se expone y aísla el uréter utilizando fórceps angulados para inducir obstrucción. El uréter se liga dos veces utilizando sutura de seda negra trenzada 6.0.La uretra debe obstruirse cerca de la vejiga para preservar una longitud adecuada de uretra para la anastomosis a la vejiga. Durante el procedimiento de reversión, se recortan los puntos de sutura, pero se deja uno largo para su uso posterior, y se corta una longitud de aproximadamente cinco milímetros de tubo plástico de pared blanda. Luego se realiza una hendidura longitudinal de manera que pueda abrirse en abanico para permitir que se coloque alrededor de la uretra.El tubo plástico de pared blanda debe tener un diámetro interno de un milímetro y un diámetro externo de dos milímetros. Luego, el tubo plástico de pared blanda se coloca cuidadosamente alrededor del uréter, asegurando que, una vez cerrado, la sutura larga emerja desde el centro de la hendidura. A continuación, se pasa una longitud de seis puntos de sutura de seda negra trenzada alrededor del tubo y se anuda. Una vez que la sutura larga que emerge desde el centro del tubo se incorpora luego al siguiente nudo. Este paso se realiza para fijar firmemente el uréter y el tubo en su lugar. El tubo colocado alrededor del uréter evitará una dilatación excesiva del uréter al final de los procedimientos UUO y RUUO.Se reemplazan los intestinos y se sutura el peritoneo, y la piel se cierra con clips metálicos. También se aplica yodo al área quirúrgica. La anestesia se revierte parcialmente mediante una inyección subcutánea de aamaz.Se administra clorhidrato y líquidos mediante una inyección subcutánea de un mililitro de solución salina tibia. Los ratones se monitorean hasta que recuperen la conciencia y luego se les permite recuperarse en una caja térmica mantenida a 29 grados durante 24 horas. Los riñones se vuelven hidronefróticos en los días siguientes a la obstrucción uterina.Los ratones pueden sacrificarse en diferentes momentos durante la fase de lesión o tras la reversión de la obstrucción. El siguiente capítulo detalla cómo realizar una reversión, que es la segunda etapa del procedimiento RUUO. El ratón se anestesia y prepara como se describió anteriormente.Se retiran los clips met&aacute;licos de la piel y se realiza una laparotom&iacute;a. Se eliminan las suturas peritoneales y el peritoneo puede abrirse suavemente con f&oacute;rceps de dientes de rata. Luego se prepara el rat&oacute;n y se expone el ur&eacute;ter izquierdo como se describi&oacute; previamente, utilizando f&oacute;rceps angulados.Se aísla el uréter y el tubo plástico de pared blanda del tejido circundante. Con el bisturí se cortan las suturas que mantienen en su lugar el tubo de pared blanda, y luego se retiran. A continuación, se retira cuidadosamente el tubo plástico de pared blanda y se observa un uréter dilatado.El uréter es frágil en el punto de obstrucción y podría romperse por encima de la obstrucción, tal como ocurrió en este clip. Sin embargo, las suturas colocadas previamente cerca de la vejiga durante la primera etapa de la OOU permanecerán intactas, lo que garantizará que no haya escape de orina desde la vejiga hacia la cavidad peritoneal. Se coloca un trozo de gasa estéril debajo del uréter para recoger cualquier sedimento urinario que drene desde el uréter previamente obstruido.La longitud restante del uréter obstruido debe dejarse drenar hasta que se produzca orina clara, para asegurar que la luz del uréter quede libre de cualquier material residual. Una vez que se ha drenado el uréter y la pelvis renal, se coloca una sutura larga de seda negra trenzada número seis en el extremo del uréter. Esta sutura se utiliza para facilitar la posterior anastomosis entre el uréter y la vejiga.Entonces, se gira el uréter de manera que quede anterior a su posición original y sobre el riñón. Se coloca una sola sutura monofilamento de nano poliamida TAing en el extremo del uréter. Se tiene cuidado para asegurar que la sutura permanezca en la capa muscular y no ingrese al lumen ureteral.La sutura se utiliza para anclar el uréter en la vejiga posteriormente, preparando así la vejiga para la anastomosis; se crea un conducto a través de la vejiga pasando una aguja de calibre 21 diagonalmente a través de ella. Luego, la aguja de calibre 21 se utiliza para guiar una aguja de ojo a través de la vejiga. La sutura de Nino previamente colocada en el uréter se pasa entonces a través de la primera incisión en la vejiga y hacia afuera a través de la pared de la vejiga adyacente al punto de entrada, para introducir el uréter dentro de la vejiga.La sutura larga de seis ceros colocada al final del uréter se pasa a través del ojo de la aguja. A continuación, la aguja con ojo se retira lentamente a través de la vejiga, asegurándose de que el uréter también sea arrastrado dentro de la vejiga. Una vez que el uréter se encuentra dentro de la vejiga, las nano suturas colocadas en la pared del uréter y de la vejiga se anudan para fijar el uréter en su lugar y asegurarlo firmemente.Se coloca una segunda sutura otax. Esta se pasa nuevamente a través del uréter, asegurando que permanezca dentro de la capa muscular, luego a través de la incisión de la vejiga y hacia afuera a través de la pared de la vejiga. A continuación, se anuda de manera similar.También se coloca una tercera sutura de náilon en la parte posterior de la vejiga. A continuación, se utilizan los dorsos de unas tijeras abiertas para empujar ligeramente hacia atrás la pared de la vejiga y exponer la longitud del uréter. Luego, el uréter se secciona por encima de la sutura del ligamento. La uretra pintada se retraerá entonces hacia dentro de la vejiga en ángulo. Se utilizan cuatro consejos para asegurar que la uretra se ha retraído completamente dentro de la vejiga. Finalmente, la herida de salida en la vejiga se cierra con una sutura de poliamida monofilamento de calibre 9-0 antes del cierre, asegurándose de que la uretra esté firmemente anclada dentro de la vejiga, cerca.El peritoneo y la piel, como se describió previamente, proporcionan cuidados postoperatorios como se describió anteriormente. En este estudio, a todos los ratones con OOU se les permite recuperarse durante siete días para permitir que el riñón desobstruido se descomprima, aunque pueden estudiarse puntos temporales más tempranos o tardíos. A continuación se presentan datos que ilustran el aspecto de los riñones obstruidos y desobstruidos y la lesión resultante.Esta figura ilustra el aspecto de los riñones, pelvis renal y uréteres U-U-L-U-U-O nativos en comparación con el riñón nativo. El riñón UUO que ha estado obstruido durante siete días presenta un aspecto hidronefrótico y un color pálido. Tras siete días de desobstrucción, el riñón RUO se ha descomprimido, con la pelvis renal y el uréter recuperando un tamaño y color similares a los del riñón nativo.Téngase en cuenta que el uréter IUO es más corto que los uréteres de los riñones UUO y nativos debido a la técnica de desestructuración y a la anastomosis en la vejiga. Esta figura muestra imágenes representativas de secciones renales teñidas con H y E de riñones nativos, UUO y RUUO. El intersticio sano del riñón normal consta de cortes transversales de túbulos sanos y compactos.Varios túbulos indicados por las flechas negras presentan una dilatación notable al séptimo día. Tras la LQU en contraste con el tubo, la dilatación se reduce marcadamente a los siete días posteriores a la reversión de la LUU. El modelo de ratón de nefropatía obstructiva presentado aquí se induce mediante obstrucción ureteral unilateral, que puede ser irreversible o reversible.El modelo reversible detallado aquí permite la eliminación de la obstrucción uréteral y la anastomosis del uréter a la vejiga para restaurar completamente el flujo urinario. La consiguiente descompresión renal posibilita el estudio del remodelado del tejido en experimentos posteriores a la lesión. La incorporación de modelos de nefropatía obstructiva tanto irreversible como reversible proporciona a los investigadores una visión poderosa de los procesos de la enfermedad y de cómo las intervenciones terapéuticas modulan tanto el desarrollo de la lesión como el posterior remodelado del tejido.

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Investigación

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Medicina

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Modelo Murino de Obstrucción Ureteral Unilateral: Un Procedimiento Quirúrgico para Obstruir el Flujo Urinario de un Riñón en Modelos de Ratón

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