Por encargo Microdiálisis Sonda Diseño

El objetivo general de este procedimiento es describir el fabricante de una sonda de microdiálisis hecha a medida. Esto se logra cortando primero el tubo de politetrafluoroetileno y la sílice fundida en las dimensiones correctas. El segundo paso es insertar la sílice fundida en el tubo utilizando una cánula como guía.

A continuación, se coloca una membrana de diálisis sobre la sílice fundida. El paso final es tirar del manguito metálico sobre la parte restante de la sílice fundida y utilizar epoxi para cerrar las juntas y asegurar una longitud de intercambio de dos milímetros. En última instancia, las instrucciones de este vídeo mostrarán cómo construir una sonda de microdiálisis robusta y fiable hecha a medida como alternativa a una sonda comercial, que puede medir con precisión la recuperación in vitro de neuropéptidos y moléculas pequeñas.

La principal ventaja de esta técnica es que este conjunto de sonda de microdiálisis presentado en detalle se puede adaptar a cualquier aplicación y se puede fabricar por menos de 10. Para empezar, corta un trozo de tubo de politetrafluoroetileno de 1,6 milímetros de grosor con un diámetro interior de 350 micras en secciones de 2,5 centímetros de largo. Corte un extremo de la sección en un ángulo de 45 grados para facilitar la conexión del tubo de salida.

A continuación, use papel de lija para rugosar la superficie exterior del tubo de PTFE para promover la adhesión de un pegamento epoxi. Corta una sección de sílice fundida en un trozo de 2,25 centímetros de largo. Inserte una aguja de calibre 30 en la fibra de PTFE hueca a un centímetro del extremo plano.

Doble el PTFE y perfore la funda en la curva. Inserte la sílice fundida en el tubo de PTFE utilizando la cánula de aguja como guía. A continuación, retire suavemente la cánula de la aguja y coloque la sílice fundida de modo que cinco milímetros sobresalgan por el extremo plano del tubo de PTFE.

Use una gota de pegamento de cianoacrilato para asegurar la sílice fundida en su lugar en el sitio de la punción y deje que se endurezca durante la noche. Prepare el pegamento epoxi agregando 30 partes de endurecedor amarillo a 70 partes de pegamento epoxi negro y mezcle suavemente. A continuación, extraiga una membrana de diálisis de polisulfona de corte de 30 kilodalton con un diámetro interior de 210 micras y un diámetro exterior de 245 micras.

Con cuidado sobre la sílice fundida. Introduzca la membrana en el tubo de PTFE y ajústela a 5,5 milímetros con un bisturí afilado. Marque un punto en la membrana con un bolígrafo fino para definir la longitud de intercambio de dos milímetros desde el extremo de la membrana.

A continuación, utiliza una aguja fina para aplicar una pequeña cantidad de pegamento epoxi para cubrir la punta de la membrana. A continuación, utilice pegamento epoxi para cerrar la unión entre la membrana de diálisis y la fibra de PTFE. Ahora regrese y agregue suficiente pegamento epoxi en la membrana hasta el punto de marcado.

Para garantizar una longitud de intercambio de difusión de solo dos milímetros, deje que el pegamento epoxi se endurezca durante la noche. Use un par de alicates para romper con cuidado trozos de un centímetro de una aguja de calibre 25 para crear manguitos de metal. Luego, tire del manguito de metal sobre la parte restante de la sílice fundida y use el pegamento epoxi restante para sellar la unión entre el manguito de metal y el tubo de PTFE.

Posteriormente, el manguito metálico permite la conexión del tubo de entrada con una sonda de microdiálisis. Finalmente, aplique pegamento caliente alrededor de la bifurcación de la sonda para una fijación y estabilización adicionales del dispositivo. Este esquema muestra un primer plano del funcionamiento interno de la sonda de microdiálisis.

Dos milímetros de la membrana de diálisis de polisulfona están expuestos en el extremo de la sonda, lo que permite la recuperación de metabolitos de pequeño peso molecular como la glucosa a TP y la acetilcolina. Aquí se muestra la capacidad de la sonda para recuperar moléculas pequeñas de bajo peso molecular como glucosa, lactato, acetilcolina y un TP in vitro. El porcentaje de recuperación es mucho mayor con estas moléculas, que están alrededor de 500 Daltons que las moléculas más grandes como la angiotensina dos, la sustancia p y la somatostatina, que están por encima de los 1000 Daltons.

Después de ver este vídeo, debería tener una buena comprensión de cómo construir sondas de microdiálisis robustas y fiables como alternativa a las comerciales.