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DOI: 10.3791/53070-v
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Describimos un ensayo de sensibilidad a fármacos de alto rendimiento para células primarias de mieloma múltiple. Consiste en una reconstrucción del microambiente de la médula ósea (incluyendo matriz extracelular y estroma) en placas de pocillos múltiples, y un método no invasivo para la cuantificación longitudinal de la viabilidad celular.
El objetivo general de este procedimiento es cuantificar la sensibilidad a la quimioterapia de las células primarias de mieloma múltiple a un panel de agentes quimioterapéuticos. Esto se logra mezclando primero células de mieloma múltiple aisladas de aspirado de médula ósea fresca con precultivo, estroma derivado del paciente y colágeno. En el segundo paso, la mezcla de CEL se siembra en una placa de pocillos múltiples.
A continuación, las células se tratan con los agentes quimioterapéuticos de interés y la placa se transfiere a la incubadora de un microscopio de etapa motorizada para obtener imágenes secuenciales de las células durante un período de incubación de 96 horas. En última instancia, se puede utilizar un algoritmo de análisis de imágenes digitales para generar curvas de viabilidad para cada fármaco y concentración. Las principales ventajas de esta técnica sobre los ensayos de viabilidad de punto final existentes son que se puede utilizar para probar varios agentes quimioterapéuticos frente a una sola muestra de paciente, y que la viabilidad de las células del paciente se puede medir longitudinalmente durante varios días sin necesidad de separar las células del estroma o la matriz.
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