Un método computarizado reproducible para la cuantificación de la densidad capilar utilizando periungueal capilaroscopia

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar el número de capilares por milímetro cuadrado en el área de la piel directamente debajo de la cutícula de la uña. Esto se logra primero tomando una imagen en blanco y negro del lecho ungueal debajo de la cutícula. El segundo paso consiste en importar la imagen a un programa informático de procesamiento de imágenes.

A continuación, se manipulan las imágenes para visualizar mejor los capilares; el paso final consiste en identificar y contar todos los capilares dentro de un milímetro cuadrado. En última instancia, la manipulación de imágenes se utiliza para mostrar la cantidad y la morfología de los capilares de un individuo. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo cardiovascular, como cómo la hipertensión, la diabetes y otras enfermedades pueden afectar la microcirculación.

Utilizando una cámara digital monocromática, obtenga imágenes capilares como se describió anteriormente. Luego, tome imágenes de calibración de una regla con marcas milimétricas utilizando la misma cámara y las mismas condiciones de aumento que se usaron para obtener las imágenes capilares. Importe la imagen de la regla al programa de imágenes del ordenador y mida el número de píxeles en una línea de un milímetro en la fotografía de la regla.

Anote este número y calcule la cantidad de píxeles que hay en una región de un milímetro por un milímetro. A continuación, abra una de las imágenes de capilares, oscurezca los capilares y aclare el fondo ajustando la imagen mediante un histograma de mejor ajuste. Luego, utilice el comando crear ROI en el menú desplegable para crear una región de interés de un milímetro por un milímetro en la parte superior de la pantalla.

Arrastre y coloque la región de interés en la ubicación con los lazos capilares más nítidos. Asegúrese de que la región de interés esté colocada de manera que el ápice de los lazos capilares se encuentre en la parte superior de la región. La clave para la reproducibilidad y la estandarización de esta etapa del protocolo es la colocación adecuada del cuadro de la región de interés de un milímetro cuadrado.

Una buena regla general para mantener la estandarización consiste en colocar el cuadro en el ápice o la punta de los bucles capilares de la imagen. Una vez posicionado correctamente, haga clic en la ROI y luego haga clic en recortar en el menú desplegable que aparece; a continuación, aplane la imagen para que todos los ajustes posteriores de la imagen se apliquen de manera uniforme. A continuación, aumente el contraste de la imagen a 75 para que los capilares se visualicen al máximo.

También elimine el ruido de la imagen para suavizar los bordes de los capilares. Defina el contraste de la imagen ajustando el histograma al modelo de mejor ajuste, de modo que los capilares sean negros y el fondo blanco. En cada imagen, seleccione manualmente una parte de un capilar bien definido utilizando la función de objeto objetivo para que sean reconocidos como objetos que el programa debe contar.

Luego, seleccione una pequeña parte del fondo utilizando la función de fondo como referencia para las áreas que deben descartarse por el algoritmo de conteo. Establezca el diámetro mínimo de los objetos contados en cinco píxeles para evitar contar el ruido de fondo como capilares. A continuación, utilice la función de conteo para contar instantáneamente todos los capilares en la imagen de cada individuo.

Cuente el promedio de tres a cuatro imágenes para obtener una evaluación más confiable. Para ahorrar tiempo, cree una macro para realizar automáticamente una secuencia específica de procesos en una o más imágenes seleccionando primero la opción de grabar macro y luego nombrando la macro según los pasos y procesos realizados y descritos en este video. A continuación, realice los pasos de manipulación de la imagen mientras la macro está grabando.

Al utilizar la macro en imágenes futuras, simplemente haga clic en ejecutar macro y el programa aplicará automáticamente las mejoras grabadas a las imágenes deseadas. El único paso que requiere intervención del usuario es seleccionar dónde recortar la imagen. Una imagen procesada de forma óptima puede contarse en 30 segundos y distingue claramente los capilares del fondo, así como los capilares individuales entre sí.

La imagen final mejorada se muestra aquí. El recuento total determinado para esta imagen fue de 54 capilares por milímetro cuadrado. Una vez dominada, esta técnica puede utilizarse para cuantificar y manipular 12 imágenes en menos de 20 minutos.