Un método computarizado reproducible para la cuantificación de la densidad capilar utilizando periungueal capilaroscopia

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar el número de capilares por milímetro cuadrado en el área de la piel directamente debajo de la cutícula de la uña. Esto se logra tomando primero una imagen monocromática del lecho de las uñas debajo de la cutícula. El segundo paso es importar la imagen a un programa de imágenes de computadora.

A continuación, se manipulan las imágenes Para visualizar mejor los capilares, el paso final es identificar y contar todos los capilares con una precisión de un milímetro cuadrado. En última instancia, la manipulación de imágenes se utiliza para mostrar la cantidad y morfología de los capilares de un individuo. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo cardiovascular, como cómo la hipertensión, la diabetes y otras enfermedades pueden afectar la microcirculación.

Utilizando una cámara digital monocromática, obtenga imágenes capilares como se ha descrito anteriormente. A continuación, tome imágenes de calibración de un ridículo con marcas milimétricas utilizando las mismas condiciones de imagen de cámara y aumento que se utilizaron para obtener las imágenes capilares. Importe la imagen del ridículo en el programa de imágenes de la computadora y mida el número de píxeles en una línea de un milímetro en la fotografía de la regla.

Anota este número y calcula el número de píxeles que hay en una región de un milímetro por un milímetro. A continuación, abra una de las imágenes capilares, oscurezca los capilares y aclare el fondo ajustando la imagen utilizando un histograma de mejor ajuste. A continuación, utilice el comando crear ROI en el menú desplegable para crear una región de interés de un milímetro por un milímetro en la parte superior de la pantalla.

Arrastre y coloque la región de interés en la ubicación con los bucles capilares más claros. Asegúrese de que la región de interés esté colocada de modo que el vértice de los bucles capilares se encuentre en la parte superior de la región. La clave para la reproducibilidad y estandarización de este paso del protocolo es la ubicación adecuada de la región de interés de un milímetro cuadrado.

Una buena regla general para mantener la estandarización es colocar la caja en el ápice o en la punta de los bucles capilares de la imagen. Una vez colocada correctamente, haga clic en el ROI y luego haga clic en recortar en el menú desplegable que aparece, luego aplane la imagen para que todos los ajustes de imagen futuros se apliquen uniformemente a la imagen. A continuación, aumente el contraste de la imagen a 75 para que los capilares se visualicen al máximo.

También de motear la imagen para suavizar los bordes de los capilares. Finalice el contraste de la imagen ajustando el histograma al modelo de mejor ajuste para que los capilares sean negros y el fondo blanco. En cada imagen, seleccione manualmente una parte de un capilar bien definido utilizando la característica del objeto de destino para que se reconozca como objetos que el programa contará.

A continuación, seleccione una pequeña parte del fondo utilizando la función de fondo como referencia a las áreas que el algoritmo de recuento debe ignorar. Establezca el diámetro mínimo de los objetos contados en cinco píxeles para evitar contar el ruido de fondo como capilares. A continuación, utilice la función de recuento para contar instantáneamente todos los capilares de la imagen para cada individuo.

Cuente el promedio de tres a cuatro imágenes para obtener una evaluación más confiable. Para ahorrar tiempo, cree una macro para realizar automáticamente una secuencia específica de procesos en una o más imágenes seleccionando primero grabar macro para asignar un nombre a la macro en función de los pasos y procesos realizados y descritos en este vídeo. A continuación, realice los pasos de manipulación de la imagen mientras se graba la macro.

Cuando utilice la macro en imágenes futuras, simplemente haga clic en ejecutar macro y el programa aplicará automáticamente las mejoras grabadas a las imágenes deseadas. El único paso que requiere la intervención del usuario es elegir dónde recortar la imagen. Una imagen procesada de forma óptima se puede contar en 30 segundos y distingue claramente los capilares del fondo, así como los capilares individuales entre sí.

Aquí se muestra la imagen mejorada final. El recuento total determinado para esta imagen fue de 54 capilares por milímetro cuadrado una vez dominada. Esta técnica se puede utilizar para cuantificar y manipular 12 imágenes en 20 minutos.