Name: El inducible Modelo BM12 del lupus eritematoso sistémico (LES) en ratones C57BL / 6 ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Aprende a caracterizar células T foliculares helper, células B de centro germinal y células plasmáticas mediante citometría de flujo en el modelo BM12 de lupus eritematoso sistémico en ratones C57BL/6.

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Este trabajo fue financiado en parte por el Instituto de Investigación del Lupus, el CA138617 de subvenciones del NCI, el DK090978 de subvenciones del NIDDK, el Premio Charlotte Schmidlapp (a E.M.J.) y la Beca Albert J. Ryan (a J.K.). Estamos agradecidos por el apoyo y la instrumentación proporcionados por el Centro de Citometría de Flujo de Investigación en la División de Reumatología del Centro Médico del Hospital Infantil de Cincinnati, respaldado en parte por NIH AR-47363, NIH DK78392 y NIH DK90971.

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Los autores no tienen nada que revelar.

El modelo inducible BM12 es una manera relativamente fácil y eficiente para estudiar los procesos celulares y moleculares de la LES. La activación crónica de las células T CD4 adoptivamente transferidas dirigidas contra antígenos propios conduce a la acumulación de Tfh, las células B GC, y las células plasmáticas que puede ser medida por citometría de flujo, tal como se describe aquí. Futuros estudios que utilizan este modelo de forma rápida y sencilla puede interrogar al papel de los genes candidatos y nuevas terapias ...

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad compleja caracterizada prototípicamente por el anticuerpo antinuclear (ANA) la producción y la glomerulonefritis. Numerosas otras secuelas, incluyendo dérmica, cardio-pulmonar y lesiones hepáticas están asociadas con la enfermedad en algunas personas. Las estimaciones de prevalencia en los EE.UU. varían ampliamente, desde 150,000-1,500,000 1,2, con especial incidencia en las mujeres de alto y las minorías 3. Aunque la etiología de LES ha sido difícil de discernir, se cree que surgen de la interacción de diversos factores genéticos y ambientales, que culminan en la autoinmunidad sistémica. Se han empleado numerosos modelos animales para estudiar los factores que conducen a la aparición de enfermedades y la progresión. Los modelos clásicos de ratón de LES incluyen cepas de ratones genéticamente predispuestos incluido el NZB x NZW modelo F1 y sus derivados NZM, la cepa / lpr MLR, y la cepa BXSB / Yaa, y los sistemas inducibles, tales como el penfermedad crónica de injerto contra huésped (cGVHD) modelos de 4 y ristane. Los primeros informes de la producción de autoanticuerpos en los modelos de EICH utilizan diversas cepas de ratón o cepas de hámster para padres en las transferencias de F1 5 - 8; métodos más comunes utilizados para estudiar la enfermedad similar al lupus incluyen actualmente el DBA / 2 padres → (C57BL / 6 x DBA / 2) F1, y el modelo de transferencia BM12 se describe aquí. Cada modelo tiene sus propias advertencias, pero generalmente comparten un conjunto común de características que se correlacionan con las características clínicas de la enfermedad humana. Los parámetros más frecuentemente reportados en modelos de ratón incluyen esplenomegalia, linfadenopatía, la nefritis, la producción de ANA, y en el nivel celular, la expansión de las células T helper (foliculares TFH), centro (GC) células B germinales y células plasmáticas. El modelo BM12 inducible se consigue mediante la transferencia adoptiva de linfocitos de IA BM12 B6 (C) - H2 - Ab1 BM12 / KhEgJ (BM12) ratones, una cepa identical de C57BL / 6 a excepción de 3 sustituciones de aminoácidos en el MHC de clase II, en IA b / 6 (B6) ratones C57BL. Alloactivation de donantes de células T CD4 por destinatario APC lleva a cGVHD con síntomas muy parecidas a LES. Específicamente, éstos incluyen expansión de donante derivado Tfh, la expansión de las células B GC receptores derivados y células plasmáticas, y la producción de ANAs incluyendo anti-dsDNA, anti-ssDNA, anti-cromatina, y los anticuerpos anti-RBC 9. Con el tiempo, los ratones receptores desarrollan glomerulonefritis asociada con depósitos de IgG en el glomerular, intersticial, y regiones vasculares de los riñones 10. Recientemente hemos demostrado que, similar a la enfermedad humana, también hay un papel crítico para la IFN de tipo I en este modelo 11. En particular, los criterios que definen para SLE humano incluyen el desarrollo de nefritis compatible con SLE ​​en presencia de anticuerpos anti-dsDNA 12, ambos de los cuales son características prominentes de este modelo de ratón. Hay seVeral ventajas del modelo BM12 en los modelos espontáneos. Los modelos clásicos que se desarrollan signos-LES como espontáneamente se basan en cualquiera de las cepas de ratón híbridos, cepas puras ratón no en el fondo B6, o grande loci genéticos en el fondo B6, que hacen que cruzan a octavos de final, o de lo contrario los ratones modificados genéticamente difícil y lleva mucho tiempo. Con el modelo inducible BM12, los ratones modificados genéticamente pueden servir ya sea como el donante o el receptor, lo que permite más rápida identificación del compartimento celular en el que genes en particular puede ser importante para la enfermedad. Además, el desarrollo de la enfermedad en el modelo BM12 es mucho más rápido, que requiere sólo 2 semanas hasta la aparición de ANA, en comparación con varios meses para los modelos más espontáneas. Además, en contraste con los modelos espontáneos que se desarrollan la enfermedad en diferentes puntos de tiempo, el inicio de la enfermedad y la progresión en el modelo B6 BM12 → es altamente sincronizadas. Esto permite la generación de cohortes de tamaño apropiado que se be utiliza para estrategias de intervención o terapéuticos en cualquier etapa del desarrollo de la enfermedad. Lo que sigue es un protocolo detallado para iniciar-LES como autoinmunidad por la transferencia adoptiva de linfocitos BM12, los cuales en ratones C57BL / 6, o variantes genéticas en el fondo B6. Además, se describe un protocolo de tinción de citometría de flujo para enumerar Tfh, las células B GC, y los tipos de células células plasmáticas asociadas con la enfermedad humana. Es importante destacar que estos protocolos también pueden ser utilizados para caracterizar la enfermedad en la mayoría de los modelos de ratón de SLE e identificar Tfh, las células B GC y células plasmáticas en otros modelos de enfermedad.

<table><tbody><tr><td>B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>El Laboratorio Jackson</td><td>001162</td><td>CD45.1+ Cepa de ratón BoyJ</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>El Laboratorio Jackson</td><td>001162</td><td>cepa de ratón Bm12</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Enzima de digestión de restricción para el genotipado</td></tr><tr><td>1X Tampón de lisis de glóbulos rojos</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de separación de plasma (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>Tubo de extracción de sangre con EDTA dipotásico</td></tr><tr><td>Tubo de separación de suero (SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>Tubo de extracción de sangre con activador de coágulos / SST Gel</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>Solución de separación celular de alta densidad</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>Solución de separación celular de alta densidad</td></tr><tr><td>GL-7-biotina</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Estreptavidina-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Tinte de viabilidad fijable ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1,2 ml Insertos de tubo FACS, bastidor</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&trade; Tubos de fondo redondo</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

el inducible modelo bm12 del lupus eritematoso sistémico (les) en ratones c57bl / 6 ratones

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune con diversas manifestaciones clínicas e inmunológicas. Varios modelos animales espontáneos e inducibles reflejan componentes comunes de la enfermedad humana, incluido el modelo de transferencia bm12. Tras la transferencia de esplenocitos bm12 o células T CD4 purificadas, los ratones C57BL/6 desarrollan rápidamente grandes frecuencias de células T foliculares auxiliares (Tfh), células B del centro germinal (GC) y células plasmáticas seguidas de altos niveles de anticuerpos antinucleares circulantes. Dado que este modelo utiliza ratones en un fondo C57BL/6 puro, los investigadores pueden estudiar rápida y fácilmente la progresión de la enfermedad en cepas de ratones transgénicos o knockout en un período de tiempo relativamente corto. En este trabajo se describen los protocolos para la inducción del modelo y la cuantificación de Tfh, células B GC y células plasmáticas mediante citometría de flujo multicolor. Es importante destacar que estos protocolos también se pueden utilizar para caracterizar la enfermedad en la mayoría de los modelos murinos de LES e identificar Tfh, células B GC y células plasmáticas en otros modelos de enfermedad.

Ratones enfermos desarrollan esplenomegalia en tan sólo 14 días, exhibiendo bazos 2-3 veces el tamaño de ratones sanos en términos de masa y celularidad (Figura 2). Los esplenocitos se secuencialmente cerrada en dispersión de la luz (FSC-A por SSC-A), la eliminación de dobletes (FSC-W o -H por FSC-A), células viables (bajo tinción de colorante de viabilidad) y CD4 + TCRβ + (Figura 3A). Las células donantes se distinguen de las células r...

La transferencia de linfocitos bm12 a un receptor C57BL/6 es un modelo establecido de lupus eritematoso sistémico. Aquí describimos cómo iniciar la enfermedad utilizando este modelo y cómo caracterizar las células T foliculares auxiliares, las células B del centro germinal y las células plasmáticas mediante citometría de flujo.

El inducible Modelo BM12 del lupus eritematoso sistémico (LES) en ratones C57BL / 6 ratones

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

El objetivo general de este procedimiento es caracterizar la expansión de las células T foliculares auxiliares, las células B del centro germinal y las células plasmáticas mediante citometría de flujo en el modelo BM 12 de lupus eritematoso sistémico, o SLE. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del lupus, como si el bloqueo de rutas moleculares específicas con fármacos puede detener o ralentizar la progresión de la enfermedad. La principal ventaja de este modelo de SLE es que utiliza ratones con una línea genética pura CPD siete negro seis, lo que permite a los investigadores estudiar rápidamente y con facilidad la progresión de la enfermedad en cepas de ratones transgénicos o knockout en un período de tiempo relativamente corto.Después de aislar e inyectar células donantes BM 12 en ratones, determinar la eficiencia del injerto y sacrificar los ratones según el protocolo descrito en el texto, rocíe ligeramente etanol al 70 % para humedecer el abdomen del ratón con tijeras quirúrgicas. Realice una pequeña incisión superficial aproximadamente un centímetro por encima de las glándulas genitales, tire suavemente de la piel del abdomen hacia el esternón mante

the-bm12-inducible-model-systemic-lupus-erythematosus-sle-c57bl6

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Este video muestra la forma de inducir hipofisitis autoinmune en ratones SJL y la forma de evaluar su gravedad por la histopatología.

La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es un modelo animal establecido de la esclerosis múltiple. C57BL / 6 ratones se inmunizan con mielina de oligodendrocitos glicoproteína (MOG) péptido 35-55 (MOG 35-55), dando como resultado una parálisis flácida ascendente causada por las células inmunes autorreactivas en el sistema nervioso central. Se discutirán Protocolos para la inducción de la enfermedad y el seguimiento.

La mielina glicoproteína del oligodendrocito (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Inducida por la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en ratones C57BL / 6 ratones

Este manuscrito describe los métodos para la inducción y puntuación del modelo experimental de encefalomielitis autoinmune (EAE), junto con la evaluación de la distribución de células inmunitarias y los niveles de citocinas de ARNm en ganglios linfáticos, bazo, sangre y médula espinal mediante citometría de flujo y PCR cuantitativa, respectivamente, en varias fases de la enfermedad.

La inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental en ratones y evaluación de la distribución de la enfermedad dependiente de las células inmunes en diversos tejidos

Este protocolo describe cómo determinar si los tratamientos farmacológicos para la encefalomielitis autoinmune experimental muestran protección del SNC como consecuencia de la supresión de la infiltración de células inmunitarias o son neuroprotectores durante el ataque de la infiltración de células inmunitarias.

La determinación de supresión del sistema inmunológico frente a la protección del SNC para Intervenciones farmacológicas en la desmielinización autoinmune

Aquí presentamos un método eficaz para investigar la actividad antifibrotica de las células mesenquimales humanas infundidas por vía intravenosa obtenidas de todo el cordón umbilical tras la inducción de la lesión pulmonar mediante una inyección endotraqueal de bleomicina en C57BL /6 ratones. Este protocolo se puede extender fácilmente a las pruebas preclínicas de otras terapias.

Inducción de lesión pulmonar de ratón por inyección endotraqueal de bleomicina

El presente protocolo describe un método para rastrear la progresión del lupus en ratones. Se presentan dos procedimientos adicionales para caracterizar la nefritis lúpica basada en la infiltración celular y la deposición de proteínas en los riñones.

Análisis de proteinuria, infiltración renal de leucocitos y depósito renal de proteínas en ratones LMR/LPR propensos al lupus

El presente protocolo describe la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón utilizando glicoproteína oligodendrocitos de mielina y monitoreando el proceso de la enfermedad utilizando un sistema de puntuación clínica. Los síntomas experimentales relacionados con la encefalomielitis autoinmune se analizan mediante análisis de tomografía microcomputarizada de fémur de ratón y prueba de campo abierto para evaluar el proceso de la enfermedad de manera integral.

Inducción y diversos indicadores de evaluación de la encefalomielitis autoinmune experimental

La encefalomielitis autoinmune experimental es uno de los modelos murinos de esclerosis múltiple más utilizados. En el protocolo actual, los ratones C57BL/6J de ambos sexos son inmunizados con el péptido glicoproteico de los oligodendrocitos de mielina, lo que resulta principalmente en paresia ascendente de la cola y las extremidades. Aquí discutimos el protocolo de inducción y evaluación de EAE.

Modelización de la esclerosis múltiple en los dos sexos: encefalomielitis autoinmune experimental inducida por MOG35-55

Aquí, presentamos un protocolo que establece un modelo de ratón con artritis reumatoide (AR) a través de la transferencia adoptiva de células T CD4+ de ratones SKG, proporcionando una herramienta experimental rápida y confiable para investigar los mecanismos inmunológicos, la progresión patológica y el desarrollo de nuevos tratamientos para la AR.

Un modelo adoptivo de transferencia de artritis reumatoide en ratones

Aprende a caracterizar células T foliculares helper, células B de centro germinal y células plasmáticas mediante citometría de flujo en el modelo BM12 de lupus eritematoso sistémico en ratones C57BL/6.

El inducible Modelo BM12 del lupus eritematoso sistémico (LES) en ratones C57BL / 6 ratones

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