La interposición de la vena del modelo: un modelo adecuado para estudiar la permeabilidad del injerto de bypass

El objetivo general de este procedimiento es estudiar la permeabilidad del injerto de derivación en un modelo de interposición de venas de rata. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la cirugía de bypass, como la trayectoria subyacente de los procesos biológicos y fisiológicos durante la oclusión de bypass. La principal ventaja de esta técnica es que el procedimiento quirúrgico es fácil y rápido, lo que puede utilizarse para estudiar nuevas terapias y tractos in vivo.

La demostración de la técnica correrá a cargo de Grigol Tediashvili, un microcirujano de nuestro laboratorio. Antes de la cirugía, verifique que haya suficiente profundidad de anestesia pellizcando las patas traseras de la rata y verificando la ausencia de reflejos. Luego, aplique un poco de ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia.

A continuación, separa las patas traseras y fija su posición con cinta adhesiva. Luego, afeite el vello inguinal con una recortadora de cabello, seguido de una desinfección amplia del área con povidona yodada seguida de alcohol al 80%. Repita estos exfoliantes alternos un total de tres veces.

Ahora, bajo un microscopio, realice una incisión vertical a lo largo de la línea inguinal. A continuación, utilice dos pinzas para separar suavemente los tejidos subcutáneos y exponer la vena epigástrica superficial hasta su origen en la vena femoral. Hazlo con mucho cuidado, ya que la vena es frágil.

A continuación, detenga el flujo sanguíneo a través de la vena epigástrica superficial con dos pinzas. Ahora, cosecha un segmento de la veta. Levante con cuidado la vena aislada y corte el vaso con unas microtijeras.

Luego, coloque el segmento de la vena sobre una gasa estéril. Allí, deslice con cuidado una aguja de calibre 30 en un extremo y enjuague la vena con heparina. Luego, transfiera la vena a lidocaína al 1% y manténgala en hielo para evitar espasmos.

Ahora, eutanasia a la rata donante aumentando la anestesia al 5% de isoflurano. A continuación, en preparación para las anastamosis, prepare la rata receptora de la misma manera que la rata donante hasta el paso de afeitado. Después de dos o tres minutos de isoflurano al 5%, abra el abdomen de la rata donante a lo largo de la línea alba, corte a través del diafragma y extraiga el corazón para detener la circulación.

Continúe preparando a la rata receptora para la cirugía. Afeitar la cara medial de las piernas con una recortadora de pelo y desinfectar la piel con tres exfoliantes alternos de povidona yodada y etanol al 80%. Antes de continuar, realice otro pellizco en el dedo del pie para controlar la anestesia.

Ahora, realice una incisión femoral mediana desde la rodilla hasta el pliegue inguinal. Bajo el microscopio, use dos pinzas para separar la arteria femoral de su entorno. A continuación, utilice dos micropinzas para detener el flujo sanguíneo, colocando primero la pinza proximal.

A continuación, corte un segmento corto de la arteria femoral pinzada y deséchelo. Acorte el muñón arterial restante para dejar un espacio que sea de uno a dos milímetros más grande que el injerto de vena. Luego, enjuague el muñón arterial con heparina de una aguja de calibre 30.

Si la adventicia sobresale ligeramente más allá del muñón del vaso, use fórceps para tirar de la adventicia ligeramente sobre el extremo del vaso y, a continuación, retire un trozo de adventicia. Ahora, coloque el segmento de vena recolectado entre los muñones arteriales en la orientación correcta y ajuste el tamaño del espacio para un buen ajuste. A continuación, realice primero la anastomosis proximal con sutura de prolene 10-0.

Comience suturando cada lado lateral, luego agregue tres suturas más en el lado ventral. Termina con tres puntos en el lado dorsal. A continuación, conecte los vasos distales utilizando la misma técnica, comenzando con una sutura en cada lado lateral, seguida de tres suturas en el lado ventral y luego terminando en el lado dorsal.

Después de completar las anastomosis, cargue dos jeringas de un mililitro con los componentes del pegamento de fibrina. Luego, levante cuidadosamente el injerto con pinzas y aplique aproximadamente 100 microlitros del componente uno debajo del injerto, seguidos de 100 microlitros del componente dos. Los dos componentes deben agregarse siempre en los mismos volúmenes.

Ahora, vuelva a colocar el injerto en su posición y aplique 100 microlitros de cada componente sobre el injerto para cubrir completamente el injerto y la anastomosis. Esto evita la insuficiencia anastomótica y la sobredistensión del injerto venoso. Ahora, abra con cuidado las abrazaderas comenzando con la abrazadera distal.

Luego, confirme una cirugía exitosa verificando si hay un pulso visible en la vena trasplantada y la arteria distal del injerto. Antes de cerrar la piel, retire el exceso de pegamento que pueda impedir el cierre. A continuación, cierre las capas de la piel con suturas de prolene 5-0.

Antes de que la rata se despierte, inyecte de cuatro a cinco miligramos de carprofeno por kilogramo por vía subcutánea. Vigile al animal hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal. Luego, dale a la rata una jaula casera sin otros animales.

Durante los próximos tres días, proporcione metamizol en el agua potable y verifique la recuperación de la rata a diario. Una vez que se recupera por completo, la rata puede alojarse con otras ratas. Los animales se recuperan bien de la cirugía y mostraron una excelente condición física después de la operación.

La integración exitosa de la vena en la arteria femoral y la permeabilidad del injerto después del trasplante se confirmaron de forma no invasiva mediante ecografía dúplex. Al trasplantar la vena de una rata luke-positiva a una rata luke-negativa, se utilizaron imágenes de bioluminiscencia para monitorear la presencia del injerto. Se encontró que la hiperplasia miointimal se desarrolla progresivamente en el injerto con el tiempo.

La tinción histológica con tricrómico de Masson demuestra la formación de miointima dentro de la lámina elástica interna. Para confirmar que el modelo reproduce la dinámica de la hiperplasia miointimal, se midió la obliteración luminal. Se observó una pérdida gradual de la permeabilidad del injerto desde los siete días hasta los 28 días posteriores a la cirugía, lo que encaja muy bien con el modelo.

Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en 20 minutos si se realiza correctamente. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.