Utilizando la técnica de la manga en un modelo murino de trasplante aórtico - un Video instructivo

En este procedimiento, la aorta del donante se coloca en posición ortópnea y las mordidas superficiales se toman en el recipiente de alimentación. Anestesiar a los ratones con una mezcla de 1,5 por ciento de volumen de isoflurano y 100% de oxígeno a través de una mascarilla. Coloque el ratón en una plataforma en posición supina y pegue todas las patas a la mesa de operaciones.

Coloque ungüento oftálmico en los ojos para evitar la sequedad durante el procedimiento. Compruebe los reflejos, pellizcando las patas traseras para asegurarse de que el ratón está lo suficientemente anestesiado. Retira todo el vello del abdomen.

Aplícate una crema depilatoria o usa una afeitadora. Realice la operación en condiciones estériles. Desinfectar el abdomen.

Para extirpar la aorta del donante, haga una incisión en la línea media del abdomen y retraiga el intestino manualmente hacia la derecha. Refleja suavemente y manualmente los intestinos hacia un lado con guantes sin polvo. Coloque los intestinos sobre un trozo de gasa humedecido con solución salina para mantenerlos húmedos.

Diseccione la aorta abdominal con mucho cuidado del tejido circundante utilizando una disección roma con pinzas. Diseccionar el segmento de la aorta entre la arteria renal y la bifurcación de la vena cava con las pinzas. Asegure todas las ramas pequeñas de este segmento con una sola sutura monofilamento 11-0.

Antes de extraer la aorta, inyecte 0,5 mililitros de solución salina que contenga 50 unidades de heparina en la vena cava inferior. Deje que el animal donante se desangre antes de que se haya extirpado el segmento de la aorta. Enjuague completamente el injerto con solución salina y colóquelo inmediatamente en un recipiente con solución salina helada.

Para preparar al receptor, anestesiar al animal a través de una mascarilla, quitar el pelo y desinfectar como se indicó anteriormente, y hacer una incisión en la línea media desde el xifoides hasta la pelvis con un bisturí. Retraer las paredes abdominales con retractores. Envuelva los intestinos en una gasa humedecida con solución salina y desplácelos muy suavemente hacia la derecha del animal.

Diseccionar la aorta infrarrenal libre entre las arterias renales proximalmente y la bifurcación distal con las pinzas. Asegure todas las ramas pequeñas de este segmento con una sola sutura monofilamento 11-0. Pinzar las porciones proximal y distal de la aorta a través de una sutura de seda simple 6-0.

Divida la aorta por la mitad entre las pinzas e irriga los extremos cortados con solución salina heparinizada para abrir el lumen. Coloque el injerto en posición ortópnea. Realizar la anastomosis mediante la técnica de manga con suturas mediante monofilamento 11-0.

Con este método, el extremo del recipiente de alimentación se coloca en el recipiente receptor. Coloque el extremo de la aorta receptora infrarrenal dentro del extremo proximal de la aorta del donante. Realizar la anastomosis distal de la misma manera.

Coloque el extremo distal de la aorta del donante dentro del extremo distal de la aorta del receptor. Tenga cuidado de evitar cualquier torsión de la aorta asegurando la alineación perfecta de la aorta del donante y del receptor. El momento de la liberación de la pinza es un paso muy importante del procedimiento y debe realizarse con mucho cuidado.

Después de comprobar que la anastomosis está en orden, suelte las pinzas. Primero suelte suavemente la pinza distal, seguida de la pinza proximal. De esta manera, hay una baja presión para mantener las paredes unidas antes de que se libere el lado de alta presión.

El injerto se perfunde inmediatamente y se observa un pulso. Retira suavemente los restos de la seda. Vuelva a colocar el contenido abdominal en la cavidad abdominal y cierre la herida con una sutura de ácido poliglicólico 3-0 en funcionamiento.

Administrar buprenorfina 0,05 miligramos por kilogramo al ratón antes de finalizar la anestesia. Presentamos los ejemplos de las imágenes de necropsia del injerto seis semanas después del trasplante y su vista ecográfica tridimensional y en modo B. Las imágenes muestran la permeabilidad del injerto.

No hay cambios en las dimensiones del lumen mostradas por el injerto. Además, no hemos encontrado estenosis ni formaciones de aneurismas. No observamos lesiones significativas en las aortas trasplantadas por tinción histológica e inmunohistoquímica.

Los núcleos fueron contrateñidos por DAPI. En conclusión, este método de anastomosis muy rápida podría utilizarse para estudiar la enfermedad vascular en ratones modificados genéticamente.