Name: ADSC-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprende el trasplante de láminas de ADSC para prevenir la estenosis esofágica tras disección endoscópica submucosa extendida en un modelo porcino. Esta técnica celular mejora la cicatrización y reduce la fibrosis.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este estudio fue apoyado y financiado por la Fundación Avenir (Fondation de l'Avenir, 255 rue de Vaugirard, 75719 Paris cedex 15, París, Francia). Este estudio nunca se habría llevado a cabo sin la valiosa ayuda del equipo veterinario del Laboratorio de Investigación Bioquirúrgica de la Fundación Alain Carpentier.

Todos los animales fueron tratados de acuerdo con el Comité de Ética de Investigación de Animales (directrices del Ministerio de Agricultura de Francia). El protocolo recibió la aprobación del comité de ética local autorizado para la experimentación con animales en la Universidad de París Descartes (número de registro MESR 2.035,02; Facultad de Medicina de París Descartes, París, Francia). 1. ADSC cultura y Etiquetado <ol><li> Obtener ADSC confirmadas de una institución privada. Cultura ADSC alogénicas a 37 ° C y 5% de CO 2 con un mínimo de medio esencial alfa incluyendo 10% de suero de ternera fetal y 1% de antibióticos (penicilina y estreptomicina). </li><li> Obtener alrededor de 24 x 10 6 ADSC por animal utilizando procedimientos de la expansión de células estándar (37 ° C y 5% de CO 2). Cosechar las ADSC utilizando una solución de tripsina estándar (10 ml para un plato T150). Realizar el recuento de células con un hemocitómetro. </li><li> Realizar celular marcando el día antes del trasplante mediante el pr tinción PKH67ocedure describe a continuación. NOTA: El objetivo del procedimiento de tinción es para permitir el rastreo de células después del trasplante. <ol><li> Con el fin de etiquetar 2 x 10 6 ADSC, preparar la Solución A (2 x 10 6 células con 100 l de diluyente de C) y la solución B (4 l de PKH67 con 1 ml de diluyente C). </li><li> Incubar soluciones A y B para 2 min. A continuación, añadir 100 l de suero de ternera fetal durante 1 min. </li><li> Enjuague la solución con 300 l de RPMI citrada (298,5 l de RPMI y 1,5 l de citrato) y se centrifuga a 1500 xg durante 5 min. Repita esta operación 2 veces. Mantener las células marcadas y protegerlos de la luz hasta que la construcción de hoja. </li></ol></li></ol> 2. Doble ADSC hojas Construct <ol><li> El día antes del trasplante, preparar una placa de cultivo celular sensible a la temperatura de 12 pocillos con 4 ml por pocillo de medio de cultivo celular, descritos anteriormente, antes de PKH-etiquetado. Sembrar el plato con 1,5 x 10 6 PKH-labeled células por pocillo y se incuban durante 12 horas (37 ° C y 5% de CO 2). </li><li> En el día del trasplante, separar la lámina de células confluentes mediante la incubación de la placa a temperatura ambiente durante 30 min. </li><li> aspirar suavemente una hoja ADSC con una pipeta y la capa en un papel hidrófobo (1,5 cm de diámetro). Utilice este documento como una membrana de soporte. </li><li> Agarre otra hoja ADSC y suavemente depositarlo en la parte superior de la otra para obtener una construcción de doble capa. </li><li> Repita este procedimiento para obtener el mayor número de construcciones de hojas ADSC según sea necesario (4 por animal). </li></ol> 3. esofágica disección endoscópica submucosa (ESD) <ol><li> En el día del trasplante, pre-medicar a los animales con 10 mg / kg de ketamina intramuscular e inducir con 8 mg / kg de propofol por vía intravenosa. A continuación, realice la intubación endotraqueal y mantener la anestesia con isoflurano al 2,5% inhalación. </li><li> Una vez que el animal está bajo anestesia general, realice ESD con una gastroscopa, un videoscopio, y una unidad de electrocirugía. <ol><li> Utilice un cuchillo endoscópica y coagulación suave para obtener marcas dorsales hemi-circunferencial que van de 40 cm a 45 cm desde el arco dental. </li><li> Inyectar una solución de glicerol que contiene el colorante índigo carmín en la capa submucosa para la separación de la capa de la mucosa de la capa muscular. </li><li> Utilice un cuchillo endoscópica con el modo endocut I para obtener incisiones circunferenciales. </li><li> Utilice un cuchillo endoscópica con el modo de coagulación obligado a realizar la disección submucosa, pasando de la incisión proximal a distal de la incisión. </li></ol></li><li> Al final del procedimiento de ESD, observar el, 5 cm de larga cicatriz esofágico hemi-circunferencial exponiendo la capa muscular. </li></ol> 4. Trasplante endoscópica <ol><li> Inmediatamente después de la EDS, endoscópicamente trasplantar animales con 4 construcciones dobles hojas ADSC. <ol><li> Agarre un constructo hojas ADSC con fórceps endoscópico yprotegerlo durante el transporte hasta el lugar de la herida mediante el uso de una gorra endoscópica grande, transparente. </li><li> Aplicar toda la superficie de la construcción de la ficha técnica ADSC al lecho de la úlcera. </li><li> Aplique suavemente el constructo de la ficha técnica ADSC durante 10 minutos para obtener un injerto completo y estable. Para la aplicación, el uso de fórceps endoscópicos o una tapa endoscópica y aplicar a toda la superficie de la ADSC construir sobre la capa submucosa del esófago. </li></ol></li><li> Repita este procedimiento cuatro veces para cada animal con el fin de obtener cuatro constructos dobles-lámina de células trasplantadas y adherentes. NOTA: El objetivo es cubrir aproximativamente la mitad del área herida. </li></ol> 5. La evaluación postoperatoria y Seguimiento <ol><li> Para cada animal, garantizar analgesia post-ESD con la inyección intramuscular de 0,2 mg / kg de morfina tres veces al día para el primer día y con un tratamiento de 28 días anti-ácido de esomeprazol (40 mg / día). Realizar profilaxis antibiótica con amoxicillen (1 g / día) durante 7 días. Autorizar a los líquidos en el día 1 y sólidos al día siguiente. </li><li> Haga un seguimiento con los animales durante 28 días. Obtener evaluaciones clínicas diarias utilizando Mellow Pinkas disfagia puntuaciones de 16 y mediciones de variación de peso. </li><li> Evaluación estenosis multimodal: bajo anestesia general, en los días programados 3, 14 y 28, lleve a cabo una evaluación multimodal de ocurrencia de estenosis. <ol><li> Realizar una evaluación endoscópica utilizando Descripción de la cicatriz, la medición de la estenosis, y la detección de la membrana de soporte del papel. Medir la estenosis mediante el gastroscopio de cruzar a través de la estenosis (el diámetro del gastroscopio es 8 mm). Observar la cicatriz, prestando atención al aspecto inflamatoria (eritema de la mucosa, edema de la mucosa y de la mucosa sangrado espontáneo) y la ausencia o presencia de la membrana de soporte del papel dentro de la cicatriz. </li><li> Aplicar la sonda verde pCLE través del canal del operador gastroscopio directamente en el lecho de la cicatriz. Buscar una espontáneay organizado señal verde compatible con marcado con PKH67 injerto constructo hojas ADSC. </li><li> Realizar 2 incidencias ortogonales de barita esofagograma con un aro radiológica (frontal y las incidencias página izquierda). Mantener la incidencia más apretado para la evaluación de la estenosis (grado de estenosis (%) = [1- (longitud del eje corto bajo estenosis / longitud del eje normal bajo estenosis) x 100)]) 17, 18. </li></ol></li><li> El sacrificio de animales. <ol><li> En el día 28, al final del período de seguimiento, realizar el sacrificio de los animales. Mientras el animal está todavía bajo anestesia general, inyectar 100 mg / kg de fenobarbital por vía intravenosa. Asegurar la muerte de los animales utilizando la exploración clínica de la ausencia de un latido del corazón y de la respiración movimiento. </li><li> Después de una exposición esternotomía y órgano, eliminar el esófago de cada uno de los animales sacrificados (con fijación de formalina al 10%, inclusión en parafina, y las secciones de 4 micras de espesor). Manchar las diapositivascon hematoxilina y azafrán 15. Digitalizar las diapositivas para el análisis computarizado y la comparación de los grupos de animales 15. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ono, S., Fujishiro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcomes+of+endoscopic+submucosal+dissection+for+superficial+esophageal+squamous+cell+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms.</a> Gastrointestinal endoscopy. 70 (5), 860-866 (2009).</li>
<li>Pech, O., May, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+efficacy+and+safety+of+endoscopic+resection+for+patients+with+mucosal+adenocarcinoma+of+the+esophagus%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term efficacy and safety of endoscopic resection for patients with mucosal adenocarcinoma of the esophagus.</a> Gastroenterology. 146 (3), 652-660 (2014).</li>
<li>Yahagi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+esophageal+endoscopic+submucosal+dissection+an+extreme+treatment+modality%2C+or+can+it+be+a+standard+treatment+modality%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Is esophageal endoscopic submucosal dissection an extreme treatment modality, or can it be a standard treatment modality.</a> Gastrointestinal Endoscopy. 68 (6), 1073-1075 (2008).</li>
<li>Rösch, T., Sarbia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attempted+endoscopic+en+bloc+resection+of+mucosal+and+submucosal+tumors+using+insulated-tip+knives%3A+a+pilot+series%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Attempted endoscopic en bloc resection of mucosal and submucosal tumors using insulated-tip knives: a pilot series.</a> Endoscopy. 36 (9), 788-801 (2004).</li>
<li>Chennat, J., Ross, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+pathology+under+squamous+epithelium+on+initial+EMR+specimens+in+patients+with+Barrett%27s+esophagus+and+high-grade+dysplasia+or+intramucosal+carcinoma%3A+implications+for+surveillance+and+endotherapy+management%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Advanced pathology under squamous epithelium on initial EMR specimens in patients with Barrett's esophagus and high-grade dysplasia or intramucosal carcinoma: implications for surveillance and endotherapy management.</a> Gastrointestinal endoscopy. 70 (3), 417-421 (2009).</li>
<li>Oyama, T., Tomori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+submucosal+dissection+of+early+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+gastroenterology+and+hepatology%3A+the+official+clinical+practice+journal+of+the+American+Gastroenterological+Association%22%5BJournal%5D)">Endoscopic submucosal dissection of early esophageal cancer.</a> Clinical gastroenterology and hepatology: the official clinical practice journal of the American Gastroenterological Association. 3 (7), Suppl 1 67-70 (2005).</li>
<li>Werner, S., Krieg, T., Smola, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17435785">Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healing.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 127 (5), 998-1008 (2007).</li>
<li>Yamaguchi, N., Isomoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+oral+prednisolone+on+esophageal+stricture+after+complete+circular+endoscopic+submucosal+dissection+for+superficial+esophageal+squamous+cell+carcinoma%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Digestion%22%5BJournal%5D)">Effect of oral prednisolone on esophageal stricture after complete circular endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell carcinoma: a case report.</a> Digestion. 83 (4), 291-295 (2011).</li>
<li>Hanaoka, N., Ishihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralesional+steroid+injection+to+prevent+stricture+after+endoscopic+submucosal+dissection+for+esophageal+cancer%3A+a+controlled+prospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Intralesional steroid injection to prevent stricture after endoscopic submucosal dissection for esophageal cancer: a controlled prospective study.</a> Endoscopy. 44 (11), 1007-1011 (2012).</li>
<li>Ohki, T., Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+oesophageal+ulcerations+using+endoscopic+transplantation+of+tissue-engineered+autologous+oral+mucosal+epithelial+cell+sheets+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Treatment of oesophageal ulcerations using endoscopic transplantation of tissue-engineered autologous oral mucosal epithelial cell sheets in a canine model.</a> Gut. 55 (12), 1704-1710 (2006).</li>
<li>Ohki, T., Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+esophageal+stricture+after+endoscopic+submucosal+dissection+using+tissue-engineered+cell+sheets%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets.</a> Gastroenterology. 143 (3), 582-588 (2012).</li>
<li>García-Gómez, I., Elvira, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+biological+properties+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+opinion+on+biological+therapy%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: biological properties and clinical applications.</a> Expert opinion on biological therapy. 10 (10), 1453-1468 (2010).</li>
<li>Jorgensen, C., Noël, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+osteoarticular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in osteoarticular diseases.</a> Regenerative Medicine. 6 (6), Suppl 44-51 (2011).</li>
<li>Antonic, A., Sena, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+transplantation+in+traumatic+spinal+cord+injury%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+biology%22%5BJournal%5D)">Stem cell transplantation in traumatic spinal cord injury: a systematic review and meta-analysis of animal studies.</a> PLoS biology. 11 (12), 1001738(2013).</li>
<li>Perrod, G., Rahmi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Sheet+Transplantation+for+Esophageal+Stricture+Prevention+after+Endoscopic+Submucosal+Dissection+in+a+Porcine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Cell Sheet Transplantation for Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection in a Porcine Model.</a> PLOS ONE. 11 (3), 0148249(2016).</li>
<li>Mellow, M. H., Pinkas, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+laser+therapy+for+malignancies+affecting+the+esophagus+and+gastroesophageal+junction.+Analysis+of+technical+and+functional+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endoscopic laser therapy for malignancies affecting the esophagus and gastroesophageal junction. Analysis of technical and functional efficacy.</a> Archives of Internal Medicine. 145 (8), 1443-1446 (1985).</li>
<li>N.A.S.C.E.T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+carotid+endarterectomy+in+symptomatic+patients+with+high-grade+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of carotid endarterectomy in symptomatic patients with high-grade carotid stenosis.</a> The New England Journal of Medicine. 325 (7), 445-453 (1991).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomised+trial+of+endarterectomy+for+recently+symptomatic+carotid+stenosis%3A+final+results+of+the+MRC+European+Carotid+Surgery+Trial+%28ECST%29%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Randomised trial of endarterectomy for recently symptomatic carotid stenosis: final results of the MRC European Carotid Surgery Trial (ECST).</a> Lancet. 351 (9113), 1379-1387 (1998).</li>
<li>Kanai, N., Yamato, M., Ohki, T., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricated+autologous+epidermal+cell+sheets+for+the+prevention+of+esophageal+stricture+after+circumferential+ESD+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Fabricated autologous epidermal cell sheets for the prevention of esophageal stricture after circumferential ESD in a porcine model.</a> Gastrointestinal Endoscopy. 76 (4), 873-881 (2012).</li>
<li>Aggarwal, S., Pittenger, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+modulate+allogeneic+immune+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses.</a> Blood. 105 (4), 1815-1822 (2005).</li>
<li>Maeda, M., Kanai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+cell+sheet+transplantation+device+developed+by+using+a+3-dimensional+printer+and+its+feasibility+evaluation+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Endoscopic cell sheet transplantation device developed by using a 3-dimensional printer and its feasibility evaluation in a porcine model.</a> Gastrointestinal Endoscopy. , (2015).</li>
<li>Haraguchi, Y., Shimizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+functional+three-dimensional+tissues+by+stacking+cell+sheets+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Fabrication of functional three-dimensional tissues by stacking cell sheets in vitro.</a> Nature Protocols. 7 (5), 850-858 (2012).</li>
<li>Nishida, K., Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+reconstruction+with+tissue-engineered+cell+sheets+composed+of+autologous+oral+mucosal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Corneal reconstruction with tissue-engineered cell sheets composed of autologous oral mucosal epithelium.</a> The New England Journal of Medicine. 351 (12), 1187-1196 (2004).</li>
<li>Napoléon, B., Lemaistre, A. -I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+the+diagnosis+of+pancreatic+serous+cystadenoma%3A+needle-based+confocal+laser+endomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">A novel approach to the diagnosis of pancreatic serous cystadenoma: needle-based confocal laser endomicroscopy.</a> Endoscopy. 47 (1), 26-32 (2015).</li>
<li>Gabbani, T., Manetti, N., Bonanomi, A. G., Annese, A. L., Annese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+endoscopic+imaging+techniques+in+surveillance+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">New endoscopic imaging techniques in surveillance of inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 7 (3), 230-236 (2015).</li>
<li>Nagyova, M., Slovinska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+PKH67%2C+DiI%2C+and+BrdU+labeling+techniques+for+tracing+rat+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology.+Animal%22%5BJournal%5D)">A comparative study of PKH67, DiI, and BrdU labeling techniques for tracing rat mesenchymal stem cells.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 50 (7), 656-663 (2014).</li>
<li>Jain, D., Singhal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Esophageal+Stricture+Prevention+after+Endoscopic+Submucosal+Dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection.</a> Clinical Endoscopy. 49 (3), 241-256 (2016).</li>
<li>Lua, G. W., Tang, J., Liu, F., Li, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Esophageal+Strictures+After+Endoscopic+Submucosal+Dissection%3A+A+Promising+Therapy+Using+Carboxymethyl+Cellulose+Sheets%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases+and+Sciences%22%5BJournal%5D)">Prevention of Esophageal Strictures After Endoscopic Submucosal Dissection: A Promising Therapy Using Carboxymethyl Cellulose Sheets.</a> Digestive Diseases and Sciences. 61 (6), 1763-1769 (2016).</li>
<li>Sakaguchi, Y., Tsuji, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triamcinolone+Injection+and+Shielding+with+Polyglycolic+Acid+Sheets+and+Fibrin+Glue+for+Postoperative+Stricture+Prevention+after+Esophageal+Endoscopic+Resection%3A+A+Pilot+Study%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Triamcinolone Injection and Shielding with Polyglycolic Acid Sheets and Fibrin Glue for Postoperative Stricture Prevention after Esophageal Endoscopic Resection: A Pilot Study.</a> The American Journal of Gastroenterology. 111 (4), 581-583 (2016).</li>
<li>Sakurai, T., Miyazaki, S., Miyata, G., Satomi, S., Hori, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+buccal+keratinocyte+implantation+for+the+prevention+of+stenosis+after+EMR+of+the+esophagus%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Autologous buccal keratinocyte implantation for the prevention of stenosis after EMR of the esophagus.</a> Gastrointestinal endoscopy. 66 (1), 167-173 (2007).</li>
<li>Nieponice, A., McGrath, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extracellular+matrix+scaffold+for+esophageal+stricture+prevention+after+circumferential+EMR%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">An extracellular matrix scaffold for esophageal stricture prevention after circumferential EMR.</a> Gastrointestinal Endoscopy. 69 (2), 289-296 (2009).</li>
<li>Honda, M., Hori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+adipose+tissue-derived+stromal+cells+for+prevention+of+esophageal+stricture+after+circumferential+EMR+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Use of adipose tissue-derived stromal cells for prevention of esophageal stricture after circumferential EMR in a canine model.</a> Gastrointestinal endoscopy. 73 (4), 777-784 (2011).</li>
<li>Barret, M., Pratico, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amniotic+membrane+grafts+for+the+prevention+of+esophageal+stricture+after+circumferential+endoscopic+submucosal+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Amniotic membrane grafts for the prevention of esophageal stricture after circumferential endoscopic submucosal dissection.</a> PloS One. 9 (7), 100236(2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

En este modelo de cerdo, el trasplante de hojas ADSC se realizó con éxito, y la evaluación in vivo en pCLE permitido para el monitoreo injerto de células. Las evaluaciones clínicas, endoscópicas, radiológicas, histológicas y demostraron la eficacia de la hoja de ADSC endoscópica en la prevención de la estenosis esofágica después de la EDS extendida. El trasplante endoscópica de una solución de glicerol ADSC que contiene una hoja de tinte índigo carmín es un enfoque innovador en la m...

El manejo de los tumores de esófago superficiales ha cambiado con el desarrollo de nuevas técnicas endoscópicas. Hoy en día, la resección endoscópica es el tratamiento de primera línea. De hecho, se asocia con menores tasas de morbilidad y mortalidad que una cirugía con resultados oncológicos iguales 1, 2, 3. La resección endoscópica de la mucosa (REM) y la resección endoscópica de la submucosa (ESD) son las técnicas más utilizadas. En el caso de un tumor superficial extendida, se prefiere ESD. En comparación con EMR, EDS permite la resección en bloque, independientemente del tamaño de la lesión y la forma 4, 5, 6. La principal complicación tardía de la EDS es la formación de estenosis esofágica, que ocurre generalmente entre una y dos semanas después de la resección. estudios publicados recientes han demostrado que la formación de estenosis se correlaciona con latamaño de la resección. La Sociedad de Endoscopia japonesa recomienda evitar la EDS tamaño superior a tres cuartas partes de la circunferencia esofágica porque están asociados con el desarrollo de estenosis en más del 90% de los casos y son responsables de los problemas de alimentación graves y un importante deterioro en la calidad de vida. La prevención de la estenosis esofágica sigue siendo un reto. Mecanismos implicados en la formación de estenosis se conocen sólo parcialmente. Estenosis formaciones parece ser el resultado de la asociación de dos mecanismos diferentes: (1) el reclutamiento celular pro-inflamatoria y (2) el desarrollo de la fibrosis excesiva 7. Se han propuesto varios tratamientos preventivos. Sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, con pocos beneficios y efectos secundarios severos 8, 9. Recientemente, un equipo japonés, Ohki et al. , Propuesto para trasplantar una lámina de células de una sola capa de células de la mucosa oral autólogas en el Esophageal cicatriz. El trasplante se realizó inmediatamente después de la EDS 10, 11. Se demostró la eficacia de este enfoque innovador, primero en un modelo canino y luego en los pacientes. las células del estroma derivadas de tejido adiposo (ADSC) son prometedores en la medicina regenerativa. Su aplicación en varios campos ha mostrado resultados interesantes, especialmente en el proceso de cicatrización de heridas. Terapia ADSC ofrece varias ventajas, porque las células son fácilmente aislados y están asociados con propiedades anti-inflamatorias, efectos inmunomoduladores locales, la inducción de neovascularización, y capacidades de diferenciación en linajes mesenquimales y no mesenquimales 12, 13, 14. En un estudio anterior, nuestro equipo demostró la eficacia de la doble trasplante de ADSC endoscópica de la ficha técnica para prev estenosis esofágicaención después de la EDS prolongada en un modelo porcino 15. En este artículo, se presentan informes de construcción ADSC hojas y técnica de trasplante endoscópica.

<table><tbody><tr><td>Capuchón endoscópico transparente compatible con Q180</td><td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GIF-Q180 gastroscopio&nbsp;</td>Sistema de videoscopio <td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Exera II&nbsp;</td><td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aguja de inyección 18 G</td> Unidad de electrocirugía <td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ERBE ICC 350&nbsp;</td><td>Tecnología</td><td></td><td></td>ERBE</tr><tr><td>Índigo carmín 1%</td><td>Life</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bisturí híbrido endoscópico</td><td>Life</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Minisonde Z pCLE sonda verde</td><td>Mauna Kea Technology</td><td></td><td>Debes aprender a usar la sonda. La manipulación podría ser difícil.</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12105C</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T146</td><td></td></tr><tr><td>Alpha medio esencial mínimo</td><td>Thermo Fisher</td><td>22561-021</td><td></td></tr><tr><td>Salinas tamponadas con fosfato</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>PKH67 kit de colorantes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Mini67-KT</td><td></td></tr><tr><td>Célula sensible a la temperatura de 12 pocillos placa de cultivo</td><td>Upcell Thermo Scientific</td><td>174900</td><td>Sienta el bienestar con 4 mL de cultivo medio estándar 30 min antes de sembrar las células</td></tr><tr><td>Esomeprazol 40 mg&nbsp;</td><td>Biogaran</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moprhine sulfato 50 mg/mL</td><td>Lavoisier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amoxicilina 1 g</td><td>Biogaran</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina 250 mg/5 mL</td><td>Panpharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Propofol 10 mg/mL</td><td>Fresenius</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papel hidrofóbico</td><td>Carrefour</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

adsc-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa

ADSC-sheet Transplantation to Prevent Stricture after Extended Esophageal Endoscopic Submucosal Dissection

En los últimos años, la construcción de la ficha técnica célula ha estimulado un gran interés en la medicina regenerativa, especialmente para procedimientos de cirugía reconstructiva. El desarrollo de tecnologías diversificadas que combinan las células del estroma derivadas de tejido adiposo (ADSC) con diversos biomateriales ha llevado a la construcción de numerosos tipos de sustitutos de la ingeniería tisular, tales como hueso, cartílago, y tejido adiposo de roedores, porcinos, o ADSC humanos. Extendido de esófago disección endoscópica de la submucosa (ESD) es responsable de la formación de estenosis esofágica. la prevención de la estenosis sigue siendo un reto, sin tratamientos eficaces disponibles. Anteriores estudios informaron la eficacia de la mucosa trasplante de lámina de células en un modelo canino y en los seres humanos. ADSC se atribuyen propiedades anti-inflamatorias, efectos de modulación inmune local, la inducción de neovascularización, y capacidades de diferenciación en linajes mesenquimales y no mesenquimales. Este estudio original describe el tra endoscópicansplantation de un constructo de tejido ADSC para prevenir la estenosis esofágica en un modelo porcino. El constructo ADSC se compone de dos hojas ADSC alogénicos en capas una sobre la otra en una membrana de soporte del papel. Los ADSC fueron marcadas con el fluoróforo PKH67 para permitir la monitorización basada en sondeos endomicroscopía láser confocal (pCLE). En el día del trasplante, se realizó una 5-cm y ESD hemi-circunferencial conocido para inducir estenosis esofágica. Los animales fueron inmediatamente endoscópicamente trasplantados con 4 construcciones ADSC. Se obtuvo el completa adhesión de las construcciones ADSC después de 10 min de aplicación suave. Los animales se sacrificaron el día 28. Todos los animales se trasplantaron con éxito. El trasplante se confirmó en el día 3 con una evaluación positiva pCLE. En comparación con los animales trasplantados, los animales de control desarrollaron estenosis severas, con un desarrollo importante tejido fibrótico, problemas alimentario más frecuente, y el aumento de peso reducido. En nuestro modelo, el trasplante de allogenic ADSC, organizadas en láminas de células dobles, después de la EDS extendida fue un éxito y fuertemente asociada con una tasa de estenosis esofágica inferior.

La cultura de ADSC y el procedimiento para obtener la hoja de ADSC se muestra en la Figura 1. La Figura 2 muestra la construcción del injerto, compuesto de dos hojas ADSC en capas una sobre la otra en su membrana de soporte del papel. ADSC se marcaron previamente con el fluoróforo PKH67 para permitir el seguimiento del injerto en vivo con pCLE. La Figura 3 muestra los diferentes pasos de extendido disección endoscópica de la sub...

El estudio muestra un método endoscópico exitoso de células estromales derivadas de tejido adiposo (ADSC)-hoja de trasplante para la prevención de la estenosis esofágica después de una disección endoscópica submucosa extendida (ESD) en un modelo porcino.

ADSC-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa

In past years, the cell-sheet construct has spurred wide interest in regenerative medicine, especially for reconstructive surgery procedures. The ...

En la práctica clínica, la aparición de estenosis esofágica es una limitación importante para la resección endoscópica ampliada de la neoplasia superficial esofágica. En este vídeo se presenta una técnica de trasplante de lámina ADSC que evita este tipo de estenosis, lo que hace posible la resección endoscópica prolongada en un modelo porcino. Este método puede avanzar en una pregunta clave en el campo de la prevención de la estenosis esofágica después de la resección endoscópica extendida.La principal ventaja de esta técnica es que el trasplante endoscópico de láminas de ADSC es significativo, eficaz y no requiere mucho tiempo para prevenir dicha estenosis esofágica. Para demostrar este procedimiento estaremos Gabriel Rahmi, un médico de mi laboratorio, y yo. Recoja alrededor de 24 millones de ADSC por cerdo utilizando procedimientos estándar de expansión celular y matraces de cultivo T150.Coseche los ADSC utilizando 10 mililitros de solución de tripsina estándar por matraz. A continuación, cuente las células con un citómetro automático. Cargue 1,5 millones de células en cada pocillo de una placa de cultivo celular sensible a la temperatura de 12 pocillos.Ahora, rellene cada pocillo hasta cuatro mililitros con medio de cultivo. Luego, incubar las placas durante 12 horas durante la noche para el trasplante al día siguiente. El día del trasplante, separe las láminas de células confluentes en los pocillos de la placa incubándolos a temperatura ambiente durante 30 minutos.Después de media hora, pipetee suavemente una hoja ADSC y colóquela sobre un papel hidrofóbico de 1,5 centímetros de diámetro dentro de un plato de plástico. Utilice este papel como membrana de soporte. Tenga paciencia y tenga cuidado al manipular las hojas ADSC.Son muy frágiles. A continuación, agarre una hoja ADSC y colóquela suavemente sobre otra para hacer una construcción de doble capa. Haz cuatro construcciones de doble capa por animal.Bajo anestesia general, realice una ESD en el cerdo. Utilice un videogastroscopio y una unidad de electrocirugía. En primer lugar, utilizando un bisturí endoscópico con coagulación suave, cree marcas blancas hemicircunferenciales de 40 a 45 centímetros dorsales de la arcada dental para crear una lesión virtual.Luego, separe la capa mucosa de la capa muscular inyectando una solución de glicerol que contenga tinte índigo carmín en la capa submucosa. A continuación, realice una incisión circunferencial de la capa mucosa alrededor de las marcas dorsales, utilizando un bisturí endoscópico con modo de coagulación forzada. A continuación, realice la disección submucosa desde la incisión proximal hasta la incisión distal.Luego, complete la resección por ESD, una cicatriz esofágica hemicircunferencial de cinco centímetros de largo que expone la capa muscular. Ahora, trasplante endoscópicamente los cuatro constructos de doble lámina ADSC. Sujete el constructo con pinzas endoscópicas y cúbralo con una tapa endoscópica transparente grande para protegerlo durante el transporte al sitio de la herida.A continuación, extienda toda la superficie de la lámina ADSC sobre el lecho de la úlcera. Mantenga el injerto en posición durante 10 minutos para asegurar un injerto completo y estable. Continúe aplicando las láminas ADSC para que las cuatro cubran aproximadamente la mitad del área herida.El transporte puede ser difícil en un animal bajo anestesia general para respirar y tragar, así que tenga mucho cuidado de no dañar las sábanas. Después de realizar el procedimiento descrito en varios animales, se realizó una evaluación de PCLE tres días después. Los resultados positivos confirmaron el éxito de los trasplantes.El período de seguimiento permitió realizar un análisis multimodal. En comparación con los animales control, el grupo de animales trasplantados mostró problemas alimenticios menos frecuentes y mayor aumento de peso el día 28. Los hallazgos endoscópicos y radiológicos al final del período de seguimiento revelaron un animal del grupo trasplantado que sí desarrolló una estenosis esofágica grave.El análisis histológico mostró que, en comparación con los animales trasplantados, los animales de control desarrollaron tejido fibrótico significativo. Demostramos que una ESD seguida de un trasplante de lámina ADSC se puede realizar en aproximadamente una hora y media. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que las hojas ADSC son frágiles y deben manipularse con precaución.La clave del éxito es tomarse el tiempo necesario para cada paso del procedimiento. Tras su exhibición, esta técnica abre el camino a las investigaciones que muestran el campo de la terapia celular para tratar endoscópicamente otras enfermedades digestivas.

adsc-sheet-transplantation-to-prevent-stricture-after-extended

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Se presenta la preparación y el trasplante de tejido adiposo derivado de la célula de vástago (ASC) hojas en anastomosis colorrectales suficientemente suturadas en un modelo de rata. Esta aplicación novedosa muestra que hojas ASC pueden reducir la fuga de la anastomosis colorrectal.

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

Describimos una novedosa técnica anastomótica esofagogástrica intratorácica diseñada para crear una anastomosis de gran diámetro manteniendo al mismo tiempo el suministro de sangre en el conducto para minimizar la incidencia de fugas anastomóticas y estenosis. También se describe la construcción y orientación del conducto estomacal diseñado para optimizar la función del tracto gastrointestinal superior.

Una esofroagectomía Ivor Lewis diseñada para minimizar las complicaciones anastomóticas y optimizar la función de conducto

La reconstrucción esofágica es un procedimiento desafiante, y el desarrollo de un esófago diseñado con tejido que permite la regeneración de la mucosa esofágica y el músculo y que se puede implantar como un injerto artificial es necesario. Aquí, presentamos nuestro protocolo para generar un esófago artificial, incluyendo la fabricación de andamios, el cultivo de biorreactores y diversas técnicas quirúrgicas.

Injerto con ingeniería de tejido para la reconstrucción esofágica circunferencial en ratas

Aquí, presentamos un protocolo para la terapia endoscópica de vacío (EVT) en el manejo de fugas anastomóticas después de una gastrectomía total con esofagoyeyunostomía.

Terapia de vacío endoscópica para el tratamiento de la fuga anastomótica después de la gastrectomía total con esofagoyeyunostomía

Este protocolo describe la excavación endoscópica submucosa por incisión longitudinal, una técnica diseñada para facilitar la resección y el cierre de defectos de lesiones subepiteliales gástricas.

Evaluación de la eficacia de la incisión longitudinal para la excavación endoscópica submucosa de lesiones subepiteliales gástricas

Este estudio detalla un protocolo PCM-ESD estandarizado para la resección de grandes LST rectales, con el objetivo de aumentar la velocidad de disección y prevenir la perforación transmural mediante túnel submucoso.

El procedimiento de creación de bolsa de disección endoscópica submucosa para tumores grandes de extensión lateral rectal

Este protocolo describe un método multianillo de hilo autofabricado para proporcionar tracción interna controlada durante la disección submucosa endoscópica gástrica. La técnica facilita una tracción eficaz del colgajo mucoso en direcciones y fuerzas deseadas, permitiendo una disección fácil, segura y rentable.

Método de tracción interna auto-fabricado para la disección endoscópica submucosa del cáncer gástrico temprano

Los sobrevivientes del síndrome de distrés respiratorio agudo (SDRA) y enfermedad grave con frecuencia desarrollan a largo plazo la debilidad muscular. La prueba muscular manual (TMM) es un examen clínico estandarizado utilizado para medir la fuerza de los grupos periféricos del músculo esquelético. Este vídeo demuestra MMT con los 6 puntos de la escala de Investigación Médica del Consejo.

Pruebas musculares manuales: un método para medir fuerza de las extremidades muscular aplicada a los pacientes críticos

Nos en este documento presentamos un modelo de trasplante renal de rata para evaluar de forma no invasiva el rechazo agudo del aloinjerto mediante tomografía por emisión de positrones con 18F-fluorodesoxiglucosa.

Imagen no invasiva de rechazo agudo del aloinjerto después Rat Trasplante Renal Uso<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

Hemos descrito un protocolo para la realización de hepatectomía parcial (PHx) y trasplante de la célula vía bazo en cabeceo. SCID (CABECEO. CB17-Prkdcscid/j) ratones. En este protocolo, se realiza una incisión para exponer y resecar el lóbulo izquierdo del hígado, seguido por otra incisión para el intrasplenic trasplante de células.

Intrasplenic trasplante de hepatocitos después de Hepatectomy parcial en cabeceo. Ratones de SCID

Aprende el trasplante de láminas de ADSC para prevenir la estenosis esofágica tras disección endoscópica submucosa extendida en un modelo porcino. Esta técnica celular mejora la cicatrización y reduce la fibrosis.

ADSC-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa

Explorar más videos