El modelo de conejo de ateroesclerosis acelerada: una perspectiva metodológica de la lesión de globo de la arteria ilíaca

El objetivo general de este procedimiento es inducir la formación de placas ateroscleróticas en conejos mediante la interrupción quirúrgica del endotelio de sus arterias ilíacas izquierdas y alimentarlos con una dieta aterogénica. La lesión solitaria en conejos se realiza a menudo en la aorta para estudiar la composición de la placa. Sin embargo, la arteria ilíaca es muy similar a la arteria coronaria humana, lo que la convierte en un lugar atractivo para modelar placas ateroscleróticas.

El contenido muscular, las lesiones uniformes, la actividad del factor de tejido ocular y las dimensiones consistentes de los vasos de la arteria ilíaca del conejo son comparables a las de la arteria coronaria humana. En última instancia, esto permite la evaluación de dispositivos fabricados comercialmente hasta puntos finales morfométricos y angiográficos. La demostración del procedimiento estará a cargo de Aurelien Frobert, un colaborador de mi laboratorio.

Asegúrese de esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos utilizando, por ejemplo, un esterilizador de perlas de vidrio. A continuación, prepare y revise los dos conjuntos de catéteres con balón. En cada uno, coloque una jeringa Luer lock de un mililitro llena de solución salina normal y luego verifique si hay emblicuados atrapados usando el mecanismo de inflado del globo.

A continuación, ajuste la almohadilla térmica en la plataforma quirúrgica a 37 grados centígrados. Luego pesa el conejo. A continuación, proporcione una inyección de buprenorfina y anestesiar al conejo con isofluorano al 5% a cinco litros por minuto durante 10 a 15 minutos.

Ahora, coloque el conejo anestesiado en la almohadilla térmica de una plataforma quirúrgica. Coloque sensores para monitorear la temperatura y la respiración del conejo y para recolectar electrocardiogramas. A continuación, coloque una mascarilla para suministrar un 4% de isofluorano a 2,5 litros por minuto.

A continuación, confirme un nivel adecuado de anestesia mediante la prueba de pérdida de nauseas y reflejos mezquinos. Un tono muscular universalmente relajado también es indicador de anestesia profunda. A continuación, aplique la pomada abtónica en ambos ojos.

A continuación, retire el pelo de la zona ventral justo debajo de las articulaciones de la rodilla con un cortapelos de animales. A continuación, retira el pelo suelto y limpia la piel expuesta con tres exfoliantes alternos de etanol al 70% y betadine y cubre al animal dejando al descubierto sólo la extremidad inferior. Para comenzar la cirugía, localice la arteria safena y haga una incisión de 1,5 centímetros.

Luego, con pequeñas pinzas curvas, exponga cuidadosamente una pequeña porción de arteria safena. Tenga cuidado de evitar dañar la vena femoral o el nervio femoral. La limpieza profunda de la arteria es muy importante durante esta exposición.

A continuación, coloque dos asas de ligadura sueltas debajo de la arteria safena y ate una asa de ligadura cerca del extremo distal de la arteria. A continuación, coloque una pinza microvascular a lo largo de la arteria por encima de la ligadura y cierre la pinza para detener el flujo sanguíneo. Aplique inmediatamente una gota de papaverina para dilatar la arteria y prevenir los espasmos de fase.

A continuación, con la ligadura, levante la arteria safena y realice una pequeña incisión en la arteriotomía con una aguja de calibre 24. A continuación, levante los colgajos de la incisión e inserte lentamente una picadura de vena o una aguja guía en la luz de la arteria. Ahora, inserte cuidadosamente un catéter de embolectomía arterial en la arteria safena.

Sé amable para evitar hacer rupturas. A continuación, retire el pico venoso y suelte la pinza microvascular en la arteria. Para crear la lesión, primero avance el catéter con balón hasta la tercera marca.

Esto debería poner aproximadamente de dos a cinco centímetros por encima de la bifurcación ilíaca. A continuación, infla el globo con 0,1 mililitros de solución salina normal. Ahora, sujete el catéter y tire de él hacia atrás seis centímetros mientras lo gira para dañar el tejido.

Una vez retirado, desinfla el globo. Y para asegurar la dilatación completa del endotelio, repita el proceso dos veces más. A continuación, retire el catéter e inmediatamente ate el lazo de la ligadura justo por encima del sitio de la arteriotomía para detener el sangrado.

A continuación, aplique un antiséptico adecuado alrededor de la perforación de la herida y limpie con un hisopo los coágulos de sangre. Por último, cierre la incisión cutánea y desinfecte el lugar de la cirugía con una solución de povidona yodada. A continuación, repita todo el procedimiento quirúrgico en la arteria ilíaca contralateral utilizando el segundo catéter.

Después de la cirugía, primero limpie el ungüento abtonico de los lados del conejo. A continuación, administre sulfadoxina y trimetoprim. Luego, transfiera al conejo con la almohadilla de cabecera a una jaula de recuperación limpia y un parche de monitoreo y clips.

Una vez que el animal recupere la decúbito externo y esté deambulando, devuélvalo a su jaula de origen. Para el manejo del dolor, proporcione buprenorfina. Ahora, comience a alimentar al animal con una dieta aterogénica durante el tiempo que sea necesario.

Para cosechar lino fino temprano, dos o cuatro semanas después de la cirugía, primero anestesiar al conejo y luego sacrificar al conejo con una incisión intercardinal. A continuación, abra el abdomen y exponga el retroperitoneo. A continuación, traza la aorta hacia la bifurcación ilíaca y átala por encima de la bifurcación.

A continuación, extrayendo cuidadosamente los tejidos circundantes y aislando ambas arterias ilíacas. Ahora disecciona ambas arterias y sumérgelas en PBS helado. Allí, retire los coágulos con fórceps y divida cada arteria en 46 segmentos.

A continuación, incruste inmediatamente los segmentos en un molde que contenga compuesto OCT y congele los tejidos en nitrógeno líquido. Almacene los tejidos a menos 80 grados centígrados y luego tiña secciones de cinco micras de espesor utilizando la metodología estándar. La lesión con balón de las arterias ilíacas se realizó con éxito sin complicaciones en menos de una hora.

Los conejos se recuperaron en una hora y/o parecían sanos sin una pérdida de peso significativa. No se encontraron complicaciones postoperatorias. Y después de cuatro semanas de dieta aterogénica, todos los conejos tenían hipercolesterolemia.

La combinación de una lesión con balón y la dieta para el colesterol dio lugar a cambios estructurales en la pared del vaso que condujeron al desarrollo de plax aterosclorótico en dos semanas. Se aislaron las arterias ilíacas no lesionadas y con balón del mismo animal y se compararon. El lino se caracterizó por infiltración de lípidos, así como por migración y proliferación del sonido del músculo liso.

El lino continúa creciendo en los vasos lesionados mientras que el tamaño del lumen continúa reduciéndose. Los cambios resultantes fueron muy pronunciados a las cuatro semanas. Después de dos y cuatro semanas, la cuantificación morfométrica reveló un aumento del grosor de la íntima media, un aumento del área de la placa, una disminución del área de la luz y, finalmente, un aumento en la acumulación de lípidos.

La tinción con anticuerpo de actina de músculo liso alfa reacciona con la actina muscular, identificando así las células del músculo liso vascular. Mientras que la tinción con más 11 anticuerpos monochlonales revela el citoplasma de los macrófagos. Juntas, las tinciones revelan hasta qué punto tanto las células musculares lisas como los macrófagos proliferan en la placa aterosclerótica de los vasos lesionados.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de la seguridad del automóvil y realizar fácilmente una lesión violenta en las arterias ilíacas del conejo. Esta lesión con la dieta aterogénica da como resultado el desarrollo de placa de las arterias ilíacas de manera homogénea y oportuna.