Name: Mejor método para el establecimiento de un In Vitro Barrera Blood - Brain modelo basado en las células endoteliales de cerebro porcino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Aprende a establecer un modelo in vitro de barrera hematoencefálica usando células endoteliales cerebrales porcinas primarias. Este protocolo optimizado ofrece alta reproducibilidad y valores elevados de TEER para estudios de farmacología y neurociencia.

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Los autores desean reconocer Elisabeth Helena Bruun, Sarah Christine Christensen y Niels M. Kristiansen para asistencia técnica y número R155-2013-14113 de concesión de la Fundación Lundbeck.

Los autores no divulgan ningún conflicto de interés.

Purificación y proliferación de pBEC
Durante el procedimiento de purificación, pasos críticos incluyen eliminación rápida y eficaz de meninges y separación de la materia blanca y gris, que es importante para el rendimiento de la purificación y la pureza y el establecimiento adecuado del modelo. El presentado en vitro BBB modelo con pBECs, hemos mejorado y simplificado de un procedimiento de purificación basado en homogeneización mecánica de materia gris aislada, tamaño selectivo de filtr...

Estructura celular y función de la Barrera Blood - Brain
En la interfaz del sistema nervioso central y circulatorio (CNS), el BBB actúa como un sitio regulador clave para homoeostatic control del microambiente del CNS, que es esencial para el correcto funcionamiento y protección del sistema nervioso. El sitio de la BBB es las células endoteliales que recubren el lumen del vaso sanguíneo. En los capilares del cerebro, las células endoteliales forman a uniones estrechas intercelulares complejas y patrones de expresión fuertemente polarizada de los transportadores de influjo y eflujo particular garantizar transporte molecular altamente específico entre la sangre y el cerebro 1. Los componentes estructurales de los complejos de Unión estrecha incluyen proteínas de la familia occludin y claudin, zonula occludens (ZO) proteínas, cingulin y asociados a las moléculas de la adherencia junctional (mermeladas). Claudin 5 es particularmente importante en la restricción de junctional paracelular. Inducción y mantenimiento de este característico fenotipo endotelial BBB implican interacciones dinámicas con las células circundantes, como pericitos, astrocitos, neuronas y las membranas del sótano, que junto con cerebro endothelial las células forma el neurovascular unidad (NVU)2,3. Los mecanismos implicados en estas interacciones no se entienden todavía completamente, pero incluyen intercambio de señales químicas entre las células, que permite la modulación de la permeabilidad BBB en el corto plazo e induce a largo plazo BBB características4. Astrocitos especialmente son conocidos por contribuir al fenotipo de célula endotelial cerebral y son una fuente de factores reguladores como neurotrófico glial-derivado (afecta el cAMP intracelular) de factor5, de factor de crecimiento básico del fibroblasto6, hidrocortisona7y transformación del factor de crecimiento β (TGF-β)8. El efecto de TGF-β, sin embargo, ha sido debatido9.
De In Vivo que In Vitro BBB
In vivo estudios siguen proporcionan valiosa información sobre la biología BBB. Sin embargo, los modelos de cultura de célula pueden proporcionar perspectivas adicionales y constituyen herramientas útiles para la comprensión detallados aspectos moleculares y funcionales de la BBB en salud y enfermedad. Aunque las complejas interacciones entre los tipos de células y componentes de la BBB son difíciles de lograr totalmente en modelos en vitro , se ha producido, desde la primera purificación de las células endoteliales cerebrales y aplicación de estos en monocultivos 10 , 11 , 12, amplio desarrollo de los procedimientos de purificación y condiciones de crecimiento de la BBB modelos cultura, resultando en una mayor semejanza a la barrera en vivo de la célula. Los modelos utilizados en vitro BBB se basan en células primarias de origen bovino, porcino y roedor y en líneas celulares inmortalizadas. Cada modelo tiene diferentes ventajas y desventajas. Para la comparación y el modelo de opción, los marcadores de validación como expresión de BBB enzimas, transportadores, receptores y proteínas estructurales se utilizan para crear descripciones de los actuales modelos establecidos1.
Objetivo del Protocolo de
Una característica importante de la BBB es barrera tirantez y TEER alta, sin embargo, un gran número de los modelos disponibles no reflejan bien los niveles en vivo . Incorporar el desarrollo y optimización de las contribuciones de varios laboratorios, el objetivo de este protocolo es presentar un método para establecer un alto TEER en vitro BBB modelo basado en la pBECs primaria en MC con o sin ACM o en NCC con primaria astrocitos de rata o de origen porcino. Los procedimientos aplicados y el establecimiento del modelo incluyen esfuerzos para eliminar las células contaminantes y mejorar la diferenciación de pBECs en un fenotipo BBB. Este trabajo ha dado como resultado el establecimiento de modelos TEER fiables y de alta permeabilidad paracelular baja y buena expresión funcional de las proteínas clave de Unión estrecha, transportadores y receptores. Sin embargo, como los astrocitos son un factor que contribuye al fenotipo de células endoteliales cerebrales, las tres condiciones diferentes de la cultura representan tres diferentes fenotipos de las células endoteliales del cerebro. El modelo de la NCC es especialmente útil para estudios de ciertos mecanismos especializados involucrados en el descubrimiento de medicamentos, estudios de transporte y tráfico intracelular, así como para la investigación de las interacciones célula-célula donde es la máxima expresión de características BBB ventajoso.
Origen e historia del Protocolo
El modelo de pBEC descrito aquí se basa en el modelo porcino desarrollado en los laboratorios Eisai (Londres) por el Dr. Louise Morgan y sus colegas, whichis basada en un exitoso anterior cerebro bovino células endoteliales modelo13. El método original de preparación de la célula fue una filtración de dos etapas utilizando nylon mallas para atrapar los microvessels, seguidos por un paso subculturing para mejorar la pureza. En el anterior desarrollo del método, tirantez óptima de fenotipo y barrera BBB fueron alcanzados por el crecimiento en medio suplementado, incluyendo ACM. R. Skinner hicieron otras modificaciones al método en el laboratorio del Prof. N. Rothwell en Manchester UK14,15. El método fue adoptado por el laboratorio Abbott, KCL Londres, donde Patabendige hecho significativamente más sencillo de preparar, evitando el uso de los astrocitos o ACM y eliminando las células contaminantes tales como del pericitos con puromicina. Los primeros papeles confirmó que el modelo de MC conserva varias características importantes de la en vivo BBB, como uniones estrechas eficaces, sistemas de transporte de la membrana mediada por receptor transcitosis16,17 , 18 , 19 , 20. más tarde S. Yusof otra vez probado co-cultivo astrositos y mejoró significativamente TEERAN, así que esta es la variante preferida actualmente utilizada en el laboratorio Abbott del21. El modelo ha sido exitosamente transferido a la Nielsen M. laboratorio en Aarhus, donde otras modificaciones han sido introducidos (este protocolo), incluyendo la simplificación gris materia extracción, usando la malla solamente un paso de filtración y un paso de la capa de filtro único la combinación de colágeno y fibronectina. El procedimiento aplicado para el aislamiento de astrocitos porcinos (este protocolo) se basó en los protocolos desarrollados por el laboratorio T. Moos en Aalborg, descrito por Thomsen et al22. El TEER y otras propiedades del modelo generado en Londres y Aarhus son similares, lo que da confianza a la idea de que el modelo se transfiere fácilmente entre laboratorios y responde bien a la observación cuidadosa y la racionalización de los pasos del método. De hecho, Yusof S. ha establecido el modelo de MC en un país tropical (Malasia)23, que otro ajuste para las condiciones locales y las fuentes de tejido.
Ventajas sobre métodos alternativos y actualmente establecieron modelos
En comparación con las células endoteliales de cerebro de origen bovino y roedor, pBECs proporcionan la ventaja de tener una menor tasa de pérdida del fenotipo BBB en vivo después de aislamiento24. Además, son capaces de formar barreras endoteliales relativamente estrecha, aun cuando crecido en MC (Ω 800 cm2)16 en comparación con los niveles comúnmente divulgados de monocapas de líneas celulares bEND.5 y bEND.3 (Ω 50 cm2) pBECs 25 , 26 , 27,29,de28,30de cfin (300-800 Ω cm2) y cerebEND (Ω 500 cm2)29,31,32y primario del cerebro células endoteliales del ratón (100-300 Ω cm2)SS = "xref" > 33,34,35,36 y rata (100-300 Ω cm2)37,38. Sin embargo, el TEER ha demostrado dependencia sobre los procedimientos de purificación y de la cultura. En la mayoría de los casos, la adición de ACM o cocultivo con astrocitos muestra efectos diferenciales sobre las células endoteliales y un aumento en tensión de las capas endoteliales1. Sin embargo, con los esfuerzos para optimizar las condiciones de cultivo, sólo los modelos basados en bovinos han demostrado valores TEER comparable a los modelos basados en porcino (promedios de 800 Ω cm2 en MC, hasta 2500 Ω cm2 en co-cultivo astrositos)13 ,39,40,41,42,43,44,45. Como los modelos basados en cerebro bovino primario células endoteliales han demostrado grandes variaciones, tanto entre como dentro de laboratorios14,45,46,47,48, reproducibilidad podría ser un problema. En el modelo de pBEC divulgado aquí, los laboratorios que han logrado TEER muy similar y los valores de permeabilidad paracelular con baja variabilidad, tanto en como entre laboratorios. Por lo tanto, debería ser posible para otros laboratorios establecer un modelo robusto con baja variabilidad utilizando el método presentado aquí. Además formando capas endoteliales apretadas, modelos con pBECs previamente han sido validados por expresión de proteínas de Unión estrecha, funcionales transportadores BBB, receptores y enzimas y demostrada idoneidad para una amplia gama de estudios15 , 16 , 17 , 19 , 20 , 22 , 49 , 50 , 51 , 52 , 53 , 54 , 55 , 56 , 57 , 58 , 59. por otra parte, datos inéditos del transcriptoma en co-cultivos de pBECs muestran un perfil esperado de BBB transportadores y receptores (resultados no publicados, Nielsen et al.).
El modelo BBB de porcino tiene otra ventaja como el genoma, la anatomía, la fisiología, y progresión de la enfermedad del cerdo reflejan la biología humana a un grado más alto que otros modelos establecidos cuenta con60, que son favorables para la industria farmacéutica. Como cerebros porcinos son un subproducto común de la industria cárnica, constituyen una fuente fácilmente accesible de cerebro las células endoteliales, minimizando la cantidad de animales necesarios para los experimentos así proporcionando un rendimiento de alta purificación de un cerebro porcino. Aunque la purificación y cultivo de células primarias es algo lentos y requiere de conocimientos de normalización en la creación del modelo, células primarias generan los modelos más confiables de BBB. Líneas celulares inmortalizadas no pueden ser un sustituto, como características importantes tales como tirantez barrera, perfiles de expresión del transportador y microambiente regulación no reflejan los resultados experimentales en vivo61, 62. in vitro modelos proporcionan la ventaja de células vivas imágenes con mayor resolución, posibilitando la visualización de procesos intracelulares permitiendo un enfoque de cercanía a las células muestreados u observados, con objetivos con la ampliación más alta y mejor calidad óptica63. No es el caso para el uso de la microscopía de dos fotones en animales vivos. Además, en vitro modelos ofrecen la posibilidad de transfectar las células, permitiendo la visualización de proteínas etiquetadas e investigación de su tráfico.
Aplicaciones del modelo
La función de la BBB no es fijo y puede ser modulada dinámicamente en fisiología y patología. En muchas enfermedades neurológicas, incluyendo neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias e infecciosas, desorganización y aumento de la permeabilidad de la BBB se observa64,65,66,67 . Con el fin de reducir y prevenir la progresión de la enfermedad y el daño subsiguiente, identificación y caracterización de los mecanismos moleculares subyacentes a la modulación de la BBB son de gran importancia. En este contexto, confiable en vitro modelos están en alta demanda por la industria farmacéutica y además desempeñan un papel importante en la predicción de la permeabilidad BBB de fármacos al SNC. Cualquier modelo en vitro que sirve como pantalla de permeabilidad debe mostrar una vía paracelular restrictiva, una arquitectura celular fisiológico realista y expresión funcional del transportador mecanismos68. Demostrado en anteriores estudios16,17,57y por la permeabilidad paracelular y expresión de proteínas TJ y AJ aquí, el modelo presentado cumple todos estos criterios y es conveniente para una gama de BBB estudios en ambos fisiología normal y patología. Las fortalezas del método de purificación y cultivo presentado incluyen una combinación de simplicidad y reproducibilidad y la habilidad de incluir astrocytic influencia con un robusto y confiable alta TEER en vitro BBB modelo resultante. Para este propósito, los astrocitos de porcino y rata origen han demostrado aumentar el fenotipo BBB de pBECs en un de manera similar22.

<table><tbody><tr><td>Fibronectina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5533</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1524</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Lonza</td><td>BE12-719F</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/Glucosa baja</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6046</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Suero derivado del plasma (PDS)</td><td>First Link UK Ltd.</td><td>60-00-89</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>10-270-106</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>15090-046</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Hidrocortisona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4001</td><td></td></tr><tr><td>8-CPT-cAMP</td><td>Biolog</td><td>C010</td><td></td></tr><tr><td>RO 20-1724</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8279</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de gentamicina</td><td>Lonza</td><td>17-518Z</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34896</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>EtOH</td><td>VWR</td><td>20,824,296</td><td>Mezcle la solución al 70 % de la ADNasa 1 de EtOH al 96 %</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4513</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa CLS2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td></td><td></td><td>Fabricado con matraces Elga System</td></tr><tr><td>T75</td><td>Thermo Scientific</td><td>156499</td><td></td></tr><tr><td>Costar Transwell insertos (Insertos de membrana permeable a las células)</td><td>Costar</td><td>CLS3401</td><td>placa de 12 pocillos, 12 mm de diámetro, 0,4 &mu; membrana de policarbonato m</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de 15 ml</td><td>Cellstar</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>tubos de centrífuga de 50 ml</td><td>Cellstar</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>placas de Petri</td><td>Thermo Scientific</td><td>150350</td><td></td></tr><tr><td>Viales criogénicos</td><td>Thermo Scientific</td><td>377224</td><td></td></tr><tr><td>botella de 500 ml</td><td>Bisturíes Thermo Scientific</td><td>159910/159920</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Swann-Morten</td><td>REF0211</td><td>Tipo 24</td></tr><tr><td>Homogeneizador de tejidos</td><td>Sigma</td><td>D9188</td><td></td></tr><tr><td>140 &mu; m filtros</td><td>MERCK</td><td>NY4H04700</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; Filtros m</td><td>Corning</td><td>431750</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de cámara EndOhm</td><td>World Precision Instruments</td><td>ENDOHM-12</td><td>Cámara EndOhm para copas de cultivo de 12 mm</td></tr><tr><td>Sistema de electrodos EVOM2</td><td>World Precision Instruments</td><td>300523+STX100C</td><td>Sistema de medición TEER con par de electrodos rígidos STX-100C</td></tr><tr><td>Aguja larga</td><td>Sigma</td><td></td><td>Acoplar a una jeringa</td></tr><tr><td>Pinzas curvas de punta fina</td><td>KLS Martin</td><td>12-409-12-07</td><td></td></tr><tr><td>Pinza de punta ancha</td><td>VWR</td><td>82027-390</td><td></td></tr><tr><td>Portafiltros</td><td>MERCK Milipore</td><td>Swinnex-47</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 50 ml</td><td>Braun</td><td>4617509F</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 10 ml</td><td>Terumo</td><td>SSt20ESI</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-Ocludina</td><td>Abcam</td><td>ab31721</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-p120 Anticuerpo de catenina</td><td>BD Laboratorios de transducción</td><td>610133</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-ZO-1</td><td>Invitrogen</td><td>61-7300</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-Claudina 5</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4502981</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Burro anti conejo IgG conjugado con Alexa Harina 568</td><td>Thermo Scientific</td><td>A10042</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Burro anti ratón IgG conjugado con Alexa Harina 488</td><td>Thermo Scientific</td><td>A21202</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Perkin Elmer NEC100X250UC</td><td></td><td>0.15&micro; l/ml conc de trabajo final</td></tr><tr><td>Lucifer Yellow</td><td>Sigma</td><td>L0144</td><td>10 &micro; g/ml conc de trabajo final</td></tr></tbody></table>

mejor método para el establecimiento de un in vitro barrera blood - brain modelo basado en las células endoteliales de cerebro porcino

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

El objetivo de este protocolo presenta un procedimiento optimizado para la purificación y cultivo de pBECs y establecer en vitro barrera blood - brain (BBB) basados en pBECs en mono-cultura (MC), MC con medio acondicionado astrositos (ACM), y co-cultivo (NCC) con astrocitos de porcino sin contacto o rata origen. pBECs fueron aisladas y cultivadas de los fragmentos de los capilares de las cortezas cerebrales de 5-6 meses de edad los cerdos domésticos. Estos fragmentos fueron purificados por el retiro cuidadoso de meninges, de aislamiento y de homogeneización de la materia gris, la digestión enzimática, filtración y centrifugación. Para eliminar las células contaminantes, los fragmentos capilares fueron cultivados con puromicina medio. Cuando confluentes de 60-95%, pBECs de los fragmentos capilares fueron pasados a filtro de membrana permeable inserta y establecido en los modelos. Para aumentar la tensión de barrera y fenotipo característico BBB de pBECs, las células fueron tratadas con los siguientes factores de diferenciación: membrana florescente 8-CPT-cAMP (campo abreviado aquí), hidrocortisona y un inhibidor de la fosfodiesterasa, RO 20-1724 (RO). El procedimiento se llevó a cabo durante un período de 9-11 días, y cuando se establece el modelo de la NCC, los astrocitos se cultivaron 2-8 semanas de antelación. Cumplimiento de los procedimientos descritos en el protocolo ha permitido el establecimiento de las capas endoteliales con permeabilidad paracelular altamente restringida, con la CNC modelo mostrando una resistencia eléctrica (TEER) de promedio transendothelial de 1249 ± 80 Ω cm 2y la permeabilidad paracelular (Papp) para Lucifer amarillo de 0,90 10-6 ± 0,13 10-6 cm seg-1 (media ± SEM, n = 55). La evaluación adicional de este fenotipo de pBEC demostró buena expresión de la proteínas de Unión estrecha claudin 5, ZO-1, occludin y adherens Unión proteína catenina p120. El modelo presentado puede utilizarse para una variedad de estudios de la BBB en salud y enfermedad, y con la permeabilidad paracelular altamente restrictiva, este modelo es adecuado para estudios de transporte y tráfico intracelular.

Establecimiento de los modelos In Vitro de BBB
En el método presentado, optimizado, cultivo de pBECs y el establecimiento del sistema de inserción de membrana permeable con MC o sin ACM o NCC con astrocitos (figura 1) se llevó a cabo durante un período de 9-11 días (figura 2). Para la selección de las células endoteliales, una cultura inicial de fragmentos capilar...

El objetivo del protocolo es presentar un procedimiento optimizado para el establecimiento de un modelo de barrera blood - brain (BBB) en vitro basado en las células endoteliales de cerebro porcino primario (pBECs). El modelo muestra alta reproducibilidad, alta tensión y es adecuado para estudios de transporte y tráfico intracelular en el descubrimiento de medicamentos.

Mejor método para el establecimiento de un In Vitro Barrera Blood - Brain modelo basado en las células endoteliales de cerebro porcino

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

El objetivo general de este protocolo es purificar y aislar las células endoteliales primarias del cerebro porcino con el fin de establecer un modelo de barrera hematoencefálica in vitro estricto. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la barrera hematoencefálica, como la administración de fármacos, la permeabilidad, el tráfico de receptores, así como la estanqueidad y la polaridad del BB. La principal ventaja de este modelo es el alto rendimiento de células endoteliales cerebrales primarias que se pueden utilizar para crear un modelo de barrera hematoencefálica in vitro que tiene un alto TEER y una baja permeabilidad. Para comenzar este procedimiento, coloque los cerebros en un banco de flujo estéril y lávelos suavemente con un litro de PBS en un vaso de precipitados colocado sobre hielo.A continuación, retire con cuidado las meninges de cada cerebro con pinzas de punta fina. Con un bisturí, raspe la materia gris de los cerebros de uno en uno y transfiera el material aislado a placas de Petri que contienen 20 mililitros de DMEM/F-12 colocadas en hielo. Para la fragmentación inicial, pase el material de materia gris a través de una jeringa de 50 mililit

improved-method-for-establishment-an-vitro-blood-brain-barrier-model

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este método se describe cómo aislar e inmortalizar las células endoteliales microvasculares de cerebro de ratón. Se describe un protocolo paso a paso a partir de la homogeneización del tejido cerebral, las fases de digestión, la siembra y la inmortalización de las células. Por lo general, toma alrededor de cinco semanas para obtener una homogénea línea inmortalizada de células endoteliales microvasculares.

Generación de una línea murina Inmortalizado microvascular cerebral célula endotelial como<em&gt; In Vitro</em&gt; Barrera hematoencefálica modelo

Este video muestra el aislamiento de capilares de cerebros porcinos frescos. El proceso consiste en eliminar las meninges, aislar la materia gris del tejido cerebral, homogeneizar y filtrar la materia gris para aislar los capilares y, finalmente, utilizar la digestión enzimática para purificar aún más los capilares.

Purificación de capilares de un cerebro porcino

Establecimiento de modelos humanos de la barrera sangre-cerebro (BBB) ​​puede beneficiar a la investigación de las condiciones del cerebro asociadas con la acreditación fracaso. Se describe aquí una técnica mejorada para la preparación de un modelo de acreditación de contacto, que permite que el cocultivo de astrocitos humanos y las células endoteliales del cerebro en los lados opuestos de una membrana porosa.

Método mejorado para la preparación de una base de células, Contacto Modelo Humano de la barrera hematoencefálica

El objetivo del presente estudio fue validar la reproducibilidad de un modelo de acreditación in vitro que implica una rata singénico co-cultivo de células endoteliales y astrocitos. La monocapa de células endoteliales presentan alta y baja permeabilidad TEER LY. La expresión de proteínas TJ específicos, se evaluaron las respuestas funcionales a la inflamación y la funcionalidad de los transportadores y los receptores.

Establecimiento de un<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelo de Rata barrera hematoencefálica (BBB): Un Enfoque en la acreditación Impermeabilidad y transporte mediado por los receptores

Las células endoteliales microvasculares cerebrales (BMEC) están interconectadas por proteínas de unión específicas que forman una barrera altamente regulada que separa la sangre y el sistema nervioso central (SNC), la llamada barrera hematoencefálica (BBB). El aislamiento de las células endoteliales microvasculares primarias del cerebro murino, como se discute en este protocolo, permite estudios detallados in vitro de la BHE.

Aislamiento de células primaria murino cerebro endoteliales microvasculares

Aquí, describimos un modelo murino in vitro de la barrera hematoencefálica que hace uso de la espectroscopia de células de impedancia, con un enfoque en las consecuencias sobre la integridad y permeabilidad de las células endoteliales al interactuar con las células T activadas.

Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelo de la barrera sangre-cerebro mediante Espectroscopia de Impedancia: Un enfoque en la interacción de células T de la célula endotelial

La barrera hematoencefálica humana previene selectivamente la penetración de moléculas hidrófilas y patógenos en el cerebro. Varias patologías, incluyendo meningitis y delirio postoperatorio, se asocian con una mayor permeabilidad de la barrera hematoencefálica. Aquí, describimos un modelo de cultivo celular endotelial para probar la permeabilidad de barrera por travesía microbiana.

Análisis de la permeabilidad de la barrera hematoencefálica mediante travesía microbiana a través de células endoteliales microvasculares

La barrera hematoencefálica (BBB) es una unidad neurovascular multicelular que regula estrechamente la homeostasis cerebral. Mediante la combinación de iPSC shumanos y tecnologías de órgano en chip, hemos generado un chip BBB personalizado, adecuado para el modelado de enfermedades y predicciones de penetrabilidad de fármacos del SNC. Se describe un protocolo detallado para la generación y el funcionamiento del chip BBB.

Generación de un chip de barrera hematoencefálica basada en iPSC humana

Este protocolo describe un método para establecer un modelo in vitro de barrera hematoencefálica humana (BHE). Las células endoteliales y los pericitos se siembran a cada lado de un filtro de inserción (compartimento sanguíneo), y los astrocitos se siembran en el pozo inferior (compartimento cerebral). El modelo caracterizado se utilizó para experimentos de transporte de nanopartículas.

Un sistema celular de triple cultivo que modela la barrera hematoencefálica humana

La barrera hematoencefálica (BHE) desempeña un papel crucial en el mantenimiento de un entorno cerebral estable y saludable. La disfunción de la barrera hematoencefálica se asocia con muchas enfermedades neurológicas. Hemos desarrollado un modelo 3D derivado de células madre de la BHE para investigar la patología cerebrovascular, la integridad de la BHE y cómo la BHE se ve alterada por la genética y la enfermedad.

Reconstrucción de la barrera hematoencefálica in vitro para modelar y atacar terapéuticamente la enfermedad neurológica

Aprende a establecer un modelo in vitro de barrera hematoencefálica usando células endoteliales cerebrales porcinas primarias. Este protocolo optimizado ofrece alta reproducibilidad y valores elevados de TEER para estudios de farmacología y neurociencia.

Mejor método para el establecimiento de un In Vitro Barrera Blood - Brain modelo basado en las células endoteliales de cerebro porcino (Video) | JoVE Journal

Mejor método para el establecimiento de un In Vitro Barrera Blood - Brain modelo basado en las células endoteliales de cerebro porcino

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