Name: Evaluación de la coagulación con Plasma en tejido del hígado en un modelo Animal grande en Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Aprende a evaluar la coagulación con plasma en tejido hepático usando un modelo porcino in vivo. Este método emplea termografía infrarroja y Doppler láser para medir microcirculación y profundidad de coagulación.

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Los autores no tienen ninguna agradecimientos.

Se siguieron las normas regidas por la legislación alemana para los estudios en animales así como principios de laboratorio Animal Care (institutos nacionales de salud publicación ed. 8, 2011). Se concede permiso oficial de la oficina gubernamental de cuidado de animales (Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Alemania).
1. los animales
<ol><li>Uso de cerdos hembra landrace alemán (25-30 kg de peso) alojados en jaulas abiertas.</li>
	<li>Uso de 5 animales por grupo (argón y helio).</li>
	<li>Permitir a los animales para aclimatarse a los alrededores de por lo menos una semana antes de los experimentos. Animales rápidos 24 h antes de la cirugía con acceso libre al agua.</li>
</ol>2. anestesia
<ol><li>Premedicate los animales con una inyección intramuscular de ketamina (15 mg/kg de peso corporal [BW]), xilacina (10 mg/kg P.C.) y atropina (0.1 mg/kg P.C.) 10 minutos antes de la inducción de la anestesia.</li>
	<li>Acceso venoso periférico se establece por la colocación de una cánula de calibre 22 en una vena de la oreja.</li>
	<li>Inducir la anestesia general por inyección i.v. de propofol 2 mg/kg de peso corporal.</li>
	<li>Coloque el animal en posición decúbito supina y realizar una incisión longitudinal de la piel en el surco yugular sobre una longitud de 2 cm. localizar la vena a través de la contundente preparación del tejido subcutáneo. Inserte la cánula, luego alambre de Seldinger.</li>
	<li>Cánula de retracción e insertar 14 Fr. catéter sobre el alambre guía. Retraiga el alambre de guía. Conectar el catéter a la extensión y fijar el catéter mediante una correa o una sutura.</li>
	<li>Saque la lengua e insertar laringoscopio recta. Utilice la punta del laringoscopio para tirar abajo la epiglotis. Inserte el tubo por las cuerdas vocales. Coloque el brazalete en la glotis e inflar.</li>
	<li>Ventilar con oxígeno al 40% en 20-26 respiraciones/min y un volumen tidal de 10 ml/kg para mantener la tensión de dióxido de carbono parcial fin-de marea entre 36 y 42 mm Hg.</li>
	<li>Mantener la anestesia con isoflurano con una concentración de 1-1.5% y fentanilo a una concentración de 3-4 μg/kg/h.</li>
	<li>Suministro de solución de lactato de Ringer a una tasa inicial de 4 mL/kg/h y aumentar después de laparotomía a una tasa de infusión constante de 8 mL/kg/h.</li>
</ol>3. cirugía y coagulación del Plasma
<ol><li>Coloque el animal en una posición supina sobre una mesa quirúrgica estándar.</li>
	<li>Desinfectar la piel mediante la aplicación de un desinfectante quirúrgico estándar (2-Propanol 45 g/100 g, 1-Propanol 10 g / 100g, bifenil-2-ol 0,2 g/100 g) con una esponja quirúrgica por 3 veces.</li>
	<li>Realizar una laparotomía media amplia del proceso xifoides hasta el pubis con un bisturí e instalar retractores quirúrgicos.</li>
	<li>Encienda el aparato de coagulación del plasma, abrir la botella de gas argón o helio, según el gas portador utilizado. Ajustar el flujo del gas a 3 L/min coagulación seleccione dispositivo potencia de salida deseada. Nota: Ambos gases nobles, argón o helio, puede utilizarse para la coagulación del plasma. Efectos de coagulación son comparables. Ver referencia7 para más detalles.</li>
	<li>Realizar coagulación del plasma en el lóbulo izquierdo del hígado como se describió anteriormente7. Usar un molde de titanio (abertura cuadrada 1 x 1 cm2) para estandarizar la zona de coagulación. Coagular durante 5 s a una distancia de la punta de prueba de 1 cm. Coagulaciones con diferentes de potencia pueden realizarse con una distancia corta entre las coagulaciones de 5 mm (figura 1).</li>
	<li>Para la cosecha del hígado, dividir todas las conexiones ligamentosas al hígado. Aislar y dividir el pedículo hepático por encima de la flexión duodenal superior dejando largas porciones de la vena porta y conducto biliar común. Dividir la vena cava por encima y por debajo del hígado y recupera el órgano.</li>
	<li>Después de la cosecha el hígado, los cerdos fueron sacrificados por administración i.v. de 0.16 g/kg BW pentobarbital.</li>
	<li>Para los experimentos de la presión de explosión, resecar la mitad del lóbulo hepático izquierdo medial con unas tijeras afiladas. Plasma-coagular el corte superficial (100W de potencia de salida) o sellar la superficie del corte con sellante de fibrina (figura 2).</li>
</ol>4. microcirculación medición
Nota: Espectroscopia del Laser Doppler puede determinar el flujo sanguíneo en el tejido a través de la medición de la cambio de Doppler causada por el movimiento de los eritrocitos. La señal del Laser se correlaciona con el número de eritrocitos móviles. Espectroscopía Doppler láser está en uso clínico (por ejemplo medicina del trasplante) y ha sido validado varias veces15.
<ol><li>Encienda el medidor Doppler laser y espectrofotómetro. Utilizar una sonda plana.</li>
	<li>Tomar mediciones de línea base de flujo y velocidad. Guarde o tenga en cuenta los valores.</li>
	<li>Realizar la coagulación como se describe en 3.5.</li>
	<li>Coloque la sonda plana en sitios de coagulación y medir caudal y velocidad. Una vez más, salvar o valores en cuenta.</li>
	<li>Repita para todos los ajustes de energía del dispositivo coagulador.</li>
</ol>5. medición de la temperatura
<ol><li>Cambiar el sistema (cámara termográfica portátil y termómetro de infrarrojos) y déjela funcionar durante al menos 1 h antes de realizar las mediciones.</li>
	<li>Ajustar el foco y ve el marco de la cámara termográfica en el sitio de la coagulación. Secuencias de infrarrojos pueden detectarse con la resolución espacial de 1024 x 768 píxeles con una resolución de temperatura mayor de 20 mK. Tener en cuenta, que la región de la coagulación y el tejido circundante — afectados por la transferencia de calor, se encuentra en medio de la vista. Nota: Debe incluir tantos pixeles del marco como sea posible para una óptima resolución espacial.</li>
	<li>Registrar el proceso de coagulación con el coagulador de plasma en la superficie del hígado con la cámara termográfica durante un período de 2 min.</li>
	<li>Analizar secuencias de imágenes con el software de análisis de termografía: definir regiones de interés. Nota: El Software calcula el curso de la temperatura media correspondiente con el tiempo.</li>
</ol>6. coagulación profundidad medida
<ol><li>Cosecha el lóbulo izquierdo de hígado medial con unas tijeras afiladas.</li>
	<li>Suprimir los sitios de coagulación con grosor de 1 cm. Cortar en segmentos longitudinales gruesos de 3 mm para su posterior procesamiento.</li>
	<li>Muestras de tejido de reparación a 4 ° C durante la noche con neutro 10% tamponada con formalina. Calor 2 ° C sobre el punto de fusión de la parafina y embed rebanadas. Proceso durante la noche.</li>
	<li>Realizar coloración de hematoxilina/eosina.<ol>
<li>Desparafinizar e hidratar los tejidos sumergiendo posteriormente en 2 x xileno, 100% de etanol (EtOH), 95% EtOH, 70% EtOH, desionizada de H2O 2 minutos.</li>
		<li>Mancha de la muestra de tejido con solución de hematoxilina de Meyer durante 3 minutos.</li>
		<li>Ahora enjuague en agua corriente durante 5 minutos.</li>
		<li>Teñir el tejido con solución de eosina durante 3 minutos.</li>
		<li>Enjuague 2 x EtOH 95% y luego xileno durante 3 minutos. Monte con el medio de montaje estándar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Encender el sistema (conectado microscopio cámara, software de imágenes). Ver todas las secciones con 40 aumentos.</li>
	<li>Tomar una imagen de un micrómetro de objeto en un aumento de 40 X. Pulse recalibrar el botón en la ventana de objetivos. Seleccione calibración manual. Trace una línea en la imagen del micrómetro de 100 μm. Enter 0,1 mm en el cuadro de diálogo y pulse OK.</li>
	<li>Seleccionar la longitud de la vista > Análisis de controles > anotaciones y medidas de la ventana. Medida de la superficie del hígado al margen de la coagulación con el ratón. Exportación o nota el resultado. Repita la medición en otra ubicación en la diapositiva misma. Nota: Profundidad de coagulación puede diferenciarse fácilmente del tejido normal del hígado por el margen agudo entre los cordones de hepatocitos normales y la zona de necrosis con citoplasma contraído, núcleos picnóticos y zonas de hemorragia.</li>
	<li>Calcular el promedio de dos mediciones.</li>
</ol>7. medición de la presión de explosión
<ol><li>Encender el sistema (bombas automáticas, medidor de presión). Preparar las muestras del hígado según el paso 3.7. Nota: Use dos bombas paralelo conectadas a través de una llave de 3 vías. La presión máxima de 1.500 mm Hg no puede obtenerse con una sola bomba.</li>
	<li>Aislamiento de la vena porta, arteria hepática común y conducto biliar con tijeras en el pedículo háptico. Sujetar la vena porta con un fórceps de overholt y ligan con una sutura de monofilamento 4-0. Abrazadera de la arteria hepática común un fórceps de overholt y ligan con una sutura de monofilamento 4-0.</li>
	<li>Insertar catéter Ch-16 en el conducto biliar común y ligan con una sutura de seda 2-0. Conectar el catéter a las bombas automáticas, instalar llave de 3 vías con medidor de presión (figura 3).</li>
	<li>Llene la jeringa de perfusión con solución salina.</li>
	<li>Inicio bombas automáticas con una tasa de entrega de 99 mL/h.</li>
	<li>Vigilar el hígado cortado metros superficie y presión de salida y registro de presión de estallido. Nota: Para fácil reconocimiento de fugas, azul patente puede añadirse a solución salina (azul patente 2 mL + solución salina 18 mL). Es más fácil observar la presión de explosión por notar el tiempo de pérdida de presión en el medidor de presión.</li>
</ol>

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<li>Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+laparoscopic+haemostasis+using+an+argon+beam+coagulator+for+blunt+traumatic+splenic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22EurJSurg%22%5BJournal%5D)">Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury.</a> EurJSurg. 167, 316-318 (2001).</li>
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<li>Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+Peculiarities+of+Pig+and+Human+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant+Off+J+Middle+East+Soc+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver.</a> Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).</li>
<li>Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+spectrometry+%28O2C+device%29+of+intraoperative+microperfusion+predicts+organ+function+after+kidney+transplantation%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study.</a> Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).</li>
<li>Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+ablation+of+porcine+liver+in+vivo%3A+effects+of+blood+flow+and+treatment+time+on+lesion+size%5BTitle%5D)+AND+%22AnnSurg%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size.</a> AnnSurg. 227, 559-565 (1998).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Modelos de roedores para la cirugía hepática se establecen para un tiempo de16. Sin embargo, los modelos animales grandes ofrecen ciertas ventajas: ningún equipo de microcirugía se necesita como equipo operativo estándar para los seres humanos puede ser aplicado, las técnicas quirúrgicas son comparables al uso clínico y métodos de evaluación clínica estándar puede transferido a los experimentos. Por ejemplo, se puede realizar exámenes clínicos estándar sin la necesidad de métodos de ensayo de labo...

Coagulación con argón plasma (APC) es un instrumento ampliamente utilizado en cirugía abdominal por más de tres décadas1,2. Es una técnica estándar para el logro de la hemostasia secundaria después comandante hepatectomy sellando el hígado de superficie para evitar hemorragias posteriores3. Coagulación del plasma es una forma especializada de electrocauterio de radiofrecuencia, que entrega la energía eléctrica a través de un arco de gas ionizado. Proporcionar hemostasia monopolar de electrotérmico, esta técnica sin contacto tiene la ventaja de evitar que el electrodo se adhiera a los tejidos4. El gas ionizado se dirige automáticamente al área de la más baja resistencia eléctrica y esté ausente cuando la resistencia aumenta debido a la desecación a otras áreas no desecados. Esto produce una profundidad limitada uniforme de coagulación5,6. Factores que influyen en el efecto de la coagulación son la activación del tiempo, la configuración del dispositivo de la coagulación y la distancia entre la sonda y el tejido. El helio es otro gas portador, que puede ser utilizado para plasma coagulación7. Clínicos recientes estudios concentrados en los resultados clínicos en lugar de hallazgos histológicos y funcionales3,8,9, mientras que estudios experimentales enfocados en vitro investigaciones10 o experimentos en órganos perfundidos aislados11.
El protocolo subyacente permite el estudio de los efectos de coagulación del plasma en un modelo animal grande cerca de la aplicación clínica utilizando equipamiento humano en cerdos: microcirculación es evaluada de forma no invasiva por un flujómetro Doppler láser y Espectrofotómetro, que es una herramienta clínica para esta indicación12,13. Cambios de temperatura durante la coagulación son monitoreados con un termómetro de infrarrojos y una cámara termográfica. La profundidad de la coagulación se mide en histológica hematoxilina/eosina secciones manchada después de la recolección de muestras de tejido. Para la comparación con otros medios de hemostasia secundaria, se realizan experimentos de presión de explosión. En contraste con técnicas previamente descritas14, estos se llevan a cabo órganos explanted para excluir la presión arterial relacionados con efectos. Además de las investigaciones descritas en los efectos locales de coagulación del plasma, pruebas de sangre estándar puede realizarse también en el modelo porcino.

<table><tbody><tr><td>Xilacina 20 mg/mL</td><td>Vetoquinol GmbH</td><td>Xylapan</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina 100 mg/mL</td><td>Ceva GmbH</td><td>Ceva Ketamina Inyección</td><td></td></tr><tr><td>Atropina 100 mg / 10 mL</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH</td><td>Atropinsulfat K&ouml; hler 100mg Amp.</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fresenius Kabi GmbH</td><td>Propofol 1% MCT Fresenius</td><td></td></tr><tr><td>Fentanilo</td><td>KG Rotexmedica GmbH</td><td>Fentanilo 0,5mg Rotexmedica</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Abbot GmbH</td><td>Forene 100% (V/V) 250 mL</td><td></td></tr><tr><td>Solución de lactato de Ringer</td><td>Baxter Deutschland GmbH</td><td></td><td>sodio 131 mmol/l, potasio 5 mmol/l, calcio 2 mmol/l, cloruro 111 mmol/l, lactato 29 mmol/l</td></tr><tr><td>Desincomentante quirúrgico</td><td>Sch&uuml; LKE & Mayr GmbH</td><td>Kodan Tinktur forte gef&auml; rbt 1l 104804</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio motorizado</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Eclipse TE2000-E</td><td></td></tr> Cámara <tr><td>microscópica</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Digitalsight DS-Qi1Mc</td><td></td></tr><tr><td>Software de imagen</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>NIS elements Vers. 4.40</td><td></td></tr><tr><td>Coagulador de plasma</td><td>S&ouml; ring GmbH</td><td>CPC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Gas argón</td><td>Linde AG</td><td>Argon 4.8&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gas helio</td><td>Linde AG</td><td>Helio 4.8</td><td></td></tr><tr><td>O2C</td><td>LEA Medizintechnik GmbH</td><td>O2C Versión 1212</td><td>con sonda LF-2 o LF-3</td></tr><tr><td>Termómetro infrarrojo</td><td>Voltcraft</td><td>VOLTCRAFT IR 260-8S</td><td></td></tr><tr><td>Cámara termográfica</td><td>InfraTec GmbH</td><td>VarioCAM HD head 820</td><td></td></tr><tr><td>Software de análisis termográfico</td><td>InfraTec GmbH</td><td>IRBIS 3</td><td></td></tr><tr><td>Solución de hematoxilina de Mayer</td><td>Merck 1.09249</td><td></td>Solución de eosina VWR International GmbH Merck 1.09844 Rollerpump Masterflex L/S easy Load Cole-Parmer Instrument Company modelo 7518-10 Perfusorpump B. Braun Melsungen AG Perfusor secura FT Medidor de presión digital Greisinger <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> electrónica</td><td>GMH 3161</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de perfusión, 50 mL</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8728810 F</td><td></td></tr><tr><td>Línea de perfusores, Tipo IV Estándar, PVC Cerradura Luer</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8722960</td><td></td></tr><tr><td>Llave de paso de 3 vías, Dicofix C35C</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 16494 C</td><td></td></tr><tr><td>Silk 2-0. 3 métricos</td><td>Resorba</td><td>REF H5F</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 Sutupak</td><td>Ethicon</td><td>V1224H</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9 %</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

evaluación de la coagulación con plasma en tejido del hígado en un modelo animal grande en vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Coagulación del plasma como una forma de electrocauterización se utiliza en Cirugía hepática durante décadas para sellar la superficie de corte de hígado grande después de hepatectomy importante para prevenir las hemorragias en una etapa posterior. Mal sólo se examinan los efectos exactos de la coagulación con plasma en tejido del hígado. En el modelo porcino, los efectos de la coagulación pueden ser examinados cerca de la aplicación clínica. Una combinado Láser Doppler flowmeter y espectrofotómetro documentos la microcirculación cambia durante la coagulación en 8 mm de profundidad de tejido no invasor, proporcionando información cuantificable sobre hemostasia más allá de la impresión clínica subjetiva. La temperatura en el sitio de la coagulación se evalúa con una coagulación previa y post de termómetro infrarrojo y una cámara termográfica durante la coagulación, una medición de la temperatura del gas de la viga no es posible debido al umbral superior de los dispositivos. La profundidad de la coagulación se mide microscópicamente con hematoxilina/eosina, tinción de secciones después de la calibración con un micrómetro de objeto y le da una información exacta sobre la coagulación ajuste profundidad-relación de poder. El efecto del lacre se examina en los conductos biliares ya que no es posible para un coagulador de plasma sellar vasos sanguíneos más grandes. Realizan experimentos de presión de explosión hacia fuera en órganos explanted para descartar hipertensión relacionadas con efectos.

Microcirculación: Utilizando el dispositivo de diagnóstico para la hemostasia después de coagulación del plasma se puede demostrar por los cambios de la microcirculación. Sangre capilar flujo (muestra como unidades arbitrarias (UA)) disminuye desde un valor basal de 142.7 ± 76.08 AU ± 57.78 49.57 AU en 25 W dispositivo de potencia de salida, a 48,5 ± 7,26 AU en 50 W y a 5,04 ± 1.31 AU 100 W (figura 4).
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Aquí presentamos un protocolo para evaluar experimentalmente la coagulación con plasma en el tejido hepático en vivo. En un modelo porcino, microcirculación es examinada por láser Doppler, profundidad de coagulación se mide histológicamente, temperatura en el sitio de coagulación por termómetro infrarrojo, cámara termográfica y conducto efecto del lacre está documentada por la presión de explosión experimentos.

Evaluación de la coagulación con Plasma en tejido del hígado en un modelo Animal grande en Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la cirugía hepática clínica sobre la relación de profundidad de ajuste de energía de la coagulación con plasma de argón y helio y el proceso de coagulación del plasma en sí. Las principales ventajas de esta técnica son que el modelo animal grande es similar a la aplicación clínica y que no se necesita ningún equipo especial. La termografía infrarroja se puede utilizar para controlar la distribución de la temperatura y el decaimiento de la temperatura, pero también para controlar la frecuencia respiratoria y los pasteles.Además, los procesos inflamatorios se pueden monitorizar mediante termografía infrarroja. La demostración del procedimiento correrá a cargo de Pascal Paschenda, un técnico de nuestro grupo. Al menos una hora antes de comenzar el procedimiento, encienda la cámara termográfica, el portátil y el termómetro infrarrojo.Cuando el equipo esté listo, coloque una hembra de cerdo Landrace alemán anestesiada de 25 a 30 kilogramos en posición supina sobre una mesa quirúrgica estándar y use un hisopo quirúrgico estándar para desinfectar el área quirúrgica tres veces con un desinfectante quirúrgico estándar. A continuación, utilice un bisturí para hacer una laparotomía amplia de la línea media desde la apófisis xifoides hasta el pubis e instale retractores quirúrgicos para exponer el tejido hepático. Para obtener mediciones de microcirculación de referencia, encienda el medidor de flujo y el espectrofotómetro láser Doppler y use una sonda plana para medir el flujo y la velocidad.A continuación, encienda el dispositivo de coagulación por plasma, abra la botella de gas portador adecuada y ajuste el flujo de gas a tres litros por minuto. Seleccione la potencia de salida del dispositivo de coagulación adecuada y utilice un molde de titanio con una apertura cuadrada de uno por un centímetro cuadrado para estandarizar la zona de coagulación. A continuación, utilice una distancia de sonda de un centímetro para coagular la región durante cinco segundos.Para medir la microcirculación posterior a la coagulación, coloque la sonda plana en cada sitio de coagulación para medir el flujo y la velocidad de cada sitio. Para medir la temperatura en cada sitio, ajuste el enfoque de la cámara termográfica y coloque el marco sobre el primer sitio de coagulación de modo que la región de coagulación y el tejido circundante afectado por la transferencia de calor se encuentren en el centro del campo de visión. Registre el proceso de coagulación con el coagulador de plasma en la superficie del hígado con una cámara termográfica durante un período de dos minutos.A continuación, analice las secuencias de imágenes con el software de análisis de termografía adecuado. Para medir la presión de rotura, primero encienda las bombas automáticas y el medidor de presión. A continuación, divida todas las conexiones ligamentosas con el hígado y divida el pedículo hepático por encima de la flexión duodenal superior, dejando intactas porciones largas de la vena porta y el conducto biliar común.A continuación, divida la vena cava por encima y por debajo del hígado para permitir la extracción del órgano. Con unas tijeras afiladas, resecar la mitad del lóbulo hepático medial izquierdo y coagular con plasma la superficie de corte. Aísla la vena porta, la arteria hepática común y el conducto biliar en el pedículo hepático.Con pinzas de sujeción, pinza la vena porta. A continuación, utilice una sutura monofil 4.0 para ligar el vaso. Pinzar la arteria hepática común con un segundo par de pinzas de sujeción y ligar la arteria con otra sutura monofil 4.0.Inserte un catéter French 16 en el conducto biliar común, ligando el conducto con sutura de seda 2.0. Y conecte el catéter a las bombas automáticas. Instale una llave de paso de tres vías con un medidor de presión y llene una jeringa de profusión con solución salina.Arranquen las bombas automáticas con una tasa de suministro de 99 mililitros por hora. A continuación, controle la superficie de corte del hígado y el medidor de presión para detectar fugas y registre la presión de ruptura. En este experimento representativo, el flujo sanguíneo capilar disminuyó aproximadamente un 60% desde el inicio a 25 vatios de potencia de salida del dispositivo, un 66% a 50 vatios y casi un 100% a 100 vatios.No se observaron cambios en la temperatura durante o después de la coagulación plasmática. La coagulación plasmática crea una zona superficial de necrosis que puede distinguirse fácilmente del parénquima hepático normal. Después de la coagulación con plasma de helio, la profundidad de coagulación aumenta significativamente en correlación directa con la potencia de salida del dispositivo de plasma aplicado.Obsérvese que las mediciones de presión de rotura realizadas en la superficie de corte del lóbulo hepático medial izquierdo explantado no muestran ninguna diferencia después de la coagulación con plasma de helio o argón. Utilizando estas técnicas, esta última para cuantificar el efecto coagulatorio local y estimar el efecto de sellado de la vía biliar de la coagulación plasmática. Estas técnicas también se pueden utilizar para comparar diferentes medias de bilio y hemostasia en un entorno quirúrgico similar al de los pacientes humanos.Además, los efectos hemo-biliostáticos de la coagulación plasmática se pueden aplicar después de hepatectomías mayores en el mismo modelo. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo evaluar los principales efectos de la coagulación con plasma de argón y helio en un modelo animal grande.

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