Name: Murino colostomía Distal, un modelo novedoso de desvío Colitis en ratones C57BL/6 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Aprende a realizar una colostomía distal en ratones C57BL/6 para estudiar la colitis de desvío. Este modelo reproduce las características histológicas humanas sin requerir animales genéticamente modificados.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por la autoridad veterinaria (Landesamt für Landwirtschaft, und Lebensmittelsicherheit Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, LALLF M-V).
1. preoperatorio cuidado y preparación del Animal
<ol><li>A su llegada a las instalaciones de animales, animales (C57Bl/6) se dividen en grupos de tamaño similar, jaula a cada grupo juntos y mantener constante a lo largo de los experimentos de los grupos. Nota: Utilizar animales del mismo sexo. Los resultados descritos se obtuvieron con ratones machos. Nota: Si se utilizan machos, grupos de jaula juntos a partir de cuando tienen 7 semanas de edad para que pueda establecerse una jerarquía, minimizando así el riesgo de comportamiento agresivo durante los experimentos.</li>
	<li>Por lo menos una semana antes de la cirugía, cambiar a una alta energía (> 14 MJ/kg) y alta en proteínas (> 20%) de la alimentación que contiene todos los oligoelementos esenciales y vitaminas (para detalles, ver lista de materiales). Nota: Asegure todos los ratones pesan al menos 25 g cuando se realiza la cirugía.</li>
	<li>Inducir analgesia y la anestesia por inyección intraperitoneal de ketamina (87 mg/kg i.p.) y el clorhidrato de xilacina (13 mg/kg i.p.). Espere hasta que el ratón tolera la estimulación mecánica, por ejemplo campo de dedo del pie, sin respuesta de motor.</li>
	<li>Asegure el ratón narcotizado con cintas en una posición supina sobre una arpillera de calor colocado en la mesa de operación, garantizando la colocación durante la operación estable y evitando una abrumadora pérdida de calor corporal. Nota: La arpillera de calor debe tener una temperatura de 36 ° C a 40 ° C; la temperatura de la sala de operaciones debe ser de 21 ° C.</li>
</ol>2. distal de la colostomía operación
<ol><li>Afeitarse el vello abdominal. Antes de comenzar la cirugía, desinfectar el campo de la operación tres veces con alcohol 70% y un yodóforo. Cubra el campo de la operación para garantizar condiciones asépticas.</li>
	<li>Realizar una laparotomía mediana 15 mm mediante la incisión de los músculos abdominales y el peritoneo a lo largo de la linea alba, minimizando así la pérdida de sangre.</li>
	<li>Utilizar dos pinzas atraumáticas de DeBakey, tire con cuidado hacia el ciego, íleon terminal y el ascendente y el colon transverso de la cavidad peritoneal. Nota: Tenga cuidado de limitar estrictamente la manipulación mecánica del intestino para evitar daños a las estructuras mesentéricas.</li>
	<li>Identificar el polo cecal, el colon ascendente y el intestino (Figuras 1a y 1b). Nota: La correcta identificación de los dos puntos ascendentes es fundamental para la correcta colocación de la colostomía. En casos donde la anatomía de la región ileocecal es ambigua, identifica a la presencia de placas de Peyer del intestino, y la presencia de heces formadas caracteriza el colon.</li>
	<li>Use una regla para determinar la posición de la futura operación del intestino grueso. Se debe colocar 20 mm distal a la válvula ileocecal para una colostomía distal.</li>
	<li>Hacer una segunda incisión de 3 mm en la pared abdominal en el cuadrante superior derecho. Tire el segmento de colon previamente identificadas a través de esta incisión para formar un círculo, teniendo cuidado de no distorsionar el bucle.</li>
	<li>Pasar con cuidado una cánula i.v. flexible calibre 22 a través del mesocolon. Tenga cuidado para no dañar estructuras vasculares mesentéricas.</li>
	<li>Devolver el intestino a la cavidad peritoneal.</li>
	<li>Fijar ambos extremos del tubo flexible a la piel con puntos simples y sutura reabsorbible (p. ej., polyglactin 910 o polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>Antes de cerrar la laparotomía, realice reanimación con líquidos usando una inyección intraperitoneal de solución salina al de 0.9% 0,5 mL.</li>
	<li>Cierre del peritoneo y la capa muscular con una sutura continua usando una sutura reabsorbible (p. ej., polyglactin 910 o polyfil 4-0 1/2 c). Cierre la piel con una sutura continua usando una sutura reabsorbible (p. ej., polyglactin 910 o polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>Abrir el bucle de colon exteriorizado mediante la realización de un corte transversal subtotal con una tijera fina. Evitar toda lesión del mesenterio. Transecto no el colon completamente.</li>
	<li>Fijar cada abertura de colostomía con tres puntadas de espesor total solo al peritoneo y la piel con un monofilamento, suturas absorbibles (p. ej., Polidioxanona o monofilamento 6-0 3/8s). El aferente del lazo, que es una colostomía de final funcional, y el lazo eferente, que es una fístula mucosa, se separan claramente en este punto (figura 1C). Nota: Tiempo de operación debe ser menos de 20 minutos para limitar las pérdidas de fluidos y térmicas.</li>
	<li>Después de terminar la cirugía, desinfectar instrumentos usando una solución de desinfectante libre de aldehídos en un baño de ultrasonidos según las instrucciones del fabricante.</li>
</ol>3. simulacro de operación (Colotomy)
<ol><li>Realice los pasos 1.1. a través de 2.4.</li>
	<li>Utilice una regla para determinar la posición de futuros colotomy. El colotomy debe colocarse a la misma distancia de la válvula ileocecal que la colostomía en el grupo experimental.</li>
	<li>Abra el colon por lo menos dos tercios su circunferencia usando las tijeras finas.</li>
	<li>Cierre colotomy con una sola capa, espesor total interrumpido con un monofilamento, absorbible sutura sutura (por ejemplo, polydioxanone, monofilamento 6-0 3/8s). Nota: Tiempo de operación debe ser menos de 20 minutos para un cirujano experimentado, limitando las pérdidas de fluidos y térmicas.</li>
	<li>Realice los pasos 2.10. , 2.11. y 2.14.</li>
</ol>4. posoperatorio cuidado
<ol><li>Devolver los animales a sus jaulas. Bien templado el ambiente de 37 ° C (por ejemplo, con una lámpara infrarroja) hasta que los ratones son totalmente despiertos. A continuación, mantenga ratones en un ambiente de temperatura y Humedad reguladas (21 ° C; humedad relativa de 30% ± 10%). Permitir el libre acceso a alimentos y agua potable. Para facilitar la absorción de líquidos, proporcionar alimentación animal empapado de agua adicional.</li>
	<li>Inicio de la analgesia postoperatoria mediante la inyección de 0,1 mg/kg corporal peso buprenorfina s.c. cuando los animales muestran respuesta a la estimulación mecánica. Tenga cuidado para evitar depresión respiratoria.</li>
	<li>Suplemento de agua potable con tramadol 1 mg/mL para analgesia continua durante la primera semana postoperatoria.</li>
	<li>Para compensar la ingesta disminuida de líquidos debido a movilidad reducida, suministrar un cojín sólido de beber en la jaula durante la primera semana postoperatoria.</li>
	<li>Pesan los animales y el comportamiento animal puntuación diariamente durante la primera semana, cada dos días durante el resto del primer mes y cada tercer día durante el segundo mes el score de severidad de la enfermedad descrito en Kleinwort et al. 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Todos los autores declaran que no tienen intereses que compiten.

El modelo murino de DC presentada en este protocolo fiable reproduce las características histopatológicas de DC humana (p. ej., desarrollo de novo de los folículos linfoides en la submucosa de segmentos de intestino inflamado, cripta acortamiento y reducción de número de células caliciformes). Aparte de esta ventaja, este modelo es inducida por un factor desencadenante muy similar y presenta un curso clínico de moderado a leve gravedad como es el caso de los seres humanos más afectados.
<p class="jo...

En los últimos años, un número considerable de entidades colitis no infecciosa diferentes de las enfermedades clásicas inflamatorias intestinales (EII; ej., enfermedad enfermedad o colitis de Crohn) han caracterizado clínico e histopathologically en seres humanos. Los mecanismos fisiopatológicos principales en el desarrollo de estas formas de colitis no se entienden completamente parcialmente porque son escasos los modelos animales apropiados. Colitis de la diversión es una de estas entidades recientemente descritas. Aunque el término fue acuñado en 1980 por Glotzer1, la descripción inicial de un fenotipo similar fue dada en 1972 por Morson2. La enfermedad se desarrolla en el 50% al 91% de los pacientes con desvío de enterostomía, y su intensidad clínica varía de3,4. Dada la incidencia anual de alrededor de 120.000 pacientes de colostomía en los Estados Unidos de América, esta entidad de la enfermedad constituye un importante problema de salud.
El objetivo general de desarrollar este protocolo era proporcionar un modelo murino de DC que se apoya en un disparador de colitis similar a ése visto en DC humana y que reproduce las principales características histopatológicas de la enfermedad humana. En contraste con otros modelos de colitis murino la inducción de colitis en nuestro modelo no requiere de animales genéticamente modificados (p. ej., ratones transgénicos IL-7, N-cadherin dominante negativo ratones o ratones TGFβ- / - ), la aplicación de la química irritantes sustancias (p. ej., sulfato de dextrano sódico (DSS) - colitis inducida o ácido de trinitrobenceno sulfónico (TNBS) - inducida por colitis) o la transferencia de poblaciones celulares específicas en ratones deficientes inmunes (como en la transferenciaalta CD45RB modelo de colitis) (para una revisión, véase5). En contraste con otros modelos, el sistema inmune intacto nuestro modelo DC permite la evaluación del mecanismo inmunológico involucrado en el desarrollo de CC. La limitación de la inflamación mucosa al segmento intestinal excluido permite la evaluación de su repercusión sobre la inmunidad mucosa en otras partes del tracto gastrointestinal en la homeostasis inmune en otros compartimentos inmunes del tracto intestinal (p. ej. , Parches de Peyer y ganglios mesenteriale) y en la homeostasis inmune de todo el organismo. Por último, nuestro modelo constituye una herramienta apropiada para investigar los mecanismos de control de estímulos inflamatorios locales origina cambios en el ambiente local normal para el microbioma local, así como antígenos alimentarios.

<table><tbody><tr><td>Material de operación</></td> subcapa de calor, 6 vatios ThermoLux, Witte + Sutor GmbH 461265 Etanol 70% (con metiletilcetón)Farmacia del Hospital Universitario Greifswald Aplicadores de madera, cabeza pequeña <td></td><td></td><td></td></tr> de <tr><td></td><td></td><td></td> algodón de un solo lado, palo de madera, 150 mm de longitud Centramed GmbH, Alemania 8308370 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>para la desinfección del campo de operaciones</td></tr><tr><td>Tijera</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Atraumatic Pinza DeBakey</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. cánula 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Alemania</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 violeta trenzado; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Jeringas con aguja con interior estéril)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecilpropan-1,3-diamina)</td><td>ANTISEPTICA, Alemania</td><td>18824-01</td><td>desinfección de instrumental quirúrgico en baño ultrasónico</td></tr><tr><td>Medicamentos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamina 10%, 100 mg/mL (clorhidrato de ketamina)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (clorhidrato de xilacina)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Braun Melsungen AG, Alemania</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0,3 mg/mL (buprenorfina)</td><td>Bayer, Alemania</td><td>PZN: 01498870</td><td>0,1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Drops, 100 mg/mL (clorhidrato de tramadol)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, Alemania</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL de agua potable</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxona)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Alemania</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg de peso corporal i.p.</td></tr><tr><td>metronidazol 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Alemania</td><td>PZN: 05543515</td><td>12,5 mg/kg peso corporal i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Alemania</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Bebida sólida Dehyprev Vit BIO, bolsas</td><td>TripleATrading, Países Bajos</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Equipo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Alemania</td><td></td><td>microscopía óptica</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Analizador de hematología veterinaria de 50 &micro; l sangre venosa</td></tr><tr><td>EDTA-Bandelin SONOREX (Baño ultrasónico)</td><td>Bandelin electronics, Alemania</td><td>RK 100 H</td><td>desinfección de instrumental quirúrgico</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Alemania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Versión 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murino colostomía distal, un modelo novedoso de desvío colitis en ratones c57bl/6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Desviación (DC) es una condición clínica frecuente que ocurre en pacientes con segmentos de intestino excluidos de la corriente fecal como resultado de una enterostomía desviar. La etiología de esta enfermedad sigue siendo mal definida pero parece diferir de la de enfermedades de intestino inflamatorias clásicas tales como la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. Investigaciones encaminadas a descifrar los mecanismos fisiopatológicos principales en el desarrollo de esta enfermedad ha sido gravemente obstaculizado por la falta de un modelo murino. Este protocolo genera un modelo murino de DC que facilita el estudio del papel del sistema inmune y su interacción con el microbioma en el desarrollo de CC. En este modelo utilizando animales C57BL/6, parte distal del colon se excluye de la corriente fecal al crear una colostomía distal, provocando el desarrollo de leve a moderada inflamación en el segmento intestinal excluido y reproducir las lesiones característica distintiva del ser humano DC con una moderada respuesta inflamatoria sistémica. En contraste con el modelo de la rata, hay un gran número de modelos murinos genéticamente en el fondo de C57BL/6. La combinación de estos animales con nuestro modelo permite que las funciones potenciales de individuales citoquinas, quimiocinas y receptores de moléculas bioactivas (e.g., interleukin (IL) -17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptores CXCR5 y CCR7 y el receptor de la esfingosina-1-fosfato 4) a evaluarse en la patogenesia de DC. La disponibilidad de tensiones congenic ratón C57BL/6 fondo facilita en gran medida transferencia experimentos para establecer los roles de distintos tipos de células involucrados en la etiología de DC. Finalmente, el modelo ofrece la oportunidad de evaluar la influencia de las intervenciones locales (p. ej., modificación del microbioma local o terapia antiinflamatoria local) de inmunidad mucosa en los segmentos intestinales afectados y no afectados y en homeostasis inmune sistémica.

La cirugía se tolera bien tanto en los grupos de sham (colotomy) y experimental (colostomía). Mortalidad perioperatoria no debe superar el 10% cuando se realiza correctamente la cirugía y perioperative management. En la primera semana postoperatoria, pérdida de peso significativa se observa en los grupos experimentales y simulados. Animales del grupo impostor alcanzan su nadir de peso normalmente hacia el cuarto día postoperatorio, pero se da un día más tarde en el grupo experimental. Pér...

Murino colostomía distal proporciona un modelo murino para la colitis de la diversión humana, una colitis linfocítica predominante en el segmento de colon excluido de la corriente fecal.

Murino colostomía Distal, un modelo novedoso de desvío Colitis en ratones C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

El objetivo general de este protocolo es facilitar el estudio del papel del sistema inmunitario y su interacción con el microbioma en el desarrollo de la colitis por derivación. Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la colitis por derivación, que ocurre en ambos segmentos excluidos del flujo fecal y afecta hasta al 90% de los pacientes con enterostomía desviadora. La principal ventaja de esta técnica es que no requiere animales modificados genéticamente, el uso de sustancias químicamente irritantes o la transferencia de poblaciones celulares específicas a ratones inmunodeficientes para inducir colitis.Al llegar al animalario, divida a los ratones en grupos de tamaño similar. Enjaular a cada grupo y mantener los grupos constantes a lo largo de los experimentos. Al menos una semana antes de la cirugía, cambie a un alimento de alta energía y proteínas que contenga todos los oligoelementos y vitaminas esenciales.Para prepararse para la cirugía después de anestesiar al animal de acuerdo con el protocolo de texto, use cinta adhesiva para estabilizar al animal en posición supina sobre una almohadilla térmica para evitar la pérdida de calor corporal. A continuación, compruebe que el ratón tolera la estimulación mecánica, por ejemplo, el pellizco de los dedos de los pies sin una respuesta motora.Antes de comenzar la cirugía, desinfecte el campo de operación tres veces con alcohol al 70% y un ápice 4. Cubra el campo de operación para garantizar condiciones asépticas. Realizar una laparotomía media de 15 mm mediante incisión de la musculatura abdominal y el peritoneo a lo largo de la línea alba, minimizando así la pérdida de sangre.A continuación, con dos pinzas atraumáticas de debakey, extraiga con cuidado el ciego, el íleon terminal y el colon descendente y transverso de la cavidad peritoneal. Tenga cuidado de limitar la manipulación mecánica del intestino para evitar lesiones en las estructuras mesentéricas y mantener la profusión óptima del intestino. A continuación, identifique el polo cecal, el colon ascendente y el intestino delgado.Si la anatomía de la región ileocecal es ambigua, la presencia de parches de Peyer identifica el intestino delgado y la presencia de formas de atura caracteriza al colon. Use una regla para determinar la posición de la futura colostomía. Debe colocarse a 20 mm distal de la válvula ileocecal para una colostomía distal.Realice una segunda incisión de 3 mm en la pared abdominal en el cuadrante superior derecho. Luego, tire del segmento de colon previamente identificado a través de esta incisión para formar un bucle, teniendo cuidado de no distorsionar el bucle. Pase con cuidado una cánula intravenosa flexible de calibre 22 a través del mesocolon, teniendo cuidado de no dañar las estructuras vasculares mesentéricas.Luego, regrese el intestino a la cavidad peritoneal. Con puntos simples y una sutura reabsorbible, fije ambos extremos del tubo flexible a la piel. Antes de cerrar la laparotomía, realizar la reanimación con líquidos mediante una inyección intraperitoneal de 0,5 mL de solución salina al 0,9%.Cerrar el peritoneo y la capa muscular con una sutura continua reabsorbible. Luego, cierre la piel de manera similar. Con una tijera fina, abra el bucle de colon exteriorizado realizando una transección subtotal.Evite todas las lesiones al mesenterio y no seccione completamente el colon. Con una sutura monofilamento absorbible, fije cada abertura de colostomía con tres puntos individuales de espesor completo al peritoneo y la piel. El asa aferente, que es una colostomía terminal funcional, y el asa eferente, que es una fístula mucosa, están claramente separados en este punto.Para llevar a cabo una colotomía, después de identificar el polo cecal, el colon ascendente y el intestino delgado como se ha demostrado para la colostomía distal, use una regla para determinar la posición futura de la colotomía que debe colocarse a la misma distancia de la válvula ileocecal que la colostomía. Con unas tijeras finas, abra el colon al menos dos tercios de su circunferencia. Utilizando una sutura monofil absorbible, cierre la colotomía con una sutura interrumpida de espesor completo antes de realizar la reanimación con líquidos y el cierre del peritoneo y la piel como antes.Después del procedimiento, regrese a los animales a sus jaulas y colóquelos bajo una lámpara infrarroja a 37 grados centígrados hasta que estén completamente despiertos antes de devolverlos a un ambiente con temperatura y humedad controladas. Cuando los animales muestren respuesta a la estimulación mecánica, iniciar la analgesia postoperatoria, inyectando 0,1 mg por kg de peso corporal, buprenorfina SC. Revisa cuidadosamente si hay signos de depresión respiratoria. Complementar el agua de bebida con 1 mg por mL de tramadol para la analgesia continuada durante la primera semana postoperatoria.Para compensar la disminución de la ingesta de líquidos debido a la movilidad reducida, suministre una almohadilla sólida en la jaula durante la primera semana postoperatoria. Finalmente, pese a los animales y califique el comportamiento animal diariamente durante la primera semana, cada segundo día durante el resto del primer mes y cada tercer día durante el segundo mes. La cirugía es bien tolerada tanto en el grupo experimental como en el simulado.La pérdida de peso es más pronunciada en el grupo experimental, alcanzando el 21,7% del peso corporal inicial. Por el contrario, los animales simulados pierden el 10,8% de su peso corporal inicial. La mortalidad total durante los primeros 60 días postoperatorios es de alrededor del 40% en el grupo de colostomía y de alrededor del 10% en el grupo simulado.La mayoría de las muertes ocurrieron durante la primera semana postoperatoria, y las causas de muerte se muestran en esta figura. La colostomía distal en ratones da lugar al desarrollo de una colitis predominantemente linfocítica, que reproduce las características histológicas distintivas de la DC humana. La longitud de la cripta se acorta significativamente en los segmentos intestinales excluidos y alcanza significación estadística después de 14 días de derivación fecal. La longitud de la cripta portadora de células caliciformes se reduce después de 30 días en los segmentos intestinales excluidos.El número absoluto de células caliciformes también se reduce significativamente en las criptas del segmento intestinal excluido después de 14 días postoperatorios. La lesión distintiva de la DC, el desarrollo de folículos linfoides en la mucosa, requiere una mayor duración de la desviación de las heces. Aunque se puede observar un aumento en el número de folículos linfoides a partir de las dos semanas, las diferencias se vuelven significativas después de dos meses.Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar una colostomía distal murina. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en menos de 20 minutos si se realiza correctamente. Este modelo puede combinarse con otros modelos modificados genéticamente o experimentos de transferencia en cepas de ratón congénitas, con el fin de abordar el papel de los mediadores inflamatorios de poblaciones celulares específicas y la patogénesis de la colitis por derivación.

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

De sodio de sulfato de dextrano (DSS), administrada en el agua potable es un modelo murino estableció una lesión inflamatoria de la colitis aguda. Este protocolo describe el método para el tratamiento de DSS y la preparación de los tejidos.

Modelado de la colitis murino utilizando sulfato de dextrano sódico (DSS)

Se demuestra un protocolo en el que la administración del agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por tres ciclos de la sódico pro-inflamatoria agente sulfato de dextrano (DSS) rápida y consistente genera tumores de colon en ratones con similitudes morfológicas y moleculares a las que se observan en la colitis humana asociada a cáncer.

Modelado Colitis asociada a cáncer con azoximetano (AOM) y Sodio sulfato de dextrano (DSS)

En este video, describimos un procedimiento quirúrgico para generar un bucle de colon proximal de ratón o un segmento pcLoop seguido de una inyección intraluminal de marcadores fluorescentes en el segmento para estudiar la permeabilidad epitelial intestinal.

Generación de un modelo de asa de colon proximal en ratón: un procedimiento quirúrgico para generar asa de colon proximal y medir la permeabilidad intestinal mediante la detección de marcadores fluorescentes en suero después de la inyección intraluminal

Este video muestra una técnica para generar un modelo murino de colitis inducido químicamente, una enfermedad inflamatoria intestinal. Se permite que el ratón consuma una solución de sulfato de sodio de dextrano (DSS) durante un tiempo adecuado. Al consumirlo, el DSS daña la mucosa y la barrera de la capa epitelial en el colon, lo que permite que los microbios intestinales ingresen al tejido subyacente, donde son detectados por las células inmunitarias residentes para mediar una respuesta...

Una técnica para generar un modelo murino de colitis inducida por sodio con sulfato de dextrano

Citrobacter infección rodentium ofrece un valioso modelo para estudiar las infecciones bacterianas entéricas, así como respuestas inmunes del huésped y la colitis en ratones. Este protocolo describe la medición de la integridad de la barrera, la carga de patógenos y el daño histológico que permita la caracterización detallada de las contribuciones patógeno y del huésped a la colitis infecciosa murino.

La<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Modelo: Estudiar Contribuciones patógeno y del huésped a la colitis infecciosa

En los últimos años, los endoscopios de nueva generación se han convertido en importantes ayudas de investigación de diagnóstico para la evaluación de la colitis murina y tumores colorrectales. Se presenta en el presente documento un protocolo detallado para la evaluación endoscópica de la inflamación y tumores colorrectales en ratones, así como un sistema de puntuación novedoso que utiliza identificadores decimales para documentar la gravedad de la colitis endoscópica y tumores colorrectales.

La colonoscopia flexible en ratones para evaluar la gravedad de la colitis y colorrectal tumores utilizando un sistema validado de puntuación endoscópica

Se presenta un protocolo para el establecimiento de un modelo genético de ratón de cáncer colorrectal por infección segmentaria de adenovirus y su vigilancia mediante colonoscopia de alta resolución.

Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

Obstrucciones intestinales son una obstrucción parcial o completa del intestino que puede causar dolor abdominal severo, náuseas, vómitos y evitando el paso de las heces. Este procedimiento para crear tiene obstrucciones parciales intestinal en ratones es confiable en el estudio de los mecanismos de crecimiento celular patológico y la muerte en el intestino.

Un modelo de ratón de la obstrucción Intestinal parcial

Fuga anastomótica o avería después de la cirugía es una causa importante de morbimortalidad postoperatoria. La cirugía para crear una anastomosis colónica es un método confiable y reproducible para el estudio de los mecanismos de cicatrización de las anastomosis.

Creación de Anastomosis de colon en ratones

El protocolo presentado describe una extirpación quirúrgica fácil del apéndice (parche cecaco) en un ratón seguido de la inducción del cáncer colorrectal asociado a la enfermedad inflamatoria intestinal. Este modelo de apendicectomía murina permite investigar el papel biológico del apéndice en la patogénesis de la enfermedad gastrointestinal humana.

Modelo de apendicectomía murine del cáncer colorrectal asociado a la colitis crónica por localización precisa del parche de Caecal

Describimos un modelo murino de íleo postoperatorio generado por manipulación intestinal. Se evaluó la función del tránsito gastrointestinal, los cambios patológicos y la activación de las células inmunitarias 24 h después de la cirugía.

Modelo murino de íleo postoperatorio

Aprende a realizar una colostomía distal en ratones C57BL/6 para estudiar la colitis de desvío. Este modelo reproduce las características histológicas humanas sin requerir animales genéticamente modificados.

Murino colostomía Distal, un modelo novedoso de desvío Colitis en ratones C57BL/6

Explorar más videos