Protocolo para crear heridas crónicas en ratones diabéticos

Este modelo de ratón puede ayudar a responder preguntas en el campo médico de la cronicidad de la herida. La principal ventaja de este modelo es que las heridas crónicas en ratones imitan muchos aspectos de las heridas crónicas en los seres humanos. Para comenzar, coloque el ratón sobre una superficie limpia y sosténjelo en su lugar pellizcando la base de su cola.

A continuación, preparar los cortapelos y estar listo para tirar rápidamente de ellos lejos si el ratón hace algún movimiento repentino. Afeitar toda la espalda desde el cuello hasta la cola, incluso alrededor de la cola. Ejecuta ligeramente la hoja contra la dirección del crecimiento del cabello para obtener el corte más eficiente.

No presione las pinzas profundamente en la piel, ya que esto puede tenertusiones o cortar. A continuación, preparar la piel para una aplicación de loción depilatoria. Humedezca la piel con una toalla de papel empapada en agua para evitar quemaduras químicas.

Presione ligeramente con suficiente presión para mojar el cabello cortado contra la piel. Luego, mientras la piel está húmeda, frota una pequeña dollop de loción depilatoria en la región afeitada durante 15 a 20 segundos. Una vez aplicada, deja que la loción reaccione con la piel durante 20 a 45 segundos.

Antes de enjuagar la loción, limpie ligeramente algunas lociones en varios lugares para comprobar la reacción. Si la piel es rosada y sin pelo, la reacción es completa. A continuación, agarre el ratón para lavarlo.

Usando la mano nonteminante con el pulgar presione hacia abajo la base de su cola contra la palma y cierre los otros dedos. Luego, con la nariz del ratón hacia arriba y lejos del agua, deje que el agua corra sobre la espalda del animal. Luego rápidamente, pero suavemente, frota la parte posterior del ratón con la otra mano para lavar la loción.

Después de retirar toda la crema depilatoria, seque la piel con una toalla de papel. Es importante no aplicar loción en las orejas, la cola o en cualquier lugar cerca de la cara. Si esto sucede, limpie inmediatamente la loción con una toalla húmeda y luego corra agua sobre el ratón para evitar daños en estas áreas.

Si se observa algún parche oscuro después de usar la crema, vuelva a aplicar la crema a esas áreas. Los parches oscuros de la piel crecerán el cabello más rápido durante toda la duración del experimento. Así que corta el cabello cada tres a cinco días cuando sea necesario.

Un parche o dos que no están sobre el sitio de la herida es aceptable, pero si la parte posterior del ratón tiene más parches oscuros, no lo utilice para el modelo de herida crónica. Después de quitar el cabello, alberga el ratón solo durante al menos un día antes de herir porque la piel será demasiado sensible de la loción depilatoria. 30 minutos antes de la cirugía, inyectar el ratón con 120 microlitros de buprenorfina intraperitonealmente en PBS estéril.

Todos los volúmenes de este procedimiento suponen un ratón de 60 gramos. 20 minutos antes de la cirugía, inyectar el ratón con 480 microlitros de ATZ intraperitonealmente en PBS estéril. Divida el volumen a ambos lados del abdomen.

Después de administrar el ATZ, coloque el ratón en un pequeño recipiente de plástico encima de una almohadilla de calentamiento caliente hasta que comience la cirugía. Cubra el recipiente pequeño con una toalla de papel para ayudar a contener el calor. El ratón debe calmarse mientras se calienta.

Después de confirmar un estado anestesiado, proceda con la herida. Para comenzar el procedimiento de hirción, rocíe una toallita con 70% de etanol para limpiar la parte posterior del ratón para limpiar el sitio de la herida y la superficie de la piel. No limpie en exceso o habrá riesgo de matar las bacterias presentes en la piel.

El éxito del modelo de herida crónica se basa en condiciones no estériles. Estos ratones no están libres de gérmenes y están alojados en un vivario convencional. El microbioma bacteriano que reside en la piel es crucial para la posterior iniciación y desarrollo de heridas crónicas tras el tratamiento con inhibidores de enzimas antioxidantes.

Ahora considere dónde está el lugar de la herida. Idealmente, utilice el lado dorsal del ratón centrado y lejos de manchas oscuras de la piel. Ahora realice el procedimiento de hiriendo al apósito en 30 a 45 segundos.

Primero presione ligeramente un puñetazo de biopsia de piel de siete milímetros en el sitio de la herida deseado y gire el punzón lo suficientemente profundo como para dejar una impresión del puñetazo. A continuación, excediendo la piel delineada tirando hacia arriba del centro del punzón con pinzas y cortando a lo largo del contorno con tijeras quirúrgicas. Una vez completada, cubra la herida firmemente con media pieza de apósito de película transparente.

Dentro de los 10 minutos de la herida, aplicar una alícuota de 60 microlitros de MSA en PBS estéril y depositar MSA tópicamente sobre la herida. Más tarde, seis horas después de la cirugía, administrar otro hace de buprenorfina. Se pueden administrar dosis adicionales según sea necesario.

El inicio crónico de la herida tiene lugar en menos de seis horas y el margen de la herida se altera visiblemente por el estrés oxidativo. Una herida crónica es una herida que permanece abierta, agrandada en comparación con la herida inicial y contiene biopelícula. Después de 20 días, la herida está en plena cronicidad.

Las bacterias que forman biopelículas que dominan el sitio de la herida incluyen Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, y varias especies de Staphylococcus y Corynebacterium. Estas bacterias también se encuentran en heridas crónicas humanas. Después de ver este video usted debe tener una buena comprensión de cómo crear heridas crónicas en ratones.

Una vez que haya establecido estas heridas crónicas, puede usarlas para investigar muchos de los mecanismos moleculares celulares involucrados en el inicio de la cronicidad de la herida.