Name: Preparando un 68Ga-etiquetada arginina glicina aspartato (RGD)-péptido angiogénesis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Aprende a preparar péptidos RGD marcados con Galio-68 para evaluación biológica en oncología. Este protocolo simplificado permite desarrollar nuevos péptidos radiomarcados para imágenes de angiogénesis.

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Este trabajo fue apoyado por una investigación y programa de desarrollo de la beca nacional investigación Fundación de Corea (NRF) financiada por el gobierno coreano (núm. 2017M2A2A6A02019904).

Todos los experimentos con animales se realizaron cumpliendo con las directrices para el cuidado y uso de animales de investigación en protocolos de actuación aprobados por el Instituto de Corea de radiológica y Comisión de estudios de animales de ciencias médicas. Todos los reactivos y solventes fueron adquiridos y utilizados sin una posterior purificación. NOTA-RGD-péptidos fueron preparados según métodos de literatura15.
PRECAUCIÓN: 68Ga emite positrones y rayos gamma. Todos los experimentos, incluyendo contacto directo o indirecto con las sustancias radiactivas, deben realizarse por capacitado y permitido exclusivamente a personal. Al manipular materiales radioactivos, puede usarse equipo de protección adecuado, blindaje, insignia de Dosímetro de radiación y anillos y un medidor de la encuesta.
1. radiolabeling péptidos RGD con 68GaCl3
Nota: 68Ga (t1/2 = 68 min, β+ = 89% y EC = 11%) se obtuvo de la 68Ga /68generador de Ge.
<ol><li>Eluir el 68GaCl3 del generador con 4 mL de 0.05 M de HCl.</li>
	<li>Purga con nitrógeno gas a 80 ° C por 30 min secar 68GaCl3 (333 BQ, 1 mL) en un frasco de reacción de 5 mL.</li>
	<li>Añadir una solución del péptido RGD (100 μg) en acetato de sodio de 1 M (100 μl, pH 5-6) al frasco de reacción que contiene 68GaCl3 en el paso 1.2.</li>
	<li>Calentar la mezcla de reacción a 80 ° C durante 5 minutos. A continuación, enfriarlo a temperatura ambiente.</li>
	<li>Purifique el producto crudo con cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Utilice el siguiente sistema: una columna C-18, un caudal de 0,5 mL/min, una pendiente gradiente de acetonitrilo de 1.17%/min (5% - 40% en 30 minutos) y componentes de elución: A = 0.1% de ácido trifluoroacético (TFA) en acetonitrilo, B = 0.1% TFA en el agua. Nota: El HPLC está equipado con un detector del arsenal del fotodiodo y un detector de radiactividad. 68Ga-RGD-péptido fue recogida en un tiempo de retención de 12,5 min (figura 2).</li>
	<li>Purificar la resultante 68Ga-RGD-péptido utilizando un sistema de extracción de fase sólida.<ol>
<li>Pasar la solución a través de un cartucho de fase reversa C18 y lavar con 2 mL de solución salina.</li>
		<li>Eluir el 68Ga-RGD-péptido con 0,7 mL de etanol al 95%. Quite el solvente a 80 ° C bajo nitrógeno durante 20 min y reconstituir con solución salina tamponada con fosfato (PBS) antes de su uso.</li>
		<li>Filtrar el producto radiactivo a través de un filtro estéril de 0,22 μm y formular en 1 mL de solución salina estéril.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Compruebe el rendimiento radioquímico por cromatografía en capa fina de radio (TLC).<ol>
<li>Punto 1 μL en una placa de cromatografía de capa fina instantánea (objetivo, 10 cm de longitud). Desarrollar la placa en una cámara que contiene el eluyente (acuosa cítrico de 0,1 M, pH 5,0) hasta 9 cm de distancia del lugar. Nota: El factor de retención por 68Ga-RGD-péptido es 0 y el factor de retención por 68Ga3 + 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Calcular la actividad específica de final de la relación de la radiactividad correspondiente a la no-radiactividad como MBq/nmol. Nota: Después de la inyección de 100 μl de la formulado 68Ga-RGD-péptido a HPLC, se calculó la cantidad de componente no radiactivo de la curva de calibración estándar con Ga-RGD-péptido no radiactivo.</li>
</ol>2. in Vitro la absorción celular
Nota: Las células de glioblastoma humano de Glioma maligno (U87MG) Uppsala 87 fueron cultivadas en medio modificado Eagle de Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% fetal bovino suero y 1% penicilina-estreptomicina. Las células fueron cultivadas en platos de 150 mm a 37 ° C en una atmósfera humidificada de 5% CO2. Las células fueron cosechadas o separadas por tripsinización: tripsina 0.25% (p/v) y 0,02% (p/v) etilendiaminotetraacético ácido (EDTA) en PBS a 37 ° C durante 3-5 minutos.
<ol><li>Células de semilla U87MG en placas de 6 pozos a una densidad de 1 x 106 células/pocillo.</li>
	<li>Incubar las células con 68Ga-RGD-péptido (111 kBq) a 37 ° C para 30, 60, 90 y 120 minutos preparar muestras por triplicado.</li>
	<li>Lavar las células 2 x con 2 mL de PBS y cosecha por tripsinización. Uso de tripsina 0.25% (p/v) y 0,02% (w/v) ácido etilendiaminotetracético (EDTA) en PBS a 37 ° C durante 3-5 minutos.</li>
	<li>Recoger la suspensión celular (500 μl) y medida en un contador de γ.</li>
	<li>Calcular la absorción por ciento del compuesto por las células % (cuenta en los recuentos de células total).</li>
</ol>3. estabilidad de suero in Vitro
<ol><li>Añadir 500 μl de suero de ratón recién preparada, 500 μl de suero humano y 500 μl de PBS. Incubar la mezcla a 37 ° C por 2 h.</li>
	<li>OBJETIVO evaluar los intervalos de tiempo especificado (30, 60, 90 y 120 min). Alícuota de 1-2 μl de la mezcla en la placa del objetivo del punto (fase móvil: ácido cítrico de 0.1 M). Desarrollar la placa como en el paso 1.7. Nota: 68Ga3 + se espera que se mueven con el frente del solvente, mientras que el compuesto marcado permanecerá en el origen.</li>
</ol>4. determinación de la lipofilia
<ol><li>Añadir 68Ga-RGD-péptido (3.7 MBq, 3.7 μL) en el sistema octanol-PBS (1:1, v/v, 1 mL total).</li>
	<li>Se mezclan los frascos vigorosamente durante 5 min a temperatura ambiente y centrifugar a 10.000 x g durante 5 min a temperatura ambiente.</li>
	<li>Tomar 100 μl muestras de cada capa y medir la radioactividad con un contador de γ. El valor reportado log P se basa en el promedio de tres muestras.</li>
</ol>5. tumor modelo
Nota: Ratones desnudos de BALB/c (6-8 semanas de edad, mujer, n = 23) se utilizaron para este estudio. Los ratones fueron posteriormente utilizados para estudios PET (n = 3) y biodistribución (n = 20) cuando los volúmenes de tumor llegaron a 200-300 mm3 (1-2 semanas después de la implantación).
<ol><li>Carga de células tumorales en 28 G, jeringas de insulina 1/2 pulgada.</li>
	<li>Inyectar células U87MG (5 x 106) en 100 μl de PBS en la región del brazo izquierdo.</li>
	<li>Anestesiar el ratón con 2% de isoflurano en gas de oxígeno durante la inyección de la célula.<ol>
<li>Asegúrese de que el ratón ha sido anestesiado por la pérdida de la retirada del pedal reflex siguiente pellizcos con pinzas entre los dedos de la pata trasera derecha. No descuide un animal hasta que ha recuperado la conciencia suficiente para mantener el recumbency esternal.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. cuantificación in Vivo de αvβ3 integrina usando PET
<ol><li>Anestesiar los ratones con 2% de isoflurano en oxígeno.<ol>
<li>Asegúrese de que el ratón ha sido anestesiado por la pérdida de la retirada del pedal reflex siguiente pellizcos con pinzas entre los dedos de la pata trasera derecha. No descuide un animal hasta que ha recuperado la conciencia suficiente para mantener el recumbency esternal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque la cabeza en el centro del pórtico del animal doméstico.</li>
	<li>Administrar por vía intravenosa 68solución Ga-RGD-péptido (7.4 MBq, 200 μL) al xenoinjerto ratón modelo a través de la vena de la cola durante 1 minuto.</li>
	<li>Al mismo tiempo, realizar una exploración del animal doméstico en el modo de lista (análisis dinámico) de 150 min. Nota: Los datos brutos de la PET fueron reconstruidos por un definido por el usuario marco de tiempo (es decir, cada 30 minutos). Después de la exploración del animal doméstico, una exploración de la tomografía micro computada (CT) (50 kVp de rayos x, 0.16 mA) se llevó a cabo para la corrección de atenuación.</li>
</ol>7. Ex Vivo biodistribución
<ol><li>68Ga-RGD-péptido (0,37 MBq, 200 μL) se inyecte en la vena de la cola del modelo de xenoinjerto murino. Anestesiar el ratón con 2% de isoflurano en gas de oxígeno durante las inyecciones. Nota: Ratones BALB/c nude, como se describe en la sección 5, fueron divididos en cuatro grupos y sacrificados en diferentes puntos temporales (n = 5 por grupo).</li>
	<li>Despertar los ratones inmediatamente después de la administración de 68Ga-RGD-péptido y sacrificar a los 30, 60, 90 y 120 min postinjection con la eutanasia de dióxido de carbono. Nota: Se extrajeron los tejidos de interés. Las metas eran la sangre, músculo, corazón, pulmón, hígado, bazo, estómago, intestino, riñones, hueso y tumor.</li>
	<li>Peso del tejido y medir la radioactividad con un contador de γ. Nota: Los resultados se expresaron como el porcentaje de dosis inyectada por gramo de tejido (% ID/g).</li>
</ol>

<ol><li>Friedlander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+Two+Angiogenic+Pathways+by+Distinct+alpha+v+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins.</a> Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).</li>
<li>Janssen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Targeting+with+Radiolabeled+alpha+v+beta+3+Integrin+Binding+Peptides+in+a+Nude+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nude Mouse Model.</a> Cancer Research. 62, 6146-6151 (2002).</li>
<li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+%CE%B1v%CE%B23+integrin+directed+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as αvβ3 integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (1), 128-135 (2002).</li>
<li>Garanger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+multifunctional+molecular+conjugate+vector+for+targeting%2C+imaging%2C+and+therapy+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">New multifunctional molecular conjugate vector for targeting, imaging, and therapy of tumors.</a> Molecular Therapy. 12 (6), 1168-1175 (2005).</li>
<li>Dijkgraaf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+integrin+expression+in+tumours+with+68Ga-labelled+mono-%2C+di-+and+tetrameric+RGD+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of αvβ3 integrin expression in tumours with 68Ga-labelled mono-, di- and tetrameric RGD peptides.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 38 (1), 128-137 (2011).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+cyclic+RGD+dimers+with+Gly3and+PEG4linkers%3A+Promising+agents+for+tumor+integrin+%CE%B1v%CE%B23+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled cyclic RGD dimers with Gly3and PEG4linkers: Promising agents for tumor integrin αvβ3 PET imaging.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 36 (6), 947-957 (2009).</li>
<li>Li, Z. B., Chen, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+multimeric+RGD+peptides+for+microPET+imaging+of+integrin+%CE%B1v%CE%B23expression%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled multimeric RGD peptides for microPET imaging of integrin αvβ3expression.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 35 (6), 1100-1108 (2008).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isomerism+and+solution+dynamics+of+90Y-labeled+DTPA-biomolecule+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isomerism and solution dynamics of 90Y-labeled DTPA-biomolecule conjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 12 (1), 84-91 (2001).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylated+RGD-containing+peptides%3A+tracer+for+tumor+targeting+and+angiogenesis+imaging+with+improved+biokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glycosylated RGD-containing peptides: tracer for tumor targeting and angiogenesis imaging with improved biokinetics.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (2), 326-336 (2001).</li>
<li>Sivolapenko, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+metastatic+melanoma+utilising+a+technetium-99m+labelled+RGD-containing+synthetic+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Euroean+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imaging of metastatic melanoma utilising a technetium-99m labelled RGD-containing synthetic peptide.</a> Euroean Journal of Nuclear Medicine. 25 (10), 1383-1389 (1998).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+Integrin+Expression+Using+18+F-labeled+RGD-containing+Glycopeptide+and+Positron+Emission+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Imaging of αvβ3 Integrin Expression Using 18 F-labeled RGD-containing Glycopeptide and Positron Emission Tomography.</a> Cancer Research. 61, 1781-1785 (2001).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+trivalent+metal+ion+complexes+of+the+tetraacetate+derivatives+of+12-%2C+13-+and+14-membered+tetraazamacrocycles%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of trivalent metal ion complexes of the tetraacetate derivatives of 12-, 13- and 14-membered tetraazamacrocycles.</a> Inorganica Chimica Acta. 190 (1), 37-46 (1991).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+the+Fe%28III%29%2C+Ga%28III%29+and+In%28III%29+chelates+of+N%2CN%E2%80%B2%2CN%E2%80%B3-triazacyclononanetriacetic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of the Fe(III), Ga(III) and In(III) chelates of N,N′,N″-triazacyclononanetriacetic acid.</a> Inorganica Chimica Acta. 181 (2), 273-280 (1991).</li>
<li>Shetty, D., Lee, Y. S., Jeong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+radiopharmaceuticals+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled radiopharmaceuticals for positron emission tomography.</a> Nuclear Medicine Molecular Imaging. 44 (4), 233-240 (2010).</li>
<li>Shin, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Preliminary+Evaluation+of+68Ga-NOTA-Biphenyl-c%28RGDyK%29+for+the+Quantification+of+Integrin+%CE%B1v%CE%B23%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Korean+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Preliminary Evaluation of 68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK) for the Quantification of Integrin αvβ3.</a> Bulletin of the Korean Chemical Society. 38 (12), 1415-1418 (2017).</li>
<li>Cai, W., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+Molecular+Imaging+of+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodality Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis.</a> Journal of Nuclear Medicine. 49, suppl2 113-128 (2008).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

En el presente estudio, presentamos un protocolo para preparar un radiopeptide a αvβ3 integrina y su evaluación biológica. Desarrollo de fármacos tradicionales consiste en un procedimiento complicado. Requiere una gran cantidad de material de referencia y un tiempo relativamente largo. Aunque la metodología sugerida no puede sustituir el proceso de evaluación delicado, este sistema puede utilizarse para fines de detección. Propuesta sistema reduciría considerablemente el tiempo y costo.
<p class...

La angiogénesis es un proceso biológico que se caracteriza por el desarrollo de nuevos vasos sanguíneos. Entre muchos factores angiogenetic, αvβ3 integrina se asocia con la invasividad, la integrina se expresa altamente en los vasos del tumor angiogenic porque está ausente en el tejido normal1.
Radiactivos atascamiento del receptor de péptidos con dominio arginina glicina aspartato (RGD), que tiene una alta afinidad hacia los receptores de integrina αvβ3 , se consideran prometedores angiogénesis agentes2,3 la proyección de imagen , 4 , 5 , 6 , 7. se han creado varios radiofármacos para PET y sus propiedades biológicas han sido validados en diferentes modelos animales8,9,10,11. En términos de un radionúclido, 68Ga tiene varias ventajas sobre otros radioisótopos. En primer lugar, tiene una alta accesibilidad para los usuarios y es económicamente ventajosa porque no se requiere de un ciclotrón. En segundo lugar, radiofármacos basados en Ga 68producen alta resolución espacial en comparación con la tomografía computada de la emisión del solo-fotón (SPECT), permitiendo la cuantificación más exacta. Por último, el período de minutos 67,71 68Ga puede ser suficiente para la preparación de pequeños péptidos o proteínas.
Para producir un complejo estable con 68Ga, se han desarrollado muchos queladores. Quelantes del representante son 1,4,8,11-tetraazacyclotetradecanetetraacetic ácido (TETA), ácido 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacético (DOTA), ácido 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacetic (NOTA), dietilentriaminopentaacético ácido (DTPA) y N, N'-di(2-hydroxybenzyl) etilendiamina-N, N'-ácido diacético (HBED). NOTA se ha divulgado para formar un complejo altamente estable con 68Ga (registro estabilidad constante 30.98)12,13,14.
El propósito del presente estudio es proporcionar un protocolo conciso para el desarrollo de un nuevo radiopeptide (figura 1). Por ejemplo, preparamos 68Ga-labeled RGD-péptidos y métodos actuales para la evaluación biológica de estos análogos en un modelo de xenoinjerto.

<table><tbody><tr><td>68Ga/68Ge generador</td><td>ITG</td> <td>Company-10</td> <td>mCi&nbsp;</td></tr><tr><td>Solución de cloruro de hidrógeno</td><td>Sigma-aldrich</td><td>84429</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de sodio</td><td>Sigma-aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>C18 cartucho de fase inversa</td><td>Waters</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>0.22-&mu; m filtro estéril</td><td>Milllipore</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>escáner Radio-TLC</td><td>Bioscan</td><td>AR2000</td><td></td></tr><tr><td>Papel ITLC</td><td>Agilent</td><td>SGI001</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico</td><td>Sigma-aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td> Sistema <td>Waters-Waters</td> <td>1525 que contiene bomba binaria, matriz de fotodiodos (Waters 2998), detector de radiactividad (Raytest, Gabi)</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrilo</td><td>J.T. Baker</td><td>14-650-359</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético</td><td>Sigma-aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle media&nbsp;</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>suero fetal bovino</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>matraces T175&nbsp;</td><td>Corning</td><td>CLS431080</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>penicilina-estreptomicina</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15240112</td><td></td></tr><tr><td>&gamma;-counter</td><td>Perkin Elmer-1480</td><td></td> <td>Wizard 3</td></tr><tr><td>Jeringa Insunlin</td><td>Becton Dickinson</td><td>326105</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de sininga</td><td>Harvard Aparato</td><td>70-4500</td><td></td></tr><tr><td>micro-PET/CT</td><td>Siemens Inveon</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

preparando un 68ga-etiquetada arginina glicina aspartato (rgd)-péptido angiogénesis

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide for Angiogenesis

La αvβ3 integrina es una molécula de adhesión heterodiméricos implicados en la angiogénesis y migración de células del tumor. La integrina se sobreexpresa en células endoteliales de tumor angiogenic, donde por lo general tiene una baja concentración. Esta expresión específica de αvβ3 , es un biomarcador válido para antiangiogénicos y de drogas. Como una modalidad de proyección de imagen funcional, tomografía por emisión de positrones (PET) proporciona información acerca de bioquímicos y fisiológicos los cambios en vivo, debido a su alta sensibilidad única a escala nanomolar. Por lo tanto, radiofármacos PET basados en radiometal han recibido gran atención para la cuantificación no invasiva de la angiogénesis del tumor. Este documento ofrece un protocolo sistémico para preparar un nuevo péptido radiometal etiquetados para la evaluación de la angiogénesis. Este protocolo contiene información sobre confiabilidad radioquímica, lipofilia, captación celular, estabilidad del suero y propiedades farmacocinéticas. 68Ga-RGD-péptido es uno de los ligandos de mascota representativos hacia αvβ3 integrina. Aquí, presentamos un protocolo para preparar una 68Ga-RGD-péptido y la evaluación de su eficacia biológica.

La quelación de 68GaCl3 con el péptido-RGD-NOTA era sencilla, y el rendimiento radiolabeling fue de 99%. Impurezas de reacción fueron quitadas con éxito tal como se muestra en la figura 2. La pureza radioquímica de 68Ga-RGD-péptido fue mayor al 99% y actividad específica al final de la síntesis fue 90-130 MBq/nmol (figura 3).
La captació...

La αvβ3 integrina es un tipo de proteína de adhesión que se expresa altamente en las células endoteliales activadas en la angiogénesis. Por lo tanto, evaluar la integridad de la integrina es de gran interés en oncología. Aquí, presentamos un método para preparar 68Ga-con la etiqueta radiopeptides y un método para evaluar su eficacia biológica.

Preparando un 68Ga-etiquetada arginina glicina aspartato (RGD)-péptido angiogénesis

The &#945;v&#946;3 integrin is a heterodimeric adhesion molecule involved in tumor cell migration and angiogenesis. The integrin is overexpressed in ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la preparación del Gallium 68 etiquetado RGD-Peptide y el método para la evaluación biológica de sus análogos. La principal ventaja de esta técnica es que es un protocolo sistémico simple para el desarrollo de un nuevo péptido radiometal.etiquetado. Demostrando el procedimiento estará Ki-Hye Jung, un post-doc de nuestro instituto.Comience por usar 0,5 ácido clorhídrico molar para eluir eletitar tricloruro de galio radiomarcado de un generador de germanio de galio radiomarcado. Purgar el compuesto en un vial de reacción de cinco mililitros con gas nitrógeno a 80 grados centígrados. Seguido por la adición de 100 microgramos de acetato de glicina de arginina o péptido RGD en un acetato de sodio molar al compuesto seco.Caliente la mezcla de reacción a 80 grados Celsius durante cinco minutos antes de permitir que la mezcla se enfríe a temperatura ambiente. Para purificar el producto crudo con cromatografía líquida de alto rendimiento, añada la solución a una columna C18 y pase la solución a través de un cartucho de fase inversa C18. Lavar el cartucho con dos mililitros de solución salina y eluir el péptido radiomarcado con 0,7 mili

preparing-68ga-labeled-arginine-glycine-aspartate-rgd-peptide-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Adultos normales tejido vascularizado mamífero que carece de la angiogénesis fisiológica y que no ha sido expuesto a la intervención quirúrgica se utiliza para estudiar: (i) el inicio y desarrollo de la angiogénesis tras la administración intraperitoneal de agentes de prueba, y (ii) la modificación de la angiogénesis tras la administración sistémica de seleccionados agentes de pruebas.

Rata mesenterio ensayo angiogénesis

Para demostrar la imagen molecular del cáncer de MR con un pequeño péptido agente de contraste de MRI específica a las proteínas plasmáticas coagulados en estroma tumoral en un modelo de cáncer de próstata de ratón dirigido.

MR Imagen Molecular del cáncer de próstata con un agente de contraste dirigidos Pequeño Molecular CLT1 Péptido

Un procedimiento para el aislamiento de EOB-DTPA y la posterior formación de complejos con Ga naturales (III) y 68 Ga se presenta en este documento, así como un análisis exhaustivo de todos los compuestos y las investigaciones sobre el etiquetado de eficiencia, la estabilidad in vitro y el octanol / agua coeficiente de distribución del complejo radiomarcado.

Las investigaciones en el complejo Ga (III) de EOB-DTPA y su<sup&gt; 68</sup&gt; Ga radiomarcados analógica

Presentamos un protocolo para la síntesis de hidrogeles funcionalizados con RGD como dispositivos para la administración de células y fármacos. El procedimiento consiste en la cicloadición de alquina-azida catalizada por cobre (CuAAC) entre el ácido poliacrílico modificado con alquino (PAA) y un derivado de RGD-azida. Los hidrogeles se forman mediante policondensación asistida por microondas y se investigan sus propiedades fisicoquímicas.

La síntesis de hidrogeles funcionalizado-RGD como una herramienta para aplicaciones terapéuticas

Se presenta un protocolo para la síntesis de guanidinas modificados con alquilo basados ​​en el uso de los precursores correspondientes.

Modificación y funcionalización del grupo guanidina por Precursores adaptado

Un protocolo para la síntesis de un 1, 2-dithiolane modificada de péptidos y la caracterización de las estructuras supramoleculares resultantes del peptide uno mismo-Asamblea.

Síntesis y caracterización de 1, 2-Dithiolane modifican uno mismo-montaje de péptidos

Se describen técnicas para generar una biblioteca de péptidos cortos que pueden activar los mastocitos a través del receptor MRGPRX2. Las técnicas asociadas son fáciles, económicas y se pueden extender a otros receptores celulares.

Detección de péptidos que activan MRGPRX2 utilizando células HEK modificadas

TGT surface es una plataforma innovadora para estudiar la diafonía factor de crecimiento-integrina. El diseño flexible de la sonda, la especificidad del ligando de adhesión y la modulación precisa de las condiciones de estimulación permiten evaluaciones cuantitativas sólidas de la interacción EGFR-integrina. Los resultados destacan a EGFR como un mecanismo de integrina de ajuste "mecano-organizador", que influye en el ensamblaje de la adhesión focal y la propagación celular.

Sondas de amarre de medidor de tensión para cuantificar la mecánica y la adhesión de la integrina mediada por el factor de crecimiento

Este estudio desarrolló un método no invasivo y en tiempo real para evaluar la distribución del ligando de muerte programada 1 en todo el cuerpo, basado en imágenes tomográficas por emisión de positrones del antagonista del D-docapéptido [68Ga]. Esta técnica tiene ventajas sobre la inmunohistoquímica convencional y mejora la eficiencia de la identificación de los pacientes apropiados que se beneficiarán de la terapia de bloqueo de puntos de control inmunitario.

Desarrollo de un trazador PET de péptido D marcado con 68galios para la obtención de imágenes de la expresión del ligando de muerte programada 1

Esta investigación describe el proceso automatizado para la producción de [68Ga]Ga-3BP-3940 con el sintetizador GAIA V2, para la obtención de imágenes PET de la proteína de activación de fibroblastos. También se presentan los resultados de las pruebas de control de calidad realizadas en tres lotes de ensayo.

Preparación automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940 en un módulo de síntesis para la obtención de imágenes PET del microambiente tumoral

Aprende a preparar péptidos RGD marcados con Galio-68 para evaluación biológica en oncología. Este protocolo simplificado permite desarrollar nuevos péptidos radiomarcados para imágenes de angiogénesis.

Preparando un ⁶⁸Ga-etiquetada arginina glicina aspartato (RGD)-péptido angiogénesis

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