Name: Aplicación de la tecnología de microfluidos Biochip para detectar suero alergénico-específicos de la inmunoglobulina E (sIgE) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Aprende a detectar inmunoglobulina E específica sérica mediante un sistema de microfluidos con quimioluminiscencia. Este método de bajo costo requiere menos volumen de suero y facilita el diagnóstico de alergias respiratorias, alimentarias y cutáneas.

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Los autores agradecen profesor Mei Jiang por su ayuda en el análisis estadístico y el Sr. Hammer Tsui en la preparación del manuscrito. Este estudio fue apoyado por el Guangzhou ciencia y Technology Foundation (201804020043) y la nacional Ciencias naturales Fundación de China (NSFC 81572063 y NSFC 81802076). Los grupos de financiación de acuerdo con el diseño del estudio, análisis de datos, preparación de manuscrito y publicación. Ninguna otra financiación fue recibida para este estudio.

Este estudio y el uso de muestras de suero fueron aprobados por el Comité de ética de la primera afiliada Hospital de Guangzhou Universidad médica (GYYY-2016-73). Todos los participantes han dado su consentimiento por escrito de forma independiente o a través de sus padres (en el caso de los niños).
1. básica información del grupo de estudio
Nota: El repositorio de información de la alergia del estado clave de laboratorio de enfermedades respiratorias (aire-SKLRD) es un banco grande de suero dentro del Hospital Instituto de Guangzhou de respiratorio (GIRH). Iniciado en la última década, la SKLRD de aire ya ha comenzado a recolectar y almacenar muestras de suero de pacientes con enfermedades alérgicas, junto con su información clínica (tabla 1)4,5. El presente estudio se realizó con sueros de aire-SKLRD.
<ol><li>Base de datos de aire SKLRD para sueros recogidos de enero de 2015 a de 2018 junio y seleccionamos a los pacientes con enfermedad alérgica, que fueron encontrados para ser sensibles a los alérgenos comunes en la región.</li>
	<li>Asegurar que todos los pacientes seleccionados tienen enfermedades relacionadas con la alergia, tales como rinitis alérgica y asma, dermatitis alérgica, o urticaria, y que el suero de estos pacientes contiene múltiples sérica alergeno-específica, inmunoglobulina E, (sIgE) sensibilizaciones de los alergenos comunes en esta región, detectados por el sistema 1.</li>
	<li>Excluir a los pacientes con historias clínicas incompletos, los perdidos durante el seguimiento, los que se niegan a dar su consentimiento informado con respecto al uso de sus muestras de suero para propósitos científicos, ésos con una inmunodeficiencia identificada, ésos actualmente en inmunoterapia o agentes inmunomoduladores, o los que se encuentran que las infecciones parasitarias.</li>
	<li>Asegúrese de que ninguna prescripción de tratamiento o fármaco fue dado antes de la colección del suero con el fin de minimizar la interferencia en los resultados del laboratorio. Todas las muestras de suero que no cumplan los criterios fueron rechazadas.</li>
</ol>2. estudio de flujo y las mediciones de interés
Nota: El sistema de microfluidos necesita 100 μl del suero para la determinación de los 19 alérgenos. Se extrajo sangre venosa (5 mL) de cada paciente usando un recipiente vacío de sangre conteniendo gel de separación. Después de centrifugar 10 min a 1.000 x g, se recolectó la capa superior para la prueba. Suero se almacenó a-80 ° C. Antes de la prueba, el suero se mantuvo a temperatura ambiente durante 30 min y fue sacudido con un mezclador de tipo vórtex. Ciclos repetidos de congelación y descongelación se evitaron.
<ol><li>Prueba sobre todo las muestras de suero para sIgEs a todo alergenos del Dermatophagoides pteronyssinus (d1) Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), caspa de gato (e1), caspa de perro (e5), zacate Bermuda (g2), timothy grass) G6), cucarachas (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), Ambrosia (w1), clara de huevo (f1), leche (f2), trigo (f4), maní (f13), soja (f14), almendra (f20), cangrejo (f23) y camarón (f24). Siga las instrucciones en la sección 3. Nota: sIgE determinación se realizó con la IgE alergeno-específica análisis kit (véase la Tabla de materiales) y medido por un analizador de quimioluminiscencia.</li>
	<li>Seleccionar al azar tres muestras entre las muestras con suficiente suero (por lo menos 900 μL) para un estudio de reproducibilidad. Mantener todas las condiciones sin cambios, medir los tres sueros para alérgenos sIgEs diariamente durante 9 días consecutivos (es decir, un total de 100 x 9 = 900 μl de suero).</li>
</ol>3. procedimiento de prueba de semi-automatización del sistema de microfluidos
Nota: El sistema 2 es la integración de la tecnología de microfluidos automático, microarrays de proteínas, análisis de luz fría, paralelo análisis de IgE y tecnología de procesamiento de imagen. El protocolo de pruebas se divide en cuatro partes: preparación de los equipos, carga de la muestra, incubación y medición.
<ol><li>
Preparación de los equipos
	<ol>
<li>Encienda el PC y el poder del analizador. Nota: El interruptor está a la izquierda de la base.</li>
		<li>Inicie el programa LabIT en el PC. Si aparece la ventana de advertencia de Marco oscuro , haga clic en Aceptar para ejecutar la prueba de fugas. Después, haga clic en el logo del centro para entrar en la interfaz de la operación. Nota: El sistema recordará al usuario para ejecutar la prueba de fugas si está inactivo durante más de 24 h.</li>
		<li>Compruebe la temperatura de reacción y el CCD (dispositivo de carga acoplada) Temp en la esquina inferior derecha de la pantalla. Se eleva la temperatura de reacción a 37 ° C ± de 1 ° C en unos 10 minutos, y la temperatura de la CCD debe caer hasta-15 ° C ± 1 ° C.</li>
		<li>Ejecutar la prueba de fuga después de que la temperatura de la CCD ha bajado a-15 ° C ± 1 ° C. Antes de ejecutar la prueba de fuga, asegúrese de que no hay otros artículos dejados dentro el instrumento y cierre la puerta. Haga clic en herramientas | Prueba del sistema | Prueba de fugas. No abra la puerta durante la prueba. Cuando la prueba haya terminado, aparecerá la ventana de informe.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Carga de la muestra
	<ol>
<li>Añadir 620 μl de tampón de lavado, 120 μl de solución amortiguadora de bloqueo, 60 μL de conjugados de A y B, 60 μL de sustrato A y B y 100 μl de las muestras de suero para el correspondiente depósito de reactivo en el cartucho de microfluidos.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubación
	<ol>
<li>Clic en ID del cartucho, utilice el escáner de código de barras para analizar el número de serie del cartucho, introduzca el ID de muestra, ponga el cartucho en el analizador y cierre la puerta y analizador y Ejecutar para iniciar el análisis.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Medición
	<ol>
<li>Exportar los resultados a software estadístico (por ejemplo, Excel) después de la medición. Nota: Después de 30 min de incubación, el analizador realiza la medición y automáticamente informa el resultado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Conmutación en el analizador
	<ol>
<li>Para mantenimiento de rutina, después de terminar la prueba, retire el cartucho y el analizador hierro calefacción interna y electroimán ligeramente con alcohol del 75%. Nota: No presione fuerte o sacudir el electroimán.</li>
		<li>Cierre la ventana LabIT. Se abrirá la ventana de control de temperatura. Se cerrará automáticamente cuando el CCD se calienta en el modo de protección de 5 ° C. Entonces, será seguro desconectar la alimentación del analizador y PC. Nota: No cierre manualmente el control ventana antes de que la temperatura de la CCD ha aumentado a 5 ° C de la temperatura y no apague el analizador ni el PC durante el calentamiento de la CCD.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. definición de reactividad sIgE
Nota: Para una muestra de suero sin diluir, el rango de detección de la 2 de sistema es 0.21 – 100 IU/mL.
<ol><li>Basado en el valor de umbral de 0,35 UI/mL, considerar un nivel sIgE superior a 0,35 UI/mL para ser positivo6,7. Tarifa de la reactividad de las pruebas sIgE como8: clase 1 (≥0.35 y < 0,70 UI/mL), clase 2 (≥0.70 y < 3,50 UI/mL), clase 3 (≥3.50 y < 17,50 UI/mL), clase 4 (≥17.50 y < 50,00 UI/mL), clase 5 (≥50.00 y < 100,00 UI/mL) y la clase 6 (≥100.00 UI/mL).</li>
</ol>5. estadístico análisis
<ol><li>Utilice un histograma para mostrar la tasa positiva de los 19 alergenos (figura 1) y la curva de Levey-Jennings para demostrar la capacidad de repetición de la detección de sistema (figura 2)9.</li>
	<li>Seleccionar los tres más comunes alergenos inhalantes y alérgenos alimentarios (en total, seis alergenos) y comparar los resultados al sistema 1 para evaluar su rendimiento diagnóstico clínico10,11. Incluyen la tasa de concordancia, sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo y el área bajo el receptor funcionando curva característica (ROC) (AUC) como los criterios de evaluación.</li>
	<li>Aplicación de análisis de correlación de Spearman12 para describir correlaciones entre los dos sistemas y utilizar el valor kappa de consistencia. Categorizar el valor de kappa como casi perfecto (0,8 – 1,0), sustancial (0,6 – 0,8), moderada (0,4 – 0,6), Feria (0.2 – 0.4) o pobre (< 0,2)13. Uso de análisis estadístico SPSS 23.0 y MedCalc 11.0 y definir P < 0.05 como significación estadística.</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Similar a los resultados de otros muchos estudios15,16,17, los resultados del sistema de microfluidos basado en sueros de pacientes alérgicos 293 demostró que casa los ácaros del polvo (como D. pteronyssinus, D. farinaey B. tropicalis) son los principales alergenos inhalantes lleva a enfermedades alérgicas en sur de China, mientras que para alimentos, leche, maní, camarón y cangrejo son los alergenos ...

La prevalencia de las alergias ha aumentado de manera constante en las últimas décadas y afecta a 20% - 30% de la población mundial1. Identificación de los alergenos causales tiene gran importancia en el manejo de las enfermedades. En China, ya que no hay pruebas del pinchazo de la piel in vivo registrado en el país, determinación in vitro de IgE específicos del suero es la más importante herramienta comúnmente utilizada para alergia de tipo I el diagnóstico2. Esto es similar a las prácticas en el mundo occidental, pero aunque el sistema ImmunoCAP (sistema 1), un sistema de base de enzima-ligado del inmunosorbente de la fluorescencia, es percibido como el estándar de oro para el diagnóstico de alergia in vitro3, su uso en China es muy limitada debido a su alto precio equipo y reactivo. Por lo tanto, es urgentemente un nuevo sistema de diagnóstico de alergias alternativa con una alta relación calidad-precio.
El sistema BioIC (sistema 2) es un sistema de cartucho de microfluidos basado en el principio de quimioluminiscencia para ensayos multiplexados de suero específico IgE. Con un tamaño de 7 cm x 4 cm, el cartucho de microfluidos se compone de tres capas de plástico moldeado por inyección. La parte superior es de policarbonato transparente de 3 mm de grosor que lleva buena estabilidad durante los procesos de Asamblea termal. Junto con la capa de 3 mm de espesor inferior hecha de un copolímero de acrilonitrilo, butadieno y estireno (ABS), sandwiches los 0.5 mm de espesor capa intermedia hecha de caucho de silicona. Color negro, la capa media ofrece fondo inferior durante la detección de la quimioluminescencia. En la parte superior del gel de silicona, se rocía una fina capa de nitrocelulosa membrana (NC) en la posición correspondiente a la zona de reacción, que permite la localización de diferentes proteínas alergénicas. El propósito de este estudio es evaluar el rendimiento clínico del sistema de microfluidos para la determinación multiplexado de alergénico-específicos de IgE en suero.

<table><tbody><tr><td>Agnitio BioIC Analyzer</td><td>Agnitio Science & Tecnología (Taiwán, China)</td><td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Kit de detección de IgE específica de alérgenos</td><td>Agnitio Science & Tecnología (Taiwán, China)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Cartrideg Placa de colocación</td><td>Agnitio Science & Tecnología (Taiwán, China)</td><td>T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Dispensador de reactivos</td><td>Agnitio Science & Tecnología (Taiwán, China)</td><td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>Imagen máquina de código de barras bidimensional</td><td>Agnitio Science & Tecnología (Taiwán, China)</td><td>Paquete de software NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>, LabIT</td><td>Agnitio Science & Tecnología (Taiwán, China)</td><td>Versión 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-5 Mezclador de vórtice</td><td>Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd.</td><td>VÓRTICE-5</td><td></td></tr></tbody></table>

aplicación de la tecnología de microfluidos biochip para detectar suero alergénico-específicos de la inmunoglobulina e (sige)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Enfermedad alérgica es común en adultos y niños. Identificación de los alergenos causales es importante en la prevención y manejo de la enfermedad. Sin embargo, carece de un sistema de medición específicos de la inmunoglobulina E (IgE) con una alta relación calidad-precio en China continental, especialmente en los hospitales de atención primaria. Este documento describe los procedimientos de principio y funcionamiento de la utilización de un sistema de quimioluminiscencia basado en el cartucho de microfluidos para detectar IgE alergeno-específica en suero. Los resultados fueron comparados con los de ImmunoCAP (sistema 1), el estándar industrial, y se evalúa la reproducibilidad del sistema para detectar a pacientes sensibilizados a los alergenos comunes. Los resultados mostraron que en comparación con ImmunoCAP (sistema 1), el sistema BioIC (sistema 2) tiene buena precisión y sensibilidad en la detección de suero específico IgE contra alergenos inhalantes y alimentos distintos pero con un costo significativamente menor. Puede servir como una buena alternativa en los hospitales de atención primaria en la China continental que tienen baja rentabilidad financiera del sistema 1.

Tasas positivas para los alergenos comunes 19 Los resultados de 293 sueros se muestran en la figura 3. Entre todos los alergenos inhalantes, D. farinae tuvo la mayor tasa de positiva (80.89%, 273/293), seguido por D. pteronyssinus (78.84%, 231/293). Entre los alérgenos alimentarios, el cangrejo tiene la mayor tasa positiva (20,48%, 60/293), seguido de 13,65% (40/293) de camarón. La tasa total positiva para alerge...

Este papel presenta un protocolo para la detección específica de suero, inmunoglobulina E, con un sistema de quimioluminiscencia basado en cartucho de microfluidos y la evaluación de su utilidad en diagnósticos de alergia.

Aplicación de la tecnología de microfluidos Biochip para detectar suero alergénico-específicos de la inmunoglobulina E (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

El sistema de tecnología microfluídica biochip es una sección basada en cartucho microfluídico que utiliza el principio de quimiuminescencia para el asequido del espectro sérico IGE. En comparación con otros métodos de detección, los sistemas bioIC tienen las ventajas de ser de bajo costo y requerir menos suero para detectar IGE sérico. Las implicaciones de esta técnica tienden al diagnóstico de enfermedades alérgicas como la rinitis y el asma, ya que muchos de estos pacientes están sensibilizados a alérgenos detectables comunes.Aunque este método puede proporcionar información sobre las enfermedades de alergia respiratoria, también se puede aplicar a otras situaciones, como alergias a los alimentos y a la piel. Como esta técnica es más fácil de usar, y tiene un método reducido para la formación del operador, las personas nuevas en el sistema pueden aprender a usarla rápidamente. La demostración vívida de este asunto es crítica, ya que determina si la prueba es exitosa y requiere un funcionamiento manual hábil.Para analizar muestras de suero en busca de anticuerpos de inmunoglobulina E sérica a alérgenos enteros, seleccione al azar tres muestras con al menos 900 microlitros de suero y tome el chip del kit y numerarlo. A continuación, encienda el ordenador y la alimentación del analizador. Inicie el programa de TI de laboratorio en el equipo.Si aparece la ventana de advertencia de marco oscuro, haga clic en Aceptar para ejecutar una prueba de fugas y, a continuación, haga clic en el logotipo central para entrar en la interfaz de la operación. Compruebe la temperatura de reacción y el dispositivo acoplado de carga o la temperatura CCD, la temperatura de reacción debe subir a 37 más o menos un grado centígrado en unos diez minutos y la temperatura CCD debe bajar a menos 15 más o menos un grado de centígrado. Cuando la temperatura ccD haya bajado a menos 15 más o menos un grado centígrado, confirme que no quedan otros elementos dentro del instrumento y cierre la puerta.A continuación, haga clic en herramientas, prueba del sistema, prueba de fugas. Cuando finalice la prueba, aparecerá la ventana del informe. A continuación, cargue 620 microlitros de tampón de lavado, 120 microlitros de tampón de bloqueo, 60 microlitros de conjugados A y B, 60 microlitros de sustratos A y B, y 100 microlitros de cada muestra de suero en los tanques de reactivos correspondientes en el cartucho microfluídico.Después de hacer clic en el ID del cartucho, utilice el escáner de código de barras para escanear el número de serie del cartucho e introduzca el ID de muestra.A continuación, coloque el cartucho en el analizador, cierre la puerta y haga clic en el analizador y ejecute para iniciar el análisis. Al final del análisis, exporte los resultados a un programa de software estadístico adecuado y retire el cartucho del analizador. Limpie ligeramente la plancha de calentamiento interno y el electroimán del analizador con un 75 por ciento de alcohol y cierre la ventana de TI del laboratorio.La ventana de monitoreo de temperatura aparecerá y se cerrará automáticamente cuando el CCD se caliente hasta el modo de protección de cinco grados celsius, momento en el que es seguro apagar el analizador y el ordenador. El sistema microfluídico produce resultados repetibles, como lo demuestran estos datos para la caspa de gato, la caspa de perro y la cucaracha después de nueve rondas de pruebas. Como se observó, todos los datos están dentro del rango de dos desviaciones estándar, lo que es consistente con el error clínico máximo permitido.Como se espera de las tasas de positividad de los alérgenos, todos los resultados de la evaluación de los alérgenos inhalantes son superiores a los alérgenos alimentarios. Dado que el área debajo de los valores de curva muestran un rango de 0,613 a 0,984, y el área debajo de los valores de curva para los tres alérgenos inhalantes es mayor que 0,950, se puede concluir que el sistema dos tiene una alta precisión con referencia al sistema uno. El análisis de consistencia para los dos sistemas revela que los valores kappa para los tres inhalantes son todos mayores que los valores kappa para los alérgenos alimentarios que en general caen por debajo de 0,4.En estas gráficas de dispersión construidas con dos resultados del sistema a lo largo del eje X y el sistema uno resulta a lo largo del eje Y, se puede observar la distribución de la concentración de inmunoglobulina E sérica de los dos sistemas para seis alérgenos diferentes. Antes de iniciar la detección, compruebe siempre la reacción y las temperaturas CCD, ya que están vinculadas a la precisión de la prueba. Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como el diagnóstico resuelto por componentes para responder preguntas adicionales sobre la estandarización cruzada de alérgenos y la coserialización.La tecnología de chip microfluídico se ha aplicado con éxito en el campo del diagnóstico de alergias para abordar problemas como suero inadecuado y alto costo médico Al trabajar con suero humano, los síntomas pueden ser determinantes peligrosos. El uso del equipo de protección personal adecuado y otras precauciones siempre deben tomarse durante el desarrollo de este procedimiento.

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Investigación

JoVE Journal

Medicine

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El video muestra un ensayo basado en células para detectar la inmunoglobulina G anti-acuaporina-4 utilizando un biochip que contiene células no transfectadas y células transfectadas que expresan acuaporina-4. Este método tiene aplicaciones en el diagnóstico de trastornos del espectro de la neuromielitis óptica, confirmados por una fuerte fluorescencia verde en el biochip.

Un ensayo para detectar la inmunoglobulina G anti-acuaporina-4 sérica

Este video muestra la detección por electroquimioluminiscencia de autoanticuerpos de islotes en suero humano. Los anticuerpos en el suero conectan el antígeno conjugado con rutenio con el antígeno de captura biotinilado, formando complejos que se detectan mediante mediciones de electroquimioluminiscencia.

Detección de autoanticuerpos de islotes humanos mediante un ensayo de electroquimioluminiscencia

Este video muestra un protocolo para detectar inmunoglobulina E específica del suero utilizando un sistema de quimioluminiscencia basado en cartucho microfluídico. Las IgE séricas interactúan con distintos alérgenos inmovilizados en la zona de reacción del cartucho, que posteriormente se detectan con anticuerpos anti-IgE conjugados con peroxidasa y un sustrato quimioluminiscente, lo que permite la detección simultánea de múltiples IgE específicas de alérgenos.

Un sistema de detección basado en cartucho microfluídico para la inmunoglobulina E específica de alérgenos

El trabajo propuesto se evalúa el potencial de diagnóstico de imagen directa y amplificada por resonancia de plasmones superficiales ensayos (SPRI), sobre todo para la detección de la hormona recombinante del crecimiento humano en el suero humano de pinchos, mediante la comparación de SPRI se traduce directamente con comercialmente disponibles inmunoensayo enzimático (ELISA) equipo.

Análisis comparativo de la hormona de crecimiento humano en suero utilizando SPRI, Nano-SPRI y ELISA Ensayos

Describimos aquí un método para generar microarrays de antígenos personalizables que se pueden utilizar para la detección simultánea de autoanticuerpos séricos IgG e IgM de humanos y ratones. Estas matrices permiten la detección cuantitativa y de alto rendimiento de anticuerpos contra cualquier antígeno o epítopo de interés.

Generación de dos colores con antígeno microarrays para la detección simultánea de autoanticuerpos IgG e IgM

Este trabajo describe un protocolo que utiliza un enfoque resuelto por componentes para estudiar la sensibilización a los alérgenos de polen de hierba en una cohorte de pacientes del sur de China con rinitis alérgica y / o asma.

Un enfoque de diagnóstico resuelto por componentes para un estudio sobre los alérgenos de polen de hierba en el sur de China con rinitis alérgica y / o asma

Aquí, presentamos los métodos para la detección de autoanticuerpos del islote humano usando análisis electrochemiluminescence (ECL). El protocolo, utilizado para predecir la diabetes tipo 1, se puede ampliar a detectar autoanticuerpos para otras enfermedades autoinmunes.

Electrochemiluminescence ensayos para autoanticuerpos islote humano

Este trabajo muestra el potencial de la tecnología de glicanos impreso array (PGA) para el análisis de la circulación de los anticuerpos anti-hidratos de carbono en pequeños animales.

Variedad de glicanos impresos: Una técnica sensible para el análisis del repertorio de circulación de los anticuerpos anti-hidratos de carbono en pequeños animales

Ensayo basado en células es un método ampliamente utilizado para detectar la inmunoglobulina del suero de anti-Acuaporina-4 G. Este método podría aplicarse a diagnóstico clínico y las investigaciones científicas de los trastornos del espectro óptico de Neuromielitis óptica.

Suero humano Anti-Acuaporina-4 inmunoglobulina G detección por análisis Cell-based

Aquí presentamos el ensayo de liberación de mediadores, utilizando una línea celular de leucemia basofílica de rata transfectada con el receptor de IgE humano, para simular la degranulación de células efectoras típicamente observadas en reacciones alérgicas tipo 1. Este método investiga la actividad biológica de los alérgenos de una manera altamente sensible, reproducible y personalizable.

Ensayo de liberación de mediadores humanizados como lectura para la potencia de los alérgenos

En línea con la necesidad urgente de detección de diabetes tipo 1, enfermedad celíaca y enfermedad por coronavirus 2019, desarrollamos un ensayo de electroquimioluminiscencia 6-Plex de alto rendimiento para detectar simultáneamente los cuatro autoanticuerpos de los islotes, los autoanticuerpos de transglutaminasa tisular y los anticuerpos contra el dominio de unión al receptor del coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo.

Una detección multiplexada de alto rendimiento para diabetes tipo 1, enfermedades celíacas y COVID-19

Aprende a detectar inmunoglobulina E específica sérica mediante un sistema de microfluidos con quimioluminiscencia. Este método de bajo costo requiere menos volumen de suero y facilita el diagnóstico de alergias respiratorias, alimentarias y cutáneas.

Aplicación de la tecnología de microfluidos Biochip para detectar suero alergénico-específicos de la inmunoglobulina E (sIgE)

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