Name: Instilación intratraqueal de células madre en ratas neonatales a término (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 27 s
Description: Aprende la instilación intratraqueal de células madre mesenquimales en ratas neonatales Sprague-Dawley. Este método permite evaluar la eficacia terapéutica pulmonar de forma rentable y reproducible en modelos neonatales.

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Este estudio fue apoyado en parte por una subvención de Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwán (A-109-008).

Este procedimiento fue aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de Taipei.
NOTA: Los MSC humanos transfectados de forma estable con proteína fluorescente verde (GFP) y genes de la luciasa de luciélula (Fluc) se obtuvieron de una empresa comercial (Tabla de Materiales).
1. Caracterización de MSC humanos con luciosa de luciélub contra incendios y proteína fluorescente verde
<ol><li>Mantener los MSC humanos transfectados con GFP y Fluc en medios completos (mínimo esencial medio de modificación de águila-alfa [-MEM], complementado con 10-15% de suero bovino fetal [FBS], 2 mM de L-glutamina, ng/mL de FGF básico, y PSF) a 37 oC con humedad saturada y 5% de CO2. Células de paso a una confluencia de 70 x 90 %.</li>
	<li>Observe los MSC bajo un microscopio de contraste de fase de fluorescencia (Figura 1A) y analice los niveles de expresión de Fluc y GFP14.</li>
	<li>Caracterice a los MSC mediante el análisis de la expresión de marcadores de CD, incluidos CD44, CD73, CD90, CD105 mediante la citometría de flujo (Figura 1B). Inducir la diferenciación del trilineage de las células madre a adipocitos, condrocitos y osteocitos, y confirmar la diferenciación del trilineage (Figura 1C) por von Kossa, aceite rojo O, y tinción azul alcian siguiendo un protocolo comercial15,16.</li>
</ol>2. Anestesización de cachorros de rata
<ol><li>Permita que las ratas Sprague-Dawley embarazadas con fecha de tiempo de parto den a luz vaginalmente a término.</li>
	<li>Retire a los cachorros de rata de la jaula el día 5 postnatal.</li>
	<li>Anestesiar a los cachorros de rata usando anestesia de gas (es decir, 2% isoflurano) en una cámara de anestesia.</li>
	<li>Confirme la anestesia adecuada comprobando la respiración y los reflejos. NOTA: La respiración debe volverse superficial y los reflejos deben disminuir. Los cachorros de rata permanecen inconscientes durante al menos 10 minutos con esta concentración de isoflurano.</li>
</ol>3. Instilación intratraqueal
<ol><li>Una vez anestesiados, sostenga a los cachorros de rata en un soporte de intubación en ángulo a 60o y sostenga a los cachorros en su lugar con cinta adhesiva de laboratorio en las cuatro extremidades.</li>
	<li>Aplique cinta adhesiva debajo de la nariz para fijar la cabeza y localizar el cuello para la traqueotomía punzante.</li>
	<li>Desinfectar el área de incisión (es decir, cuello) con una almohadilla de preparación de alcohol del 75%.</li>
	<li>Haga una incisión vertical del cuello medio por encima de la tráquea con microscisores para evitar dañar las arterias carótidas.</li>
	<li>Disecciona las capas de grasa y músculo para localizar la tráquea con pinzas cónicas con punta curva sin gancho.</li>
	<li>Sostenga la tráquea con las pinzas cónicas de punta curvadas.</li>
	<li>Sostenga una jeringa de 100 l en posición vertical e inyecte lentamente 30 ml de solución salina normal (es decir, control) o 30 ml de MSC etiquetados con Fluc-GFP (1 x 105 células) en la tráquea a través de una jeringa de aguja de 30 G durante la fase inspiratoria.</li>
	<li>Cierre la incisión con una puntada de seda 6-0, ate el nudo lo más pequeño posible y corte los extremos lo más cortos posible.</li>
	<li>Coloque las ratas bajo luz infrarroja o sobre una almohadilla de calentamiento para mantenerlas calientes y permitir que se recuperen de la anestesia.</li>
	<li>Confirme que las ratas son cálidas, rosadas y capaces de movimiento espontáneo antes de devolver las ratas a la jaula.</li>
</ol>4. Monitoreo de la distribución pulmonar de los MSC
<ol><li>Para realizar un seguimiento de los MSC humanos trasplantados, inyectar por vía intraperitoneal a las ratas sal de potasio de luciferina en solución salina tamponada de fosfato (PBS) a una dosis de 125 mg/kg de peso corporal 15 minutos después de la inyección de MSC.</li>
	<li>Anesthetizar las ratas usando 2% isoflurano a través de los conos nasales.</li>
	<li>Adquirir imágenes secuenciales a intervalos de 5-15 s 10 min después de la administración de luciferina con binning medio, 1 f/stop, y un campo de visión de 26 cm utilizando un sistema de imágenes de animales pequeños (Tabla de materiales).</li>
	<li>Cuantificar la actividad de luminiscencia de los pulmones en función de las regiones automáticas de interés utilizando software de imagen (Tabla de materiales)17.</li>
</ol>

<ol><li>Ramanathan, R., Bhatia, J. J., Sekar, K., Ernst, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+in+preterm+infants+with+respiratory+distress+syndrome+treated+with+poractant+alfa%2C+calfactant+or+beractant%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Mortality in preterm infants with respiratory distress syndrome treated with poractant alfa, calfactant or beractant: a retrospective study.</a> Journal of Perinatology. 33, 119-125 (2013).</li>
<li>Gien, J., Kinsella, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of bronchopulmonary dysplasia.</a> Current Opinion in Pediatrics. 23, 305-313 (2011).</li>
<li>Pasha, A. B., Chen, X. Q., Zhou, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchopulmonary+dysplasia%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Bronchopulmonary dysplasia: Pathogenesis and treatment.</a> Experimental and Therapeutic. 16, 4315-4321 (2018).</li>
<li>Committee on Fetus and Newborn. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+corticosteroids+to+treat+or+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Postnatal corticosteroids to treat or prevent chronic lung disease in preterm infants.</a> Pediatrics. 109, 330-338 (2002).</li>
<li>Watterberg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Academy+of+Pediatrics%3B+Committee+on+Fetus+and+Newborn.+Policy+statement-postnatal+corticosteroids+to+prevent+or+treat+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">American Academy of Pediatrics; Committee on Fetus and Newborn. Policy statement-postnatal corticosteroids to prevent or treat bronchopulmonary dysplasia.</a> Pediatrics. 126, 800-808 (2010).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+stromal+cells+as+stem+cells+for+nonhematopoietic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues.</a> Science. 276, 71-74 (1997).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-+dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)- dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nature Medicine. 15 (2), 42-49 (2009).</li>
<li>Chou, H. C., Li, Y. T., Chen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+attenuate+experimental+bronchopulmonary+dysplasia+induced+by+perinatal+inflammation+and+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells attenuate experimental bronchopulmonary dysplasia induced by perinatal inflammation and hyperoxia.</a> American Journal of Translational Research. 8, 342-353 (2016).</li>
<li>Chen, C. M., Chou, H. C., Lin, W., Tseng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+effects+on+the+viability+and+function+of+human+mesenchymal+stem+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Surfactant effects on the viability and function of human mesenchymal stem cells: in vitro and in vivo assessment.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8, 180(2017).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80, 415-424 (2016).</li>
<li>Fleurence, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+intratracheal+adeno-associated+virus+administration+to+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of intratracheal adeno-associated virus administration to newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 16, 1298-1306 (2005).</li>
<li>Waszak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intratracheal+adenoviral+vector+administration+on+lung+development+in+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effect of intratracheal adenoviral vector administration on lung development in newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 13, 1873-1885 (2002).</li>
<li>O'Reilly, M., Thébaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia.+The+term+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bronchopulmonary dysplasia. The term rat models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307, 948(2014).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+labeling+and+hepatic+differentiation+potential+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">GFP labeling and hepatic differentiation potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 35, 2299-2308 (2015).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+osteogenic+capacity+for+bone+tissue+engineering+of+fetal+compared+with+perinatal+and+adult+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 27, 126-137 (2009).</li>
<li>Huang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surfactant+and+budesonide+on+pulmonary+distribution+of+fluorescent+dye+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+and+Neonatology%22%5BJournal%5D)">Effect of surfactant and budesonide on pulmonary distribution of fluorescent dye in mice.</a> Pediatric and Neonatology. 56, 19-24 (2015).</li>
<li>Keyaerts, M., Caveliers, V., Lahoutte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging%3A+looking+beyond+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging: looking beyond the light.</a> Trends in Molecular Medicine. 18, 164-172 (2012).</li>
<li>Yeh, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+budesonide%2Fsurfactant+to+prevent+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of budesonide/surfactant to prevent bronchopulmonary dysplasia.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193, 86-95 (2016).</li>
<li>Nguyen, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inoculation+of+Fischer+344+rats+with+Francisella+tularensis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inoculation of Fischer 344 rats with Francisella tularensis.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56123(2017).</li>
<li>de Almeida, P. E., van Rappard, J. R., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+for+tracking+cell+fate+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence for tracking cell fate and function.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, 663-671 (2011).</li>
<li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49, 3-10 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Los recién nacidos con dificultad respiratoria suelen requerir tensioactivos intratraqueales y/o tratamiento con corticoesteroides19. Los ensayos clínicos de fase I en humanos han demostrado la seguridad de los MSC intratraqueales en bebés prematuros8. Estos estudios sugieren que la administración intratraqueal de medicamentos es una opción importante para los recién nacidos con dificultad respiratoria. Los estudios de modelos en animales son más úti...

A menudo se requiere oxígeno suplementario para tratar a los recién nacidos con dificultad respiratoria1. Sin embargo, la terapia con hiperoxia en lactantes tiene efectos adversos a largo plazo. La exposición prolongada a altas concentraciones de oxígeno conduce a inflamación y lesión pulmonar aguda, que es similar a la displasia broncopulmonar humana (BPD)2. La BPD es una complicación importante del tratamiento con hiperoxia que puede ocurrir a pesar de la terapia con surfactantes tempranos, los procedimientos óptimos de ventilación y el aumento del uso de ventilación por presión positiva no invasiva en bebés prematuros. Si bien se han notificado muchas estrategias de tratamiento para la BPD3,ninguna terapia conocida puede reducir esta complicación.
El uso de corticoesteroides es un tratamiento potencial para prevenir la BPD, porque la inflamación pulmonar juega un papel crucial en su patogénesis. Sin embargo, el tratamiento sistémico con corticoesteroides no suele recomendarse en bebés prematuros debido a los efectos adversos a largo plazo4,,5.
Las células estromales mesenquimales (MSC) tienen características pluripotentes y pueden diferenciarse en varios tipos de células, incluyendo hueso, cartílago, tejido adiposo, músculo y tendones6. Los MSC tienen efectos inmunomoduladores, antiinflamatorios y regenerativos7,y los estudios en animales muestran los beneficios terapéuticos de las MSC y sus componentes secretados en la lesión pulmonar inducida por hiperoxia en roedores8,,9. Se ha demostrado que el trasplante intratraqueal e intravenoso de MSC protege contra la lesión pulmonar hiperóxica neonatal. Por lo tanto, la administración intratraqueal de células madre y la terapia combinada de tensioactivos y corticoesteroides podrían ser una posible estrategia de tratamiento para tratar a los recién nacidos con trastornos respiratorios. Los estudios preclínicos han utilizado la administración intratraqueal de células madre y virus adeno-asociados en ratas recién nacidas10,11,12. Sin embargo, no se dispone de una presentación paso a paso de la técnica y el seguimiento in vivo de las células madre trasplantadas. La rata recién nacida es adecuada para estudiar los efectos de la administración intratraqueal en bebés prematuros con dificultad respiratoria porque la etapa saccular del pulmón de la rata al nacer es equivalente a la del pulmón humano a las 26-28 semanas de gestación13. Un método eficaz para la administración en la tráquea de rata es crucial para una distribución pulmonar exitosa. La técnica presentada aquí permite el estudio de la administración intratraqueal de células y/o fármacos para el tratamiento de enfermedades pulmonares neonatales utilizando ratas como modelo para humanos.

<table><tbody><tr><td>6-0 seda</td><td>Ethicon</td><td>1916G</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla de preparación de alcohol</td><td>CSD</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>BD Stemflow hMSC Kit de análisis</td><td>BD Biosciences</td><td>562245</td><td>Marcadores CD</td></tr><tr><td>CMV-Luciferasa-EF1&alpha;-copGFP BLIV 2.0 Lentivector para imágenes in vivo SBI</td><td></td><td>BLIV511PA-1</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor10</td><td>BioLife Solutions</td><td>640222</td><td></td></tr><tr><td>MSC humanos</td><td>Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwán</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luz infrarroja</td><td>JING SHANG</td><td>JS300T</td><td></td></tr><tr><td>Halocarbono</td> de<td>isoflurano</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-200 sistema de imágenes para animales pequeños</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sal de potasio de luciferina</td><td>Promega, Madison, WI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtijeras, rectas</td><td>Vannas</td><td>H4240</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina normal</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>113531</td><td>Solución isotónica de cloruro de sodio</td></tr><tr><td>Aguja RN de cubo pequeño, calibre 30</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>7799-06</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa (100 y micro; l)</td> <td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>81065</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Living Image 2.5 software</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

instilación intratraqueal de células madre en ratas neonatales a término

Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats

La exposición prolongada a altas concentraciones de oxígeno conduce a inflamación y lesión pulmonar aguda, que es similar a la displasia broncopulmonar humana (BPD). En bebés prematuros, la BPD es una complicación importante a pesar del uso temprano de la terapia con surfactantes, las estrategias óptimas de ventilación y la ventilación positiva de presión no invasiva. Debido a que la inflamación pulmonar desempeña un papel crucial en la patogénesis de la BPD, el uso de corticoesteroides es un tratamiento potencial para prevenirla. Sin embargo, el tratamiento sistémico con corticoesteroides no suele recomendarse para bebés prematuros debido a efectos adversos a largo plazo. Los estudios preclínicos y los ensayos clínicos de fase I en humanos demostraron que el uso de células estromales mesenquimales (MSC) en lesiones pulmonares inducidas por hiperoxia y en bebés prematuros es seguro y factible. Se ha demostrado que el trasplante intratraqueal e intravenoso de MSC protege contra la lesión pulmonar hiperóxica neonatal. Por lo tanto, la administración intratraqueal de células madre y el tratamiento combinado de tensioactivos y glucocorticoides ha surgido como una nueva estrategia para tratar a los recién nacidos con trastornos respiratorios. La etapa de desarrollo de los pulmones de rata al nacer es equivalente a la de los pulmones humanos a las 26 a 28 semanas de gestación. Por lo tanto, las ratas recién nacidas son apropiadas para estudiar la administración intratraqueal a bebés prematuros con dificultad respiratoria para evaluar su eficacia. Esta técnica de instilación intratraqueal es una opción clínicamente viable para la administración de células madre y fármacos a los pulmones.

La distribución pulmonar de la instilación intratraqueal de las células madre en el término ratas neonatales se determinó por células madre etiquetadas con foufa luciferasa (Fluc). Los MSC fueron etiquetados con Fluc y etiquetados con proteína fluorescente verde a través de transducción lentiviral. La Figura 1A muestra un alto nivel de expresión de la GFP en los MSC humanos, y el 93,7% de la población mostró la expresión positiva de la GFP detectada por la citometría de flujo. Los MSC se car...

Se describe un protocolo para realizar el trasplante intratraqueal de células estromales mesenquimales (MSC) a través de la inyección intratraqueal en ratas neonatales. Esta técnica es una opción clínicamente viable para la administración de células madre y fármacos en pulmones de ratas neonatales para evaluar su eficacia.

Instilación intratraqueal de células madre en ratas neonatales a término

Prolonged exposure to high concentrations of oxygen leads to inflammation and acute lung injury, which is similar to human bronchopulmonary dysplasia ...

La instilación intratraqueal es un biotécnico clínico para la administración de células madre y fármacos en un pulmón neonatal para evaluar la eficacia de Chilman. Esta técnica puede ser de buena fe para su uso con una variedad de aplicación primaria en una rata neonatal y es una medida relativamente fácil y rentable para el tratamiento de la enfermedad pulmonar. En el quinto día posnatal, retén los cachorros de rata Sprague-Dawley anestesiados.en un puesto de intubación de 60 grados.Y coloque la cinta de etiquetado del laboratorio en las cuatro extremidades de cada cachorro para asegurarlas en su lugar. Aplique cinta adhesiva debajo de cada nariz para fijar las cabezas. Y identifica el primer cuello para la traqueotomía punzante.Utilice una almohadilla de preparación de alcohol al 75% para desinfectar el área de la incisión. Y hacer una incisión vertical de 3 centímetros de línea media por encima de la tráquea para evitar dañar las arterias carótidas. Utilice pinzas cónicas curvas sin gancho para disociar las capas de grasa y músculo para localizar la tráquea.Cuando se pueda observar la tráquea, utilice las pinzas para agarrar la tráquea y utilice una jeringa de 100 microlitros eq

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Avances significativos en la identificación de células madre están continuamente haciendo. Para traducir estos descubrimientos, sin embargo, nuevos métodos para la entrega de celulares deben ser concebido. Aquí me informan de que las vías aéreas proporcionen una ruta segura para el trasplante de células madre a los pulmones.

Traqueotomía: Un método para el trasplante de células madre para el pulmón

Intratraqueal instilaciones solutos entregar directamente a los pulmones. Este procedimiento objetivos de la entrega de los instilado en las regiones distales de los pulmones, y por lo tanto incorpora a menudo en los estudios dirigidos a estudiar los alvéolos. Ofrecemos un protocolo detallado para la supervivencia de realizar instilaciones intratraqueal en ratones.

La instilación directa traqueal de solutos en pulmón de ratón

Hemos desarrollado un enfoque quirúrgico novedoso para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en el feto de ratón. La ruta de entrega es más eficiente en la orientación de los pulmones fetales de ratón que el comúnmente utilizado intraamniótica inyección. Este procedimiento hasta la fecha no se ha descrito en un modelo de ratón.

Un nuevo enfoque quirúrgico para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en un modelo de ratón fetal

Este video demuestra el establecimiento de una infección pulmonar en un modelo de roedor inmunocompetente a través de la intubación y la instalación de suspensiones bacterianas en los lóbulos pulmonares. Este modelo permite realizar estudios de eficacia antibacteriana en animales inmunocompetentes.

Instilación intrabronquial de Streptococcus pneumoniae en modelos de roedores inmunocompetentes

Se ha notificado un método para la entrega de células madre neurales, adaptable para inyectar soluciones o suspensiones, a través de la arteria carótida común (ratón) o la arteria carótida externa (rata) después de un accidente cerebrovascular isquémico. Las células inyectadas se distribuyen ampliamente por todo el parénquima cerebral y se pueden detectar hasta 30 d después del parto.

Entrega intra-arterial de células madre neuronales a la rata y el cerebro del ratón: aplicación a la isquemia cerebral

Esta técnica de inculcar medicamentos directamente en la tráquea de roedores neonatales es importante para estudiar el impacto de los medicamentos o biológicos administrados localmente en las enfermedades pulmonares neonatales. Además, este método también se puede utilizar para inducir lesiones pulmonares en modelos animales.

Un método mínimamente invasivo para la instilación intratraqueal de medicamentos en roedores neonatales para tratar la enfermedad pulmonar

Este método elimina cualquier invasión importante durante las inyecciones celulares causada por la solución de suspensión celular.

Un nuevo método de inyección celular con una invasión mínima

Aquí se presenta un método para el aislamiento de células madre neurales y células progenitoras de oligodendrocitos del cerebro de ratas vivas en detalle experimental. Permite múltiples colecciones de estas células de los mismos animales sin comprometer su bienestar.

El método de "ordeño cerebral" para el aislamiento de células madre neurales y células progenitoras de oligodendrocitos de ratas vivas

En este trabajo se presenta un modelo animal de fibrosis inducida por transición endotelial-mesenquimatosa, como se observa en defectos cardíacos congénitos como la estenosis aórtica crítica o el síndrome del corazón izquierdo hipoplásico, que permite la evaluación histológica detallada del tejido, la identificación de vías de señalización reguladoras y la prueba de opciones de tratamiento.

Un modelo de trasplante de corazón de rata heterotópico neonatal para el estudio de la transición endotelial a mesenquimal

La terapia celular ofrece una intervención prometedora para la fibrosis pulmonar mediante el uso de células progenitoras para reparar el tejido dañado y mejorar la función pulmonar. Dado que las imágenes desempeñan un papel fundamental en el seguimiento de la integración celular, en este trabajo describimos el seguimiento in vivo guiado por imágenes magnéticas de la terapia celular para la fibrosis pulmonar en un modelo de ratón.

Seguimiento in vivo guiado por imágenes de células progenitoras epiteliales pulmonares distales trasplantadas para fibrosis pulmonar mediante imágenes de partículas magnéticas

Aprende la instilación intratraqueal de células madre mesenquimales en ratas neonatales Sprague-Dawley. Este método permite evaluar la eficacia terapéutica pulmonar de forma rentable y reproducible en modelos neonatales.

Instilación intratraqueal de células madre en ratas neonatales a término

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