Name: Un modelo murino de exposición fetal a la inflamación materna para estudiar los efectos de la coleamnionitis aguda en el desarrollo intestinal neonatal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Aprende a inducir inflamación materna fetal con LPS en ratones gestantes para estudiar lesiones intestinales neonatales. Este modelo murino permite investigar los mecanismos de la enterocolitis necrosante sin bacterias vivas.

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Este trabajo fue apoyado en parte a través de los Institutos Nacionales de Salud (DK097335 & T32AI007260) y el Departamento de Pediatría de la Familia Stead de la Universidad de Iowa.

Todos los procedimientos de animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Iowa (Protocolo #8041401). Todos los animales fueron alojados en un vivarium aprobado por la Asociación para la Evaluación y Acreditación del Cuidado de Animales de Laboratorio (AALAC) en la Universidad de Iowa. Todos los ratones eran cepa de tipo salvaje C57Bl/6J.
1. Establecimiento de FEMI en ratones embarazadas
<ol><li>Preparación lps<ol>
<li>Utilice LPS derivado de Escherichia coli O55:B5 (concentración de stock 2 mg/ml).</li>
		<li>Diluir la concentración de existencias lps 1:100 con solución salina estéril para una concentración de trabajo de 20 μg/ml.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inyección materna de LPS<ol>
<li>Inyecte presas embarazadas en el día de gestación e15. Este punto de tiempo es aproximadamente el 75% a través del embarazo murino, por lo que este modelo es similar al tercer trimestre temprano de los embarazos humanos, que es cuando se producen la mayoría de los partos prematuros debido a la colemonionitis.</li>
		<li>Pesar ratones embarazadas inmediatamente antes de la inyección para determinar la dosificación adecuada de LPS.</li>
		<li>Calcular la dosis de concentración de trabajo utilizando la siguiente fórmula: 5 μL x gramo de peso corporal (gbw), para una dosis total de LPS de 100 μg/kg. Para animales de control, utilice un volumen equivalente de solución salina normal para inyección.</li>
		<li>Solución Vortex LPS tres veces durante 15 segundos en alto antes de cada inyección.</li>
		<li>Dibuja el volumen LPS en una jeringa de 1 ml.</li>
		<li>Frene al ratón embarazada con una técnica de desaliñada. Sujete en posición de recumbencia dorsal y realice la inyección.<ol>
<li>Inserte una aguja de 30 calibres y 8 mm biselado sobre el cuadrante inferior derecho del abdomen (para evitar la vejiga y los vasos abdominales) en un ángulo de 30\u201240°. Inserte aproximadamente 1/4 a 1/2 la longitud de la aguja.</li>
			<li>Tire hacia atrás en el émbolo de la jeringa para asegurar la presión negativa antes de la inyección. Proceda con la inyección si hay presión negativa.</li>
			<li>Después de la inyección, monitoree ratones durante aproximadamente 30 minutos y luego regrese a jaulas durante el resto del embarazo.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Parto y cuidado de la descendencia, y la cosecha intestinal
<ol><li>Entregue cachorros normalmente a través del parto vaginal en e20. NOTA: Este modelo tiene una tasa de pérdida fetal dependiente de la dosis esperada que se puede ver en la Figura 1 y se discute en los resultados a continuación.</li>
	<li>Permita que los cachorros permanezcan con las madres y reciban alimentos ad libitum.</li>
	<li>El día de la cosecha, típicamente el día postnatal 14 (P14), eutanasia a los cachorros a través de la dislocación cervical en cumplimiento de los protocolos del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales.</li>
	<li>Usando tijeras y fórceps, hacer una incisión vertical por la línea media del abdomen, a través de la piel y el peritoneo, durante toda la longitud del abdomen. Excitar el intestino delgado desde el estómago hasta el cecum con tijeras y eliminar el mesenterio con fórceps.</li>
	<li>Aísle y mantenga el distatal 1/3 del intestino delgado (sección representativa del íleo humano), descartando el intestino delgado proximal, el cecum y el colon.</li>
	<li>Divida la porción de ileum por la mitad con tijeras.</li>
	<li>Coloque la mitad proximal en una solución de estabilización de ARN para una cuantificación posterior del ARN.</li>
	<li>Coloque la mitad distal en formalina en búfer neutral al 10% para la preparación de diapositivas.</li>
</ol>3. Puntuación de lesiones intestinales
<ol><li>Sección de tejido incrustado de parafina en rodajas de 5 μm de espesor y montaje en toboganes de vidrio. NOTA: Enviamos las muestras a un núcleo histología para la incrustación, sección y montaje de parafinas en diapositivas.</li>
	<li>Deparafinar diapositivas de acuerdo con los procedimientos estándar.</li>
	<li>Mancha secciones con hematooxilina y eosina de acuerdo con los procedimientos estándar.</li>
	<li>Puntúe secciones en una escala de 3 puntos para lesiones intestinales como se describió anteriormente42,43.<ol>
<li>Utilizando microscopía ligera, evalúe la lesión intestinal generalizada por dos investigadores ciegos separados en una escala de 3 puntos que evalúa la integridad del vello y la separación de la membrana del sótano43 (Figura suplementaria 1). La lesión intestinal se evalúa mejor con una ampliación de 20x y una apertura numérica 0,50.</li>
		<li>Asigne una puntuación de 0 para describir la mucosa normal.</li>
		<li>Asignar una puntuación de 1 describir lesiones leves que abarca el desarrollo del espacio de Gruenhagen subepithelial, vacuolización o elevación subepithelial limitada a la propria lamina o puntas de villi.</li>
		<li>Asignar una puntuación de 2 para describir lesiones graves, indicadas por elevación epitelial y vacuolización mayor a la mitad de la villi, distorsión vil, o ulceración mucosa y desintegración de la propria lamina.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Cuantificación de las células de paneth y copas
<ol><li>Después de la deparafinación, las manchas se deslizan de secciones de tejido del Paso 2.8 con mancha alcian Blue/Periodic Acid Schiff para denotar tanto las células de copa como las de Paneth como se describió anteriormente44,45 de acuerdo con los siguientes pasos. NOTA: Mientras que la mancha alcian azul/ácido periódico Schiff no es específica ni para las células de Paneth o de la copa, en nuestra experiencia, los investigadores experimentados cegados tienen cuantificación celular equivalente utilizando esta mancha en comparación con los anticuerpos dirigidos a celulares, con significativamente menos mancha de fondo46.</li>
	<li>Deparafinar, manchar y deshidratar diapositivas de la siguiente manera.<ol>
<li>Sumerja las diapositivas en xileno durante 10 minutos dos veces. PRECAUCIÓN: El xileno debe utilizarse en una campana de humo.</li>
		<li>Enjuague con etoh 100%.</li>
		<li>Sumerge las diapositivas en 100 % EtOH durante 3 min, luego en 90% EtOH durante 3 min, seguido por 70% EtOH durante 3 min, y por último sumergir diapositivas en 50% EtOH durante 3 min.</li>
		<li>Lave bajo agua corriente del grifo durante 5 minutos. PRECAUCIÓN: Apunte la sección lejos del agua corriente para evitar la pérdida de muestras de tejido.</li>
		<li>Filtre la solución de mancha azul alcian con un filtro de café estándar.</li>
		<li>Manchas en manchas azules alcian durante 15 minutos y luego lavar bajo agua corriente del grifo durante 2 minutos.</li>
		<li>Diluir 1 mg de ácido periódico en 200 ml de agua destilada doble. Sumerja las diapositivas en esta solución durante 5 min. A continuación, lave bajo agua corriente del grifo durante 1 minuto.</li>
		<li>Mancha con el reactivo de Schiff durante 10 minutos. Lave bajo agua corriente del grifo durante 5 minutos.</li>
		<li>Mancha los toboganes con hematoxilina durante 1 minuto y luego lave bajo agua corriente del grifo durante 2 minutos.</li>
		<li>Sumergirlos en alcohol ácido (1 ml de ácido clorhico mezclado en 99 ml de 70% EtOH) durante 1 min.</li>
		<li>Sumérgete en el agua del grifo de Scott (0,1% de concentración de NaHCO3 en agua del grifo) durante 1 min y luego lave bajo agua corriente del grifo durante 1 min.</li>
		<li>Deshidratar las diapositivas.<ol>
<li>Sumerja cada diapositiva 10 veces en 70% EtOH, luego sumerja 10 veces en 90% EtOH, y 10 veces en 100% EtOH.</li>
			<li>Sumerge los toboganes en 100% EtOH durante 10 minutos, seguido de sumergirse dos veces en xileno fresco durante 3 minutos cada uno.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Coloque una gota de soporte de montaje en la muestra y coloque una cubierta sobre ella.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Recuento de células de copas<ol>
<li>Usando microscopía ligera, cuente las células de la copa(Figura Suplementaria 2). Para cada pieza de tejido intestinal, cuente el número de células de copa y 500 células epiteliales y la proporción de células de copa expresa como una proporción por cada 100 células epiteliales. Las células de copa se cuentan mejor con una ampliación de 20x y una apertura numérica 0,5.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Recuento de celdas paneth<ol>
<li>Usando microscopía ligera, cuente las células de Paneth(Figura Suplementaria 2). Para cada pieza de tejido intestinal, expresar como una proporción de las células de Paneth por cripta intestinal. Contar 100 criptas intestinales por cada pieza de tejido intestinal. Las celdas paneth se cuentan mejor con una ampliación de 20x-60x y una apertura numérica 0,50-1,30.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La colemonionitis afecta al 2\u20124% del plazo y al 25\u201230% de los partos prematuros8,9. Sin embargo, el impacto de la coleamnionitis puede extenderse mucho más allá del nacimiento, ya que se ha demostrado que tiene efectos significativos en el feto y neonato10,11,12,13,14,<sup class="x...

Las membranas corionicas desempeñan un papel integral en el embarazo de mamíferos. Incluyen el coro y la amnion, que cumplen múltiples funciones. Rodean y protegen el feto, facilitan la señalización paracrina entre los compartimentos materno-fetal1y crean bucles de retroalimentación locales dentro de las membranas corionicas, que pueden estar involucrados en el inicio de la parturición1. La comprensión actual de las membranas indica que la amnion proporciona una función de barrera estructural, y la coral proporciona un amortiguador inmunológico principalmente para proteger al feto en desarrollo del sistema inmunitario materno2. Inflamación de estas membranas se conoce como colemonionitis. Históricamente, el diagnóstico de colemonionitis clínica se realizó a raíz de la presencia de fiebre materna más uno o más hallazgos clínicos fetales o maternos3,4. Sin embargo, si bien esta definición es clínicamente útil, su falta de precisión ha hecho que la investigación de la colemonionitis sea un desafío. En 2015, en un intento de aclarar el diagnóstico, un taller de panel de expertos del Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano Eunice Kennedy Shriver definió la colemonionitis como inflamación intrauterina, o infección, o ambas (triple I)3. Esta aclaración es importante porque si bien la infección inducida por microbianos es una causa importante de inflamación uterina/amniótica, ocurre con menos frecuencia que la inflamación estéril uterina/amniótica5,6,7. En general, la colemonionitis sigue siendo un problema importante de salud pública, como se observa en 2\u20124% de los partos a término y 25\u201230% de los partos prematuros8,9.
La colemonionitis puede tener efectos significativos en el feto y el neonato. En la literatura se ha documentado bien que la colemonionitis está asociada con un mayor riesgo de muchas de las morbilidades de la prematuridad, incluyendo displasia broncopulmonar10,lesión de materia blanca cerebral11,hemorragia intraventricular12,retinopatía de prematuridad13,y sepsis neonatal de inicio temprano sospechosa y confirmada14,15. Como estamos interesados en los mecanismos de lesiones y reparación del tracto intestinal inmaduro, es importante tener en cuenta que la colemonionitis también se asocia con el desarrollo posterior de enterocolitis necrosante (NEC)15,16. Nec es una enfermedad gastrointestinal devastadora de los bebés prematuros que resulta en una respuesta disregulada del huésped a la inflamación y la necrosis intestinal posterior17. Cada año, nec afecta a más de 4000 bebés en los Estados Unidos, y hasta un tercio de estos bebés mueren a causa de la enfermedad18. La patogénesis de NEC probablemente implica una combinación de inmadurez intestinal, desregulación del sistema inmunitario inmaduro, inflamación intestinal y translocación bacteriana19,que culmina en una vía común final de necrosis intestinal. Es importante destacar que la aparición de NEC a menudo ocurre semanas después del nacimiento y la exposición potencial a la colemonionitis, haciendo que el vínculo mecanicista entre la colaamnionitis y el desarrollo posterior de NEC no esté claro20. Un mecanismo potencial por el cual la colemonionitis puede contribuir a la fisiopatología de nec es a través de la regulación del sistema inmune materno, produciendo posteriormente una fuerte respuesta inflamatoria fetal que puede interrumpir los patrones normales de desarrollo fetal21,22,23.
Existen múltiples modelos de corioamnionitis en roedores y ovejas24,25,26,27,28,29,30,31,32. Sin embargo, existen pocos datos sobre el desarrollo del tracto intestinal más allá del período inicial del recién nacido después de la exposición fetal inducida por corioamnionitis a la inflamación materna (FEMI). Con el fin de explorar la relación entre FEMI y el posterior desarrollo de lesiones del tracto intestinal inmaduro, hemos adaptado el modelo FEMI inducido por lipopolisacáridos (LPS). Los lipopolisacáridos son un componente importante de la superficie extracelular sobre bacterias gram negativas y son un potente estimulante del sistema inmune innato de múltiples especies eucariotas, incluidos los seres humanos33. La inyección de LPS materno da como resultado una cascada inflamatoria estéril sin los efectos confusos de las bacterias vivas, y es un modelo bien establecido para la inducción del nacimiento prematuro34,así como un modelo de colemonionitis aguda y el síndrome de respuesta inflamatoria fetal (FIRS), que es la forma más grave de colemonionitis24,35. También se ha demostrado que induce lesiones cerebrales de materia blanca y gris en una oveja modelo36 y una murina modelo37,38,39,40. Sin embargo, hasta donde sabemos, somos los primeros en utilizar este modelo de coleamnionitis y FEMI para investigar sus efectos en el desarrollo del tracto gastrointestinal más allá del nacimiento, así como para investigar un posible vínculo mecanicista entre la coleamnionitis y el desarrollo posterior de NEC41,42.

<table><tbody><tr><td>10% de formalina tamponada neutra</td><td>Sigma</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>tinción de azul alcián</td><td>Suministro de recién llegados</td><td>1003A</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl6/J</td><td>ratones Jackson Laboratories</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon labs</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Tinción de hematoxilina</td><td>Leica</td><td>381562</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ni-U Microscopio</td><td>Nikon</td><td>2CE-MQVJ-1</td><td></td></tr><tr><td>Ácido Periódico</td><td>ACROS</td><td>H5106</td><td>CAS# 10450-59-9</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Thermofisher</td><td>Am7021</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de Schiff</td><td>Sigma</td><td>S5133</td><td></td></tr><tr><td>Secor Imager 2400</td><td>Descubrimiento a escala meso (MSD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ensayo V-plex Descubrimiento a</td><td>escala mesométrica (MSD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xileno</td><td>Sigma</td><td>534056</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo murino de exposición fetal a la inflamación materna para estudiar los efectos de la coleamnionitis aguda en el desarrollo intestinal neonatal

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

La colemonionitis es un precipitante común del parto prematuro y se asocia con muchas de las morbilidades de la prematuridad, incluida la enterocolitis necrosante (NEC). Sin embargo, aún no se ha descubierto un vínculo mecanicista entre estas dos condiciones. Hemos adoptado un modelo murino de colemonionitis que implica lipopolisacáridos (LPS) de exposición fetal inducida a la inflamación materna (FEMI). Este modelo de FEMI induce una cascada inflamatoria materna, placentaria y fetal estéril, que también está presente en muchos casos de colemonionitis clínica. Aunque existen modelos que utilizan bacterias vivas e imitan con mayor precisión la fisiopatología de una infección ascendente que resulta en corioamnionitis, estos métodos pueden causar efectos indirectos en el desarrollo del tracto intestinal inmaduro y el microbioma en desarrollo asociado. Utilizando este protocolo, hemos demostrado que el FEMI inducido por LPS resulta en un aumento dependiente de la dosis en la pérdida del embarazo y el parto prematuro, así como la interrupción del desarrollo intestinal normal en la descendencia. Además, hemos demostrado que el FEMI aumenta significativamente las lesiones intestinales y las citoquinas séricas en la descendencia, al tiempo que disminuyen las células de copa y paneth, que proporcionan una primera línea de inmunidad innata contra la inflamación intestinal. Aunque se ha utilizado un modelo similar de FEMI inducido por LPS para modelar la asociación entre la coleamnionitis y las anomalías posteriores del sistema nervioso central, hasta donde sabemos, este protocolo es el primero en intentar dilucidar un vínculo mecanicista entre la coleamnionitis y perturbaciones posteriores en el desarrollo intestinal como posible vínculo entre la corioamnionitis y el NEC.

La exposición al FEMI el día embrionario 15 conduce a una pérdida de embarazo dependiente de la dosis y a una tasa de dosis dependiente del trabajo de parto prematuro (Figura 1)42. Para los experimentos, elegimos utilizar una dosis de LPS de 100 μg/kg para minimizar la pérdida del embarazo y la prematuridad (50% de pérdida entre la prematuridad y la muerte fetal intrauterina) mientras exponía a los fetos a un insulto inflamatorio significativo.
<p class="jove_cont...

Desarrollamos un modelo de coleamnionitis para simular la exposición fetal a la inflamación materna (FEMI) sin complicaciones de organismos vivos para examinar los efectos del FEMI en el desarrollo del tracto intestinal de la descendencia. Esto permite el estudio de causas mecanicistas para el desarrollo de lesiones intestinales después de la coleamnionitis.

Un modelo murino de exposición fetal a la inflamación materna para estudiar los efectos de la coleamnionitis aguda en el desarrollo intestinal neonatal

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Este protocolo FEMI permite investigar los efectos a largo plazo para los neonatos después de la exposición fetal a la inflamación materna. Esto es especialmente relevante para el desarrollo de enterocolitis necrotizante, o ECN. Esta técnica imita la inflamación estéril que a menudo se observa en la corioamnionitis, y la falta de bacterias vivas puede tener efectos confusos en el tracto intestinal en desarrollo y el microbioma.El paso más importante de este protocolo es la inyección de LPS para inducir FEMI. Es de vital importancia que se utilice una dosis adecuada de LPS y que la inyección no cause un traumatismo intraperitoneal en el ratón grávido. Comience diluyendo el caldo de LPS de uno a 100 con solución salina estéril para obtener una concentración de trabajo de 20 microgramos por mililitro.Inyectar a las madres embarazadas el día de gestación E15. Pesar los ratones inmediatamente antes de la inyección para determinar la dosis adecuada de LPS, utilizando un volumen equivalente de solución salina normal para los animales de control. Agita la solución de LPS tres veces durante 15 segundos en altura.A continuación, sácalo en una jeringa de un mililitro. Utilice la técnica de desaliño para sujetar a la rata embarazada y manténgala en la posición de decúbito dorsal. Inserte aproximadamente un cuarto a la mitad de una aguja de calibre 30 de ocho milímetros biselada hacia arriba, superponiendo el cuadrante inferior derecho del abdomen en un ángulo de 30 a 40 grados.Tire hacia atrás del émbolo de la jeringa para asegurar la presión negativa. A continuación, proceda con la inyección si hay presión negativa. Monitoree a los ratones durante aproximadamente 30 minutos y luego devuélvalos a las jaulas durante el resto del embarazo.Dar a luz a las crías por vía vaginal en E20 y permitirles permanecer con las madres, recibiendo alimentaciones ad libitum. Cosecha los intestinos en el día postnatal 14. Use tijeras y fórceps para hacer una incisión vertical a lo largo de la línea media del abdomen, a través de la piel y el peritoneo, a lo largo de todo el abdomen.Extirpar el intestino delgado desde el estómago hasta el ciego y extraer el mesenterio. Aislar el tercio distal del intestino delgado, descartando el intestino delgado proximal, el ciego y el colon. Divida la porción del íleon por la mitad con unas tijeras.A continuación, coloque la mitad proximal en una solución de estabilización de ARN para la cuantificación del ARN y la mitad distal en formol tamponado neutro al 10% para la preparación del portaobjetos. Divida el tejido incrustado en parafina en rodajas de cinco micrómetros de grosor y móntelas en portaobjetos de vidrio. Desparafinar los portaobjetos, luego teñir las secciones con hematoxilina y eosina de acuerdo con los procedimientos estándar.Utilice la microscopía óptica para evaluar la lesión intestinal generalizada realizada por dos investigadores ciegos separados en una escala de tres puntos, evaluando la integridad de las vellosidades y la separación de la membrana basal. Asigne una puntuación de cero para describir la mucosa normal. Asigne una puntuación de uno para describir una lesión leve, que incluye el desarrollo del espacio de Gruenhagen subepitelial, la vacuolización o el levantamiento subepitelial limitado a la lámina propia o las puntas de las vellosidades.Asigne una puntuación de dos para describir una lesión grave, indicada por elevación epitelial y vacuolización de más de la mitad de las vellosidades, distorsión de las vellosidades o ulceración de la mucosa y desintegración de la lámina propia. Sumerja los portaobjetos en xileno dos veces durante 10 minutos. Luego enjuáguelos con etanol al 100%.Sumerja los portaobjetos durante tres minutos en etanol al 100 %, al 90 % de etanol, al 70 % de etanol y al 50 % de etanol. A continuación, lave los portaobjetos con agua corriente durante cinco minutos, alejando la sección del agua para evitar la pérdida de la muestra de tejido. Filtre la solución de tinte azul alcián con un filtro de café estándar y úselo para teñir los portaobjetos durante 15 minutos.A continuación, lávelos con agua corriente del grifo durante dos minutos. Diluya un miligramo de ácido peryódico en 200 mililitros de agua bidestilada y sumerja los portaobjetos en esta solución durante cinco minutos. Después de un lavado de un minuto con agua corriente, tiñe los portaobjetos con el reactivo de Schiff durante 10 minutos y lávalos de nuevo durante cinco minutos.A continuación, tíñelos con hematoxilina durante un minuto y lávalos con agua durante dos minutos. Sumérjalos en alcohol ácido durante un minuto, luego en agua del grifo de Scott durante un minuto, seguido de un lavado con agua corriente del grifo durante un minuto. Para deshidratar los portaobjetos, sumerja cada portaobjetos 10 veces en 70 % de etanol, 90 % de etanol y luego 100 % de etanol.Sumerja los portaobjetos en etanol al 100% durante 10 minutos, seguido de una inmersión dos veces en xileno fresco durante tres minutos cada vez. Coloque una gota de medio de montaje en la muestra y un cubreobjetos en la parte superior. Cuente las células caliciformes bajo el microscopio.Para cada pedazo de tejido intestinal, cuente el número de células caliciformes y 500 células epiteliales. A continuación, extraiga las células caliciformes como una proporción por cada 100 células epiteliales. Cuenta las células de Paneth.Para cada pieza de tejido intestinal, registre la proporción de células de Paneth por cripta intestinal, contando 100 criptas intestinales por cada pieza de tejido intestinal. La exposición fetal a la inflamación materna (FEMI, por sus siglas en inglés) en el día embrionario 15 conduce a una pérdida del embarazo dependiente de la dosis y a una tasa de parto prematuro dependiente de la dosis. La FEMI induce una lesión intestinal importante al nacer y a las ocho semanas de vida.Esta lesión se produce en ausencia de estímulos adicionales para los animales, lo que sugiere que la FEMI por sí sola interrumpe la homeostasis normal del tracto intestinal murino del recién nacido. Se cuantificó el número de células caliciformes productoras de mucina y células de Paneth productoras de péptidos antimicrobianos en el tercio distal del tracto intestinal delgado. Se encontró que el IAMIO alteró la composición normal del epitelio intestinal al inducir la pérdida de ambos tipos de células, en comparación con los animales sin IAM.Para investigar los efectos de FEMI en la respuesta inflamatoria neonatal, se cuantificaron una variedad de marcadores inflamatorios séricos, incluidos interleucina-1 beta, interleucina-10, KCGRO e interleucina-6, del suero de cachorros con y sin FEMI. FEMI aumentó significativamente la cascada inflamatoria para todas las citocinas en P0. La cascada inflamatoria en edades posteriores difirió según el momento y la citocina. Curiosamente, hubo niveles similares de IL6 en P7 a P28 en los grupos FEMI y simulado.Sin embargo, hubo niveles significativamente más altos en el grupo FEMI en P56, a pesar de que no hubo intervención secundaria. Es fundamental realizar una curva de dosis inicial de LPS, ya que las diferentes existencias de LPS pueden tener diferentes potencias. Hemos encontrado que nuestros resultados neonatales dependen de la dosis de LPS utilizada para inducir el FEMI.

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