Name: Operación de constricción aórtica transversal con sutura absorbible para obtener hipertrofia miocárdica transitoria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-09T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprende a realizar constricción aórtica transversal con sutura absorbible para inducir hipertrofia miocárdica transitoria en modelos murinos. Este protocolo reduce la mortalidad operatoria y permite estudiar la regresión de la hipertrofia ventricular.

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Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81770271; a Y, Liao), los Fondos Conjuntos de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (U1908205; a Y, Liao), y los Proyectos Municipales de Planificación de la Tecnología Científica de Guangzhou (201804020083; al Dr. Liao).

Todos los procedimientos se llevaron a cabo siguiendo las directrices de cuidado y uso de animales de laboratorio publicadas por los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos (Publicación Nº 85-23 de los NIH, revisada en 1996). C57BL/6J ratones macho (8-10 semanas, 20-25 g) fueron proporcionados por el Centro de Animales de la Universidad Médica del Sur.
1. Preparación preoperatoria
<ol><li>Pellizque la punta de una aguja de 25 G con un soporte de aguja y conzúltela con un objeto duro como el soporte.</li>
	<li>Pase una sutura absorbible de 5-0 a través de la aguja y luego curvarla a 90° con un soporte13. NOTA: Según diferentes propósitos de investigación, los investigadores podrían seleccionar líneas absorbibles con diferentes tiempos de absorción. En este protocolo, usamos una sutura absorbible de 2 semanas para constreñir el arco aórtico.</li>
	<li>Curva otra aguja de 25 G a 120° y suaviza la punta con un soporte para ser utilizado como espaciador en el paso de ligadura. NOTA: Se utilizó una aguja de 25 G como espaciador para ratones con peso corporal (BW) >25 g. Utilice una aguja de 26 G para ratones con 19-24 g BW.</li>
	<li>Desinfectar el lugar del operativo con un 75% de alcohol.</li>
	<li>Ajuste la temperatura de la almohadilla de calefacción a 37 °C.</li>
	<li>Preparar instrumentos quirúrgicos esterilizados (incluyendo 1 tijera oftálmica, 1 micro tijera, 2 pinzas microquirúrgicas del codo, 1 soporte de aguja y 1 soporte de micro aguja).</li>
</ol>2. Inducción de anestesia y afeitado
<ol><li>Anestesiar un ratón mediante inyección intraperitoneal de una mezcla de xilazina (5 mg/kg) y ketamina (100 mg/kg) diluida en solución salina (0,9% NaCl). Confirme la anestesia completa con el reflejo negativo de retirada del pedal.</li>
	<li>Mantenga el ratón en posición supina fijando los incisivos con una sutura y fijando las extremidades con cintas adhesivas.</li>
	<li>Aplicar crema depilatoria para eliminar el cabello en su cuello y xifoides. Desinfectar la zona con yodo seguido de 75% alcohol.</li>
</ol>3. Cirugía
<ol><li>Haga una incisión de más de 10 mm en la posición de la línea media entre la muesca supraesternal y el pecho con un bisturí. Luego, separa la piel y la fascia superficial.</li>
	<li>Identifique el primer espacio intercostal contando las costillas desde el ángulo de esternón. Realice la incisión en el primer espacio intercostal y lo más cerca posible del esternón. Penetrar sin rodeos con pinzas de codo para abrir este espacio.</li>
	<li>Separe suavemente el parénquima y el timo hasta que el arco aórtico transversal sea visible. NOTA: No dañe la pleura parietal para evitar el neumotórax.</li>
	<li>Pase la sutura absorbible 5-0 debajo del arco aórtico entre la arteria braquiocéfala y la arteria carótida común izquierda con una aguja de pestillo14. Asegúrese de que la arteria braquiocéfala, la arteria carótida común izquierda y la arteria subclaviana izquierda sean visibles en el campo de operaciones.</li>
	<li>Coloque el espaciador, preparado en el paso 1.3, en la aorta transversal y realice un doble nudo en el espaciador con la sutura en el paso 3.4. NOTA: La punta del espaciador debe ser contundente para evitar dañar la aorta transversal mientras se elimina.</li>
	<li>Retire el espaciador rápidamente pero suavemente, y luego corte los extremos de la sutura.</li>
	<li>Cierra el primer espacio intercostal y la piel usando suturas de nylon 5-0. Desinfectar la piel de nuevo con un 75% de alcohol.</li>
	<li>Coloque el ratón en la almohadilla de calefacción para promover la recuperación. Inyectar buprenorfina (0,1 mg/kg, q12h) por vía intraperitoneally durante los primeros 3 días después de la cirugía.</li>
	<li>Devuelve el ratón a la jaula en una sala de ciclo claro/oscuro de 12 h cuando recupere el conocimiento.</li>
	<li>Realizar una cirugía simulada idéntica a todos los pasos anteriores pero sin la constricción (paso 3.5).</li>
	<li>Realice una cirugía para el grupo de sutura de seda, idéntica a todos los pasos anteriores, pero usando una sutura de seda de 5-0 en el paso 1.2.</li>
</ol>4. Evaluación ecocardiográfica de ligaduras y mediciones exitosas
<ol><li>Realice una evaluación ecocardiográfica el día (D) 7 después de la cirugía.</li>
	<li>Anestesiar el ratón con un 3% de isoflurano a través de la inhalación para la inducción, y un 1,5% para mantener la profundidad de la anestesia, con un caudal de oxígeno de 0,5-1 L/min.</li>
	<li>Coloque el ratón en posición supina en la plataforma, mantenido a 37 °C, y tape sus extremidades al electrodo.</li>
	<li>Retire el vello torácico con una crema depilatoria y aplique un agente de acoplamiento ultrasónico en el pecho del ratón.</li>
	<li>Evalúe la constricción aórtica transversal con una sonda de 30 MHz.<ol>
<li>Incline la plataforma hacia el extremo izquierdo. Mantenga la sonda en posición vertical y bárela sobre el pecho a lo largo de la línea parasteral derecha. A continuación, manipule el eje X y el eje Y en modo B hasta que el arco aórtico esté claramente visible.</li>
		<li>Localice la constricción en modo B para obtener la vista de arco aórtico11. Utilice el modo Color Doppler y la onda pulsada para medir la velocidad máxima de flujo y seleccionar ratones con una velocidad de más de 3.000 mm/s como grupo TAC (los valores se basan en experimentos preliminares).</li>
		<li>Calcular el gradiente de presión según la versión modificada de la ecuación11de Bernoulli: gradiente de presión = 4 x Vmáx.2. NOTA: El gradiente de presión ideal para modelo de constricción aórtica transversal oscila entre 40 y 80 mmHg11.</li>
		<li>Guarde los datos y las imágenes con Cine Store y Frame Store.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Evalúe las dimensiones y la contractilidad del ventricular izquierdo (LV) con una sonda de 30 MHz.<ol>
<li>Restablezca la plataforma a la posición horizontal. Mantenga la sonda a 30° en sentido contrario a las agujas del reloj en relación con la línea parasteral izquierda.</li>
		<li>Utilice el modo B y manipule X e Y para obtener una vista clara y completa del eje del corazón.</li>
		<li>Pulse el modo M para mostrar la línea del indicador. Adquiera imágenes con Cine Store y Frame Store para una medición posterior de la dimensión de la cámara LV, el acortamiento fraccionarios y el grosor de la pared LV.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Una vez hecho esto, detenga la inhalación de isoflurano y permita que el ratón se recupere de la anestesia. Luego, devuelva al animal a su jaula en una sala de ciclo de 12 h de luz/oscuridad.</li>
	<li>En D14 y D28 después de la cirugía, repita los pasos anteriores para medir los parámetros cardíacos y luego coseche el corazón para estudios histológicos.</li>
</ol>

<ol><li>Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+ischemia%3A+a+delay+of+lethal+cell+injury+in+ischemic+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium.</a> Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).</li>
<li>Ban, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphatidylinositol+3-kinase+gamma+is+a+critical+mediator+of+myocardial+ischemic+and+adenosine-mediated+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Phosphatidylinositol 3-kinase gamma is a critical mediator of myocardial ischemic and adenosine-mediated preconditioning.</a> Circulation Research. 103 (6), 643-653 (2008).</li>
<li>Wu, Z. K., Iivainen, T., Pehkonen, E., Laurikka, J., Tarkka, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+preconditioning+suppresses+ventricular+tachyarrhythmias+after+myocardial+revascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Ischemic preconditioning suppresses ventricular tachyarrhythmias after myocardial revascularization.</a> Circulation. 106 (24), 3091-3096 (2002).</li>
<li>Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+and+postconditioning%3A+underlying+mechanisms+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Preconditioning and postconditioning: underlying mechanisms and clinical application.</a> Atherosclerosis. 204 (2), 334-341 (2009).</li>
<li>Heusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+cardioprotection%3A+signal+transduction+in+ischemic+pre-%2C+post-%2C+and+remote+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of cardioprotection: signal transduction in ischemic pre-, post-, and remote conditioning.</a> Circulation Research. 116 (4), 674-699 (2015).</li>
<li>Lund, O., Emmertsen, K., Dorup, I., Jensen, F. T., Flo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+left+ventricular+hypertrophy+during+10+years+after+valve+replacement+for+aortic+stenosis+is+related+to+the+preoperative+risk+profile%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Regression of left ventricular hypertrophy during 10 years after valve replacement for aortic stenosis is related to the preoperative risk profile.</a> European Heart Journal. 24 (15), 1437-1446 (2003).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciiences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciiences of the United States of America. 88 (18), 8277-8281 (1991).</li>
<li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+hypertrophic+preconditioning+attenuates+cardiomyocyte+hypertrophy+and+slows+progression+to+heart+failure+through+upregulation+of+S100A8%2FA9%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Myocardial hypertrophic preconditioning attenuates cardiomyocyte hypertrophy and slows progression to heart failure through upregulation of S100A8/A9.</a> Circulation. 131 (17), 1506-1517 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+biomicroscopy+validation+of+a+murine+model+of+cardiac+hypertrophic+preconditioning%3A+comparison+with+a+hemodynamic+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Ultrasound biomicroscopy validation of a murine model of cardiac hypertrophic preconditioning: comparison with a hemodynamic assessment.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 313 (1), 138-148 (2017).</li>
<li>Oka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac-specific+deletion+of+Gata4+reveals+its+requirement+for+hypertrophy%2C+compensation%2C+and+myocyte+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cardiac-specific deletion of Gata4 reveals its requirement for hypertrophy, compensation, and myocyte viability.</a> Circulation Research. 98 (6), 837-845 (2006).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+morphological+and+functional+changes+in+mouse+model+of+transverse+aortic+constriction+by+echocardiographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac morphological and functional changes in mouse model of transverse aortic constriction by echocardiographic imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54101(2016).</li>
<li>Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mechanical+ventilation+of+isolated+mouse+lungs+on+surfactant+and+inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines.</a> The European Respiratory Journal. 17 (3), 488-494 (2001).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), e59431(2019).</li>
<li>Eichhorn, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closed-chest+model+to+induce+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A closed-chest model to induce transverse aortic constriction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57397(2018).</li>
<li>Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+minimally+invasive+transverse+aortic+constriction+in+mice+for+induction+of+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56231(2017).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Todavía hay un área muy subexplorada en el preacondicionamiento cardíaco no isquémico. Basándonos en nuestros estudios anteriores, pasamos a usar suturas absorbibles para mejorar el modelo de preacondicionamiento hipertrófico miocárdico.
En informes anteriores, muchos investigadores utilizaron sutura de seda para constreñir el arco aórtico8,14,15. La sutura de seda estaba fácilmente disponible y a men...

El preacondicionamiento isquémico es un fenómeno que induce breves episodios no letales de isquemia y reperfusión al corazón y tiene la capacidad de reducir drásticamente la lesión miocárdica1. Dadas las evidentes implicaciones clínicas del preaccondicionamiento isquémico, como limitar el tamaño de infarto de miocardio2 y suprimir las tachyarrhythmias ventriculares después de la revascularización miocárdica3,ha habido mucha investigación para diseccionar los mecanismos subyacentes a los efectos cardioprote protectores inducidos por el preaccondicionamiento4,5. Por el contrario, otros tipos no isquémicos de preacondicionamiento han recibido relativamente poca atención. La hipertrofia cardíaca puede ser contundente en pacientes con estenosis aórtica sometidos a reemplazo de válvula aórtica6. Dondequiera que exista el estado de hipertrofia miocárdica patológica, rara vez se informa del principio del preaccondicionamiento.
En 1991, Rockman et al. estableció en primer lugar un modelo de ratón de hipertrofia ventricular izquierda por constricción aórtica transversal (TAC)7. Al operar TAC dos veces en ratones, hemos demostrado previamente que el preaccondicionamiento hipertrófico miocárdico (MHP) conduce a la estimulación hipertrófica transitoria en el corazón, lo que hace que el corazón sea más resistente al estrés hipertrófico sostenido en el futuro8. Las características del modelo MHP han sido validadas por biomicroscopio ultrasonido y evaluación hemodinámica9. Los puntos clave en la construcción del modelo fueron realizar la toracotomía tres veces, TAC durante una semana, debanding por una semana, y TAC secundario durante 6 semanas. Sin embargo, la disolución podría causar sangrado, lo que divió ser dominado por novicios y difícil de popularizar. Además, también es un desafío técnico intubar ratones. La intubación inadecuada podría causar lesiones traqueales, neumotórax e incluso la muerte en ratones. Por lo tanto, es necesario y valioso mejorar algunos procedimientos mientras se construye el modelo MHP.
Para reducir la dificultad del modelo y aumentar su éxito, cambiamos a suturas absorbibles para el primer TAC y monitoreamos el éxito del modelo midiendo el gradiente de presión a través de la constricción aórtica bajo ecocardiografía10. Basado en nuestro experimento preliminar, sería difícil inducir suficiente hipertrofia miocárdica en ratones con gradiente de presión demasiado baja, mientras que los ratones con gradiente de presión demasiado alta desarrollarían insuficiencia cardíaca aguda o incluso morirían. El gradiente de presión ideal para el modelo oscila entre 40–80 mmHg11. Además, este experimento no se basó en un respirador, que podría evitar eficazmente la manipulación técnica asociada al respirador y la lesión12.

<table><tbody><tr><td>Sutura absorbible (5-0)</td><td>Shandong Kang Lida Medical Products Co., Ltd</td><td>5-0</td><td></td></tr><tr><td>Ligadura Sistema de ultrasonido animal VEVO2100</td><td>Visual Sonic</td><td></td><td>VEVO2100 Ecocardiografía</td></tr><tr><td>Iluminador de luz fría</td><td>Olympus</td><td>ILD-2</td><td></td></tr><tr><td>Light Almohadilla térmica - sistema quirúrgico termostático (ALC-HTP-S1)</td><td>SHANGHAI ALCOTT BIOTECH CO</td><td>ALC-HTP-S1</td><td>Calefacción</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD ciencias de la vida</td><td>R510-22</td><td>Anestesia inhalante</td></tr><tr><td>Matrx VIP 3000 Vaporizador de isofurano</td><td>Midmark Corporation</td><td>VIP 3000</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Sutura de nylon médico (5-0)</td><td>Ningbo Medical Needle Co.</td><td>5-0</td><td>Cerrar la piel</td></tr><tr><td>Pentobarbital sal sódica</td><td>Merck</td><td>25MG</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Balanza electrónica de precisión</td><td>Denver Instrument</td><td>TB-114 Sensor de</td><td>pesaje</td></tr><tr><td>Espaciador</td><td></td><td></td> propio <td>Aguja de calibre 25</td></tr><tr><td>Sutura de seda (5-0)</td><td>Yangzhou Yuankang Medical Devices Co., Ltd.</td><td>5-0</td><td>Ligadura</td></tr><tr><td>Equipo de microcirugía para animales pequeños</td><td>Napox</td><td>MA-65</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Gel de transmisión</td><td>Guang Gong pai</td><td>250ML</td><td>Ecocardiografía</td></tr><tr><td>Veet crema depilatoria</td><td>Reckitt Benchiser</td><td>RQ / B 33 Tipo 2</td><td>Eliminar el pelo de ratones</td></tr><tr><td>Esterilizador de vapor de presión electrotérmica automático vertical</td><td>Hefei Huatai Medical Equipment Co.</td><td>LX-B50L Limpieza</td><td>automática de los instrumentos quirúrgicos</td></tr></tbody></table>

operación de constricción aórtica transversal con sutura absorbible para obtener hipertrofia miocárdica transitoria

Operating Transverse Aortic Constriction with Absorbable Suture to Obtain Transient Myocardial Hypertrophy

Basado en constricciones aórticas dos veces transversales (TAC) en ratones, se demuestra que el preaccondicionamiento hipertrófico miocárdico (MHP) podría atenuar la hipertrofia de cardiomiocitos y ralentizar la progresión a la insuficiencia cardíaca. Para los principiantes, sin embargo, el modelo MHP suele ser bastante difícil de establecer debido a los obstáculos técnicos en la operación del respirador, la apertura del pecho repetidamente y el sangrado causado por la disolución. Para facilitar este modelo, para aumentar la tasa de éxito quirúrgico y reducir la incidencia de sangrado, cambiamos a suturas absorbibles para el primer peinado TAC con una técnica libre de respiradores. Usando una sutura absorbible de 2 semanas, demostramos que este procedimiento podría causar hipertrofia miocárdica significativa en 2 semanas; y 4 semanas después de la cirugía, la hipertrofia miocárdica se regresión casi por completo a la línea de base. Con este protocolo, los operadores podrían dominar el modelo MHP fácilmente con una menor mortalidad de funcionamiento.

En este estudio, dividimos aleatoriamente 45 ratones en tres grupos, la farsa, el grupo de sutura de seda y el grupo de sutura absorbible (el número de cada grupo en D0 (línea base), D14 y D28 después del TAC fue de 15, 10 y 5, respectivamente). En D7, D14, D21 y D28 después de la cirugía, la velocidad máxima constreñida fue determinada por ecocardiografía. Encontramos que la velocidad del flujo sanguíneo en la constricción era todavía mayor que 3.000 mm/s en la segunda semana después del TAC a pesar de que se había util...

Este protocolo presenta un método mejorado para obtener hipertrofia miocárdica transitoria con sutura absorbible, simulando la disminución de la hipertrofia ventricular izquierda después de eliminar la sobrecarga de presión. Podría ser valioso para los estudios sobre el preaccondicionamiento hipertrófico miocárdico.

Operación de constricción aórtica transversal con sutura absorbible para obtener hipertrofia miocárdica transitoria

Based on twice transverse aortic constrictions (TACs) in mice, it is proved that myocardial hypertrophic preconditioning (MHP) could attenuate ...

Este protocolo presenta un método mejorado para obtener la hipertrofia miocárdica transitoria, utilizando suturas reabsorbibles, que estimula la disminución de la hipertrofia ventricular izquierda después de eliminar la sobrecarga de presión. Con este protocolo, los investigadores pueden dominar fácilmente el modelo con una menor mortalidad operativa. La demostración del procedimiento estará a cargo de Xiaoxia Huang, un técnico de mi laboratorio.Comience pellizcando la punta de una aguja de calibre 25 con un soporte para agujas y desafilanda. Luego, pase una sutura absorbible 5/0 a través de esta aguja y curve la aguja roma en un ángulo de 90 grados usando el soporte. Pellizque la punta de otra aguja de calibre 25, luego cúbrala en un ángulo de 120 grados y alise la punta con un soporte para usarlo como espaciador en el paso de ligadura.Prepare instrumentos quirúrgicos esterilizados, incluyendo una tijera oftálmica, una microtijera, dos pinzas de codo microquirúrgicas, un soporte para agujas y un soporte para microagujas. Para comenzar la cirugía, confirme la anestesia completa del ratón con el reflejo de retirada del pedal. Mantenga el ratón en posición supina fijando los incisivos con una sutura y fijando las extremidades con cinta adhesiva.Retira el vello del cuello y desinfecta la zona con yodo y alcohol al 75%. Comience la cirugía haciendo una incisión de más de 10 milímetros en la posición de la línea media entre la muesca supraesternal y el tórax. A continuación, separe la piel y la fascia superficial.Hacer una incisión en el primer espacio intercostal lo más cerca posible del esternón y penetrar sin tapujos, para abrir este espacio con pinzas en el codo. Separe suavemente el parénquima y el timo hasta que el arco aórtico transversal sea visible. Pase una sutura absorbible 5/0 por debajo del arco aórtico entre la arteria braquiocefálica y la arteria carótida común izquierda con una aguja de enganche.Colocar el espaciador previamente preparado en la aorta transversal y hacer un doble nudo en el espaciador con la sutura. Retire suave pero rápidamente el espaciador y corte los extremos de la sutura. Cierre el primer espacio intercostal y la piel con suturas de nylon 5/0.Desinfectar la piel de nuevo con alcohol al 75%. Siete días después de la cirugía, coloque al ratón en posición supina, manteniéndolo a 37 grados centígrados, y pegue sus extremidades al electrodo. Retire el vello del pecho y aplique un agente de acoplamiento ultrasónico en el pecho del ratón.A continuación, acceda al TAC con una sonda de 30 megahercios. Inclina la plataforma hacia el extremo izquierdo. Mantenga la sonda en posición vertical y bájela en el pecho a lo largo de la línea paraesternal derecha.Ajuste los ejes X e Y en el modo B hasta que el arco aórtico y la constricción sean claramente visibles. Con el modo Doppler, mida la velocidad máxima, las dimensiones y la contractilidad del ventrículo izquierdo. Seleccione los ratones con una velocidad de más de 3000 milímetros por segundo como grupo TAC.Con una sonda de 30 megahercios, evalúe las dimensiones y la contractilidad del ventrículo izquierdo. Vuelva a colocar la plataforma en posición horizontal, manteniendo la sonda a 30 grados en sentido contrario a las agujas del reloj con respecto a la línea paraesternal izquierda. Obtenga una vista de eje corto del corazón manipulando los ejes X e Y en el modo B.A continuación, pulse el modo M para mostrar la línea indicadora y adquirir imágenes con Cine Store y Frame Store para la medición posterior de la dimensión de la cámara de BT, el acortamiento fraccional y el grosor de la pared de BT. Las imágenes Doppler de onda pulsada realizadas después de 14 días de TAC mostraron que la velocidad del flujo sanguíneo en la constricción era superior a 3000 milímetros por segundo, a pesar de que se había utilizado una sutura absorbible para constreñir el arco aórtico. El gradiente de presión del flujo sanguíneo después de 14 días de TAC se mantuvo por encima de los 40 milímetros de mercurio.Curiosamente, no hubo constricción en la cuarta semana después de la cirugía, lo que indica que la sutura reabsorbible se había absorbido por completo. Aquí se muestran los parámetros del ventrículo izquierdo en el grupo de sutura de seda y en el grupo de sutura absorbible en los días cero, 14 y 28 después de la TAC, en las imágenes en modo M. En el día 14 después de la TAC, el grosor de la pared posterior del ventrículo izquierdo al final de la diástole aumentó, mientras que el diámetro interno del ventrículo izquierdo al final de la diástole disminuyó ligeramente.La fracción de eyección del ventrículo izquierdo no se vio afectada por el uso de suturas reabsorbibles. Aquí se muestra la comparación de la relación entre el peso cardíaco y el peso corporal del grupo de sutura de seda, el grupo de sutura absorbible y el grupo simulado. Los cortes histológicos del corazón mostraron que los cardiomiocitos se agrandaron significativamente desde el día 14 hasta el día 28 en el grupo de sutura de seda, pero en su mayoría retrocedieron el día 28 en el grupo de sutura absorbible.Al intentar este protocolo, lo más importante es no dañar la pleura parental para evitar el neumotórax. Asegúrese de desafilar la punta de la aguja tanto como sea posible y realice el procedimiento con cuidado. Hay muchas aplicaciones potenciales para este método, como el establecimiento del modelo de precondicionamiento de la hipertrofia miocárdica, la exploración del mecanismo de la regresión de la hipertrofia y la investigación del tiempo de la remodelación reversible del ventrículo izquierdo.

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Este video muestra la técnica de desbandado aórtico, que puede conducir a una remodelación inversa para limitar la progresión hacia la insuficiencia cardíaca en un modelo murino. Después del desbandado, una reducción significativa de la poscarga ventricular desencadena una regresión de la hipertrofia ventricular y la fibrosis, lo que provoca una recuperación de la función cardíaca.

Extirpación quirúrgica de la aorta: un procedimiento para estudiar la remodelación inversa del ventrículo izquierdo en el modelo murino de constricción aórtica

Se describe un procedimiento paso a paso para la creación de la sobrecarga de presión e hipertrofia del ventrículo izquierdo en ratas Wistar por la constricción de la aorta ascendente mediante un pequeño clip metálico. Este modelo se utiliza ampliamente para el estudio de los cambios de remodelación durante la hipertrofia cardíaca y para la identificación y evaluación de las estrategias para la regresión de dichos cambios.

Ascendente aórtica Constricción en ratas para la Creación de la sobrecarga de presión hipertrofia cardíaca Modelo

Se describe un modelo de rata de constricción aórtica abdominal que induce hipertrofia y remodelación cardíaca. Se utiliza un método eficiente, altamente reproducible y mínimamente invasivo para proporcionar una plataforma simple pero útil para la investigación de la hipertrofia y disfunción miocárdica.

Un modelo de remodelamiento cardiaco A través de la constricción de la aorta abdominal en ratas

Mínimamente invasiva constricción de la aorta transversal (MTC) conserva los elementos esenciales de la constricción de la aorta transversal regular (TAC) al tiempo que elimina el uso de un ventilador con intubación traqueal. Demuestra ser un método altamente deseable para los estudios de alto rendimiento de sobrecarga ventricular izquierda, sobre todo en estudios de traducción.

La constricción aórtica mínimamente invasiva transversal en ratones

El objetivo de este protocolo es describir paso a paso la técnica de invasión mínima constricción aórtica transversal (TAC) en ratones. Por la eliminación de la intubación y la ventilación que son obligatorios para el procedimiento estándar utilizado, mínimamente invasiva TAC simplifica el procedimiento operativo y reduce el esfuerzo puesto en el animal.

Técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia Ventricular izquierda

Este protocolo presenta un modelo animal grande quirúrgico de la isquemia crónica, de un solo vaso que resulta en anormalidades regionales pero no crea infarto, conocido como miocardio hibernating. Tras establecimiento de isquemia crónica, los animales son tratados con bomba LIMA-muchacho de la arteria coronaria cirugía de bypass para revascularize el tejido isquémico.

Modelo quirúrgico porcina de isquemia cardíaca crónica tratada por cirugía de Bypass aortocoronario de bomba

Aquí, presentamos un protocolo de constricción aórtica transversal (TAC) a través de una toracotomía lateral. Esta técnica es un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo, cerrado pecho con el objetivo de simular la sobrecarga de presión y la insuficiencia cardíaca en ratones utilizando la configuración estándar de laboratorio de TAC.

Un modelo del cerrado-pecho para inducir constricción aórtica transversal en ratones

Aquí se describe un protocolo paso a paso de la desbanding aorta quirúrgica en el modelo bien establecido de ratones de constricción aórtica. Este procedimiento no sólo permite estudiar los mecanismos que son la base del remodelado inverso del ventrículo izquierdo y la regresión de la hipertrofia, sino también probar nuevas opciones terapéuticas que podrían acelerar la recuperación miocárdica.

Estudio de la remodelación inversa del ventrículo izquierdo por desbanding aórtico en roedores

El presente protocolo describe una técnica modificada y simplificada con un procedimiento de constricción aórtica transversa (TAC) mínimamente invasivo utilizando un retractor de fabricación propia. Este procedimiento se puede realizar sin un ventilador o microscopio e introduce sobrecarga de presión, lo que eventualmente conduce a hipertrofia cardíaca o insuficiencia cardíaca.

Una técnica modificada para la constricción aórtica transversa en ratones

El presente protocolo describe una nueva técnica de banda aórtica en ratones para inducir hipertrofia cardíaca por sobrecarga de presión. Para el enfajado, se utiliza un anillo de goma con un diámetro interior fijo. Esta nueva técnica promete menos varianza y datos más reproducibles para futuros experimentos.

Banda aórtica con junta tórica versus constricción aórtica transversal tradicional para el modelado de la hipertrofia cardíaca inducida por sobrecarga de presión

Este estudio presenta un modelo quirúrgico porcino de isquemia miocárdica crónica por estenosis progresiva de la arteria coronaria, que resulta en deterioro de la función cardíaca sin infarto. Después de la isquemia, los animales se someten a un injerto de derivación de la arteria coronaria sin bomba con colocación epicárdica de un parche de colágeno cargado de exosomas derivados de células madre. Esta terapia adyuvante mejora la función miocárdica y la recuperación.

Modelo porcino quirúrgico de isquemia miocárdica crónica tratado con parche de colágeno cargado de exosomas e injerto de derivación de la arteria coronaria sin bomba

Aprende a realizar constricción aórtica transversal con sutura absorbible para inducir hipertrofia miocárdica transitoria en modelos murinos. Este protocolo reduce la mortalidad operatoria y permite estudiar la regresión de la hipertrofia ventricular.

Operación de constricción aórtica transversal con sutura absorbible para obtener hipertrofia miocárdica transitoria

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