Name: Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Aprende a establecer un modelo murino de lesión retiniana isquémica mediante oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común. Este método simplificado facilita el estudio de la patofisiología de retinopatías isquémicas y el cribado de fármacos in vivo.

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Este trabajo fue apoyado por grants-in-aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 a Toshihide Kurihara y 20K18393 a Yukihiro Miwa) del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología (MEXT).

Todos los métodos descritos aquí han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Escuela de Medicina de la Universidad keio.
1. Preparación de instrumentos quirúrgicos y animales
<ol><li>Autoclave instrumentos quirúrgicos y mantenerlos en 70% alcohol etílico. Antes de cada nuevo procedimiento quirúrgico, limpie los instrumentos quirúrgicos cuidadosamente usando un 70% de alcohol etílico.</li>
	<li>Preparar ratones MACHO BALB/cAJc1 (6 semanas de edad, 26-28 kg) en un espacio específico libre de patógenos (SPF) para mantener condiciones estériles antes, durante y después de la cirugía.</li>
</ol>2. Oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común (tBCCAO)
<ol><li>Coloque un ratón bajo anestesia mediante inyección intraperitoneal con una combinación de midazolam (40 μg/100 μL), medetomidina (7,5 μg/100 μL) y tartrato de butorphanol (50 μg/100 μL), denominado "MMB", como se describió anteriormente8,9. Sostenga las pieles traseras del ratón para evitar que el ratón golpee sus ojos hasta que el ratón esté completamente anestesiado.<ol>
<li>Juzgue la profundidad de la anestesia pellizcando el dedo del pie del ratón hasta que no tenga respuesta, cuyo método se utiliza comúnmente para comprobar la anestesia completa10. NOTA: Generalmente, se requieren menos de 5 minutos para que los ratones se queerman dormidos. Las instituciones pueden ser diferentes para las recetas adecuadas para la anestesia general.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aplicar una gota de 0.1% solución purificada de gota para los ojos de hialuronato sódico a los ojos para evitar la sequedad en los ojos bajo anestesia.</li>
	<li>Coloque el ratón en su parte posterior y fije las patas del ratón usando cintas adhesivas.</li>
	<li>Desinfectar el área del cuello del ratón usando un 70% de alcohol etílico antes de la cirugía. NOTA: No se realizó un recorte adicional de la piel, ya que esto puede causar inflamación posterior de la piel11,12.</li>
	<li>Realizar incisión sagital del cuello con una cuchilla (Figura 1). NOTA: La incisión debe hacerse en la línea media entre el cuello, el esternón y la tráquea.</li>
	<li>Separe cuidadosamente ambas glándulas salivales usando cuidadosamente dos fórceps y moviélgas para visualizar los CCA subyacentes.</li>
	<li>Aísle cuidadosamente a la CCA derecha de los respectivos nervios vagal y venas que lo acompañan sin dañar sus estructuras, y coloque dos suturas de seda 6-0 bajo el CCA. Ata los dos lazos firmemente para bloquear el flujo sanguíneo(Figura 1). NOTA: Durante el procedimiento, las venas pequeñas podrían dañarse. Si se observa sangrado, se requiere la limpieza para visualizar claramente los CCA.</li>
	<li>Encuentra el CCA izquierdo cuidadosamente de los respectivos nervios vagal y venas que lo acompañan sin dañar sus estructuras, y ocluye el CCA izquierdo durante 2 segundos por una abrazadera(Figura 1). NOTA: Se necesita una aguja de sutura de seda de 6-0 para ser colocada debajo de la CCA izquierda para marcar un sitio para la sujeción.</li>
	<li>Después de la reapertura de la CCA izquierda, sutura heridas del cuello por una sutura de seda 6-0 y aplicar un toque de antibióticos (50 μL) en el cuello para inhibir la infección bacteriana. NOTA: Retire suavemente una abrazadera para evitar dañar la pared arterial al reabrir el CCA izquierdo.</li>
	<li>Inyecte 0,75 mg/kg de clorhidrato de atipamezol por vía intraperitoneally al ratón para ayudar al ratón a recuperarse rápidamente de la anestesia profunda. Devuelve el ratón a una jaula de ratón con almohadillas precalentados. NOTA: No deje que el ratón quede desatendido hasta que el ratón recupere la conciencia suficiente para mantener la recumbencia severa.</li>
	<li>Inyectar 0,4 mg/kg de tartrato de butorphanol en el ratón para el manejo del dolor cuando el ratón se despierta. NOTA: El protocolo se puede pausar aquí. Como primera pista para el éxito de tBCCAO, se puede observar la caída del párpado del ratón (Figura 2).</li>
	<li>Para la eutanasia, inyecte 3x de mezcla de MMB a los ratones y sacrifique para experimentos.</li>
</ol>3. Observaciones generales (tasas de supervivencia y caída de párpados)
<ol><li>Después de la cirugía, compruebe las tasas de supervivencia de todas las causas de muerte en el día 0 (después de la cirugía), 1, 3 y 7.</li>
	<li>Evaluar el caída del párpado por una escala de clasificación de 4 puntos: 1 = sin caídas, 2 = caída leve (~50%), 3 = caída grave (más del 50%), y 4 = caída severa con secreción ocular.</li>
</ol>4. Perfusión de sangre retiniana
<ol><li>Inyectar 200 μL de FITC-dextran (25 mg/ml) en el ventrículo izquierdo del ratón, que se utiliza comúnmente para la observación de perfusión de sangre en vasos retinianos de ratón13,14.</li>
	<li>2 minutos después de la circulación, enuclear los ojos y fijar en 4% paraformaldehído durante 1 hora. Las retinas fueron cuidadosamente obtenidas y montadas planas, como se describió anteriormente15,y examinadas a través de un microscopio de fluorescencia.</li>
	<li>Tome fotografías de los soportes enteros de la retina a una ampliación de 4x y combínese en una sola usando un analizador de fusión, descrito previamente16.</li>
	<li>Mida las áreas perfundidas a través de una herramienta de análisis de buques en el software NIH Fiji/ImageJ.</li>
</ol>5. Mancha occidental
<ol><li>3 y 6 horas después de tBCCAO, obtener los ojos de ratones y transferir inmediatamente a una placa De Petri que contiene PBS frío para aislar las retinas.</li>
	<li>Después del aislamiento de las retinas, realice la hinchazón occidental, como se describió anteriormente9.</li>
	<li>Incubar con anticuerpos para el factor-1α inducible a la hipoxia (HIF-1α; un marcador de hipoxia general) y para β-Actin (un control interno de carga) durante la noche seguido de la incubación de anticuerpos secundarios conjugados por HRP. Visualice las señales a través de la quimioluminiscencia.</li>
</ol>6. PCR cuantitativo (qPCR)
<ol><li>6, 12 y 24 horas después de tBCCAO, procesar las retinas obtenidas para qPCR, como se describió anteriormente17.</li>
	<li>Realice qPCR a través del sistema PCR en tiempo real. Las imprimaciones utilizadas se enumeran en la Tabla 1. Calcule los cambios de pliegue entre los niveles de diferentes transcripciones mediante el método ΔΔCT.</li>
</ol>7. Inmunohistoquímica (IHC)
<ol><li>3 días después de tBCCAO, obtener los ojos de ratones e incrustar en parafina.</li>
	<li>Corta los ojos incrustados en parafina por un microtome para obtener las secciones oculares.</li>
	<li>Desfinalice y manche las secciones oculares de 5 μm de espesor como se describió anteriormente13.</li>
	<li>Incubar con un anticuerpo para proteína ácida fibrilariana glial (GFAP; un marcador fiable para astrocitos y células de Müller en la retina) durante la noche seguido de la incubación de anticuerpos secundarios conjugados con Alexa Fluor 555.</li>
	<li>Utilice DAPI (4′,6-diamidino-2-phenylindole) para manchar el núcleo en la retina. Visualice las señales a través de un microscopio de fluorescencia.</li>
	<li>Evalúe la puntuación de morfología por una escala de clasificación de 4 puntos, como se describió anteriormente13,18: 0 = sin señal, 1 = pocos pies finales gliales positivos en la capa de células gangliona (GCL), 2 = pocos procesos etiquetados que llegan de GCL a la capa nuclear externa (ONL), y 3 = la mayoría de los procesos etiquetados que llegan de GCL a ONL.</li>
</ol>8. Electroretinografía (ERG)
<ol><li>3 y 7 días después de tBCCAO, realizar ERG utilizando un domo Ganzfeld, sistema de adquisición y estimuladores LED, como se describió anteriormente9.</li>
	<li>Después de la adaptación oscura durante la noche, anestesia a ratones con una combinación de MMB bajo luz roja tenue.</li>
	<li>Utilice una solución mixta de 0,5% tropicamida y 0,5% fenilefrina para dilatar las pupilas.</li>
	<li>Coloque los electrodos activos en la lente de contacto y coloque el electrodo de referencia en la boca.</li>
	<li>Obtenga respuestas ERG de ambos ojos de cada animal.</li>
	<li>Registre las respuestas escocesas bajo una adaptación oscura con varios estímulos.</li>
	<li>Mida las amplitudes de una onda desde la línea base hasta el punto más bajo de una onda.</li>
	<li>Mida las amplitudes de onda b desde el punto más bajo de una onda hasta el pico de onda b.</li>
	<li>Mantenga a todos los ratones calientes durante el procedimiento usando almohadillas de calor.</li>
</ol>9. Tomografía de coherencia óptica (OCT)
<ol><li>2 semanas después de tBCCAO, realice OCT utilizando el sistema SD-OCT, como se informó anteriormente8,9.</li>
	<li>Para la medición, someta a los ratones a la mydriasis mediante una solución mixta de 0,5% de tropicamida y 0,5% fenilefrina, y a anestesia general por una mezcla de MMB.</li>
	<li>Obtenga imágenes de escaneo B de sectores ecuatoriales de escaneos en la cara.</li>
	<li>Examine las retinas a 0,2, 0,4 y 0,6 mm de la cabeza del nervio óptico.</li>
	<li>Mida el grosor de la retina desde la capa de fibra nerviosa retiniana (NFL) hasta la membrana limitante externa (OLMO), y considere el promedio de los valores medidos como grosor retiniano de un ratón individual.</li>
	<li>Trace los resultados como diagramas de arañas.</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

En el estudio, hemos demostrado que la tBCCAO, utilizando suturas simples y una abrazadera, podría inducir isquemia retiniana y disfunción retiniana que lo acompaña. Además, hemos demostrado que nuestro protocolo actual para el desarrollo de un modelo de ratón de isquemia retiniana es más fácil y rápido en comparación con otros protocolos anteriores para el desarrollo de modelos de lesiones isquémicas retinianas2,3,7.
<p cla...

La retina es un tejido neurosensorial para la función visual. Dado que se necesita una cantidad sustancial de oxígeno para la función visual, la retina se conoce como uno de los tejidos más exigentes de oxígeno en el cuerpo1. La retina es susceptible a enfermedades vasculares, ya que el oxígeno se administra a través de los vasos sanguíneos. Varios tipos de enfermedades vasculares, como la retinopatía diabética y la oclusión de los vasos sanguíneos retinianos (venas o arterias), pueden inducir isquemia retiniana. Para investigar los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana, se consideran necesarios modelos experimentales reproducibles y clínicamente relevantes de isquemia retiniana. La oclusión arterial cerebral media (MCAO) mediante la inserción de un filamento intraluminal es el método más utilizado para el desarrollo de modelos de roedores in vivo de isquemia cerebral experimental2,3. Debido a la proximidad de la arteria oftálmica (OpA) a MCA, los modelos MCAO también se utilizan simultáneamente para entender la fisiopatología de la isquemia retiniana4,5,6. Para inducir la isquemia cerebral junto con la isquemia retiniana, los filamentos largos se insertan típicamente a través de la incisión de la arteria carótida común (CCA) o la arteria carótida externa (ECA). Estos métodos son difíciles de realizar, requieren mucho tiempo para completar la cirugía (más de 60 minutos para un ratón), y conducen a altas variabilidades en los resultados después de la cirugía7. Sigue siendo importante desarrollar un mejor modelo para mejorar estas preocupaciones.
En este estudio, simplemente utilizamos una breve oclusión bilateral transitoria de CCA (tBCCAO) con agujas y una abrazadera para inducir isquemia retiniana en ratones y analizamos los resultados típicos de lesiones isquémicas en la retina. En este vídeo, daremos una demostración del procedimiento tBCCAO.

<table><tbody><tr><td>Clorhidrato de atipnamezol</td><td>Zenoaq</td><td>Antisedan</td><td>Para antianestésico</td></tr><tr><td>Applied Biosystems 7500 Fast</td><td>Applied Biosystems-Para</td><td></td> <td>qPCR</td></tr><tr><td>Tartrato de butorfanol</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>Vetorphale</td><td>Para anestesia</td></tr><tr><td>Analizador BZ-II</td><td>KEYENCE-Para</td><td></td> <td>una combinación de imágenes</td></tr><tr><td>BALB/cAJc1</td><td>CLEA-Mouse</td><td></td><td> cepa</td></tr><tr><td>&beta;-actina (8H10D10) mAb de ratón</td><td>CST</td><td>3700</td><td>Para Western blot</td></tr><tr><td>Pinza de pinza</td><td>World Precision Instruments</td><td>WPI 500451</td><td>Para cirugía</td></tr><tr><td>Pinzas Dumont #5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Para cirugía</td></tr><tr><td>Solución DAPI</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>Para IHC</td></tr><tr><td>Envisu SD-OCT sistema</td><td>Leica</td><td>R4310</td><td>Para PTU</td></tr><tr><td>FITC-dextrano</td><td>Merk</td><td>FD2000S</td><td>Para la perfusión sanguínea en la retina</td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Para la detección de fluorescencia</td></tr><tr><td>Hidrato de gatifloxacina</td><td>Senju Pharmaceutical</td><td>Gachifuro</td><td>Para la infección antibacteriana</td></tr><tr><td>GFAP Anticuerpo monoclonal (2.2B10)</td><td>Thermo</td><td>13-0300</td><td>Para IHC</td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Marukan</td><td>RH-200</td><td>Para cirugía</td></tr><tr><td>HIF-1 y alfa; (D1S7W) XP Rabbit mAb</td><td>CST</td><td>36169</td><td>Para Western blot</td></tr><tr><td>ImageQuant LAS 4000 mini</td><td>GE</td> <td>Healthcare-Para</td> <td>quimioluminiscencia</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz K.K</td><td>SANDOZ</td><td>Para anestesia</td></tr><tr><td>Microtomo Tissue-Tek TEC 6</td><td>Sakura-Para</td><td></td> <td>seccionar</td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Orion Corporation</td><td>Domitor</td><td>Para anestesia</td></tr><tr><td>Aguja soporte</td><td>Handaya</td><td>HS-2307</td><td>Para cirugía</td></tr><tr><td>PuREC</td><td>MAYO</td> <td>Corporation-Para</td> <td>ERG</td></tr><tr><td>Tijera</td><td>Fine Science Tools</td><td>91460-11</td><td>Para cirugía</td></tr><tr><td>Hialuronato de sodio</td><td>Santen Pharmaceutical</td><td>Hyalein</td><td>Para lubricación ocular</td></tr><tr><td>Tropicamida/Clorhidrato de penilefrina</td><td>Santen Pharmaceutical</td><td>Mydrin-P</td><td>Para midriasis</td></tr><tr><td>Sutura de seda 6-0</td><td>Natsume</td><td>E12-60N2</td><td>Para cirugía</td></tr></tbody></table>

un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diversas enfermedades vasculares como la retinopatía diabética, la oclusión de venas o arterias retinianas y el síndrome isquémico ocular pueden conducir a isquemia retiniana. Para investigar los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana, es necesario desarrollar modelos experimentales relevantes. Anatómicamente, un vaso principal de suministro de sangre de retina es la arteria oftálmica (OpA) y OpA se origina en la arteria carótida interna de la arteria carótida común (CCA). Por lo tanto, la interrupción de la CCA podría causar efectivamente isquemia retiniana. Aquí, establecimos un modelo de ratón de isquemia retiniana mediante oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común (tBCCAO) para atar la CCA derecha con suturas de seda 6-0 y ocluir la CCA izquierda transitoriamente durante 2 segundos a través de una abrazadera, y demostramos que tBCCAO podría inducir isquemia retiniana aguda que conduce a disfunción retiniana. El método actual reduce la dependencia de los instrumentos quirúrgicos utilizando únicamente agujas quirúrgicas y una abrazadera, acorta el tiempo de oclusión para minimizar la muerte inesperada de animales, que a menudo se ve en modelos de ratón de oclusión arterial cerebral media, y mantiene la reproducibilidad de los hallazgos isquémicos retinianos comunes. El modelo se puede utilizar para investigar la fisiopatología de las retinopatías isquémicas en ratones y más se puede utilizar para la detección de fármacos in vivo.

Después de la circulación sistémica de FITC-dextran durante 2 minutos, se examinaron las vasculaturas retinianas de las retinas izquierda y derecha en ratones operados por sham y ratones operados por tBCCAO(Figura Suplementaria 1). Fitc-dextran era totalmente visible en las dos retinas en los ratones operados por sham y la retina izquierda en los ratones operados por tBCCAO, mientras que era parcialmente detectable en la retina derecha en los ratones operados por tBCCAO.
Despu...

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

El modelo de ratón establecido con este protocolo se puede utilizar para investigar la fisiopatología de las retinopatías isquémicas y para el cribado de fármacos in vivo. El método actual podría reducir la dependencia de varios instrumentos quirúrgicos y acortar el tiempo de operación para inducir la isquemia de la retina. Se puede entender la patogenia de enfermedades vasculares, como la retinopatía diabética, la oclusión de venas o arterias retinianas y el síndrome isquémico ocular.Deokho Lee, nuestro estudiante de doctorado de mi laboratorio, demostrará el procedimiento. Yukihiro Miwa, DVM, PhD, y profesor asistente de mi laboratorio ayudará a demostrar el procedimiento. Esterilizar en autoclave todos los instrumentos quirúrgicos y mantenerlos en alcohol etílico al 70% antes del procedimiento quirúrgico.Prepare a los ratones machos BALB/c en una sala específica libre de patógenos para mantener las condiciones estériles antes, durante y después de la cirugía. Aplique una gota de solución de colirio de hialuronato de sodio purificado al 0,1% en los ojos del animal para evitar la sequedad bajo anestesia. Coloque el ratón boca arriba y fije sus patas con cinta adhesiva.Desinfecte el área del cuello con alcohol etílico al 70% antes de la cirugía. Con una cuchilla, haga una incisión sagital en el cuello. Separe cuidadosamente las glándulas salivales con dos pinzas y déjelas a un lado para visualizar el ACC subyacente.Aísle el CCA derecho de los respectivos nervios vagos y las venas acompañantes y coloque dos suturas de seda 6-0 debajo del CCA. Ata los dos extremos firmemente para bloquear el flujo sanguíneo. Limpie la sangre que supura de las venas pequeñas dañadas durante el procedimiento para obtener una visibilidad clara de la CCA.Encuentre el CCA izquierdo sin dañar las venas que lo acompañan y coloque una aguja de sutura 6-O debajo de él para marcar un sitio para el pinzamiento, ocúltelo durante dos segundos. Retire suavemente la pinza para evitar dañar la pared arterial y vuelva a abrir el CCA izquierdo. Después de reabrir, sutura las heridas del cuello con una sutura de seda.Cuando termine, aplique un poco de antibiótico en el cuello para inhibir la infección bacteriana. Inyecte al ratón 0,75 miligramos por kilogramo de clorhidrato de atipamezol por vía intraperitoneal para ayudarlo a recuperarse rápidamente de la anestesia profunda, luego devuelva al ratón a una jaula con almohadillas precalentadas. Cuando el ratón se despierte, inyéctelo con 0,4 miligramos por kilogramo de tartrato de butorfanol para controlar el dolor.La caída de los párpados se examinó después de la tBCCAO. El ojo derecho mostraba un párpado caído leve y severo, mientras que los ojos izquierdos no tenían caída, excepto por un ratón. Las inmunotransferencias y los análisis cuantitativos de HIF-1 alfa y beta-actina mostraron que HIF-1 alfa se estabilizó en la retina derecha tres y seis horas después de tBCCAO.La gliosis reactiva de la retina se examinó tres días después de la tBCCAO. El promedio de las puntuaciones morfológicas para el marcaje GFAP en la retina derecha fue el más alto entre las retinas de los ratones operados simuladamente y la retina izquierda en los ratones operados con tBCCAO. Las amplitudes de la onda b en el ojo derecho disminuyeron tres y siete días después de tBCCAO, como se muestra en el ERG adaptado a la oscuridad.Mientras que los análisis cuantitativos mostraron una disminución en las amplitudes de la onda b en el ojo derecho sin ningún cambio en la amplitud de la onda a. Las imágenes representativas de OCT en las retinas simuladas y operadas con tBCCAO y los análisis cuantitativos mostraron que hubo un aumento en el grosor de la retina en la retina derecha y ningún cambio en la retina izquierda. Al intentar este protocolo, es importante recordar que el CCA correcto debe estar ocluido claramente.Y luego el CCA izquierdo tiene que ser rigurosamente ocluido. Con este método, la hipertensión o la hipoglucemia se pueden aplicar para imitar las condiciones de las enfermedades oculares humanas. Este modelo muestra los resultados de la isquemia retiniana común y los mecanismos de la isquemia retiniana.

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El medio de oclusión intraluminal modelo cerebral en ratones se presentan en la presente memoria. La extensión del infarto cerebral se evaluó mediante una puntuación neurológica y tinción con violeta de cresilo, una alternativa a la tinción con TTC, que ofrece la gran ventaja de prueba en paralelo marcadores de interés muchos.

Modelo de ratón de MCAO intraluminal: Evaluación del infarto cerebral mediante tinción con violeta de cresilo

Este video muestra el procedimiento de realizar una oclusión permanente de la arteria cerebral media distal, o MCAO, con la arteria carótida común, o ligadura de CCA, en ratas envejecidas para modelar un accidente cerebrovascular isquémico. Esto bloquea el flujo sanguíneo al cerebro, lo que conduce a la muerte neuronal y genera un modelo para estudiar los mecanismos del accidente cerebrovascular y los posibles tratamientos.

Inducción de isquemia a través de la oclusión de la arteria carótida común y cerebral media en un modelo de rata

Monitorización de la perfusión cerebral se ha demostrado para mejorar la precisión en modelos de ictus isquémicos. Las dificultades técnicas a menudo limitan el uso de esta herramienta esencial para la investigación cerebrovascular. En este vídeo, un sistema optimizado se muestra para obtener una monitorización hemodinámica única o multi-sitio durante la oclusión intraluminal de la arteria cerebral en ratas.

Sistema optimizado para la monitorización de la perfusión cerebral en el modelo de rata de Carrera intraluminal oclusión arteria cerebral media

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Estereológico y Citometría de Flujo Caracterización de leucocitos subpoblaciones en Modelos de transitorios o isquemia cerebral permanente

Describimos un modelo de ratón de accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media utilizando una sutura recubierta de silicona. El protocolo se puede aplicar para inducir una oclusión permanente o una isquemia temporal, seguida de reperfusión.

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Obstrucción de filamento intraluminal de la arteria cerebral media es el modelo más frecuentemente utilizado en vivo del movimiento experimental en roedores. Una alternativa quirúrgica para permitir la reparación de la arteria carótida común se realiza aquí, lo que permite la reperfusión de la arteria carótida común y una reperfusión completa para el territorio de la arteria cerebral media.

Oclusión de la arteria Cerebral Media permitiendo la reperfusión mediante la reparación de la arteria carótida común en ratones

Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

El protocolo actual describe un modelo de rata de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media que preserva la estructura anatómica de los vasos cerebrales sin causar daño.

Un modelo en ratas de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media sin dañar la estructura anatómica de los vasos cerebrales

Este protocolo describe el proceso de preparación para la reperfusión de la oclusión de la arteria cerebral media a través de la arteria carótida común.

Un modelo modificado de preparación para la reperfusión de oclusión de la arteria cerebral media

Se propone el método de aguja para la estenosis bilateral asimétrica de la arteria carótida común para crear un modelo de ratón para el deterioro cognitivo vascular y la demencia. Da lugar a resultados a largo plazo en comparación con los modelos establecidos anteriormente y es compatible con la resonancia magnética en vivo. La representación visual que demuestra el procedimiento proporciona orientación para dominar la cirugía.

Un modelo murino para el deterioro cognitivo vascular y la demencia basado en la estenosis bilateral asimétrica de la arteria carótida común guiada por aguja

El objetivo de este estudio fue establecer un método reproducible para realizar una craneectomía seguida de una oclusión permanente y selectiva de la arteria cerebral media en ratas, para su aplicación en estudios experimentales de déficits de memoria motora y espacial.

Oclusión selectiva y permanente de la arteria cerebral media en ratas: un enfoque experimental para estudiar déficits de memoria motora y espacial

Aprende a establecer un modelo murino de lesión retiniana isquémica mediante oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común. Este método simplificado facilita el estudio de la patofisiología de retinopatías isquémicas y el cribado de fármacos in vivo.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

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