Modelo de trasplante parcial de extremidades posteriores heterotópicas en ratas

Este trabajo presenta un protocolo de trasplante de colgajo osteomiocutáneo heterotópico parcial en ratas y sus posibles resultados en el seguimiento a medio plazo.

Presentamos un modelo quirúrgico fiable y reproducible de trasplante heterotópico de extremidades posteriores en ratas. Esta técnica es ideal para estudios a corto plazo sobre preservación o rechazo inmune en VCA. La descripción paso a paso permitirá a los aprendices dominar rápidamente la cirugía.

Para comenzar, haga una incisión circunferencial en la piel por encima del tobillo en el tercio distal de la pierna. Esqueletizar y cauterizar la arteria safena y la rama terminal de la arteria poplítea utilizando fórceps bipolares. Cauterizar y cortar los músculos gastrocnemio, sóleo, tibial anterior y bíceps femoral hasta que el hueso tibial quede expuesto.

Haga una incisión de 2,5 centímetros en el pliegue inguinal derecho y diseccione la almohadilla de grasa inguinal. Use un retractor de anzuelo de pescado para agarrar el ligamento inguinal. Sostenga la almohadilla de grasa inguinal distalmente con pinzas de sujeción y retraiga la almohadilla de grasa para exponer los vasos femorales.

Diseccionar los vasos femorales, individualizar las ramas de Murphy y ligar con lazos de nylon 8/0. Heparinizar la rata donante inyectando la heparina en la vena dorsal del pene con una aguja de calibre 27,5. Complete la incisión en la piel alrededor de la cadera.

Use los fórceps bipolares para cauterizar los músculos bíceps femoral y glúteo superficial, luego cauterice y corte el nervio ciático a la mitad de la longitud del fémur. Exponer el fémur proximalmente a nivel de la cresta femoral posterior y ligar los vasos femorales con lazos de nylon a nivel del ligamento inguinal. Realice una arteriotomía en la arteria femoral justo debajo de la ligadura y dilate para insertar el angiocatéter de calibre 24.

Cauterizar y cortar el músculo restante debajo del pedículo para exponer el lado anterior del fémur. Use el cortador de huesos para cortar la tibia proximalmente y cortar el fémur lo más distalmente posible. Enjuague la extremidad posterior parcial con dos mililitros de solución salina de heparina para obtener una salida venosa clara.

Coloque la extremidad posterior sobre hielo en una gasa estéril hasta la transferencia microvascular. Diseccionar la almohadilla de grasa inguinal y reclinar la almohadilla de grasa inguinal distalmente para exponer los vasos femorales. Use un gancho para retraer el ligamento inguinal y pinzas de sujeción para sostener la almohadilla de grasa inguinal distalmente.

Diseccionar los vasos femorales, individualizar las ramas de Murphy y ligar con lazos de nylon como se ha demostrado. Ligar ambos vasos por encima de los vasos epigástricos usando lazos de nylon. Coloque las abrazaderas del aproximador proximalmente, dilate la lente del vaso y enjuague con solución salina de heparina.

Haga una incisión en el flanco izquierdo por encima de la cadera y cree una bolsa subcutánea con un túnel subcutáneo hasta el pliegue inguinal. Coloque la parte proximal de la extremidad parcial y la almohadilla de grasa inguinal a través del túnel subcutáneo para la transferencia microvascular. Realizar las anastomosis venosas y arteriales utilizando suturas de nylon.

Retire ambas pinzas de aproximación y observe la revascularización de la extremidad. Realizar una prueba de ordeño en ambos vasos para evaluar la permeabilidad de cada anastomosis. Haga una incisión longitudinal en la piel en el lado medial de la extremidad trasplantada e inserte el injerto.

Retire el exceso de piel del injerto y cierre la herida con suturas separadas y una sutura corriente utilizando suturas absorbibles 4/0. Suturar juntos las almohadillas de grasa inguinal de la extremidad trasplantada y el receptor usando dos suturas absorbibles separadas y cerrar el pliegue inguinal después del último chequeo de la anastomosis microvascular. Se monitorizó la evolución del modelo heterotópico de extremidades posteriores hasta el final del estudio.

El recrecimiento del cabello se observó durante la primera semana postoperatoria, y la retracción cutánea apareció después de dos semanas. La falla del alotrasplante compuesto vascularizado puede ocurrir durante la primera semana postoperatoria debido a la trombosis microvascular. La trombosis venosa fue la causa de la eutanasia temprana en el 20% de los casos, todos los cuales ocurrieron antes del quinto día postoperatorio.

La piel parecía azul y se oscurecía cada día. La automutilación es una preocupación seria en los injertos sin sentido y a menudo ocurre entre el segundo y el siete días postoperatorios. Si se limita a menos de un tercio de la superficie del injerto y se refiere solo a la piel, el desbridamiento quirúrgico y la sutura con suturas no absorbibles se pueden discutir con el veterinario del personal.

La prevención de la automutilación se basa en el uso de un collar electrónico cosido en el cuello hasta el séptimo día postoperatorio y la limpieza de cualquier sangre o costra en las heridas quirúrgicas del animal. La autofagia severa de múltiples capas del injerto conduce a la eutanasia del animal. Los quistes dérmicos aparecieron después del día 14 postoperatorio, a veces con un centro necrótico cutáneo antes de la fístula.

Es crucial asegurarse de que la colocación del injerto no impida que el animal sea ambulatorio, y que el pedículo no esté torcido o apretado durante el recuadro del injerto. Nuestro equipo realizó estudios de preservación en las extremidades adquiridas antes del trasplante. Se han evaluado los efectos de diferentes duraciones del almacenamiento en frío estático, así como diferentes protocolos de perfusión de extremidades.