Un modelo de ratón eficaz de lesión unilateral por isquemia-reperfusión renal

La lesión por isquemia-reperfusión renal es la principal causa de insuficiencia renal aguda. Este modelo es muy útil para comprender los cambios fisiopatológicos que ocurren en el riñón después de un insulto isquémico. Este modelo es rentable y en tiempo y ofrece datos altamente reproducibles.

Además de esto, este Modelo de Isquemia Renal Unilateral permite al investigador trabajar con tiempos isquémicos más largos mientras mantiene una alta tasa de supervivencia. Para empezar, coloque el ratón anestesiado sobre la mesa de operaciones. Después de esterilizar el área quirúrgica, use una cuchilla de bisturí para hacer una incisión quirúrgica lateral dorsal de aproximadamente un centímetro en el flanco derecho detrás de la costilla y continúe mimando aproximadamente un centímetro paralelo a la línea media lumbar.

Transecta la musculatura abdominal usando tijeras para visualizar el espacio retroperitoneal. Use un hisopo de algodón estéril para eliminar las pequeñas cantidades de sangre producidas durante la seccionamiento de los músculos. A continuación, empuje el riñón derecho fuera de la cavidad abdominal.

Exponga lenta y cuidadosamente el riñón con fórceps grises e identifique el pedículo renal. Luego retire cuidadosamente el tejido adiposo alrededor del pedículo. Use un hemostático de mosquitos Halsted para manipular la pinza vascular.

Para inducir la isquemia, coloque la pinza vascular sobre la arteria renal y la vena presente en el pedículo renal evitando el pinzamiento del uréter adyacente. Cubra el riñón sujetado con una gasa estéril empapada en solución salina para evitar la desecación. Deje los riñones en la gasa durante 30 minutos y controle la profundidad de la anestesia y la humedad de la gasa periódicamente.

Poco antes del final del período de isquemia, descubra el riñón y sostenga el hemostático del mosquito Halsted, listo para la eliminación de la pinza. Al final del período de isquemia, abra la pinza vascular con el hemostático y retire la pinza para permitir la perfusión del riñón. Para animales de control simulados, realice la cirugía demostrada sin pinzamiento del pedículo renal.

Después de verificar el cambio de color del riñón, devuelva el riñón a la cavidad abdominal. Cierre los músculos abdominales en un patrón cruzado con sutura absorbible 5-0. Cierre la piel en un patrón de colchón horizontal con sutura absorbible 5-0.

Limpie la herida con solución de povidona yodada. Después de la lesión por perfusión por isquemia, se observó una reducción del peso corporal en algunos ratones con menos del 10% del peso corporal inicial. Sin embargo, la mayoría de los ratones recuperaron su peso corporal inicial entre los días 4 y 7 después de la cirugía.

Los ratones de control no mostraron ningún cambio en el peso corporal después de la cirugía. Se identificaron varios cambios en la morfología renal después de la cirugía utilizando hematoxilina-eosina, ácido-Schiff periódico y tinción tricrómica de Masson. La presencia de yeso proteínico en la luz tubular se observó después de cuatro horas.

Se detectó dilatación tubular a las ocho horas y se notó yeso tubular, así como necrosis celular en los segmentos medulares a las 16 horas después de la cirugía IRI. Después de 24 horas de la cirugía, se observó dilatación tubular. Se detectó infiltración de linfocitos y macrófagos y núcleos celulares agrandados después de 48 horas.

Para el día 4, se observaron células tubulares mitóticas y en el día 7 después de la cirugía IRI, se detectó fibrosis focal. La corteza renal de los ratones durante la reperfusión temprana se monitoreó mediante tinción PAS y se observó una atenuación progresiva del borde del cepillo. Las áreas de fibrosis intersticial en el día 7 después de la cirugía se visualizaron utilizando la tinción de tricoma de Masson.

Se desarrolló un sistema de puntuación de lesiones tubulares para categorizar el daño a lo largo del tiempo. Las puntuaciones más altas de lesión tubular se obtuvieron entre 8 horas y 24 horas después de la IRI renal. Algunos de los pasos más críticos son la correcta colocación de la pinza vascular en el pedículo renal y el mantenimiento de una temperatura corporal constante durante la cirugía.