Name: Generación de organoides cerebrales humanos para el modelado de enfermedades mitocondriales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Aprenda a generar organoides cerebrales humanos a partir de células iPSC para modelar enfermedades mitocondriales sin bioreactores costosos. Este protocolo permite evaluar propiedades mitocondriales y bioenergéticas en contextos neuronales.

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Agradecemos a Miriam Bünning por su apoyo técnico. Agradecemos el apoyo de deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (PR1527/5-1 a A.P.), Spark y berlinesa Institute of Health (BIH) (BIH Validation Funds to A.P.), la United Mitochondrial Disease Foundation (UMDF) (Leigh Syndrome International Consortium Grant to A.P.), University Hospital Duesseldorf (Forschungskommission UKD to A.P.), y el Ministerio Federal Alemán de Educación e Investigación (BMBF) (e: Bio joven investigador concede AZ 031L0211 a A.P.). El trabajo en el laboratorio de C.R.R. fue apoyado por el DFG (FOR 2795 "Sinapsis bajo estrés", Ro 2327/13-1).

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<li>Ludikhuize, M. C., Meerlo, M., Burgering, B. M. T., Colman, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+profile+the+bioenergetics+of+organoids+using+Seahorse%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol to profile the bioenergetics of organoids using Seahorse.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100386(2021).</li>
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Los autores no declaran intereses financieros o no financieros en competencia.

Este artículo describe la generación reproducible de organoides cerebrales derivados de iPSC humanos y su uso para el modelado de enfermedades mitocondriales. El protocolo aquí descrito se modifica en base a un trabajo publicado previamente20. Una ventaja importante del protocolo actual es que no requiere la incrustación manual de cada organoide en una matriz de andamios. De hecho, la solución matricial simplemente se disuelve en el medio de cultivo celular. Además, no hay necesidad de emplear bio...

Las enfermedades mitocondriales representan la mayor clase de errores congénitos del metabolismo1. Son causadas por mutaciones genéticas que interrumpen diferentes procesos mitocondriales, incluyendo la fosforilación oxidativa (OXPHOS)2, el ensamblaje de la cadena respiratoria, la dinámica mitocondrial y la transcripción o replicación del ADN mitocondrial3. Los tejidos con requerimientos energéticos se ven particularmente afectados por la disfunción mitocondrial4. En consecuencia, los pacientes con enfermedades mitocondriales suelen desarrollar manifestaciones neurológicas de inicio temprano.
Actualmente no existen tratamientos disponibles para los niños afectados con enfermedades mitocondriales5. Un obstáculo importante para el desarrollo farmacológico de enfermedades mitocondriales es la falta de modelos efectivos que recapitulen el curso de la enfermedad humana6. Varios de los modelos animales actualmente estudiados no presentan los defectos neurológicos presentes en los pacientes7. Por lo tanto, los mecanismos subyacentes a la patología neuronal de las enfermedades mitocondriales aún no se comprenden completamente.
Estudios recientes generaron iPSCs de pacientes afectados por enfermedades mitocondriales y utilizaron estas células para obtener células neuronales específicas del paciente. Por ejemplo, se ha encontrado que los defectos genéticos asociados a la enfermedad mitocondrial, el síndrome de Leigh, causan aberraciones en la bioenergética celular8,9, la síntesis de proteínas10 y la homeostasis del calcio9,11. Estos informes proporcionaron importantes pistas mecanicistas sobre el deterioro neuronal que ocurre en las enfermedades mitocondriales, allanando el camino para el descubrimiento de fármacos para estas enfermedades incurables12.
Las culturas bidimensionales (2D), sin embargo, no permiten la investigación de la complejidad arquitectónica y la organización regional de los órganos 3D13. Con este fin, el uso de organoides cerebrales 3D derivados de iPSCs específicas del paciente14 puede permitir a los investigadores obtener información adicional importante y, por lo tanto, ayudar a diseccionar cómo las enfermedades mitocondriales afectan el desarrollo y la función del sistema nervioso15. Los estudios que emplean organoides cerebrales derivados de iPSC para investigar enfermedades mitocondriales están comenzando a descubrir los componentes del neurodesarrollo de las enfermedades mitocondriales. 
Los organoides de la médula espinal portadores de mutaciones asociadas con la enfermedad mitocondrial, la encefalopatía mitocondrial, la acidosis láctica y el síndrome de episodios similares a accidentes cerebrovasculares (MELAS), mostraron neurogénesis defectuosa y diferenciación retardada de la neurona motora16. Los organoides corticales derivados de pacientes con enfermedad mitocondrial, síndrome de Leigh, mostraron reducción de tamaño, defectos en la generación de brotes epiteliales neurales y pérdida de la arquitectura cortical17. Los organoides cerebrales de pacientes con síndrome de Leigh demostraron que los defectos de la enfermedad se inician a nivel de las células progenitoras neurales, que no pueden comprometerse con el metabolismo mitocondrial, causando ramificación neuronal aberrante y morfogénesis18. Por lo tanto, los progenitores neurales pueden representar un objetivo terapéutico celular para las enfermedades mitocondriales, y las estrategias que promueven su función mitocondrial pueden apoyar el desarrollo funcional del sistema nervioso.
El uso de organoides cerebrales podría ayudar a descubrir los componentes del neurodesarrollo de las enfermedades mitocondriales. Las enfermedades mitocondriales se consideran principalmente como neurodegeneración de inicio temprano5. Sin embargo, los defectos del neurodesarrollo también están presentes en pacientes afectados por enfermedades mitocondriales, incluyendo retraso en el desarrollo y deterioro cognitivo19. Los organoides cerebrales específicos del paciente pueden ayudar a abordar estos aspectos y dilucidar cómo las enfermedades mitocondriales pueden afectar el desarrollo del cerebro humano. La disfunción mitocondrial también podría desempeñar un papel patogénico en otras enfermedades neurológicas más comunes, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Huntington4. Por lo tanto, dilucidar el impacto de los defectos mitocondriales en el neurodesarrollo utilizando organoides cerebrales también podría ser fundamental para el estudio de esas enfermedades. Este artículo describe un protocolo detallado para generar organoides cerebrales reproducibles que se pueden utilizar para realizar modelos de enfermedades mitocondriales.

<table><tbody><tr><td>2-mercaptoetanol</td><td>Gibco</td><td>31350-010</td><td></td></tr><tr><td>Affinity Designer</td><td>Serif (Europe) Ltd</td><td></td><td>Software de diseño; Editor de gráficos vectoriales</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 burro anti-conejillo de indias</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SAB4600033-250UL</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 burro anti-ratón</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31571</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Antimicina A</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1397-94-0</td><td></td></tr><tr><td>Anti-&beta;-Tubulina III (TUJ-1)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8578</td><td>1:2000</td></tr><tr><td>Láser de argón</td><td>Melles Griot</td><td></td><td>Cualquier otro láser, por ejemplo, láseres de diodo que emiten 488 también está bien</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico</td><td>Sigma</td><td>A92902</td><td></td></tr><tr><td>B-27 con vitamina A</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td>3% en PBS, almacene la solución a -20 & grados; C</td></tr><tr><td>BDNF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-0811</td><td></td></tr><tr><td>cAMP</td><td>Sigma</td><td>D0627</td><td></td></tr><tr><td>Célula Célula Estrella Cultivo de células placa de 6 pocillos</td><td>Greiner-Bio-One</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Concentrado de lípidos químicamente definido</td><td>Gibco</td><td>11905031</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de barrido láser confocal C1</td> Soluciones <td></td> de <td>microscopio Nikon</td><td>Microscopio confocal modular sistema</td></tr><tr><td>Corning Matrigel Factor de crecimiento reducido (GFR) Matriz de membrana basal, sin fenol Libre de rojo, sin LDEV</td><td>Componente de la matriz</td><td>de 356231</td> de <td>Corning</td></tr><tr><td>CyQUANT Kit de ensayo de proliferación celular</td><td>Thermo Fisher</td><td>C7026</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>ThermoFisher</td><td>31330038</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2660-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Burro anticabra Cy3</td><td>Merck Millipore</td><td>AP180C</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Burro anti-ratón Cy3</td><td>Merck Millipore</td><td>AP192C</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Burro anti-conejo Cy3</td><td>Merck Millipore</td><td>AP182C</td><td>1:300</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>DS-Q1Mc Cámara</td><td>Nikon Microscopio Microscopio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>de campo amplio vertical Eclipse 90i</td><td>Soluciones de microscopio Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio vertical Eclipse E 600FN</td> Soluciones <td></td><td></td><td>de microscopio Nikon Microscopio</td></tr><tr><td>invertido Eclipse Ts2</td> Soluciones <td></td><td></td>de <td>Microscopio Nikon</td></tr><tr><td>EZ-C1 Silver Versión 3.91</td> Soluciones <td></td> de <td>microscopio Nikon</td><td>Software de imagen para microscopio confocal</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Sigma Aldrich</td><td>370-86-5</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>GDNF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-291</td><td></td></tr><tr><td>Glasgow MEM</td><td>Gibco</td><td>11710-035</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur de vidrio</td><td>Marca</td><td>747715</td> Glutamax <td>invertido</td></tr><tr><td></td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Láser de helio-neón</td><td>Melles Griot</td><td></td><td>Todos los demás láseres, por ejemplo, láseres de diodo que emiten 594 están bien, también</td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Merck</td><td>H3149-25KU</td><td></td></tr><tr><td>HERACell 240i CO2 Incubadora</td><td>Thermo Scientific</td><td>51026331</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td>1:2500</td></tr><tr><td>Imagen J 1.53c</td><td>Wayne Rasband Instituto Nacional de Salud</td><td></td><td>Software de procesamiento de imágenes</td></tr><tr><td>Injekt Solo 10 mL/ Luer</td><td>Braun</td><td>4606108V</td><td></td></tr><tr>Láser <td>Gibco</td><td>10828010</td><td></td>de <td>repuesto Knockout Serum</td></tr><tr><td>(407 nm)</td><td>Coherente</td><td></td><td>Cualquier otro láser, por ejemplo, láseres de diodo que emiten 407 también está bien</td></tr><tr><td>Map2</td><td>Synaptic Systems</td><td>Nº 188004</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Maxisafe 2030i</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MEM NEAA</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>Stemcell Technology</td><td>85850</td><td>iPSC medio</td></tr><tr><td>Multifuge X3R Centrífuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>10325804</td><td></td></tr><tr><td>MycoAlert Kit de detección de micoplasma</td><td>Lonza</td><td># LT07-218</td><td></td></tr><tr><td>N2 Suplemento</td><td>Gibco</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de un solo uso (23G x 1" TW)</td><td>Neoject</td><td>10016</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements Aadvanced Research 3.2</td><td>Nikon</td><td></td><td>Software de imagen</td></tr><tr><td>Oligomicina A</td><td>Sigma Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Agitador orbital Heidolph Unimax 1010</td><td>Heidolph</td><td>543-12310-00</td><td></td></tr><tr><td>PAP Pluma</td><td>Sigma</td><td>Z377821-1EA</td><td>Para dibujar una barrera hidrofóbica en diapositivas.</td></tr><tr><td>Kit del sistema de disociación de papaína</td><td>Worthington LK003150</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído Merck</td><td></td><td>818715</td><td>4% en PBS, solución de almacenamiento a -20 & grados; C</td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur 7 ml</td><td>VWR</td><td>612-1681</td><td>Graduada hasta 3 mL</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Plan Apo VC 20x / 0,75 aire DIC N2&nbsp; &infin;/0.17 WD 1.0</td> Soluciones <td></td> de <td>microscopio seco Nikon</td><td>Objetivo de microscopio</td></tr><tr><td>Apo VC 60x / 1.40 aceite DIC N2 &infin;/0.17 WD 0.13</td><td>Soluciones</td><td></td> <td>de microscopio NikonMicroscopio de inmersión en aceite Objetivo Placa</td></tr> de <tr><td>Petri de poliestireno (100 mm)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664161</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de poliestireno de fondo redondo con tapón de filtro de celdas (5 mL)</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Roth</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Glass Antifade Moutant</td><td>Invitrogen</td><td>P36980</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro cualitativo</td><td>VWR</td><td>516-0813</td><td></td></tr><tr><td>Inhibidor de rocas</td><td>Merck</td><td>SCM075</td><td></td></tr><tr><td>Rotenona</td><td>Sigma</td><td>83-794</td><td></td></tr><tr><td>S100&beta;</td><td>Abcam</td><td>Ab11178</td><td>1:600</td></tr><tr><td>SB-431542</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>13031</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de bisturí</td><td>Heinz Herenz Hamburq</td><td>1110918</td><td></td></tr><tr><td>SMI312 Biolegend</td><td></td><td>837904</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio</td><td>Merck/Sigma</td><td>31437-1kg-M</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Roth</td><td>3957</td><td></td></tr><tr><td>Sodio fosfato de dihidrógeno</td><td>Applichem</td><td>131965</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sodio</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>SOX2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-17320</td><td>1:100</td></tr><tr><td>StemPro Accutase Reactivo de disociación celular</td><td>Gibco/StemPro</td><td></td><td>A1110501 Reactivo A</td></tr> Super <tr><td>Glue Gel</td><td>UHU</td><td>63261</td><td>gel adhesivo</td></tr><tr><td>SuperFrost Plus</td><td>VWR</td><td>631-0108</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de un solo uso (1 mL)</td><td>BD Plastipak</td><td>300015</td><td></td></tr><tr><td>TB2 Thermoblock</td><td>Biometra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TC Placa 24 Pocillos</td><td>Sarstedt</td><td>83.3922</td><td></td></tr><tr><td>TC Placa 6 Pocillos</td><td>Sarstedt</td><td>83.392</td><td></td></tr><tr><td>TGFbeta3</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-007</td><td></td></tr><tr><td>Campana</td> <td>de cultivo de tejidosThermoFisher</td><td>51032711</td><td></td></tr><tr><td>TOM20</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>SC-11415</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Merck</td><td>X100-5ML</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 0.5M EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome Microm HM 650 V</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Production terminado, cualquier otro micrótomo ajustable también está bien.</td></tr><tr><td>Vibratome Wilkinson Hoja de afeitar clásica Espada</td><td>Wilkinson</td><td>70517470</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Benchkote</td><td>Merck/Sigma</td><td>28418852</td><td></td></tr><tr><td>Wnt Antagonista I</td><td>EMD Millipore Corp</td><td>3378738</td><td></td></tr><tr><td>XF 96 analizador de flujo extracelular</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>100737-101</td><td></td></tr><tr><td>XF Ensayo DMEM Medium</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103680-100</td><td></td></tr><tr><td>XF Solución Calibrante</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>100840-000</td><td></td></tr><tr><td>XFe96 FluxPak (microplaca de 96 pocillos)</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>102416-100</td><td></td></tr></tbody></table>

generación de organoides cerebrales humanos para el modelado de enfermedades mitocondriales

Generation of Human Brain Organoids for Mitochondrial Disease Modeling

Las enfermedades mitocondriales representan la clase más grande de errores congénitos del metabolismo y actualmente son incurables. Estas enfermedades causan defectos del neurodesarrollo cuyos mecanismos subyacentes aún no se han dilucidado. Un obstáculo importante es la falta de modelos efectivos que recapitulen el deterioro neuronal de inicio temprano observado en los pacientes. Los avances en la tecnología de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) permiten la generación de organoides cerebrales tridimensionales (3D) que se pueden utilizar para investigar el impacto de las enfermedades en el desarrollo y la organización del sistema nervioso. Los investigadores, incluidos estos autores, han introducido recientemente organoides cerebrales humanos para modelar trastornos mitocondriales. Este artículo informa un protocolo detallado para la generación robusta de organoides cerebrales derivados de iPSC humanos y su uso en perfiles bioenergéticos mitocondriales y análisis de imágenes. Estos experimentos permitirán el uso de organoides cerebrales para investigar disfunciones metabólicas y de desarrollo y pueden proporcionar información crucial para diseccionar la patología neuronal de las enfermedades mitocondriales.

El protocolo descrito aquí facilita la generación robusta de organoides redondos (Figura 1A). Los organoides generados contienen neuronas maduras que se pueden visualizar utilizando marcadores de proteínas específicos para axones (SMI312) y dendritas (proteína 2 asociada a microtúbulos (MAP2)) (Figura 1B).. Los organoides maduros contienen no solo células neuronales (MAP2-positivas) sino también células gliales ...

Describimos un protocolo detallado para la generación de organoides cerebrales derivados de células madre pluripotentes inducidas por humanos y su uso en el modelado de enfermedades mitocondriales.

Generación de organoides cerebrales humanos para el modelado de enfermedades mitocondriales

Mitochondrial diseases represent the largest class of inborn errors of metabolism and are currently incurable. These diseases cause neurodevelopmental ...

Este protocolo tiene como objetivo utilizar organoides cerebrales para estudiar enfermedades mitocondriales. Fue desarrollado para generar organoides cerebrales reproducibles en la evaluación de sus propiedades mitocondriales. Este método no requiere biorreactores costosos y procedimientos de incrustación que consumen mucho tiempo.Por lo tanto, es fácil de implementar y escalar. Este protocolo permite generar organoides cerebrales reproducibles y probar sus propiedades mitocondriales. Esto puede conducir a la identificación de objetivos de intervención para enfermedades mitocondriales intratables.Para comenzar, cultive iPSC humanas en condiciones libres de alimentación en medio iPSC en placas recubiertas de seis pocillos y manténgalas en una incubadora de cultivo de tejidos humidificados a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono. Pase las iPSC al 80% de confluencia utilizando un medio de desprendimiento libre de enzimas en proporciones que van de uno por cuatro a uno por 12. Para aumentar la supervivencia celular, agregue 10 micromolares de proteína quinasa asociada a rho o inhibidor de ROCK después de cada división.Disociar el 80% de iPSCs en el día cero. Preparar el medio de

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El video muestra un método para generar organoides cerebrales humanos a partir de células madre pluripotentes inducidas. Muestra cómo la neurosfera forma una capa neuroectodérmica, que suprime la formación de otras capas germinales. Las neuroesferas están incrustadas en una matriz de gel 3D y forman brotes neuroepiteliales. Cuando se incuban con medios organoides, estas yemas neuroepiteliales se diferencian en regiones específicas del cerebro, lo que da lugar a la formación de organoides...

Un método in vitro para generar organoides cerebrales humanos

El modelado del desarrollo del cerebro humano se ha visto obstaculizado debido a la complejidad sin precedentes del tejido epitelial neural. Aquí, se describe un método para la generación robusta de organoides cerebrales para delinear eventos tempranos del desarrollo del cerebro humano y para modelar la microcefalia in vitro.

Generación de derivados de IPSC organoides cerebro humano para modelar los trastornos del neurodesarrollo temprano

Organoides cerebrales representan un nuevo sistema modelo para investigar el cerebro humano desarrollo temprano en vitro. Este artículo proporciona la metodología detallada para generar eficientemente organitas prosencéfalo-tipo dorsal homogéneo de células pluripotentes inducidas humanas incluyendo pasos críticos de la caracterización y validación.

Generación de organoides Cerebral prosencéfalo-tipo estandarizadas y reproducibles de humanos inducida por células madre pluripotentes

Este estudio introduce y describe protocolos para derivar dos organoides neuronales humanos específicos como un modelo relevante y preciso para el estudio de 1) desarrollo de glioblastoma humano dentro de organoides neuronales humanos exclusivamente en humanos y 2) neurona dopaminérgica diferenciación que genera un organoide tridimensional.

Organoides neuronales humanos para el estudio del cáncer cerebral y las enfermedades neurodegenerativas

Este protocolo se generó como un medio para producir organoides cerebrales de una manera simplificada y de bajo costo sin factores de crecimiento exógenos o matriz de membrana de sótano sin dejar de mantener la diversidad de tipos de células cerebrales y muchas características de la organización celular.

Un método autodirigido estático para generar organoides cerebrales a partir de células madre embrionarias humanas

En este estudio, proporcionamos una técnica detallada para un sistema de cultivo de organoides corticales simple pero robusto utilizando cultivos hPSC estándar sin alimentador. Este es un protocolo rápido, eficiente y reproducible para generar organoides que modelan aspectos de la senescencia cerebral in vitro.

Generación robusta y altamente reproducible de organoides cerebrales corticales para modelar la senescencia neuronal cerebral in vitro

La electroporación de organoides cerebrales de primates proporciona un enfoque preciso y eficiente para introducir modificaciones genéticas transitorias en diferentes tipos de progenitores y neuronas en un sistema modelo cercano al desarrollo (pato)fisiológico del neocórtex de primates. Esto permite el estudio de los procesos evolutivos y del desarrollo neurológico y también se puede aplicar para el modelado de enfermedades.

Microinyección dirigida y electroporación de organoides cerebrales de primates para la modificación genética

Este protocolo tiene como objetivo platear de manera estable ensamblajes fusionados dorsal-ventral en matrices de electrodos múltiples para modelar la epilepsia in vitro.

Una plataforma de matriz de electrodos múltiples para modelar la epilepsia utilizando ensamblajes cerebrales derivados de células madre pluripotentes humanas

Los organoides cerebrales sirven como un modelo valioso para los estudios de encefalomiopatía mitocondrial, acidosis láctica y episodios similares a accidentes cerebrovasculares (MELAS), ofreciendo información sobre su fisiopatología subyacente y proporcionando una plataforma para la detección de fármacos. Los organoides derivados de líneas celulares con diferentes niveles de heteroplasmia de genes causantes de enfermedades exhiben diferencias fenotípicas significativas.

Modelado de enfermedades mitocondriales utilizando organoides cerebrales: un enfoque en la encefalomiopatía mitocondrial, la acidosis láctica y los episodios similares a accidentes cerebrovasculares

Este protocolo tiene por objeto describir un método para examinar la capacidad de retención de Ca2 + y Ca2 +- activa hinchazón de mitocondrias aisladas de SH-SY5Y mitocondrial de células paso a paso.

Mitocondrial de Ca2 + retención capacidad análisis y Ca2 +-activa hinchazón mitocondrial ensayo

Aprenda a generar organoides cerebrales humanos a partir de células iPSC para modelar enfermedades mitocondriales sin bioreactores costosos. Este protocolo permite evaluar propiedades mitocondriales y bioenergéticas en contextos neuronales.

Generación de organoides cerebrales humanos para el modelado de enfermedades mitocondriales

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