Name: Aplicación de la tomografía de coherencia óptica a un modelo de retinopatía en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Aprende a aplicar tomografía de coherencia óptica para diagnosticar retinopatía en modelos murinos. Esta técnica no invasiva permite obtener imágenes de alta resolución y mediciones cuantitativas del grosor retiniano en tiempo real.

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Fuente del proyecto: Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Guangdong (2018A0303130306). Los autores desean agradecer al Laboratorio de Investigación Oftalmológica, al Centro Oftalmológico Internacional Shantou Conjunto de la Universidad de Shantou y a la Universidad China de Hong Kong por la financiación y los materiales.

Las operaciones se realizaron siguiendo la Declaración sobre el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología. El diseño experimental fue aprobado por el Comité de Ética Animal institucional (Comité de Ética Médica de JSIEC, EC 20171213(4)-P01). En este estudio se utilizaron ratones C57BL / 6J de dos meses de edad y ratones knockout Vldlr . Había 7 ratones en cada grupo, todos los cuales eran hembras y pesaban de 20 g a 24 g.
1. Condiciones experimentales
<ol><li>Asigne los ratones a dos grupos: un grupo experimental formado por ratones knockout Vldlr y un grupo de control formado por ratones C57BL/6J.</li>
	<li>Alimente a los ratones con comida y agua convencionalmente.</li>
	<li>Criar a los ratones en el laboratorio animal en condiciones estables de temperatura ambiente (22 °C), humedad (50-60%), ciclo luz-oscuridad (12 h-12 h) e intensidad de luz ambiente (350-400 lux).</li>
	<li>Preparar el equipo experimental: tomografía de coherencia óptica con oftalmoscopio láser de barrido confocal (cSLO) para animales pequeños (Figura 1A).</li>
	<li>Preparar todos los materiales necesarios para el experimento (Figura 1B) y pesar los ratones (Figura 1C).</li>
</ol>2. Registros de información
<ol><li>Registre la información: grupo, código, fecha de nacimiento, edad, sexo, peso y dosis de anestesia.</li>
</ol>3. Inicio y prueba del instrumento
<ol><li>Encienda la computadora e inicie el software.</li>
	<li>Haga clic en el botón Programa de prueba para completar el programa de prueba.</li>
	<li>Encienda el termostato y precaliéntelo a la temperatura de 37 °C.</li>
	<li>Inicie el procedimiento del módulo OCT después de la prueba del programa.</li>
	<li>Cree un nuevo asunto y rellene la información del ratón.</li>
	<li>Precalienta la manta eléctrica y cúbrela con toallas quirúrgicas.</li>
</ol>4. Anestesia
<ol><li>Use polvo anestésico liofilizado que contenga Tiletamine y Zolazepam para preparar la mezcla anestésica. NOTA: Siga las recomendaciones del comité local de ética animal para la elección, dosis y vía de administración de anestesia. Anestesiar al animal con un anestésico que proporcionará inmovilidad y pérdida de percepción del dolor durante al menos 1 hora, después de lo cual el animal se recupera rápidamente. La dosificación debe basarse en la duración del tiempo de experimento, el peso del animal y otros factores.</li>
	<li>Anestesiar al animal usando la mezcla anestésica preparada. Asegúrese de mantener al animal caliente durante todo el procedimiento hasta la recuperación.</li>
</ol>5. Aplicación de gotas midriáticas
<ol><li>Logre la sujeción manual del mouse por el desaliño, haga que el globo ocular sobresalga ligeramente y gire la cabeza del mouse con un ojo hacia arriba.</li>
	<li>Aplicar las gotas midriáticas para dilatar las pupilas (Figura 2A).</li>
	<li>Compruebe si hay dilatación de la pupila después de 10 min.</li>
</ol>6. Colocación del ratón
<ol><li>Coloque un mouse en una plataforma de manta eléctrica.</li>
	<li>Cubra ambos ojos con gel médico de hialuronato de sodio (Figura 2B).</li>
	<li>Atornille una lente esférica doble 60 D (lente preestablecida) en el dispositivo cSLO (Figura 1A-5, 6).</li>
	<li>Coloque una lente de contacto 100 D en la córnea del ratón con el lado cóncavo tocando el gel de hialuronato de sodio en la superficie corneal (Figura 2C, D y Figura 3A-II).</li>
	<li>Coloque el ratón en la pequeña plataforma animal de temperatura constante y mantenga el ojo a 1-2 mm de distancia de la lente del dispositivo cSLO (Figura 3A).</li>
	<li>Ajuste el ángulo de la lente de contacto con fórceps para mantener la pupila en el centro de la lente.</li>
	<li>Ajuste los ajustes de la cabeza para que el ojo mire hacia adelante.</li>
</ol>7. Oftalmoscopio láser de barrido confocal (cSLO)
<ol><li>Haga clic en el botón OCT , elija el módulo del mouse e inicie el programa cSLO (Figura 4B).</li>
	<li>Seleccione el modo IR (fuente de luz: luz roja) y ajuste el parámetro (rango: 2047, Figura 4D).</li>
	<li>Seleccione el ojo a examinar (ojo derecho: figura 4C-1; ojo izquierdo: figura 4C-2). </li>
	<li>Controle la palanca y mueva la lente predefinida hacia la lente de contacto lentamente.</li>
	<li>Ajuste el valor de las dioptrías hasta que la imagen del polo posterior sea clara (Figura 4E).</li>
	<li>Haga más ajustes para alinear la imagen del polo posterior de la retina, centrándola en la cabeza del nervio óptico.</li>
</ol>8. Tomografía de coherencia óptica (OCT)
<ol><li>Inicie el programa OCT (Figura 4G).</li>
	<li>Haga clic en la barra de progreso hacia arriba y hacia abajo hasta que aparezca la imagen de OCT (Figura 4H).</li>
	<li>Ajuste los parámetros: Rango mínimo (Figura 4I) = 0-20, Rango máximo (Figura 4J) = 40-60.</li>
	<li>Ajuste la distancia preestablecida de la lente y la dirección de la posición hasta obtener una imagen OCT ideal.</li>
	<li>Seleccione la posición de escaneo moviendo la línea estándar en el cSLO (Figura 4M).</li>
	<li>Comience a escanear desde la cabeza del nervio óptico.</li>
	<li>Recopilar imágenes en el mismo orden para cada ojo: línea horizontal: cabeza del nervio óptico → superior → inferior; Línea vertical: Cabeza del nervio óptico → nasal → temporal.</li>
	<li>Recopila imágenes desde cuatro direcciones.</li>
	<li>Haga clic en Promedio para superponer las señales de imagen cSLO y OCT (Figura 4F y Figura 4O).</li>
	<li>Haga clic en el botón de disparo para adquirir la imagen SLO-OCT (Figura 4P).</li>
	<li>Guarde y exporte todas las imágenes (Figura 4Q, R).</li>
</ol>9. El final del experimento (después del examen PTU)
<ol><li>Coloque el mouse sobre la manta eléctrica para mantenerlo caliente hasta que se despierte. NOTA: El ratón debe ser monitoreado hasta que recupere suficiente conciencia para mantener la decúbito esternal. La exposición postoperatoria a la luz brillante debe minimizarse.</li>
	<li>Retire la lente de contacto 100 D.</li>
	<li>Aplique el gel ocular de levofloxacina para proteger la córnea.</li>
	<li>Vuelva a colocar el ratón en la jaula después de que se despierte. NOTA: Asegúrese de que el ratón examinado no se devuelva a la compañía de otros ratones hasta que se recupere por completo.</li>
	<li>Apague el software y apague el equipo.</li>
	<li>Limpie la lente de contacto 100 D con agua; Seque la lente.</li>
	<li>Limpiar y desinfectar el ambiente.</li>
</ol>10. Análisis de imágenes
<ol><li>Compare las imágenes OCT de ratones knockout Vldlr con las de ratones C57BL / 6J.</li>
	<li>Observe múltiples posiciones: escaneos verticales y horizontales que pasan a través de la papila óptica; exploraciones superiores, inferiores, nasales y temporales; y exploraciones anormales en el sitio de reflexión.</li>
	<li>Observe el grosor, la forma, las capas y las lesiones de reflectancia anormal de la retina en cada imagen, así como la interfaz vítrea de la retina y el cuerpo vítreo.</li>
	<li>Registre las ubicaciones, características y números de lesiones.</li>
</ol>11. Corrección de la estratificación retiniana
<ol><li>Haga clic en Examen de carga en la interfaz de OCT (Figura 5A).</li>
	<li>Llame a las imágenes OCT de un mouse desde una ventana emergente.</li>
	<li>Seleccionar imágenes: escaneo de imágenes OCT a través de la papila óptica, horizontal o verticalmente.</li>
	<li>Haga doble clic en la imagen en el contenedor de medios para mostrarla en la pantalla (Figura 5C).</li>
	<li>Haga clic en Detección de capas para completar la estratificación automática en la retina (Figura 5D).</li>
	<li>Seleccione las líneas divisorias a ambos lados de la capa preparada para el análisis (Figura 6D-10).</li>
	<li>Seleccione una línea divisoria separada (Figura 6B-6) y haga clic en Editar capa (Figura 6A-1) para activar la línea cuando aparezca un círculo rojo (Figura 6B-7).</li>
	<li>Ajuste el espaciado (Figura 6A-4, por ejemplo, 50) y el rango límite (Figura 6A-5, por ejemplo, 50).</li>
	<li>Modifique la línea divisoria moviendo el círculo rojo (compare la línea divisoria verde en la Figura 6B y la Figura 6C; La figura 6C muestra el resultado modificado).</li>
</ol>12. Espesor de laminación retiniana
<ol><li>Haga clic en el botón Marcador de medida (Figura 6D-9).</li>
	<li>Seleccione la línea divisoria de la capa a analizar (por ejemplo, en la capa nuclear externa, seleccione la 4ª y5ª línea divisoria de la lista) para mostrar el límite de la capa en la imagen OCT (Figura 6D-10).</li>
	<li>Seleccione Conectar con capa (Figura 6D-11) y Permanezca conectado en movimiento (Figura 6D-12).</li>
	<li>Seleccione el área para mostrar los resultados (la columna seleccionada está coloreada, Figura 6D-13). </li>
	<li>Haga clic en la posición a analizar en la imagen de OCT para que aparezca la línea de medición (perpendicular al eje horizontal y consistente con el color del área resultante) (Figura 6D-14).</li>
	<li>Haga clic en la siguiente columna para la siguiente medición y revele los datos anteriores (Figura 6E-15).</li>
	<li>Lea el valor de Vert (grosor de la posición medida) en la fila Longitud en μm (tejido) (Figura 6E, rectángulo rojo).</li>
	<li>Haga clic en Eliminar marcador (Figura 6E-16) y Nuevo marcador (Figura 6E-17) para volver a realizar la prueba de modo que los resultados cubran los datos originales (si es necesario volver a medirlos).</li>
	<li>Presione Imprimir Scr en el teclado para guardar capturas de pantalla, o haga clic en Guardar examen para guardar directamente (Figura 5H).</li>
	<li>Ingrese los datos en una hoja de cálculo o software estadístico para el análisis estadístico.</li>
</ol>13. Medición del espesor total de la retina
<ol><li>Seleccione la línea 1 (ILM, membrana limitante interna, figura 7B) y la línea 7 (OS-RPE, SG: segmentos fotorreceptores externos; EPR: capa epitelial pigmentaria retiniana, figura 7C) en la lista de la esquina superior derecha. NOTA: El grosor retiniano completo significa el grosor de la capa del neurepitelio retiniano, que es la retina entre ILM y OS-RPE en OCT).</li>
	<li>Mida el grosor de la retina en ambos lados de la papila óptica en un intervalo específico.<ol><li>Por ejemplo: a partir de la apariencia de la estructura retiniana en el borde de la papila óptica, medir 4 valores con un espaciado de 200 μm de la regla horizontal (Figura 7G, H).</li>
	</ol></li>
	<li>Registra todos los valores medidos en una hoja de cálculo.</li>
	<li>Utilice múltiples pruebas t (una por fila) para comparar los valores medidos de cada posición correspondiente en ambos grupos.</li>
</ol>

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</ol>

Los autores declaran no tener ningún posible conflicto de intereses.

En este estudio, se aplicaron imágenes de OCT utilizando un sistema de imágenes de retina de animales pequeños para evaluar los cambios retinianos en ratones knockout Vldlr , que demuestran desprendimiento vítreo posterior incompleto, neovascularización subretiniana y adelgazamiento del grosor de la retina. La OCT es un método de imagen no invasivo para examinar la condición de la retina in vivo. La mayoría de los dispositivos OCT están diseñados para el examen ocular humano. El tamaño del equipo de har...

La tomografía de coherencia óptica (OCT) es una técnica de imagen que puede proporcionar imágenes in vivo de alta resolución y transversales para el tejido 1,2,3,4,5,6,7,8, especialmente para el examen no invasivo en la retina 9,10,11,12 . También se puede utilizar para cuantificar algunos biomarcadores importantes, como el grosor de la retina y el grosor de la capa de fibras nerviosas de la retina. El principio de la OCT es la reflectometría de coherencia óptica, que obtiene información tisular transversal a partir de la coherencia de la luz reflejada de una muestra y la convierte en una forma gráfica o digital a través de un sistema informático7. La OCT es ampliamente utilizada en las clínicas de oftalmología como una herramienta esencial para el diagnóstico, seguimiento y manejo de pacientes con trastornos de la retina. También puede proporcionar información sobre la patogénesis de las enfermedades de la retina.
Además de las aplicaciones clínicas, la OCT también se ha utilizado en estudios con animales. Aunque la patología es el estándar de oro de la caracterización morfológica, la OCT tiene la ventaja de las imágenes in vivo no invasivas y el seguimiento longitudinal. Además, se ha demostrado que la OCT está bien correlacionada con la histopatología en modelos animales de retinopatía 11,13,14,15,16,17,18,19,20. El ratón es el animal más utilizado en estudios biomédicos. Sin embargo, sus pequeños globos oculares plantean un desafío técnico para la realización de imágenes de OCT en ratones.
En comparación con la OCT utilizada por primera vez para imágenes de la retina en ratones21,22, la OCT en animales pequeños ahora se ha optimizado con respecto a los sistemas de hardware y software. Por ejemplo, la OCT, en combinación con el seguidor, reduce significativamente la relación señal-ruido; Las actualizaciones del sistema de software OCT permiten detectar automáticamente más capas de retina; y el proyector DLP integrado ayuda a reducir los artefactos de movimiento.
El receptor de lipoproteínas de muy baja densidad (Vldlr) es una proteína transmembrana en las células endoteliales. Se expresa en las células endoteliales vasculares de la retina, en las células epiteliales pigmentarias de la retina y alrededor de la membrana limitante externa23,24. La neovascularización subretiniana es el fenotipo de los ratones knockout Vldlr 23. Por lo tanto, los ratones knockout Vldlr se utilizan para investigar la patogénesis y la terapia potencial de la neovascularización subretiniana. Este artículo demuestra la aplicación de imágenes OCT para detectar lesiones retinianas en ratones knockout Vldlr, con la esperanza de proporcionar alguna referencia técnica para la investigación de la retinopatía en modelos de animales pequeños.

<table><tbody><tr><td>Lente de contacto de 100 Dpt</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>Accesorio perteneciente a la RETImap</td></tr><tr><td>Lente de vidrio doble asférica de 60 Dpt</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>Accesorio perteneciente a la RETImap</td></tr><tr><td>Manta calefactora eléctrica</td><td>POPOCOLA</td><td>CW-DRT-01</td><td>50 x 35 cm</td></tr><tr><td>Jeringa de inyección (1 mL)</td><td>Kaile</td><td></td><td>0.45 x 16RWLB</td></tr><tr><td>Levofloxacino Clorhidrato Gel para Ojos</td><td>EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD</td><td></td><td>5 g: 0,015 g</td></tr><tr><td>Gel médico de hialuronato de sodio</td><td>Alcon</td><td>16H01E</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas de microlitros</td><td>Shanghai paloma alta industria y comercio co., LTD</td><td>Q31/0113000236C001-2017</td><td>50 &micro; L</td></tr><tr><td>Povidona solución de yodo</td><td>Guangdong medihealth pharmaceutical Co.,LTD</td><td></td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RETImap ROLAND</td><td>CONSULT</td><td>19-99_50-2.1_1.2E</td><td>cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP</td></tr><tr><td>Aretes de animales pequeños</td><td>OSMO POCKET OT110</td><td>INS1005-1S</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide Fenilefrina Colirio Santen</td><td>Pharmaceutical Co.,LTD</td><td></td><td>5 mg/mL</td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>Sigma</td><td>X1251-5G</td><td>5 g</td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac.S.A</td><td>7FRPA</td><td>Tiletamina 125 mg + Zolazepam 125 mg</td></tr></tbody></table>

aplicación de la tomografía de coherencia óptica a un modelo de retinopatía en ratones

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

La tomografía de coherencia óptica (OCT) ofrece un método no invasivo para el diagnóstico de la retinopatía. La máquina OCT puede capturar imágenes transversales de la retina a partir de las cuales se puede calcular el grosor de la retina. Aunque la OCT es ampliamente utilizada en la práctica clínica, su aplicación en la investigación básica no es tan frecuente, especialmente en animales pequeños como los ratones. Debido al pequeño tamaño de sus globos oculares, es difícil realizar exámenes de imágenes de fondo de ojo en ratones. Por lo tanto, se requiere un sistema especializado de imágenes de retina para acomodar las imágenes de OCT en animales pequeños. Este artículo demuestra un sistema específico de animales pequeños para los procedimientos de examen de la OCT y un método detallado para el análisis de imágenes. Se presentan los resultados del examen de OCT retiniana de ratones knockout con receptor de lipoproteínas de muy baja densidad (Vldlr) y ratones C57BL / 6J. Las imágenes OCT de ratones C57BL / 6J mostraron capas retinianas, mientras que las de ratones knockout Vldlr mostraron neovascularización subretiniana y adelgazamiento de la retina. En resumen, el examen de OCT podría facilitar la detección y medición no invasiva de la retinopatía en modelos de ratón.

Gracias a los escaneos de alta resolución de OCT, se pueden observar las capas de la retina del ratón y se pueden identificar reflejos anormales y sus ubicaciones exactas. Las imágenes de OCT retiniana de ratones knockout Vldlr y ratones C57BL / 6J se compararon en este estudio. Las imágenes OCT de todos los ratones C57BL / 6J mostraron varias capas retinianas con diferente reflectividad, y la demarcación fue clara (Figura 8D). En contraste, todos los ratones knockout Vldlr...

Aquí, describimos una técnica de imagen in vivo utilizando tomografía de coherencia óptica para facilitar el diagnóstico y la medición cuantitativa de la retinopatía en ratones.

Aplicación de la tomografía de coherencia óptica a un modelo de retinopatía en ratones

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

La tomografía de coherencia óptica se usa ampliamente en el diagnóstico clínico de diferentes enfermedades de la retina, pero aún es difícil de aplicar en modelos de ratón. Este protocolo describe cómo manejar la técnica de OCT en animales. Esta tecnología se puede aplicar a animales con diferentes tamaños de globo ocular.Permite imágenes transversales retinianas no invasivas, de alta resolución y en tiempo real, junto con mediciones cuantitativas del grosor de la retina. La OCT ayuda en el diagnóstico de retinopatía mediante la identificación de las características de la lesión, como la ubicación, el rango, la forma y el tamaño de las lesiones, así como todas las anomalías retinianas sospechosas, como la neovascularización retiniana. Este protocolo es aplicable a estudios en animales o enfermedades del fondo de ojo, incluidas las enfermedades de la retina.Antes de comenzar el procedimiento, prepárese y siga el protocolo paso a paso. Realizar el experimento cuando el animal esté anestesiado. Uno debe ser capaz de obtener imágenes OCT de buena calidad después de un poco de práctica.Para comenzar, encienda la computadora e inicie el software. Haga clic en el botón programa de prueba para completar el programa de prueba. Luego, encienda el termostato y precaliéntelo a 37 grados centígrados.Después de las pruebas del programa, inicie el procedimiento del módulo OCT. Cree un nuevo asunto y rellene la información del ratón. Luego, precalienta la manta eléctrica y cúbrela con toallas quirúrgicas.Coloque el ratón anestesiado en la plataforma de la manta eléctrica e inmediatamente cubra ambos ojos con gel médico de hialuronato de sodio. A continuación, coloque una lente de contacto 100D en la córnea del ratón con el lado cóncavo tocando el gel de hialuronato de sodio en la superficie de la córnea. Luego, coloque el mouse en la pequeña plataforma animal de temperatura constante del dispositivo cSLO.Ajuste el ángulo de la lente de contacto con fórceps para mantener la pupila en el centro de la lente. Ajuste los ajustes de la cabeza para que el ojo mire hacia adelante. Haga clic en el botón OCT, elija el módulo del mouse e inicie el programa cSLO.Luego, use la palanca de operación para mover lentamente la lente preestablecida hacia la lente de contacto. Haga más ajustes para alinear la imagen del polo anterior-posterior, centrándolo en la cabeza del nervio óptico. A continuación, inicie el programa OCT y haga clic en la barra de progreso hacia arriba y hacia abajo hasta que aparezca la imagen de OCT.Ajuste el rango mínimo entre 0 y 20 y el rango máximo entre 40 y 60. Luego, ajuste la distancia preestablecida de la lente y la dirección de la posición hasta obtener una imagen OCT ideal. Seleccione la posición de escaneo moviendo la línea estándar en el cSLO.A continuación, haga clic en promedio para superponer la señal de imagen cSLO y OCT y haga clic en el botón de disparo para adquirir la imagen OCT SLO. Después del experimento, retire la lente de contacto 100D y aplique el gel ocular de levofloxacina para proteger la córnea. Para corregir la estratificación de la retina, haga clic en examen de carga en la interfaz de OCT y llame a las imágenes de OCT desde una ventana emergente.A continuación, haga doble clic en la imagen en el contenedor de medios para mostrarla en la pantalla. A continuación, haga clic en la detección de capas para completar la estratificación automática en la retina. Después de seleccionar la línea divisoria a ambos lados de la capa preparada para el análisis, haga clic en editar capa para ajustar el espaciado y el intervalo límite.A continuación, modifique la línea moviendo el círculo rojo. Para medir el grosor de la laminación retiniana, haga clic en el botón Medir marcador y seleccione la línea divisoria de la capa que se va a analizar para mostrar el límite de la capa en la imagen OCT. A continuación, seleccione conectar con capa y permanecer conectado en movimiento.A continuación, seleccione el área para mostrar los resultados y haga clic en la posición que se analizará en la imagen OCT para que aparezca la línea de medición. Haga clic en la siguiente columna para ver las mediciones posteriores y para revelar los datos anteriores. Para medir el grosor total de la retina, seleccione la línea uno y la línea siete en la lista de la esquina superior derecha.Luego, a partir de la aparición de la estructura retiniana en el borde de la papila óptica, mida cuatro valores a intervalos de espaciado de 200 micrómetros en la regla horizontal. Las imágenes OCT de ratones C57BL/6 mostraron varias capas retinianas con una demarcación clara. En contraste, los ratones knockout Vldlr mostraron lesiones hiperreflectantes anormales.Las imágenes de OCT mostraron algunas bandas reflectantes medias en las superficies retinianas de los ratones knockout Vldlr. Estas bandas se adhirieron al vaso retiniano, siendo consistentes con las características de OCT de desprendimiento vítreo incompleto. Una lesión hiperreflectante apareció en el espacio subretiniano y se extendió a la capa nuclear externa, pero no atravesó la capa plexiforme externa.La apariencia de OCT de esta lesión fue consistente con los hallazgos patológicos. La sección patológica mostró que la neovascularización rompió la capa del epitelio pigmentario de la retina, los segmentos internos y externos fotorreceptores y la membrana limitante externa, invadiendo la capa nuclear externa, pero no la capa plexiforme externa. Otra banda de lesión hiperreflectante, localizada en el espacio subretiniano, no involucró la capa nuclear externa.De acuerdo con los hallazgos patológicos, esta neovascularización subretiniana no rompió la membrana limitante externa. La comparación del grosor retiniano del ojo derecho en las direcciones temporal, nasal, superior e inferior del polar posterior entre los dos grupos reveló que el grosor de la retina de los ratones knockout Vldlr era significativamente menor que el de los ratones C57BL / 6J. Al realizar el protocolo, coloque correctamente una lente de contacto 100D en la córnea, luego ajuste la posición de la imagen.Seleccione la ubicación de escaneo y superponga la imagen antes de disparar. Después de este procedimiento, la OCT del segmento anterior es factible, lo que requiere cambiar la distancia entre la lente preestablecida y la córnea. Puede mostrar la córnea, la cámara anterior, el iris, el cuerpo ciliar y el cristalino.Esta técnica proporciona una herramienta importante para la investigación de la retinopatía en modelos de animales pequeños, promoviendo la detección no invasiva y la medición de la retinopatía en la investigación básica.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video muestra una técnica de imagen in vivo para detectar y cuantificar la inflamación ocular en un modelo de ratón de uveítis postinfecciosa. La técnica, conocida como tomografía de coherencia óptica (OCT, por sus siglas en inglés), genera imágenes transversales de alta resolución del ojo para evaluar la progresión de la enfermedad.

Tomografía de coherencia óptica para evaluar la uveítis en un modelo de ratón

Source: Jagodzinska, J., et. al., Tomografía de Coherencia Óptica: Imágenes de las Células Gangliales de la Retina del Ratón In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  En este video, demostramos el uso de la tomografía de coherencia óptica de dominio espectral (SD-OCT) para obtener imágenes de las capas de la retina y evaluar los cambios estructurales en un modelo de ratón modificado genéticamente con neuropatía óptica.

Obtención de imágenes in vivo de la retina del ratón mediante tomografía de coherencia óptica

Este manuscrito describe un protocolo para la proyección de imagen en vivo de la retina de ratón con tomografía de coherencia óptica de alta resolución de dominio espectral (SD-OCT). Se centra en las células ganglionares de la retina (RGC) en la región de pepipapilar, con varios análisis y cuantificación de enfoques descritos.

Tomografía de coherencia óptica: Proyección de imagen de ratón ganglionares de la retina las células In Vivo

Aquí nos muestran un nuevo enfoque al uso de tomografía de coherencia óptica de dominio espectral de alta resolución (HR-SD-OCT) para facilitar la presentación de los agentes de terapia génica en el espacio subretinal, evaluar su cobertura areal y caracterizan la vitalidad del fotorreceptor.

Tomografía de coherencia óptica ultraalta resolución ratón para facilitar la inyección Intraocular en investigación de retina la terapia génica

Este protocolo describe cómo alta resolución técnicas imagenológicas como una tomografía de coherencia óptica de dominio espectral y exploración oftalmoscopia de láser puede ser utilizada en pequeños roedores, utilizando un sistema de plataforma imagen oftálmica, para obtener información sobre espesor retiniano y microglía células distribución, respectivamente.

En Vivo Proyección de imagen de ratones de reportero Cx3cr1gfp/gfp con tomografía de coherencia óptica de dominio espectral y exploración oftalmoscopia de láser

Se presenta un protocolo detallado para la evaluación de lecturas visuales y estructurales en roedores por coherencia óptica tomografía y optoquinéticas respuesta. Los resultados proporcionan información valiosa para la investigación oftalmológica y neurológica.

Utilizando tomografía de coherencia óptica y respuesta Optokinetic como lecturas de sistema Visual estructural y funcional en ratones y ratas

Aquí, describimos el uso de la tomografía de coherencia óptica de dominio espectral (SD-OCT) para visualizar estructuras retinianas y oculares in vivo en modelos de degeneración retiniana, glaucoma, retinopatía diabética y miopía.

Evaluaciones estructurales in vivo de enfermedades oculares en modelos de roedores mediante tomografía de coherencia óptica

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

Aquí, describimos un protocolo optimizado para la oclusión de la vena retiniana utilizando rosa de bengala y un sistema de microscopio de imágenes de retina guiado por láser con recomendaciones para maximizar su reproducibilidad en cepas modificadas genéticamente.

Optimización del modelo de ratón de oclusión de venas retinianas para limitar la variabilidad

El presente protocolo describe los pasos para alinear las imágenes de fibragrafía de tomografía de coherencia óptica en luz visible (vis-OCTF) in vivo con imágenes confocales ex vivo de la misma retina de ratón con el fin de verificar la morfología del haz de axones de las células ganglionares de la retina observada en las imágenes in vivo .

Alineación de figramas de tomografía de coherencia óptica en luz visible con imágenes confocales de la misma retina de ratón

Aprende a aplicar tomografía de coherencia óptica para diagnosticar retinopatía en modelos murinos. Esta técnica no invasiva permite obtener imágenes de alta resolución y mediciones cuantitativas del grosor retiniano en tiempo real.

Aplicación de la tomografía de coherencia óptica a un modelo de retinopatía en ratones

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