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DOI: 10.3791/64493-v
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This article presents an optimized protocol for isolating hepatocytes in mice following partial hepatectomy. The method effectively retains lipid-laden hepatocytes, which are typically lost during density-gradient centrifugation, allowing for the study of regenerating hepatocyte populations.
Los hepatocitos cargados de lípidos son inherentes a la regeneración hepática, pero generalmente se pierden con la centrifugación por gradiente de densidad. Aquí, presentamos un protocolo de aislamiento celular optimizado que retiene hepatocitos esteatósicos, produciendo poblaciones representativas de hepatocitos regeneradores después de la hepatectomía parcial en ratones.
El objetivo general de este protocolo es presentar un método optimizado para el aislamiento de hepatocitos en ratones después de una hepatectomía parcial sin necesidad de centrifugación por gradiente de densidad. Por lo general, vemos un gran porcentaje de hepatocitos cargados de lípidos durante la regeneración temprana. Los hepatocitos esteatósicos que generalmente se pierden en la centrifugación del gradiente de densidad debido a la baja densidad se conservan con este protocolo.
Para preparar el equipo de perfusión, conecte una cánula IUI de calibre 26 al extremo de salida del tubo mediante un conector de bloqueo Luer. Luego enjuague el tubo e inserte el extremo de entrada del tubo en el tubo tampón de perfusión precalentado en el baño de agua. Prepárelo con tampón de perfusión caliente a una velocidad de bombeo de tres mililitros por minuto.
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