Preparación de muestras con captura de suspensión de proteínas para proteómica lagrimal mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem
December 1st, 2023
Este protocolo describe un método para recolectar muestras de lágrimas utilizando tiras de Schirmer y un flujo de trabajo cuantitativo integrado para descubrir biomarcadores de proteínas lagrimales no invasivos. El flujo de trabajo de preparación de muestras con captura en suspensión permite una preparación rápida y robusta de muestras de lágrimas y análisis por espectrometría de masas, lo que da como resultado mayores rendimientos de recuperación de péptidos e identificación de proteínas que los procedimientos estándar en solución.
Nuestra investigación tiene como objetivo demostrar el uso de una preparación de muestras de captura de suspensión de proteínas, conocida como trampa S para la investigación basada en espectrometría de masas. Este protocolo emplea una preparación rápida, reproducible y estandarizada de muestras de líquido lagrimal humano recolectadas utilizando el para la investigación traslacional en oftalmología. El líquido lagrimal humano es un fluido corporal que se puede recolectar para pruebas moleculares no invasivas en oftalmología.
Existen muchos métodos estandarizados de recolección de líquido lagrimal y preparación de muestras, que son fundamentales para el éxito de la investigación clínica de enfermedades y afecciones. Los métodos no estandarizados son difíciles de comparar e interpretar entre metodologías y, por lo tanto, afectan los resultados químicos. Este protocolo permite la toma de muestras de fluidos corporales lagrimales y su almacenamiento a temperatura ambiente.
Esto ayuda a facilitar la recogida y el envío de muestras. Proporciona extracciones de péptidos rápidas y robustas para el análisis de espectrómetros de masas, lo que mejora la recuperación e identificación de péptidos. Este protocolo tiene pasos mínimos de preparación de muestras para minimizar los errores y las incertidumbres.
El rendimiento rápido y superior de la identificación y cuantificación de proteínas mediante espectrometría de masas facilitará a los médicos e investigadores el desarrollo de pruebas moleculares no invasivas. Optimizar la preparación de la muestra siempre será uno de los pasos críticos. Independientemente del método de detección, el valor clínico del líquido lagrimal humano aún no se ha investigado por completo.
Se espera que el método de preparación de muestras propuesto abra la puerta a una posible aplicación clínica en un futuro próximo.
Visión general
Este protocolo describe un método para recolectar muestras de lágrimas humanas utilizando tiras de Schirmer y un flujo de trabajo estandarizado para identificar biomarcadores de proteínas en lágrimas de manera no invasiva. La preparación de muestras mediante captura en suspensión mejora la recuperación de péptidos y la identificación de proteínas mediante espectrometría de masas.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Oftalmología
- Espectrometría de masas
- Descubrimiento de biomarcadores
Antecedentes
- El fluido lagrimal humano es un biofluido valioso para pruebas moleculares no invasivas.
- Faltan métodos estandarizados para la recolección y preparación del fluido lagrimal.
- Los métodos no estandarizados dificultan la comparabilidad de la investigación clínica.
- Este protocolo permite el almacenamiento de muestras de lágrimas a temperatura ambiente.
Propósito del estudio
- Establecer un método confiable para la recolección y análisis de fluido lagrimal.
- Mejorar la extracción de péptidos y la identificación de proteínas en espectrometría de masas.
- Facilitar el desarrollo de pruebas moleculares no invasivas en entornos clínicos.
Métodos utilizados
- Recolección de muestras de lágrimas utilizando tiras de Schirmer.
- Preparación de muestras utilizando la metodología de captura en suspensión (S-Trap).
- Análisis espectrométrico de masas para la identificación de proteínas.
- Protocolos estandarizados para minimizar errores e incertidumbres.
Resultados principales
- Se identificaron un total de 1,183 proteínas utilizando el método S-Trap.
- Se identificaron 874 proteínas utilizando procedimientos estándar en solución.
- El análisis de ontología genética mostró funciones proteómicas similares entre los métodos.
- Se lograron una mayor recuperación e identificación de péptidos con el nuevo protocolo.
Conclusiones
- El método S-Trap proporciona un enfoque robusto para el análisis de muestras de lágrimas.
- La estandarización en la recolección de fluido lagrimal puede mejorar los resultados clínicos.
- Este protocolo puede conducir a nuevas aplicaciones en oftalmología.
