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DOI: 10.3791/64617-v
Jimmy Sung-Hei Tse*1, Ying-Hon Sze*1,2, Jimmy Ka-Wai Cheung1,2, King-Kit Li1, Thomas Chuen Lam1,2,3,4
1Centre for Myopia Research, School of Optometry,The Hong Kong Polytechnic University, 2Centre for Eye and Vision Research (CEVR), 3Research Centre for SHARP Vision (RCSV),The Hong Kong Polytechnic University, 4Research Centre for Chinese Medicine Innovation (RCMI),The Hong Kong Polytechnic University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este protocolo describe un método para recolectar muestras de lágrimas utilizando tiras de Schirmer y un flujo de trabajo cuantitativo integrado para descubrir biomarcadores de proteínas lagrimales no invasivos. El flujo de trabajo de preparación de muestras con captura en suspensión permite una preparación rápida y robusta de muestras de lágrimas y análisis por espectrometría de masas, lo que da como resultado mayores rendimientos de recuperación de péptidos e identificación de proteínas que los procedimientos estándar en solución.
Nuestra investigación tiene como objetivo demostrar el uso de una preparación de muestras de captura de suspensión de proteínas, conocida como trampa S para la investigación basada en espectrometría de masas. Este protocolo emplea una preparación rápida, reproducible y estandarizada de muestras de líquido lagrimal humano recolectadas utilizando el para la investigación traslacional en oftalmología. El líquido lagrimal humano es un fluido corporal que se puede recolectar para pruebas moleculares no invasivas en oftalmología.
Existen muchos métodos estandarizados de recolección de líquido lagrimal y preparación de muestras, que son fundamentales para el éxito de la investigación clínica de enfermedades y afecciones. Los métodos no estandarizados son difíciles de comparar e interpretar entre metodologías y, por lo tanto, afectan los resultados químicos. Este protocolo permite la toma de muestras de fluidos corporales lagrimales y su almacenamiento a temperatura ambiente.
Esto ayuda a facilitar la recogida y el envío de muestras. Proporciona extracciones de péptidos rápidas y robustas para el análisis de espectrómetros de masas, lo que mejora la recuperación e identificación de péptidos. Este protocolo tiene pasos mínimos de preparación de muestras para minimizar los errores y las incertidumbres.
El rendimiento rápido y superior de la identificación y cuantificación de proteínas mediante espectrometría de masas facilitará a los médicos e investigadores el desarrollo de pruebas moleculares no invasivas. Optimizar la preparación de la muestra siempre será uno de los pasos críticos. Independientemente del método de detección, el valor clínico del líquido lagrimal humano aún no se ha investigado por completo.
Se espera que el método de preparación de muestras propuesto abra la puerta a una posible aplicación clínica en un futuro próximo.
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