Name: Producción de suero condicionado autólogo modificado y evaluación ex vivo de su potencial curativo en el epitelio corneal murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:15:00.000+00:00
Duration: 3 min 55 s
Description: Aprenda a preparar suero condicionado autólogo modificado para acelerar la cicatrización de heridas en modelos murinos de córnea. Este método simplificado reduce costos y mejora el acceso de pacientes a tratamientos oculares efectivos.

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Los autores agradecen a Ya-Lan Chien y Chia-Ying Lee por su excelente asistencia técnica, y a la empresa OnLine English por la edición lingüística. Este estudio fue financiado en parte por el Proyecto de Investigación Médica Chang Gung (Subvención No. CMRPG3L1491).

La investigación se realizó de acuerdo con las directrices institucionales al inicio de la sección de protocolo. Todos los protocolos y procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con la Declaración de Helsinki y fueron revisados y aprobados por la Junta de Revisión Institucional de la Fundación Médica Chang Gung. Todos los voluntarios fueron informados de la naturaleza de este estudio y firmaron un formulario de consentimiento informado antes de su inclusión. Los consumibles necesarios para todo el procedimiento experimental se presentan en la Figura 1 y la Figura 2, así como en la Tabla de materiales.
1. Preparación de los materiales necesarios para producir gotas oftálmicas mACS
<ol><li>Prepare 250 ml de solución de glicerol al 10% y mantenga listo un equipo de infusión de alas de mariposa de 21 G, una jeringa de 3 ml sin la aguja y seis tubos de vacutainer de 10 ml que contengan heparina 158 unidades USP listas (Figura 1).</li>
	<li>Conecte la aguja de recolección de sangre de 21 G a la jeringa de 3 ml y extraiga 3 ml de solución de glicerol al 10% en la jeringa preparada. NOTA: Todos los materiales deben esterilizarse antes de insertar la aguja.</li>
	<li>Distribuir la solución de glicerol al 10% en los tubos de vacutainer en secuencia, con aproximadamente 0,5 ml de solución de glicerol al 10% en cada uno (Figura 3A). NOTA: Debido a la presión negativa en el tubo de ensayo, la aguja debe salir inmediatamente después de entrar para distribuir uniformemente 3 ml de solución de glicerol a los seis tubos de ensayo.</li>
	<li>Esterilice la piel del paciente con hisopos de algodón estériles con alcohol al 75%. Perforar la vena superficial de las extremidades superiores del paciente con la aguja de recolección de sangre de 18 G. Extraiga 60-70 ml de sangre venosa de la vena superficial en total.</li>
</ol>2. Preparación para las gotas oftálmicas mACS
<ol><li>Inyectar secuencialmente 10 ml de la sangre venosa extraída en cada uno de los seis tubos vacutainer (Figura 3B). NOTA: Este paso se basa en la presión negativa del vacío para llenar los tubos. Para evitar la alteración de las células sanguíneas y la hemólisis, no aplique ninguna presión positiva.</li>
	<li>Colocar los seis tubos vacutainer en la incubadora con una temperatura constante de 37 °C durante 4 h (Figura 3C). NOTA: El estado hipóxico se mantiene y estabiliza por la presión negativa restante en un tubo sellado que recibió glicerol.</li>
	<li>Retirar los tubos de la incubadora después de 4 h y centrifugarlos a 3.500 × g durante 10 min a temperatura ambiente.</li>
	<li>En este punto, prepare los materiales para la extracción de mACS, incluidos los frascos de gotas oculares esterilizados, una jeringa de 3 ml con la aguja, un filtro de 0,22 μm, una aguja de 18 G y un par de guantes estériles (Figura 2). NOTA: La mesa de operaciones debe limpiarse con alcohol al 75% para garantizar un ambiente aséptico. El sobrenadante, después de la centrifugación, ya es un producto semiacabado de mACS.</li>
	<li>Coloque los seis tubos en el bastidor de tubos y abra las tapas después de completar la centrifugación (Figura 3D). NOTA: No se requiere esterilidad en este paso.</li>
	<li>Póngase guantes estériles y extraiga el mACS uno por uno usando una jeringa de 3 ml con una aguja de 18 G. NOTA: Tenga cuidado de no extraer la capa inferior de células sanguíneas durante este paso (Figura 3E).</li>
	<li>Extraiga la aguja, conéctela al filtro de 0,22 μm y conecte la aguja de recolección de sangre de 23 G, 1,5 pulgadas con la jeringa original de 3 ml a la salida a continuación (Figura 3F).</li>
	<li>Empuje suavemente la aguja a través del filtro de 0,22 μm en los frascos estériles preparados para gotas para los ojos (Figura 3G).</li>
	<li>Repita los pasos anteriores hasta que todos los mACS se hayan filtrado y almacenado en frascos de gotas para los ojos (Figura 3H).</li>
	<li>Conservar las colirios mACS a 4 °C para su uso inmediato; conservar a -20 °C para su conservación a largo plazo. NOTA: No los conserve durante más de 2 semanas a 4 °C o durante más de 3 meses a -20 °C 9,19.</li>
</ol>3. Modelo de cicatrización de heridas ex vivo del epitelio corneal murino
NOTA: El siguiente modelo animal ex vivo se basó en la experiencia previa de Hung et al. sobre lesiones mecánicas del epitelio corneal20. Los siguientes pasos deben realizarse bajo el microscopio para crear una herida epitelial corneal bien circunscrita y consistente.
<ol><li>Anestesiar a los ratones C57BL/6 con 3% -4% de isoflurano. Aplique el punzón de biopsia de piel sobre la córnea central murina, dejando un círculo poco profundo en el epitelio como un margen uniforme de la herida. NOTA: Sea suave para evitar la ruptura del globo ocular.</li>
	<li>Debridar el epitelio corneal dentro del área confirmada hasta la capa de Bowman, con un removedor de anillo de óxido corneal equipado con una rebaba de 0,5 mm.</li>
	<li>Para establecer el modelo animal ex vivo de la herida corneal mecánica, cosechar el globo ocular y preparar bien el cultivo.<ol><li>Eutanasia a los ratones primero; Luego, presione suavemente los bordes orbitales superior e inferior de los ratones, introduzca la punta de los fórceps sobre el espacio retrobulbar y saque el globo ocular y sosténgalo por los fórceps.</li>
		<li>Cortar el nervio óptico y el tejido blando periorbitario con tijeras corneales para aislar perfectamente el globo ocular.</li>
		<li>Prepare un plato de 96 pocillos con cera derretida en su interior. Cree rápidamente un orificio redondo usando las puntas de las pinzas y luego espere la solidificación.</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare los medios a probar: 0.5% mACS, 0.5% AS para comparación, solución salina normal como control negativo y medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM). NOTA: mACS se obtiene utilizando el protocolo mencionado anteriormente.</li>
	<li>Para el cultivo ex vivo , coloque el globo ocular cosechado en la placa preparada de 96 pocillos. Agregue 200 μL de cada medio en la placa de 96 pocillos.</li>
	<li>Colocar la placa de cultivo de 96 pocillos en la incubadora a 37 °C con un 5% deCO2. Asegúrese de que los medios de cultivo se cambien cada 24 h.</li>
	<li>Para confirmar el efecto secuencial de cicatrización de heridas, controle el área de la herida epitelial bajo el microscopio cada 8 h mediante tinción con fluoresceína.<ol><li>Disuelva la fluoresceína en el papel fluoresceína con solución salina normal.</li>
		<li>Deje caer el tinte fluoresceína sobre la córnea central murina, luego obsérvelo y documéntelo bajo un microscopio. Un resultado típico se muestra en la Figura 4. NOTA: Una gota (aproximadamente 0,05 ml) de colorante fluoresceína es suficiente para la observación.</li>
	</ol></li>
</ol>

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</ol>

Todos los autores declaran que no existe conflicto de intereses.

En este estudio, se describe un protocolo para la preparación de mACS y se muestra además el beneficio de las gotas oftálmicas mACS en la cicatrización de heridas de modelos animales. La modificación crucial de este protocolo mACS es la adición de aproximadamente 0,5 ml de solución de glicerol al 10% en cada tubo de ensayo, lo que crea condiciones hipóxicas adecuadas durante la incubación de 4 h a 37 °C. Esta configuración proporciona al AS el estrés adecuado y hace que las células secreten los factores de crecimiento n...

Los efectos terapéuticos del suero autólogo (EA) en las enfermedades del ojo seco fueron reportados por primera vez en la década de 1980 por Fox et al.1. Se cree que tanto la propiedad lubricante como los componentes bioquímicos epiteliotrópicos esenciales en la EA, imitando las lágrimas naturales, benefician la proliferación de células epiteliales corneales. En las últimas décadas, se han realizado varios estudios sobre esta base. Los componentes tróficos incluyen factor de crecimiento epidérmico (EGF), vitamina A, factor de crecimiento transformante β (TGF-β) y otras citocinas. Curiosamente, el suero es rico en TGF-β y vitamina A, que se cree que desempeñan un papel fundamental en la proliferación epidérmica 2,3,4,5. Además, al tratar a pacientes con enfermedades de la superficie ocular, varios estudios han demostrado algunas ventajas de las gotas oftálmicas AS en los resultados informados por los pacientes, otros parámetros objetivos del ojo seco 6,7 y hallazgos microscópicos como la densidad celular8. Los estudios de metanálisis revelaron que podría haber algunos beneficios en la mejora de los síndromes del paciente con el tratamiento con gotas oftálmicas para la EA, pero aún faltan resultados y observaciones a largo plazo 9,10.
A diferencia de la EA, el plasma rico en plaquetas (PRP) se deriva de la adición de un anticoagulante durante la preparación, con una centrifugación diferencial adicional y la activación química de las plaquetas. En comparación con la EA, numerosos productos químicos y factores de crecimiento, como TGF-β, factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y EGF, están presentes en PRP. También se ha aplicado a las enfermedades de la superficie ocular con beneficios clínicos en el alivio de los síntomas11.
El vínculo cruzado entre los defectos epiteliales y la inflamación es complejo. En particular, la inmunofisiopatología es otro tema importante en las enfermedades de la superficie ocular. Se cree que las citoquinas proinflamatorias, como IL-1β e IFN-γ, son mediadores fundamentales en cascadas inflamatorias12. Se abren así nuevas vías de tratamiento basadas en la comprensión del mecanismo inmune. Las estrategias para detener este proceso inflamatorio, incluyendo la producción de antagonistas del receptor de interleucina-1 (IL-1Ra) y otras citoquinas antiinflamatorias, también pueden desempeñar un papel importante en las enfermedades de la superficie ocular13,14,15.
Desde 1998, Orthokine, un suero condicionado autólogo (SCA) comercializado, ha sido utilizado clínicamente en pacientes ortopédicos que sufren de osteoartritis (OA), artritis reumatoide (AR) y trastornos de la columna vertebral13. En comparación con AS y PRP, el tratamiento con perlas de vidrio recubiertas químicamente y la incubación hipóxica para activar monocitos son las características específicas de ACS16. Teóricamente, se pueden secretar más factores antiinflamatorios al agregar estrés de supervivencia a las células, lo que resulta en una mayor concentración de componentes inmunomoduladores esenciales, incluida la IL-1Ra. Los beneficios terapéuticos mejorados del SCA en la OA, en comparación con la EA, también han sido reportados17. Las enfermedades de la superficie ocular comparten antecedentes inmunes similares con las enfermedades inflamatorias ortopédicas en algunos aspectos. Por lo tanto, sobre la base de los resultados exitosos de la terapia derivada de la sangre humana en el campo ortopédico, el SCA podría tener ventajas sobre los tratamientos convencionales en la práctica clínica por sus propiedades epiteliotrópicas e inmunomoduladoras. Aunque el SCA ha sido ampliamente utilizado en enfermedades inflamatorias ortopédicas, sus aplicaciones clínicas en oftalmología aún necesitan ser exploradas, lo que puede verse obstaculizado por su alto costo, falta de apoyo de la literatura y falta de estandarización del proceso de preparación, lo que resulta en un rendimiento diverso.
En este artículo de video, se demostró un método novedoso, rentable y conveniente para generar el ACS modificado (mACS), o plasma rico en factores de crecimiento (PRGF), produciendo una solución de gotas para los ojos con un valor práctico comparable al ACS comercializado. Se mantuvieron las ideas clave de agregar anticoagulantes y activar las células sanguíneas para secretar citoquinas antiinflamatorias mediante incubación estresada, pero a diferencia de los métodos inducidos químicamente, como los basados en perlas de vidrio recubiertas de CrSO4 y kits comerciales, el estado de estrés crítico es inducido físicamente por la incubación hipóxica en este método. Además, se agregó glicerol para proporcionar beneficios adicionales, incluido un aumento en la estabilidad de la membrana de las células sanguíneas, el mantenimiento de una presión adecuada del líquido extracelular osmótico18 y una fuente adecuada de nutrientes en condiciones hipóxicas que evitan el estrés excesivo de las células.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; placa de cultivo de 96 pocillos</td><td>Merck KGaA, Alemania</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>Espéculo de tapa Barraquer</td><td>katena</td><td>K1-5355</td><td>15 mm</td></tr><tr><td>Portaagujas Barraquer</td><td>Katena</td><td>K6-3310</td><td>sin cerradura&nbsp;</td></tr><tr><td>Punzón de vacío Barron 8.0 mm</td><td>katena</td><td>K20-2108</td><td>para cortar papel de filtro</td></tr><tr><td>BD 10.0 mL tubos vacutainer que contienen heparina 158 unidades USP</td><td>Becton,Dickinson and Company, US</td><td>367880</td><td>Al menos 6 tubos, necesarios para recolectar sangre para experimentos posteriores y para evitar la aglutinación de sangre</td></tr><tr><td>BD 21 G equipo de infusión con alas de mariposa</td><td>Becton,Dickinson and Company, US</td><td>367281</td><td>Para una distribución uniforme de la solución de glicerol</td></tr><tr><td>C57BL/6 ratones&nbsp;</td><td>Centro Nacional</td><td>de Animales de Laboratorio RMRC11005</td><td>para el modelo de ratón</td></tr><tr><td>Castroviejo pinzas de 0,12 mm</td><td>katena&nbsp;</td><td>Centrífuga K5-2500</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf, Alemania</td><td>5811000428</td><td>3.500 x g durante 10 min</td></tr><tr><td>Cheng Yi 10,0 mL frasco gotero esterilizado</td><td>Cheng Yi Chemical, Taiwán</td><td>CP405141</td><td>Debe ser estéril y como contenedor de almacenamiento para el producto final</td></tr><tr><td>Removedor de anillos de óxido corneal con rebaba de 0,5 mm</td><td>Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX</td><td>CHI-675</td><td>para el desbridamiento del epitelio corneal</td></tr><tr><td>Medio esencial mínimo modificado de Dulbecco</td><td>Merck KGaA, Alemania</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro&nbsp;</td><td>Toyo Roshi Kaisha, Ltd.</td><td>1.11</td><td></td></tr><tr><td>Tiras oftálmicas de fluoresceína sódica U.S.P</td><td>OPTITECH</td><td></td><td>OPTFL100 tinción para el defecto epitelial de la córnea&nbsp;</td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Firstek, Taiwán</td><td>S300S</td><td>37 &deg; C para 4 h</td></tr><tr><td>Guantes estériles Kanam Kanam</td><td>Latex Industries, India</td><td>EN455</td><td>Para funcionamiento aséptico</td></tr><tr><td>Merck 0.22 &micro; m filtro</td><td>Merck KGaA, Alemania</td><td>PR05359</td><td>Al menos 2 filtros para la filtración de mACS</td></tr><tr><td>Nang Kuang 250 mL solución de glicerol al 10%</td><td>Nang Kuang Pharmaceutical, Taiwán</td><td>19496</td><td>Para ofrecer un efecto adecuado de estabilización de la membrana y presión osmótica extracelular para las células sanguíneas</td></tr><tr><td>Solución salina normal</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>100-120-1101</td><td></td></tr><tr><td>Punzón de biopsia de piel 2mm</td><td>STIEFEL</td><td>22650</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Carl Zeiss Meditec, Dublín, CA</td><td>Microscopio</td><td>SV11</td> para cirugía</tr><tr><td>Terumo Aguja de 18 G</td><td>Terumo, Taiwán Jeringa</td><td>SMACF0120-18BX</td><td>de 3,0 mL con aguja de 18 g para extraer el sobrenadante después de la centrifugación</td></tr><tr><td>Jeringa Terumo de 20,0 mL</td><td>Terumo, Taiwán</td><td>MDSS20ES</td><td>Podría usarse para recolectar suero después de la centrifugación inicial y usarlo para la centrifugación secundaria.</td></tr><tr><td>Jeringa Terumo de 3,0 mL con la aguja de 23 G</td><td>Terumo, Taiwán</td><td>MDSS03S2325</td><td>jeringa de 3,0 mL se utiliza para extraer el sobrenadante después de la centrifugación. A continuación, conecte el filtro y la aguja de 23 g para inyectar en los frascos de gotas para los ojos.</td></tr><tr><td>Tijeras de tenotomía Westcott medianas</td><td>katena</td><td>K4-3004</td><td></td></tr></tbody></table>

producción de suero condicionado autólogo modificado y evaluación ex vivo de su potencial curativo en el epitelio corneal murino

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Las terapias tópicas derivadas de la sangre humana han sido una bendición para los médicos en las últimas décadas. El suero autólogo (EA) y el plasma rico en plaquetas (PRP) están enriquecidos en factores de crecimiento epiteliotrópicos que son esenciales en la cicatrización de heridas corneales. A diferencia de AS, PRP se basa en un sistema de centrifugación diferencial, produciendo más factores de crecimiento derivados de plaquetas. El suero autólogo condicionado (SCA) no solo preserva la preparación de AS y PRP, sino que también se centra en las propiedades inmunomoduladoras, que son importantes en las enfermedades inflamatorias.
La falta de protocolos estandarizados y los altos costos de preparación son limitaciones para la aplicación clínica de SCA. Este experimento en video demuestra un procedimiento operativo estándar para preparar gotas oftálmicas modificadas de suero autólogo condicionado (mACS). Primero, se agregó glicerol en jeringas de heparina como estabilizador de células sanguíneas durante la incubación hipóxica. Para activar las células sanguíneas, se inició una incubación de 4 h a 37 °C. Luego, las muestras de sangre se centrifugaron a 3.500 × g durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de la filtración del sobrenadante a través de un filtro de 0,22 μm, las gotas oftálmicas mACS se prepararon completamente.
Una prueba tentativa del efecto terapéutico de mACS mostró que puede tener ventajas competitivas sobre la EA convencional en la cicatrización de heridas corneales en ojos de ratón ex vivo . La EA utilizada en este estudio fue preparada de acuerdo con los estudios publicados y la práctica clínica en nuestro hospital. Por lo tanto, la eficacia de mACS en enfermedades de la superficie ocular podría evaluarse en futuras investigaciones a través de estudios in vivo en animales y ensayos clínicos.

La Figura 1 y la Figura 2 muestran los materiales necesarios para el experimento, y la Figura 3 muestra los pasos secuenciales y los productos intermedios exitosos durante la preparación de mACS. Primero, se agregaron 0.5 ml de solución de glicerol al 10% en cada tubo de ensayo estéril de 10 ml (Figura 3A). Luego, se obtuvieron 60-70 mL de sangre venosa del paciente, y se inyectaron 10 mL de sangre en c...

Este artículo describe un protocolo para simplificar el proceso y hacer que la preparación de suero condicionado autólogo (SCA) sea menos costosa. No se necesitan jeringas especiales ni perlas de vidrio recubiertas superficialmente. Además, el SCA modificado (mACS) tiene ventajas competitivas sobre el suero autólogo convencional en la cicatrización de heridas corneales de ojos murinos ex vivo.

Producción de suero condicionado autólogo modificado y evaluación ex vivo de su potencial curativo en el epitelio corneal murino

Human blood-derived topical therapies have been a boon to clinicians in recent decades. Autologous serum (AS) and platelet-rich plasma (PRP) are enriched ...

Este proceso presenta un producto innovador derivado de la sangre llamado mACS, que no requiere ningún procesamiento técnico complejo. También acelera la cicatrización de heridas en mayor medida que el suero autólogo convencional. Además de proporcionar un proceso de preparación estandarizado, esta técnica también puede reducir el costo de las gotas oftálmicas de suero, mejorando la accesibilidad del paciente a una opción de tratamiento más asequible.Esta técnica se puede aplicar en campos que requieren promover la regeneración, reparación y antiinflamación de heridas o tejidos. Esta técnica será una gran ventaja para heridas difíciles de curar y enfermedades inflamatorias crónicas como enfermedades graves de la superficie ocular. Para comenzar, inyecte 10 mililitros de la sangre venosa humana previamente extraída en cada uno de los seis tubos vacutainer.Coloque los tubos en una incubadora a 37 grados centígrados durante cuatro horas y luego centrifugue los tubos a 3, 500 G durante 10 minutos a temperatura ambiente. Decapear los tubos después de colocarlos en la rejilla. Después de ponerse guantes estériles, use una jeringa de tres mililitros equipada con una aguja de calibre 18 pa

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Medicine

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Se presenta una técnica para la fabricación de membranas microbolsas dentro electrohiladas en el que estudiar el comportamiento celular. Específicamente, se describe una combinación de microstereolithography y electrospinning para la producción de PLGA (poli (lactida-co-glicólido)) dispositivos de biomateriales corneales equipados con microfeatures.

Combinación de Microstereolithography y electrospinning para Fabricación de membranas Equipado con nichos para la regeneración de la córnea

Se presenta un ejemplo de terapia génica adenoviral en las córneas diabéticas humanas cultivadas con órganos para la normalización de la cicatrización tardía de heridas y la expresión marcadamente reducida de marcadores de células madre epiteliales en estas córneas. También se describe la optimización de este proceso en cultivos epiteliales limbales enriquecidos con células madre.

Terapia génica adenoviral para Diabetic Queratopatía: Efectos en la curación de heridas y Stem Cell expresión del marcador en córneas de órganos cultivados humanos y células epiteliales Limbal

Un cultivo primario de células endoteliales corneales bovinas se utilizó para investigar el mecanismo de la transición endotelial-mesenquimal corneal. Además, se utilizó un modelo de endotelio corneal criolesión rata para demostrar transición endotelial-mesenquimal corneal in vivo.

En vitro y en modelos in vivo para estudiar la transición del endotelio corneal-mesenquimal

Un protocolo para un ex vivo modelo de cultura órgano córneo es útil para estudios de cicatrización se describe. Este sistema modelo puede utilizarse para evaluar los efectos de agentes para promover la curación regenerativa o toxicidad de la droga en un ambiente organizado de multicelular 3D.

Ex Vivo modelo de cultura órgano córneo para la curación de heridas estudios

Aquí, presentamos un protocolo para separar las células endoteliales corneales (CEC) de la membrana de Descemet (DM) utilizando un láser neodimio:YAG (Nd:YAG) como modelo de enfermedad ex vivo para la queratopatía bullosa (BK).

Desarrollo de un Modelo Experimental No Invasivo, Asistido por Láser de Pérdida Celular Endotelial Corneal

Este protocolo describe los pasos críticos necesarios para establecer y cultivar cultivos celulares endoteliales corneales a partir de explantas de tejido humano o ovino. También se presenta un método para subculturizar células endoteliales corneales en biomateriales membranosas.

Crecimiento de capas celulares endoteliales corneales humanas y ovinas en membranas biomateriales

Aquí, se desarrollan modelos animales basados en ratones y conejos para lesiones mecánicas y químicas del epitelio corneal para detectar nuevas terapias y el mecanismo subyacente.

Modelos animales ex vivo e in vivo para lesiones mecánicas y químicas del epitelio corneal

Stripping Only de Descemet es un procedimiento experimental en el que a los pacientes con guttas corneales centrales resultantes de la distrofia corneal endotelial de Fuchs se les extirpa la membrana de Descemet para que las células periféricas regeneren la capa endotelial. Presentamos una novedosa metodología simulando DSO en córneas humanas distróficas ex vivo con curación acelerada estimulada por eFGF1 (NM141).

Un modelo de cultivo de órganos corneales humanos de la extracción de Descemet solo con curación acelerada estimulada por el factor de crecimiento de fibroblastos diseñado 1

Desarrollamos un modelo de rata de inflamación corneal severa a través de legrado de epitelio corneal combinado con suturas corneales. El estudio evaluó los patrones de inflamación de la córnea, la proliferación epitelial y los cambios en las células madre limbales en condiciones inflamatorias.

Establecimiento de un modelo de inflamación corneal severa en ratas basado en legrado del epitelio corneal combinado con suturas corneales

El cultivo de órganos ex vivo de córnea porcina y la cicatrización de heridas epiteliales proporcionan un medio económico, ético, reproducible y cuantitativo para probar la toxicidad ocular de los productos químicos. También ayudan a dilucidar los mecanismos subyacentes a la regulación de la epitelización y la reparación de tejidos, y a evaluar terapias para el tratamiento de la queratopatía diabética y el retraso en la cicatrización de heridas.

Evaluación de la toxicidad terapéutica y química mediante el cultivo de órganos de córneas porcinas y la cicatrización de heridas epiteliales

Se presenta un protocolo reproducible para la preparación, enriquecimiento y aplicación de un hidrogel in situ de luz azul cruzada–gelatina–riboflavina reticular para la reparación de heridas estromales corneales en conejos, incluyendo pasos procedimentales para el manejo quirúrgico, tarsorrafia parcial y cuidados postoperatorios.

Fabricación y aplicación quirúrgica de hidrogeles enriquecidos foto-reticulados gelatina–riboflavina para la reparación de heridas corneales en conejos

Aprenda a preparar suero condicionado autólogo modificado para acelerar la cicatrización de heridas en modelos murinos de córnea. Este método simplificado reduce costos y mejora el acceso de pacientes a tratamientos oculares efectivos.

Producción de suero condicionado autólogo modificado y evaluación ex vivo de su potencial curativo en el epitelio corneal murino (Video) | JoVE Journal

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