Name: Preparación de vectores lentivirales para la modulación eficiente de genes y microARN de macrófagos residentes en el tejido de la cavidad peritoneal in vivo en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: Aprende a preparar vectores lentivirales para modulación eficiente de genes y microARN en macrófagos residentes del peritoneo in vivo en ratones. Este método permite estudiar la función génica y la inmunometabolismo.

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<meta charset="utf8"></head><body>Preparación de vectores lentivirales para la modulación génica in vivo

<ol><li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+biology+in+development%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li>
<li>Jantsch, J., Binger, K. J., Muller, D. N., Titze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+homeostatic+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in homeostatic immune function.</a> Front Physiol. 5, 146(2014).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+tissue+repair%2C+regeneration%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in tissue repair, regeneration, and fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li>
<li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Amit, I., Winter, D. R., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+local+environment+and+epigenetics+in+shaping+macrophage+identity+and+their+effect+on+tissue+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the local environment and epigenetics in shaping macrophage identity and their effect on tissue homeostasis.</a> Nat Immunol. 17 (1), 18-25 (2016).</li>
<li>Gosselin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+drives+selection+and+function+of+enhancers+controlling+tissue-specific+macrophage+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Environment drives selection and function of enhancers controlling tissue-specific macrophage identities.</a> Cell. 159 (6), 1327-1340 (2014).</li>
<li>Lavin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+enhancer+landscapes+are+shaped+by+the+local+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage enhancer landscapes are shaped by the local microenvironment.</a> Cell. 159 (6), 1312-1326 (2014).</li>
<li>Davies, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+tissue-resident+macrophages+are+metabolically+poised+to+engage+microbes+using+tissue-niche+fuels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Peritoneal tissue-resident macrophages are metabolically poised to engage microbes using tissue-niche fuels.</a> Nat Commun. 8 (1), 2047(2017).</li>
<li>Shi, J., Hua, L., Harmer, D., Li, P., Ren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+driver+mice+targeting+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cre driver mice targeting macrophages.</a> Methods Mol Biol. 1784, 263-275 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+lentiviral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Recent advances in lentiviral vectors for gene therapy.</a> Sci China Life Sci. 64 (11), 1842-1857 (2021).</li>
<li>Kosaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-based+gene+delivery+in+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-based gene delivery in mouse embryonic stem cells.</a> Artif Organs. 28 (3), 271-277 (2004).</li>
<li>Naldini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+gene+delivery+and+stable+transduction+of+nondividing+cells+by+a+lentiviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector.</a> Science. 272 (5259), 263-267 (1996).</li>
<li>Yamashita, M., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsid+is+a+dominant+determinant+of+retrovirus+infectivity+in+nondividing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Capsid is a dominant determinant of retrovirus infectivity in nondividing cells.</a> J Virol. 78 (11), 5670-5678 (2004).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+delivery+of+RNAi+for+in+vivo+lineage-specific+modulation+of+gene+expression+in+mouse+lung+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Lentiviral delivery of RNAi for in vivo lineage-specific modulation of gene expression in mouse lung macrophages.</a> Mol Ther. 21 (4), 825-833 (2013).</li>
<li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors%3A+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li>
<li>Finkelshtein, D., Werman, A., Novick, D., Barak, S., Rubinstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDL+receptor+and+its+family+members+serve+as+the+cellular+receptors+for+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">LDL receptor and its family members serve as the cellular receptors for vesicular stomatitis virus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (18), 7306-7311 (2013).</li>
<li>Ipseiz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+in+vivo+gene+modification+in+mouse+tissue-resident+peritoneal+macrophages+by+intraperitoneal+delivery+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Effective in vivo gene modification in mouse tissue-resident peritoneal macrophages by intraperitoneal delivery of lentiviral vectors.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 16, 21-31 (2020).</li>
<li>Rosas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Gata6+links+tissue+macrophage+phenotype+and+proliferative+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Gata6 links tissue macrophage phenotype and proliferative renewal.</a> Science. 344 (6184), 645-648 (2014).</li>
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<li>Zufferey, R., Nagy, D., Mandel, R. J., Naldini, L., Trono, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiply+attenuated+lentiviral+vector+achieves+efficient+gene+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo.</a> Nat Biotechnol. 15 (9), 871-875 (1997).</li>
<li>Nasri, M., Karimi, A., Allahbakhshian Farsani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+purification+and+titration+of+a+lentivirus-based+vector+for+gene+delivery+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Production, purification and titration of a lentivirus-based vector for gene delivery purposes.</a> Cytotechnology. 66 (6), 1031-1038 (2014).</li>
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<li>Bouabe, H., Okkenhaug, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in mice: a review.</a> Methods Mol Biol. 1064, 315-336 (2013).</li>
<li>Kim, J. M., Rasmussen, J. P., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+prevent+catastrophic+autoimmunity+throughout+the+lifespan+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells prevent catastrophic autoimmunity throughout the lifespan of mice.</a> Nat Immunol. 8 (2), 191-197 (2007).</li>
<li>Decalf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+of+HIV-1+entry+triggers+a+Type+I+Interferon+response+in+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Sensing of HIV-1 entry triggers a Type I Interferon response in human primary macrophages.</a> J Virol. 91 (15), e00147-e00217 (2017).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+emphysema+in+mice+through+lentiviral+transduction+of+long-lived+pulmonary+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.</a> J Clin Invest. 120 (1), 379-389 (2010).</li>
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<li>Burke, B., Sumner, S., Maitland, N., Lewis, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+gene+therapy%3A+cellular+delivery+vehicles+and+in+vivo+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in gene therapy: cellular delivery vehicles and in vivo targets.</a> J Leukoc Biol. 72 (3), 417-428 (2002).</li>
<li>Bain, C. C., Jenkins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+serous+cavity+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">The biology of serous cavity macrophages.</a> Cell Immunol. 330, 126-135 (2018).</li>
<li>Milone, M. C., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+use+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Clinical use of lentiviral vectors.</a> Leukemia. 32 (7), 1529-1541 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05% Tripsina-EDTA (1x) (Tripsina 500 mg/L o 0,02 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>0,22 &mu; m filtro estéril millex GP</td><td>Merck</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>0,45 &mu; m Filtro GP estéril Millex</td><td>Merck SLHP033RS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5 mL Jeringa de insulina U-100 con aguja, 0,33 mm x 12,7 mm (29 G)</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>Contenedor de objetos punzocortantes de 1 litro</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2,4G2 anticuerpo (TruStain FcX anti-ratón CD16/32)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; Filtro Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>Medio AimV (grado de investigación), Suplemento AlbuMax</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31035025</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de bloqueo</td><td>preparado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medio de tioglicolato de cervecería</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2551</td><td>Solución madre al 4% preparada en agua, esterilizada en autoclave y congelada.</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101222</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>de CD11b</td><td>BD</td><td>550993</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr> de <tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117317</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración</td></tr><tr><td>de CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117333</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>de CD19</td><td>BD</td><td>560375</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr><tr><td>de CD19</td><td>Biolegend</td><td>152410</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración</td></tr><tr><td>de CD226</td><td>Biolegend</td><td>128808</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración</td></tr> de <tr><td>CD3e</td><td>BD</td><td>560527</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración</td></tr><tr><td>de CD3e</td><td>Biolegend</td><td>152313</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr> de <tr><td>CD4</td><td>Biolegend</td><td>100412</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr><tr><td>CD73</td><td>eBioscience</td><td>16-0731-82</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>eBioscience</td><td>48-0081-82</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr><tr><td>Matraz de cultivo celular (T175 fraz, 175 cm2, 550 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga, tubos de fondo cónico de 25 mm x 89 mm</td><td>Centrífugas Beckman Coulter</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>y centrífuga TC</td></tr><tr><td>Colagenasa tipo IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cónicos (15 mL y 50 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>11512303 & 11849650</td><td></td></tr><tr><td>Criotubos</td><td>Greiner Bio One</td><td>123277</td><td>o criotubos</td></tr><tr><td>DMEM medio (1x) + 4,5 g/L D-glucosa, 400 y micro; M L-glutamina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>41965-062</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de transfección Effectene</td><td>Qiagen</td><td>301425</td><td></td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123123</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123133</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y la concentración.</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123147</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>FceR1</td><td>eBioscience</td><td>48-5898-80</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración</td></tr><tr><td>Suero de ternero fetal (FCS)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270-106</td><td>inactivado por calor durante 30 minutos a 56 & ° C y estéril filtrado a través de 0,22 &mu; m filter</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp; Tampón de citometría de flujo Attune NxT</td><td></td></tr><tr><td>(FACS)</td><td>preparado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente para cultivo de tejidos</td><td>Pinza Thermo Fisher Scientific</td><td>EVOS FL</td><td></td></tr> N<tr><td></td><td>/A</td><td>N/A</td><td>Preferencia del usuario</td></tr><tr><td>Solución salina equilibrada de Hank (HBSS)</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14175-053</td><td></td></tr><tr><td>Línea</td><td></td> <td>celular HEK293T</td><td>cultivado durante al menos una semana antes de la transfección. Libre de micoplasma</td></tr><tr><td>VIH-1 Antígeno central</td><td>Beckman Coulter</td><td>6604667</td><td></td></tr><tr><td>hialuronidasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>Hydrex exfoliante quirúrgico, gluconato clorhexiante 4% p/v limpiador cutáneo</td><td>Ecolab</td><td>3037170</td><td></td></tr><tr><td>I-A/I-E</td><td>Biolegend</td><td>107625</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración</td></tr><tr><td>ICAM1</td><td>Becton Dickinson</td><td>554970</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y concentración de la</td></tr><tr><td>línea</td><td></td><td></td> de células T Jurkat <td>cultivadas durante al menos una semana antes de su uso. Kit de</td></tr><tr><td>tinción de células muertas en infrarrojo cercano fijable VIVO/MUERTO</td> sin micoplasma <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L34975</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>Biolegend</td><td></td><td>127615 Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>Ratones</td><td></td><td></td><td>utilizados aquí C57BL/6 hembras, de 8 a 12 semanas de edad (Charles Rivers), a menos que se especifique lo contrario</td></tr><tr><td>Pipetas microcapilares (rango de volumen 0,5-1.000 &mu; L)</td> <td>Fisher Científico & Starlab</td><td>11963466 & 11943466 & 11973466 & S1111-3700</td><td></td></tr><tr><td>NK1.1</td><td>Biolegend</td><td>108724</td><td>Consulte la Tabla 1 para la dilución y concentración</td></tr><tr><td>de Paraformaldehído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-500G</td><td>preparado al 2% p/v en PBS</td></tr><tr><td>pCMV-&Delta; El plásmido de empaquetamiento R8.91</td><td>Zuffrey, R., et al. 1997</td> codifica la proteína Gag-Pol del VIH impulsada por el promotor del citomegalovirus.<td></td><td> Resistencia a la ampicilina.</td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina (100x, 10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific 15140122</td><td></td><td></td></tr><tr><td>placa de Petri</td><td>Greiner Bio One</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>pHR'SIN-cPPT-SEW plásmido</td><td></td><td>Rosas, M. et al. 2014</td><td>modificado para estudios de expresión de shRNA y miR. Codifica el marcador EGFP aguas abajo, promotor SFFV y aguas arriba del potenciador del virus hepatitiv Woodchuck. Resistencia a la ampicilina.</td></tr><tr><td>El plásmido</td><td></td> pMD2.G <td>Naldini, L. et al. 1996</td><td>codifica la envoltura de la glicoproteína g del virus del estomatis vesicular (VSV-G). Resistencia a la ampicilina.</td></tr><tr><td>Rata IgG1, &kappa; control de isotipo</td><td>Becton Dickinson</td><td>550617</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>Suero de rata</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R9759-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de lisis ACK para sangre roja</td><td>preparado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medio RPMI 1640 (1x) + 400 uM L-glutamina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21875-091</td><td></td></tr><tr><td>Saponina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>SiglecF</td><td>BD</td><td>562681</td><td>Consulte la Tabla 1 para conocer la dilución y la concentración</td></tr><tr><td>de hipoclorito de sodio Tabletas (lejía, 2,000 ppm)</td><td>Guest Medical</td><td>H8818</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular estéril de 24 pocillos</td><td>Greiner Bio</td><td>One 662160</td><td></td></tr><tr><td>PBS estéril de Dulbecco (DPBS) (1x) Mg++ y Ca2+ - gratis</td><td>Thermo Fisher Scientific 14190144</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EDTA estéril</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de transferencia desechables estériles de VWR (23,0 ml, 30 cm)</td><td>VWR</td><td>612-4515</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td></td><td>Tijeras quirúrgicas Thermo Fisher Scientific</td> 15503022 <td></td></tr><tr><td></td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Preferencias del usuario</td></tr><tr><td>Jeringas (50 ml y 1 0 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10084450 & 768160</td><td></td></tr><tr><td>Tim4</td><td>Biolegend</td><td>130007</td><td>Consulte la Tabla 1 para ver la dilución y concentración en la</td></tr><tr><td>placa de cultivo celular de 96 pocillos con fondo en U</td><td>Greiner Bio One</td><td>650180</td><td></td></tr></tbody></table>

preparación de vectores lentivirales para la modulación eficiente de genes y microarn de macrófagos residentes en el tejido de la cavidad peritoneal in vivo en ratones

Lentiviral Vector Preparation for Efficient Gene and MicroRNA Modulation of Peritoneal Cavity Tissue&#45;Resident Macrophages In Vivo in Mice

Preparación de vectores lentivirales para la modulación eficiente de genes y microARN de macrófagos residentes en el tejido de la cavidad peritoneal in vivo en ratones

Peritoneal tissue-resident macrophages have broad functions in the maintenance of homeostasis and are involved in pathologies within local and neighboring ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Los microARNs tienen funciones importantes en la estructura y función del cerebro. Aquí se describe un método para hacer cumplir miRNA hipocampo sobreexpresión mediante inyección estereotáxica de un lentivirus que expresan los genes miARN ingeniería. Este enfoque puede servir como una manera relativamente rápida para evaluar...

Inyección estereotáctica de microARN que expresan lentivirus al ratón hipocampo CA1 Región y evaluación de los resultados del comportamiento

En este protocolo, describimos métodos para transfectar eficientemente líneas celulares de macrófagos murinos con siRNAs utilizando el sistema de lanzadera Amaxa Nucleofector de 96 pocillos, estimular los macrófagos con lipopolisacáridos y monitorear los efectos sobre la producción de citoquinas inflamatorias.

El uso de ARN de interferencia para Investigar la respuesta inmune innata en macrófagos de ratón

Describimos aquí un protocolo sencillo para aislar macrófagos peritoneales murinos. A este procedimiento le sigue la extracción de ARN para llevar a cabo el análisis de la expresión génica tras la estimulación de los receptores tipo Toll.

Aislamiento de macrófagos peritoneales murinos para llevar a cabo análisis de expresión génica Al Toll-like Receptores Estimulación

Inyección en la vena hidrodinámica cola de vectores de integración basado en el transposón permite la transfección estable de hepatocitos murinos en vivo. Aquí, presentamos un protocolo práctico para sistemas de transfección que permite la expresión constitutiva a largo plazo de un solo transgen o expresión constitutiva e inducible de doxiciclina combinada de un transgén o miR-shRNA en el hígado.

Sistemas inducibles y constitutivos para la modificación genética In Vivo de hepatocitos de ratón mediante la inyección en la vena hidrodinámica cola

Aquí, presentamos un protocolo para promover la integración del transgén y la producción de ratones transgénicos fundador con alta eficacia por una simple inyección de lentivirales vector en el espacio perivitelino de un ovocito fertilizado.

Lentivirales mediación producción de ratones transgénicos: un método Simple y altamente eficiente para el estudio directo de los fundadores

En este artículo, nos proporcionan que un protocolo detallado para la expresión de proteínas fluorescentes de fusión en médula ósea murina derivados de macrófagos y células dendríticas. El método se basa en la transducción de la médula ósea progenitores con retrovirales construcciones seguidas de diferenciación en macrófagos y dendríticas de las células en vitro.

Expresión de proteínas fluorescentes de fusión en murinas médula ósea células dendríticas y macrófagos

Se describe un método de usar polietilamina (PEI)-recubierto de óxido de hierro superparamagnético nanopartículas para transfectar macrófagos con ARNsi. Estas nanopartículas pueden administrar siRNA a macrófagos in vitro y en vivo y silencio blanco genes.

Nanopartículas de óxido de hierro recubierto de polietilamina como vehículo para la entrega de ARN interferente pequeño a los macrófagos In Vitro e In Vivo

A ADN epigenoma edición representa un potente enfoque terapéutico. Este protocolo describe la producción, purificación y concentración de vectores lentivirales all-in-one que el transgén CRISPR-dCas9-DNMT3A para aplicaciones de edición de epigenoma en células pluripotentes inducidas humanas (hiPSC)-derivado de las neuronas.

Plataforma de vectores lentivirales para la entrega eficiente de las herramientas de edición de epigenoma en humanos inducida por modelos de enfermedad derivados de células madre pluripotentes

Los macrófagos, especialmente los macrófagos primarios, son difíciles de transfectar, ya que se especializan en la detección de moléculas de origen no propio. Describimos un protocolo que permite la transfección altamente eficiente de macrófagos primarios con ARNm generados a partir de plantillas de ADN como plásmidos.

Transfección altamente eficiente de macrófagos primarios con ARNm transcrito in Vitro

Este protocolo tiene como objetivo introducir un método para producir y purificar biomiméticos extracelulares derivados de células madre mesenquimales (MSC) para la terapia génica. La nanovesícula está confinada con bicapas lipídicas derivadas de MSC y encapsula los AAVs recombinantes que portan el gen de interés en la luz. Esta nanovesícula ofrece un vector mejorado para la entrega de genes in vivo .

Desarrollo de nanovesículas envueltas en membrana de células madre mesenquimales para mejorar la entrega génica

Aprende a preparar vectores lentivirales para modulación eficiente de genes y microARN en macrófagos residentes del peritoneo in vivo en ratones. Este método permite estudiar la función génica y la inmunometabolismo.

Preparación de vectores lentivirales para la modulación eficiente de genes y microARN de macrófagos residentes en el tejido de la cavidad peritoneal in vivo en ratones (Video) | JoVE Journal

Preparación de vectores lentivirales para la modulación eficiente de genes y microARN de macrófagos residentes en el tejido de la cavidad peritoneal in vivo en ratones

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