Name: Aislamiento de Células con Información Morfológica y Espacial a partir de Muestras de Fibrosis Submucosa Oral mediante Microdisección por Captura Láser (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: Aprenda microdisección por captura láser para aislar células de fibrosis submucosa oral con información morfológica y espacial. Este protocolo permite análisis multi-ómicos de tejidos incluidos en parafina para estudiar transformación maligna.

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Este trabajo fue apoyado por becas de investigación de la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza de China (81671006, 81300894), el Fondo de Innovación CAMS para Ciencias Médicas (2019-I2M-5-038), el Proyecto Nacional de Construcción de Disciplinas Clínicas Clave (PKUSSNKP-202102), el Fondo de Innovación para Candidatos Sobresalientes a Doctorado del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Pekín (BMU2022BSS001).

Este estudio fue aprobado por la junta de revisión institucional de la Escuela y Hospital de la Universidad de Pekín. Se obtuvo el consentimiento informado de los pacientes. Las muestras de tejido utilizadas en este estudio fueron desidentificadas. El esquema de estudio se muestra en la Figura 1.
1. Preparación de la muestra
<ol><li>Corte tejidos de fibrosis submucosa oral fijados en formol e incluidos en parafina en secciones continuas de 3 μm y 10 μm de espesor en un micrótomo.</li>
	<li>Despliega las secciones en el agua y luego pesca en los toboganes. Fije las secciones de 3 μM y 10 μm en los portaobjetos del microscopio de adhesión (portaobjetos A) y en los portaobjetos de membrana PEN (portaobjetos B), respectivamente.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos en una placa calefactora a 60 °C durante 2 h.</li>
</ol>2. Tinción de hematoxilina-eosina
<ol><li>Coloque los portaobjetos A y B en xileno (PRECAUCIÓN) durante 10 minutos y repita este paso tres veces.</li>
	<li>Hidratar los portaobjetos A y B en soluciones de etanol graduadas del orden de 100%, 100%, 90%, 80% y 70% durante 1 min en cada concentración.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en agua destilada ultrapura durante 30 s</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en la solución de colorante de hematoxilina Harris durante 90 s.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en agua destilada ultrapura durante 30 s y repita este paso tres veces.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en una solución de div-hematoxilina (PRECAUCIÓN) durante 2 s.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en agua destilada ultrapura durante 30 s y repita este paso tres veces.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos en A y B en una solución re-azul al 1% durante 2 s.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en agua destilada ultrapura durante 30 s y repita este paso tres veces.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos en una solución de eosina durante 2 s.</li>
	<li>Coloque los portaobjetos A y B en agua destilada ultrapura durante 30 s y repita este paso tres veces.</li>
	<li>Deshidratar los portaobjetos en soluciones de etanol graduadas del orden de 70%, 80%, 90%, 100% y 100% durante 2 s en cada concentración.</li>
	<li>Coloque el portaobjetos A en xileno durante 3 minutos y repita este paso dos veces.</li>
	<li>Agregue una gota de medio de montaje (PRECAUCIÓN) para deslizar A y cúbralo con un cubreobjetos.</li>
</ol>3. Observación de la morfología histológica y microdisección por captura láser
<ol><li>Inicie el sistema y el software de microdisección láser (Figura 2).</li>
	<li>Coloque el portaobjetos A en la platina del portaobjetos y observe la morfología histológica para identificar el área de interés para la microdisección láser.</li>
	<li>Retire la diapositiva A y coloque la diapositiva B inversamente en la platina de la diapositiva.</li>
	<li>Haga clic en el botón Descargar (Figura 2) para enviar el dispositivo de recolección. Inserte un tubo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en el dispositivo de recolección y asegúrese de que el tubo se mantenga fijo. Haga clic en el botón Aceptar (Figura 3).</li>
	<li>Seleccione una tapa haciendo clic en el círculo rojo correspondiente que marca el dispositivo colector: Tapas de tubo. El círculo seleccionado se volverá verde.</li>
	<li>Haga clic en el botón Dibujar y en el botón Dibujar + Cortar y utilice el ratón para dibujar el área de interés.</li>
	<li>Haga clic en el botón Iniciar corte para capturar el área de interés; la muestra capturada será recogida por el tapón (Figura 4).</li>
	<li>Haga clic en el botón Inferior para asegurarse de que se recopila la muestra capturada (Figura 5).</li>
	<li>Haga clic en el botón Espécimen para capturar la siguiente muestra.</li>
	<li>Haga clic en el botón Descargar para descargar el tubo de PCR con la muestra capturada.</li>
</ol>

Captura de muestras de tejido de fibrosis submucosa oral para análisis espacial-ómico

<ol><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+clinicopathological+study+of+674+cases+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A clinicopathological study of 674 cases in China.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 48 (4), 321-325 (2019).</li>
<li>Cai, X., Huang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathological+factors+associated+with+progression+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+population-based+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Clinicopathological factors associated with progression of oral submucous fibrosis: A population-based retrospective study.</a> Oral Oncology. 130, 105949(2022).</li>
<li>Ray, J. G., Chatterjee, R., Chaudhuri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+global+challenge.+Rising+incidence%2C+risk+factors%2C+management%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontology+2000%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A global challenge. Rising incidence, risk factors, management, and research priorities.</a> Periodontology 2000. 80 (1), 200-212 (2019).</li>
<li>Shih, Y. H., Wang, T. H., Shieh, T. M., Tseng, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+Review+on+etiopathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A Review on etiopathogenesis, diagnosis, and therapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (12), 2940(2019).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preliminary+exploration+of+immune+microenvironment+in+oral+leukoplakia+concomitant+with+oral+submucosal+fibrosis%3A+A+comparative+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">The preliminary exploration of immune microenvironment in oral leukoplakia concomitant with oral submucosal fibrosis: A comparative immunohistochemical study.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. , (2023).</li>
<li>Warnakulasuriya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+potentially+malignant+disorders%3A+A+consensus+report+from+an+international+seminar+on+nomenclature+and+classification%2C+convened+by+the+WHO+Collaborating+Centre+for+Oral+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral potentially malignant disorders: A consensus report from an international seminar on nomenclature and classification, convened by the WHO Collaborating Centre for Oral Cancer.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1862-1880 (2021).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+nomogram+prediction+model+for+malignant+transformation+of+oral+potentially+malignant+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a nomogram prediction model for malignant transformation of oral potentially malignant disorders.</a> Oral Oncology. 123, 105619(2021).</li>
<li>Murthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+rate+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation rate of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Journal of Clinical Medicine. 11 (7), 1793(2022).</li>
<li>Kujan, O., Mello, F. W., Warnakulasuriya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1936-1946 (2020).</li>
<li>Qin, X., Ning, Y., Zhou, L., Zhu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+Etiological+mechanism%2C+malignant+transformation%2C+therapeutic+approaches+and+targets%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: Etiological mechanism, malignant transformation, therapeutic approaches and targets.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (5), 4992(2023).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+dissection+of+precancerous+lesions+underlying+the+initiation+process+of+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial dissection of precancerous lesions underlying the initiation process of oral squamous cell carcinoma.</a> Cell Discovery. 9 (1), 28(2023).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+dynamic+evolution+from+preneoplasia+to+invasive+lung+adenocarcinoma+by+integrating+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Delineating the dynamic evolution from preneoplasia to invasive lung adenocarcinoma by integrating single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics.</a> Experimental & Molecular Medicine. 54 (11), 2060-2076 (2022).</li>
<li>Ji, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+analysis+of+composition+and+spatial+architecture+in+human+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal analysis of composition and spatial architecture in human squamous cell carcinoma.</a> Cell. 182 (2), 497-514 (2020).</li>
<li>Van den Bossche, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-driven+intratumoral+heterogeneity+in+head+and+neck+cancers%3A+clinical+challenges+and+opportunities+for+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resistance+Updates%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-driven intratumoral heterogeneity in head and neck cancers: clinical challenges and opportunities for precision medicine.</a> Drug Resistance Updates. 60, 100806(2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+in+the+risk+assessment+of+oral+leukoplakia+through+morphology-related+copy+number+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+China.+Life+sciences%22%5BJournal%5D)">Improvement in the risk assessment of oral leukoplakia through morphology-related copy number analysis.</a> Science China. Life sciences. 64 (9), 1379-1391 (2021).</li>
<li>Watkins, T. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pervasive+chromosomal+instability+and+karyotype+order+in+tumour+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pervasive chromosomal instability and karyotype order in tumour evolution.</a> Nature. 587 (7832), 126-132 (2020).</li>
<li>Odell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneuploidy+and+loss+of+heterozygosity+as+risk+markers+for+malignant+transformation+in+oral+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Aneuploidy and loss of heterozygosity as risk markers for malignant transformation in oral mucosa.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1993-2007 (2021).</li>
<li>Wood, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+road+to+invasion-examining+the+similarities+and+differences+in+the+genomes+of+associated+oral+pre-cancer+and+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">The genomic road to invasion-examining the similarities and differences in the genomes of associated oral pre-cancer and cancer samples.</a> Genome Medicine. 9 (1), 53(2017).</li>
<li>Venugopal, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+proteomics+based+on+2D+gel+electrophoresis+and+mass+spectrometry+with+validations%3A+Identification+of+a+biomarker+compendium+for+oral+submucous+fibrosis-An+indian+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Personalized+Medicine%22%5BJournal%5D)">Integrated proteomics based on 2D gel electrophoresis and mass spectrometry with validations: Identification of a biomarker compendium for oral submucous fibrosis-An indian study.</a> Journal of Personalized Medicine. 12 (2), 208(2022).</li>
<li>Kundu, P., Pant, I., Jain, R., Rao, S. G., Kondaiah, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+DNA+methylation+changes+in+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Genome-wide DNA methylation changes in oral submucous fibrosis.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1094-1103 (2022).</li>
<li>Cai, X., Zhang, H., Li, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-target+pharmacological+mechanisms+of+Salvia+miltiorrhiza+against+oral+submucous+fibrosis%3A+A+network+pharmacology+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Multi-target pharmacological mechanisms of Salvia miltiorrhiza against oral submucous fibrosis: A network pharmacology approach.</a> Archives of Oral Biology. 126, 105131(2021).</li>
<li>Xiao, X., Hu, Y., Li, C., Shi, L., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+content+abnormality+in+oral+submucous+fibrosis+concomitant+leukoplakia%3A+A+preliminary+evaluation+of+the+diagnostic+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">DNA content abnormality in oral submucous fibrosis concomitant leukoplakia: A preliminary evaluation of the diagnostic and clinical implications.</a> Diagnostic Cytopathology. 48 (11), 1111-1114 (2020).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+expression+profile+associated+with+malignant+progression+of+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA expression profile associated with malignant progression of oral submucous fibrosis.</a> Journal of Oncology. 2019, 6835176(2019).</li>
<li>Lunde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+of+chromosomal+changes+in+potentially+malignant+and+malignant+oral+mucosal+lesions+from+South+and+Southeast+Asia+using+array-comparative+genomic+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Genomics+%26+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Profiling of chromosomal changes in potentially malignant and malignant oral mucosal lesions from South and Southeast Asia using array-comparative genomic hybridization.</a> Cancer Genomics & Proteomics. 11 (3), 127-140 (2014).</li>
<li>Sun, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+resolved+metabolomics+to+discover+tumor-associated+metabolic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Spatially resolved metabolomics to discover tumor-associated metabolic alterations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (1), 52-57 (2019).</li>
<li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copy+number+alteration+profiling+facilitates+differential+diagnosis+between+ossifying+fibroma+and+fibrous+dysplasia+of+the+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Copy number alteration profiling facilitates differential diagnosis between ossifying fibroma and fibrous dysplasia of the jaws.</a> International Journal of Oral Science. 13 (1), 21(2021).</li>
</ol>

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

Este protocolo reportó una tubería para capturar muestras de tejido OSF con información morfológica y espacial para posteriores análisis espaciales-ómicos a través de microdisección láser. A partir de los resultados representativos, se identificaron diferentes patrones de CNA entre varias muestras relacionadas con la morfología.
La OSF, un tipo de OPMD, es una afección precancerosa común del carcinoma oral de células escamosas6. Se ha descrito que la inestabilidad genóm...

La fibrosis submucosa oral (FSO) es una enfermedad crónica e insidiosa que se desarrolla principalmente en la mucosa bucal y provoca una apertura bucal restringida1. Si bien la OSF es una enfermedad multifactorial, la masticación de la nuez de areca o la nuez de betel es la principal causa de la OSF 2,3. Debido a este hábito geográficamente específico, la PPO se concentra predominantemente en poblaciones del sudeste y sur de Asia3. Las características histológicas comunes de la OSF incluyen la deposición anormal de colágeno en el tejido conectivo debajo del epitelio de la mucosa oral, la estenosis vascular y la oclusión1. El tejido epitelial de la FSO puede presentar manifestaciones de atrofia o hiperplasia e incluso displasia cuando es concomitante con leucoplasia oral 4,5.
La Organización Mundial de la Salud define la OSF como un trastorno oral potencialmente maligno (OPMD, por sus siglas en inglés) común que exhibe el potencial de progresar a carcinoma oral de células escamosas con una tasa de transformación maligna del 4% al 6%6%6,7,8,9. El mecanismo que subyace a la transformación maligna de la FSO es complejo10. El crecimiento anormal del epitelio, incluyendo tanto la displasia como la atrofia, aumenta el potencial de carcinogénesis, y los fibroblastos senescentes en el estroma pueden estar involucrados en la progresión maligna de la OSF al inducir la transición epitelio-mesenquimal (EMT) a través de especies reactivas de oxígeno (ROS) y otras moléculas10.
Las tecnologías para el análisis espacio-ómico generaron datos multiómicos con información morfológica y espacial que han proporcionado información sobre los mecanismos del cáncer11,12,13. Aquí, presentamos un protocolo para capturar poblaciones celulares relacionadas con la morfología a partir de tejido OSF fijado en formol e incluido en parafina mediante microdisección láser. Los análisis multiómicos de estas muestras pueden superar los desafíos de la heterogeneidad intratisular y aumentar la comprensión de la patología molecular y los mecanismos de transformación maligna en OSF14.

<table><tbody><tr><td>Portaobjetos de microscopio de adherencia</td><td>CITOTEST</td><td>REF.188105</td><td></td></tr><tr><td>Div-hematoxilina</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>solución de eosina</td><td>BASO</td><td>BASO BA4098</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>REACTIVO DE PEKÍN</td><td>No.32061</td><td></td></tr><tr><td>Harris solución de colorante de hematoxilina</td><td>YiLi 20230326</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa calefactora</td><td>LEICA</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de microdisección por captura láser</td><td>LEICA</td><td>LMD7</td><td>Máquina</td></tr><tr><td>Microsistema de microdisección láser</td><td>LEICA</td><td>8.2.3.7603</td><td>Software</td></tr><tr><td>Medio de montaje Micromount</td><td>LEICA</td><td>REF.3801731</td><td></td></tr><tr><td>Cubreobjetos para microscopio</td><td>CITOTEST</td><td>REF.10212450C</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo</td><td>LEICA</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de PCR</td><td>AXYGEN 16421959</td><td></td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos de membrana</td><td>LEICA</td><td>No.11505158</td><td></td></tr><tr><td>Solución Re-blue</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>Agua destilada ultrapura</td><td>Invitrogen</td><td>REF.10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Xileno</td><td>REACTIVO DE PEKÍN</td><td>No.33535</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de células con información morfológica y espacial a partir de muestras de fibrosis submucosa oral mediante microdisección por captura láser

Isolation of Cells with Morphological and Spatial Information from Oral Submucous Fibrosis Samples by Laser Capture Microdissection

La fibrosis submucosa oral (FSO) es un tipo común de trastorno potencialmente maligno en la cavidad oral. La atrofia del epitelio y la fibrosis de la lámina propia y la submucosa se encuentran a menudo en los portaobjetos histopatológicos. Se ha propuesto que la displasia epitelial, la atrofia epitelial y los fibroblastos senescentes se asocian con la transformación maligna de la FSO. Sin embargo, debido a la heterogeneidad de los trastornos orales potencialmente malignos y del carcinoma oral de células escamosas, es difícil identificar los mecanismos moleculares específicos de la transformación maligna en la FSO. Aquí, presentamos un método para obtener un pequeño número de células epiteliales o mesenquimales portadoras de datos morfológicos e información espacial mediante microdisección por captura láser en portaobjetos de tejido fijados en formol e incluidos en parafina. Usando un microscopio, podemos capturar con precisión tejido epitelial displásico o atrófico a microescala (~500 células) y tejido subepitelial fibrótico. Las células extraídas pueden ser evaluadas mediante secuenciación genómica o transcriptómica para adquirir datos genómicos y transcriptómicos con información morfológica y espacial. Este enfoque elimina la heterogeneidad de la secuenciación de tejido OSF a granel y la interferencia causada por las células en áreas no lesionadas, lo que permite un análisis espacio-ómico preciso del tejido OSF.

Al realizar la microdisección láser de los tejidos OSF, capturamos muestras de epitelio displásico, estroma debajo del epitelio displásico, epitelio atrófico y estroma debajo del tejido epitelial atrófico (Figura 1). A través de la extracción de ADN y la secuenciación del genoma completo en baja profundidad, pudimos analizar las alteraciones en el número de copias (CNA) relacionadas con la morfología15. El CNA es una forma común de inestabilidad genómica asociada a un...

La microdisección por captura láser de tejidos de fibrosis submucosa oral permite la extracción precisa de células de regiones histológicas de interés para el análisis de datos multiómicos con información morfológica y espacial.

Aislamiento de Células con Información Morfológica y Espacial a partir de Muestras de Fibrosis Submucosa Oral mediante Microdisección por Captura Láser

Oral submucous fibrosis (OSF) is a common type of potentially malignant disorder in the oral cavity. The atrophy of epithelium and fibrosis of the lamina ...

Nuestros principales intereses de investigación son los mecanismos de transformación maligna bajo el desarrollo de modelos predictivos de trastornos orales potencialmente malignos como la leucoplasia oral y la fibrosis submucosa oral. El análisis genómico transcriptómico, proteómico y otros análisis de secuenciación multiómica bajo modelos de inteligencia artificial de aprendizaje profundo se utilizan para estudiar la progresión de trastornos orales potencialmente malignos al cáncer oral. La secuenciación actual y el análisis multiómico se basan principalmente en muestras congeladas, pero los trastornos orales potencialmente malignos se fijan en su mayoría formalmente en tejido incluido en parafina, a menudo mediante biopsia, y la necesidad de desarrollar técnicas experimentales basadas en muestras de parafina.Las muestras de tejido de parafina de trastornos orales potencialmente malignos y el carcinoma de células escamosas están disponibles en grandes cantidades y de una variedad de fuentes, lo que las convierte en un recurso muy valioso para el estudio. Todos los protocolos pueden ayudar a utilizar plenamente estos recursos para comprender mejor los mecanismos de desarrollo de la enfermedad y la transformación maligna.

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Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

El video describe la disección láser del modelo de cocultivo organotípico 3D con precisión a nivel de micras. En los modelos organotípicos 3D, los constituyentes del estroma, como los fibroblastos, se cocultivan tridimensionalmente con células epiteliales cancerosas. El modelo 3D sirve como una herramienta experimental que permite estudiar la invasión y las interacciones cáncer-estroma en condiciones casi fisiológicas.

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Las características moleculares de las células láser microdissected y estroma de, modelos de cáncer colorrectal ingeniería de tejidos sintéticos representa un enfoque novedoso y manipulable para caracterizar y diseccionar la biología distintiva en la interfaz entre las células tumorales en el cáncer de células del estroma asociado frente invasivo y.

Molecular Profiling del microambiente tumoral invasiva en un modelo de 3 dimensiones de las células del cáncer colorrectal y<em&gt; Ex vivo</em&gt; Los fibroblastos

Microdisección se ha empleado ampliamente para el examen de ADN, ARN, y proteínas dentro del tejido. Microscopía de captura láser (LCM) es el método más comúnmente utilizado, pero una nueva técnica de fresado, mesodissection, es recientemente disponible. Demostramos la extracción de RNA de mesodissected formalina parafina fijo diapositivas de tejidos embebidos de granulomas de Mycobacterium tuberculosis.

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La expresión de genes de un subconjunto de células en un tejido específico representa un reto importante. En este artículo se describe cómo aislar el ARN total de alta calidad a partir de una población de células específicas mediante la combinación de un método immunolabeling rápida con láser captura microdissection.

Aislamiento de ARN a partir de células subpoblaciones específicas utilizando láser captura Microdissection Combinado con Rapid Immunolabeling

Aquí presentamos un protocolo para la microdisección asistida por láser de tipos específicos de células vegetales para el perfil transcripcional. Si bien el protocolo es adecuado para diferentes especies y tipos de células, la atención se centra en células altamente inaccesibles de la línea germinal femenina importantes para la reproducción sexual y apomíctica en el género de crucíferas Boechera.

Asistida por láser microdisección (LAM) como herramienta para la transcripción de perfiles de distintos tipos de células

El objetivo de este protocolo es obtener muestras de RNA de alta integridad de ganglios entéricos aislados del tejido intestinal humano no fijado, recién resecado usando el microdissection de la captura de láser (LCM). Este protocolo implica preparación de flash-congeladas muestras de tejido intestinal humano, cryosectioning, coloración etanólico y deshidratación, LCM y la extracción de RNA.

Optimización del Microdissection de la captura de láser para el aislamiento de los ganglios entéricos de tejido humano fresco congelado

La microdisección láser (LMD) es una técnica sensible y altamente reproducible que se puede utilizar para descubrir vías que median la heterogeneidad e invasión del glioma. Aquí, describimos un protocolo optimizado para aislar áreas discretas del tejido glioma usando LMD láser seguido de análisis transcriptomático.

Microdisección de captura láser de las subregiones de Glioma para la caracterización espacial y molecular de la heterogeneidad intratumoral, los oncostreams y la invasión

Este protocolo describe un flujo de trabajo de alto rendimiento para la segmentación impulsada por inteligencia artificial de regiones de interés confirmadas por patología a partir de imágenes de sección de tejido delgado teñidas para el enriquecimiento de poblaciones celulares resueltas por histología utilizando microdisección láser. Esta estrategia incluye un algoritmo novedoso que permite la transferencia de demarcaciones que denotan poblaciones celulares de interés directamente a los...

Microdisección láser industrializada guiada por inteligencia artificial para el análisis proteómico a microescala del microambiente tumoral

Aprenda microdisección por captura láser para aislar células de fibrosis submucosa oral con información morfológica y espacial. Este protocolo permite análisis multi-ómicos de tejidos incluidos en parafina para estudiar transformación maligna.

Aislamiento de Células con Información Morfológica y Espacial a partir de Muestras de Fibrosis Submucosa Oral mediante Microdisección por Captura Láser (Video) | JoVE Journal

Aislamiento de Células con Información Morfológica y Espacial a partir de Muestras de Fibrosis Submucosa Oral mediante Microdisección por Captura Láser

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