Name: Aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares derivadas del plasma para el descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Aprende a aislar y caracterizar vesículas extracelulares del plasma humano para descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares. Este protocolo utiliza ultracentrifugación y análisis proteómico LC-MS/MS para identificar proteínas clave en enfermedades cardíacas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Estudios de biomarcadores cardiovasculares con proteoma de vesículas extracelulares plasmáticas

<ol><li>Thery, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+%28misev2018%29%3A+A+position+statement+of+the+international+society+for+extracellular+vesicles+and+update+of+the+misev2014+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (misev2018): A position statement of the international society for extracellular vesicles and update of the misev2014 guidelines.</a> J Extracell Vesicles. 7 (1), 1535750(2018).</li>
<li>Kalluri, R., Lebleu, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology%2C+function%2C+and+biomedical+applications+of+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The biology, function, and biomedical applications of exosomes.</a> Science. 367, 6478(2020).</li>
<li>Shah, R., Patel, T., Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+extracellular+vesicles+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Circulating extracellular vesicles in human disease.</a> N Engl J Med. 379 (22), 2180-2181 (2018).</li>
<li>Zara, M., Amadio, P., Campodonico, J., Sandrini, L., Barbieri, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+in+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Exosomes in cardiovascular diseases.</a> Diagnostics (Basel). 10 (11), 943(2020).</li>
<li>Ontoria-Oviedo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+secreted+by+hypoxic+ac10+cardiomyocytes+modulate+fibroblast+cell+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles secreted by hypoxic ac10 cardiomyocytes modulate fibroblast cell motility.</a> Front Cardiovasc Med. 5, 152(2018).</li>
<li>Zara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+exosome+profile+in+st-elevation+myocardial+infarction+patients+with+and+without+out-of-hospital+cardiac+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Plasma exosome profile in st-elevation myocardial infarction patients with and without out-of-hospital cardiac arrest.</a> Int J Mol Sci. 22 (15), (2021).</li>
<li>Anselmo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+hypoxic+stress+mediates+functional+cardiac+extracellular+vesicle+release%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Myocardial hypoxic stress mediates functional cardiac extracellular vesicle release.</a> Eur Heart J. 42 (28), 2780-2792 (2021).</li>
<li>Navickas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+circulating+microRNAs+as+biomarkers+of+cardiovascular+disease%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Identifying circulating microRNAs as biomarkers of cardiovascular disease: A systematic review.</a> Cardiovasc Res. 111 (4), 322-337 (2016).</li>
<li>Creemers, E. E., Tijsen, A. J., Pinto, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs%3A+Novel+biomarkers+and+extracellular+communicators+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs: Novel biomarkers and extracellular communicators in cardiovascular disease.</a> Circ Res. 110 (3), 483-495 (2012).</li>
<li>Deddens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs+as+novel+biomarkers+for+the+early+diagnosis+of+acute+coronary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs as novel biomarkers for the early diagnosis of acute coronary syndrome.</a> J Cardiovasc Transl Res. 6 (6), 884-898 (2013).</li>
<li>Gidlof, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+extracellular+vesicles+reveals+additional+diagnostic+biomarkers+for+myocardial+infarction+compared+to+plasma+alone%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of extracellular vesicles reveals additional diagnostic biomarkers for myocardial infarction compared to plasma alone.</a> Sci Rep. 9 (1), 8991(2019).</li>
<li>Byrne, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESC+guidelines+for+the+management+of+acute+coronary+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J+Acute+Cardiovasc+Care%22%5BJournal%5D)">ESC guidelines for the management of acute coronary syndromes.</a> Eur Heart J Acute Cardiovasc Care. 10, (2023).</li>
<li>Garcia-Castrillo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+blood+sampling+in+emergency+departments+from+the+European+Society+for+Emergency+Medicine+%28EUSEM%29%2C+European+Society+for+Emergency+Nursing+%28EUSEN%29%2C+and+European+Federation+of+Clinical+Chemistry+and+Laboratory+Medicine+%28EFLM%29+working+group+for+the+pre-analytical+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Recommendations for blood sampling in emergency departments from the European Society for Emergency Medicine (EUSEM), European Society for Emergency Nursing (EUSEN), and European Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (EFLM) working group for the pre-analytical phase.</a> Clin Chem Lab Med. 62 (8), 1538-1547 (2024).</li>
<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).</li>
<li>Cox, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Andromeda%3A+A+peptide+search+engine+integrated+into+the+maxquant+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Andromeda: A peptide search engine integrated into the maxquant environment.</a> J Proteome Res. 10 (4), 1794-1805 (2011).</li>
<li>Cox, J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maxquant+enables+high+peptide+identification+rates%2C+individualized+p.p.b.-range+mass+accuracies+and+proteome-wide+protein+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Maxquant enables high peptide identification rates, individualized p.p.b.-range mass accuracies and proteome-wide protein quantification.</a> Nat Biotechnol. 26 (12), 1367-1372 (2008).</li>
<li>Blein-Nicolas, M., Zivy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thousand+and+one+ways+to+quantify+and+compare+protein+abundances+in+label-free+bottom-up+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Thousand and one ways to quantify and compare protein abundances in label-free bottom-up proteomics.</a> Biochim Biophys Acta. 1864 (8), 883-895 (2016).</li>
<li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+pre-analytical+variables+in+plasma+microparticle+determination%3A+Results+of+the+international+society+on+thrombosis+and+haemostasis+SSC+collaborative+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Standardization of pre-analytical variables in plasma microparticle determination: Results of the international society on thrombosis and haemostasis SSC collaborative workshop.</a> J Thromb Haemost. 11 (6), 1190-1193 (2013).</li>
<li>Nieuwland, R., Siljander, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+study+extracellular+vesicles+in+human+blood+plasma+and+serum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to study extracellular vesicles in human blood plasma and serum.</a> J Extracell Vesicles. 13 (1), e12400(2024).</li>
<li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+pre-analytical+parameters+on+the+measurement+of+circulating+microparticles%3A+Towards+standardization+of+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Impact of pre-analytical parameters on the measurement of circulating microparticles: Towards standardization of protocol.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 437-446 (2012).</li>
<li>Coumans, F. aW., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodological+guidelines+to+study+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Methodological guidelines to study extracellular vesicles.</a> Circ Res. 120 (10), 1632-1648 (2017).</li>
<li>Clayton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+towards+a+roadmap+for+collection%2C+handling+and+storage+of+blood+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Considerations towards a roadmap for collection, handling and storage of blood extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 8 (1), 1647027(2019).</li>
<li>Lucien, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miblood-EV%3A+Minimal+information+to+enhance+the+quality+and+reproducibility+of+blood+extracellular+vesicle+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Miblood-EV: Minimal information to enhance the quality and reproducibility of blood extracellular vesicle research.</a> J Extracell Vesicles. 12 (12), e12385(2023).</li>
<li>Zhang, X., Takeuchi, T., Takeda, A., Mochizuki, H., Nagai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+serum+and+plasma+as+a+source+of+blood+extracellular+vesicles%3A+Increased+levels+of+platelet-derived+particles+in+serum+extracellular+vesicle+fractions+alter+content+profiles+from+plasma+extracellular+vesicle+fractions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of serum and plasma as a source of blood extracellular vesicles: Increased levels of platelet-derived particles in serum extracellular vesicle fractions alter content profiles from plasma extracellular vesicle fractions.</a> PLoS One. 17 (6), e0270634(2022).</li>
<li>Gelibter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+storage+on+extracellular+vesicles%3A+A+systematic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">The impact of storage on extracellular vesicles: A systematic study.</a> J Extracell Vesicles. 11 (2), e12162(2022).</li>
<li>Sluijter, J. P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+in+diagnostics+and+therapy+of+the+ischaemic+heart%3A+Position+paper+from+the+working+group+on+cellular+biology+of+the+heart+of+the+European+Society+of+Cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles in diagnostics and therapy of the ischaemic heart: Position paper from the working group on cellular biology of the heart of the European Society of Cardiology.</a> Cardiovasc Res. 114 (1), 19-34 (2018).</li>
<li>Davidson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+identification+and+characterization+of+extracellular+vesicles+in+cardiovascular+studies%3A+From+exosomes+to+microvesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Methods for the identification and characterization of extracellular vesicles in cardiovascular studies: From exosomes to microvesicles.</a> Cardiovasc Res. 119 (1), 45-63 (2023).</li>
<li>Karimi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+analysis+of+the+plasma+extracellular+vesicle+proteome+after+separation+from+lipoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Detailed analysis of the plasma extracellular vesicle proteome after separation from lipoproteins.</a> Cell Mol Life Sci. 75 (15), 2873-2886 (2018).</li>
<li>Brennan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+methods+for+the+isolation+and+separation+of+extracellular+vesicles+from+protein+and+lipid+particles+in+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A comparison of methods for the isolation and separation of extracellular vesicles from protein and lipid particles in human serum.</a> Sci Rep. 10 (1), 1039(2020).</li>
<li>Palviainen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+from+human+plasma+and+serum+are+carriers+of+extravesicular+cargo-implications+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles from human plasma and serum are carriers of extravesicular cargo-implications for biomarker discovery.</a> PLoS One. 15 (8), e0236439(2020).</li>
<li>Lotvall, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+experimental+requirements+for+definition+of+extracellular+vesicles+and+their+functions%3A+A+position+statement+from+the+international+society+for+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: A position statement from the international society for extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 3, 26913(2014).</li>
<li>Gemoll, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+profiling+of+serum+extracellular+vesicles+reveals+qualitative+and+quantitative+differences+after+differential+ultracentrifugation+and+ExoQuick+TM+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Protein profiling of serum extracellular vesicles reveals qualitative and quantitative differences after differential ultracentrifugation and ExoQuick TM isolation.</a> J Clin Med. 9 (5), 1429(2020).</li>
<li>Kreimer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass-spectrometry-based+molecular+characterization+of+extracellular+vesicles%3A+Lipidomics+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mass-spectrometry-based molecular characterization of extracellular vesicles: Lipidomics and proteomics.</a> J Proteome Res. 14 (6), 2367-2384 (2015).</li>
<li>Shevchenko, A., Tomas, H., Havlis, J., Olsen, J. V., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-gel+digestion+for+mass+spectrometric+characterization+of+proteins+and+proteomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In-gel digestion for mass spectrometric characterization of proteins and proteomes.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2856-2860 (2006).</li>
<li>Bateman, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+peptide+identification+events+in+proteomic+workflows+using+data-dependent+acquisition+%28dda%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Maximizing peptide identification events in proteomic workflows using data-dependent acquisition (dda).</a> Mol Cell Proteomics. 13 (1), 329-338 (2014).</li>
<li>Pino, L. K., Just, S. C., Maccoss, M. J., Searle, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquiring+and+analyzing+data+independent+acquisition+proteomics+experiments+without+spectrum+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Acquiring and analyzing data independent acquisition proteomics experiments without spectrum libraries.</a> Mol Cell Proteomics. 19 (7), 1088-1103 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4x Bufffer de muestra Laemmli</td><td>Bio-rad</td><td>1610747</td><td></td></tr><tr><td>10x RIPA-Buffer</td><td>Abcam</td><td>ab156034</td><td></td></tr><tr><td>Botella de policarbonato de 26,3 mL con conjunto de tapa para ultracentrifugación</td><td>Beckman Coulter</td><td>355654</td><td></td></tr><tr><td>5810R Centrífuga de sobremesa</td><td>Eppendorf</td><td>5811000015</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrilo (ACN)</td><td>Biosolve</td><td>0001204101BS</td><td></td></tr><tr><td>Ditiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Ácido fórmico 99% ULC/MS 100</td><td>Biosolve</td><td>0006914143BS</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque - 1077</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>Yodoacetamida (IAA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6125-5G</td><td></td></tr><tr><td>Espectrómetro de masas Orbitrap Q Exactive HF</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>MOPS SDS búfer de funcionamiento</td><td>Thermo Fisher</td><td>B0001</td><td></td></tr><tr><td>NanoSight NS300</td><td>Malvern Panalytical&nbsp;</td><td>NS300</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NTA 3.2 Software</td><td>Malvern Panalytical&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&nbsp; bis 12&nbsp;%, Bis-Tris geles de proteína</td><td>Invitrogen</td><td>NP0323</td><td></td></tr><tr><td>Optima XPN-80 ultracentrífuga de pie</td><td>Beckman Coulter</td><td>521-4180</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Plus Escalera de proteínas preteñida</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26619</td><td></td></tr><tr><td>Cóctel de inhibidores de proteasa/fosfatasa (100X)</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>5872S</td><td></td></tr><tr><td>Marcador de proteínas</td><td>Thermo Fisher</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>Proteome Discoverer 2.5</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Q Exactive Plus Espectrómetro de masas híbrido cuadrupolo-orbitrap</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>Quick stain coomasssie</td><td>Serva</td><td>35081.01</td><td></td></tr><tr><td>ReproSil-Pur 120 C18-AQ, 1.9 &micro; m 1 g</td><td>Dr. Maisch</td><td>r119.aq.0001</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE gel comercial</td><td>Thermo Fisher</td><td>NW00100BOX</td><td></td></tr><tr><td>S-Monovette&nbsp; Citrat 9NC 0,106 mol/l 3,2%</td><td>Sarstedt</td><td>02.1067.001</td><td></td></tr><tr><td>Concentrador de vacío rápido</td><td>Savant</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Swiss-Prot (Uniprot) Homo sapiens (UP000005640, junio de 2020) Base de datos de proteínas</td><td>UniProt</td><td>https://www.uniprot.org/proteomes/UP000005640</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de bicarbonato de trietilamonio (TEAB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7408</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético (TFA) para HPLC >99%, 100 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>302031-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina MS-Grade</td><td>Thermo Fisher</td><td>90058</td><td></td></tr><tr><td>Tipo 50.2 Ti Rotor de ángulo fijo</td><td>Beckman Coulter</td><td>337901</td><td></td></tr><tr><td>UHPLC Dionex Ultimate 3000</td><td>Thermo Fisher Scientific ULTIM3000RSLCNANO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water</td><td>Biosolve</td><td>0023214102BS</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares derivadas del plasma para el descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares

Isolation, Characterization, and Proteomic Analysis of Plasma-Derived Extracellular Vesicles for Cardiovascular Biomarker Discovery

Los EV se aislaron de muestras de plasma (n = 3) de pacientes sin enfermedad cardiovascular manifiesta, así como de pacientes con infarto de miocardio sin elevación del segmento ST (IMSEST; n = 2), utilizando el protocolo de ultracentrifugación diferencial establecido. La separación adecuada de la EV plasmática se confirmó mediante inmunotransferencia de las proteínas TSG-101, anexina 5 (Anx5) y CD9 enriquecidas con EV en aislados de EV en comparación con el plasma deplecionado con EV de los mismos pacientes (<strong cla...

Aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares derivadas del plasma para el descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares

Extracellular vesicles (EV) are cell-derived, lipid bilayer-enclosed, non-replicable nanoparticles. EV currently gain attention in cardiovascular research ...

isolation-characterization-proteomic-analysis-plasma-derived

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Las vesículas extracelulares presentes en la sangre han sido sugeridas como nuevos biomarcadores para diversas enfermedades. En este trabajo se presenta un protocolo para el aislamiento de grandes microvesículas derivadas de membrana plasmática a partir de muestras de sangre periférica y su posterior análisis mediante citometría de flujo convencional y Western Blotting.

Aislamiento y caracterización de microvesículas de la sangre periférica

Aquí, presentamos un protocolo para purificar exosomas de plasma y suero con menor Co purificación de proteínas de la sangre no exosomal. El protocolo optimizado incluye tratamiento con proteasas y ultrafiltración y cromatografía por exclusión de tamaño. Mayor purificación de exosomas beneficios aguas abajo los análisis, incluyendo la cuantificación más exacta de las vesículas y caracterización proteómica.

Digestión de proteínas, ultrafiltración y cromatografía por exclusión de tamaño para optimizar el aislamiento de exosomas de suero y Plasma de sangre humana

El protocolo describe un método reproducible diseñado para uso con sobrenadantes de cultivo celular para detectar epítopos superficiales en pequeñas vesículas extracelulares (EV). Utiliza específica inmunoprecipitación EV usando granos juntados con los anticuerpos que reconocen antígenos de superficie CD9, CD63 y CD81. El método está optimizado para el análisis de citometría de flujo aguas abajo.

Análisis Cytometric del vesículas extracelulares de medios acondicionado de célula de flujo

El presente informe destaca los requisitos cronológicos para el aislamiento de vesículas extracelulares (EV) de la microglia o de los macrófagos sanguíneos. Los vehículos eléctricos derivados de la microglia se evaluaron como reguladores del crecimiento de la neurita, mientras que los vehículos eléctricos derivados de macrófagos sanguíneos se estudiaron en el control de la invasión de células de glioma C6 en ensayos in vitro. El objetivo es comprender mejor estas funciones EV como mediadores...

Caracterización de vesículas extracelulares derivadas de células inmunes y estudio del impacto funcional en el entorno celular

El presente protocolo describe un método para extraer vesículas extracelulares de la sangre periférica y tejidos sólidos con el posterior perfil de antígenos de superficie y cargas de proteínas.

Aislamiento y análisis de vesículas extracelulares trazables y funcionalizadas a partir del plasma y tejidos sólidos

La última generación de herramientas de caracterización de EV es capaz de realizar un solo análisis de EV a través de múltiples parámetros simultáneamente. La citometría de nanoflujo mide todas las partículas biológicas mayores de 45 nm sin etiquetado e identifica características específicas de subpoblaciones mediante una variedad de técnicas de etiquetado fluorescente.

Caracterización de proteínas transmembrana de vesícula extracelular única mediante citometría de nanoflujo

El presente protocolo proporciona descripciones detalladas para el aislamiento eficiente de vesículas extracelulares urinarias utilizando perlas magnéticas funcionalizadas. Además, abarca análisis posteriores, como Western blot, proteómica y fosfoproteómica.

Aislamiento Basado en la Afinidad Química de Vesículas Extracelulares a partir de Biofluidos para Análisis de Proteómica y Fosfoproteómica

Se proporciona un protocolo detallado para la limpieza y reutilización de los tubos de ultracentrífuga de policarbonato para realizar el aislamiento de vesículas extracelulares adecuado para experimentos de proteómica.

Reutilización de tubos ultracentrífugos de policarbonato en análisis proteómicos de vesículas extracelulares

Aquí, demostramos el método de caracterización de vesículas extracelulares (EV) recolectadas de fluidos biológicos, como lágrimas y saliva, de sujetos humanos. El escáner utilizado en este método es capaz de detectar el fenotipo, el tamaño y el recuento total de partículas de los EV a partir de 1 μL de la muestra.

Caracterización de vesículas extracelulares a partir de fluidos biológicos

Este video muestra una técnica eficaz para la diferenciación y la disección de las diferentes estructuras semi-transparente del cuerpo humano en el vítreo posterior ojos mortem.

La disección de los elementos humanos Cuerpo Vítreo para el análisis proteómico

Aprende a aislar y caracterizar vesículas extracelulares del plasma humano para descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares. Este protocolo utiliza ultracentrifugación y análisis proteómico LC-MS/MS para identificar proteínas clave en enfermedades cardíacas.

Aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares derivadas del plasma para el descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares (Video) | JoVE Journal

Aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares derivadas del plasma para el descubrimiento de biomarcadores cardiovasculares

Explorar más videos