Name: 5/6 Nefrectomía con bipolectomía aguda mediante laparotomía de línea media en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 34 s
Description: Aprende la nefrectomía 5/6 mediante bipolectomía aguda con laparotomía de línea media en ratas. Este protocolo estandarizado induce insuficiencia renal con precisión para investigar enfermedades renales.

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Todos los procedimientos con animales descritos en este documento se llevaron a cabo dentro de instalaciones acreditadas y han recibido la aprobación del comité institucional de cuidado y uso de animales (IACUC) del Consejo Regional de Baden-Württemberg en Karlsruhe, Alemania (35-9185.81/G-62/23). Los animales de experimentación se manipularon de acuerdo con los protocolos institucionales y en cumplimiento de la legislación alemana sobre bienestar animal, además de seguir las directrices establecidas por el Consejo de la Comunidad Europea (2010/63/UE) y las directrices ARRIVE. Se utilizaron ratas Sprague Dawley macho con un peso inicial de 400 g después de un período de aclimatación de 1 semana.
1. Anestesia y analgesia
<ol>
	<li>Narcotiza el modelo de rata con los productos farmacéuticos de elección. Para seguir este protocolo, realice la inducción volátil de la sedación con isoflurano seguida de una inyección intraperitoneal de 100 mg/kg de ketamina de peso corporal para anestesia disociativa y 4 mg/kg de xilacina de peso corporal. Lograr analgesia con inyecciones subcutáneas de 5 mg/kg de peso corporal de carprofeno. NOTA: Un protocolo detallado se puede encontrar en la literatura citada25.</li>
	<li>Asegure una profundidad analgésica adecuada buscando reflejos de dolor durante la prueba de pinzamiento del dedo del pie con pinzas quirúrgicas y reevalúe regularmente la profundidad de la anestesia durante el procedimiento.</li>
	<li>Aplique lubricante oftálmico en los ojos para prevenir la desecación de la córnea.</li>
</ol>
2. Preparación del procedimiento
<ol>
	<li>Prepare el sitio de operación con todos los materiales e instrumentos necesarios, incluidas ligaduras de polifilamento, bucles de vasos de silicona, pinzas romas overholt, tijeras y pinzas de preparación fina, así como parches hemostáticos cortados en piezas de 0,8 x 0,6 cm (Figura 1A-G). Prepare el aparato de exposición quirúrgica a roedores, una almohadilla térmica y los ganchos de preparación quirúrgica como se especifica en la literatura citada25.</li>
	<li>Afeitar la longitud del acceso deseado, desinfectar el sitio quirúrgico alternando tres exfoliantes con hisopos de lavado a base de etanol y yodo al 70% o clorhexidina con movimientos circulares, y lograr una oxigenación adecuada mediante la inhalación de oxígeno al 100% con una mascarilla neonatal (Figura 1H-J). Cubra el resto del cuerpo fuera del sitio quirúrgico con paños para evitar la contaminación. NOTA: El animal representativo que se utilizó para obtener las imágenes de la figura no estaba cubierto para permitir una mejor visualización de los puntos de referencia anatómicos.</li>
	<li>Realizar una minilaparotomía mediana a través de una incisión cutánea mediana inicial sobre la longitud abdominal deseada de ~3 cm y una incisión posterior ligeramente más pequeña de la fascia a lo largo de la línea alba (Figura 1K-M).</li>
	<li>Lograr la exposición quirúrgica del riñón utilizando compresas quirúrgicas y ganchos de preparación quirúrgica (Figura 1N-O). Solo toque el parénquima renal con instrumentos de preparación atraumática, como un hisopo de algodón humedecido o una compresa humedecida con pinzas o pinzas romas.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67322/67322fig01.jpg"> 
Figura 1: Instrumentos experimentales, materiales y configuración. (A) Instrumentos quirúrgicos requeridos; (B) ligadura de polifilamento; (C) bucle de recipiente de silicona; (D) tijeras de preparación fina. (E-G) Parche hemostático cortado en trozos de 0,8 x 0,6 cm. (H-J) Modelo de rata afeitado y oxigenado con mascarilla. El animal representativo que se utilizó para obtener las imágenes de la figura no estaba cubierto para permitir una mejor visualización de los puntos de referencia anatómicos. (K,L) Mediana de la incisión cutánea sobre la longitud abdominal deseada de ~3 cm. (M) Mediana de la minilaparotomía; (N) exposición del riñón izquierdo usando una compresa quirúrgica, ganchos de preparación quirúrgica y un soporte de metal; (O) exposición análoga del riñón derecho y resección de la fascia de Gerota. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67322/67322fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
3. Nefrectomía parcial
<ol>
	<li>Exponga el riñón respectivo, agarre la grasa perirrenal que está unida a la fascia delgada de Gerota y aplique un poco de tensión para levantar localmente la fascia del parénquima renal (Figura 2A, B.2).</li>
	<li>Incidir y socavar la fascia con el extremo afilado del filo de una tijera y continuar con una disección longitudinal de la fascia de la Gerota (Figura 2B).</li>
	<li>Realice un degloante romo de la fascia de la Gerota con unas tijeras cerradas, socavando gradualmente la fascia alrededor del parénquima y doblando la cápsula fascial medialmente, opcionalmente resecándola parcialmente (Figura 2C).</li>
	<li>Eslingar el hilio renal con un asa de vasos de silicona para mejorar el control vascular (Figura 2D).</li>
	<li>Coloque la punta de las pinzas en el espacio retroperitoneal para estabilizar el riñón y evitar un escape dorsal del riñón durante el proceso de corte y realice la polectomía renal aguda craneal de 1/3 en un solo golpe preciso con tijeras (Figura 2E). NOTA: La línea de disección debe elegirse mediante evaluación clínica de manera que separe el órgano en 1/3 de la altura del órgano craneal y caudalmente.</li>
	<li>Lograr la hemostasia mediante la aplicación de un parche hemostático, por compresión manual, por compresión con instrumentos contundentes o por tensión hiliar a través del asa de los vasos de silicona, reduciendo eficazmente el flujo sanguíneo hiliar (Figura 2F-J). NOTA: La hemostasia se logró regularmente mediante la extracción simultánea del asa vascular y la aplicación del parche hemostático durante 2,5-3 min.</li>
	<li>A continuación, se realiza una polectomía caudal aguda de 1/3 renal de forma análoga (Figura 2K-N). Para ambos golpes de tijera, apunte a un plano de disección ligeramente angulado que deje más parénquima renal en el lado hiliar y menos tejido en el lado lateral para evitar lesiones hiliares involuntarias y reducir las fugas urinarias del sistema pelvicocaliceal (Figura 2O). Si se desea una mayor estandarización de la resección precisa del parénquima 5/6, se pesa la resección de la nefrectomía total en el lado contralateral que se describe más adelante, se pesan las resecciones de la nefrectomía parcial 2/3 y se repite la disección en una técnica de "corte de salami" hasta obtener exactamente 2/3 del peso.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67322/67322fig02.jpg"> 
Figura 2: Nefrectomía parcial. (A) Exposición quirúrgica de un riñón. (B) Incisión longitudinal de la fascia de la Gerota con tijeras afiladas. (C) Desengrasado romo de la fascia de la Gerota con tijeras cerradas. (D) Eslingar el hilio renal usando un asa de silicona. (E) Polectomía aguda craneal de 1/3 con tijeras y pinzas como guía. (F) Lograr la hemostasia mediante la aplicación de un parche hemostático; (G) lograr la hemostasia por compresión manual; (H-J) logrando la hemostasia por compresión con instrumentos contundentes y la tensión hiliar a través del asa del vaso de silicona. (K-N) Polectomía caudal aguda 1/3 por analogía. (O) Representación esquemática de los planos de disección recomendados para evitar lesiones hiliares involuntarias (líneas negras). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67322/67322fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
4. Nefrectomía total
<ol>
	<li>Movilice el riñón en analogía con los pasos descritos anteriormente y tunelice el hilio renal con pinzas romas (Figura 3A, B).</li>
	<li>Coloque el hilio renal con una ligadura de polifilamento y coloque un nudo deslizante seguro en el hilio renal un poco más cerca de los vasos abdominales para ocluir el flujo sanguíneo renal y el uréter (Figura 3C, D).</li>
	<li>Diseccionar bruscamente el hilio con unas tijeras y extraer el riñón (Figura 3E, F).</li>
	<li>Control de la hemostasia y corte de los extremos de la ligadura (Figura 3G-J).</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67322/67322fig03.jpg"> 
Figura 3: Nefrectomía total. (A) Exposición quirúrgica del riñón contralateral; (B) extirpación análoga de la fascia de Gerota y tunelización del hilio renal mediante pinzas romas; (C) Eslingar el hilio con una ligadura de polifilamento. (D) Colocación de una ligadura de nudo deslizante en el hilio renal; (E,F) disección aguda del hilio con tijeras y extracción del riñón; (G-I) control de hemostasia y corte de los extremos de la ligadura. (J) Representación esquemática de la altura de ligadura recomendada (línea discontinua) y el plano de disección (línea negra). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67322/67322fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
5. Cierre de la pared abdominal
<ol>
	<li>Coloque una sutura de esquina en la fascia abdominal utilizando una sutura de polifilamento (Figura 4A-D).</li>
	<li>Continúe suturando la fascia abdominal con una sutura corrida con ~ 2 mm de tejido agarrado con cada mordida y aproximadamente 4 mm entre las mordidas (Figura 4E-I).</li>
	<li>Suturar la capa cutánea con puntos individuales con ~3 mm de tejido agarrado con cada mordida y ~6 mm entre las mordidas (Figura 4J-Q).</li>
</ol>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67322/67322fig04.jpg"> 
Figura 4: Cierre de la pared abdominal. (A-D) Colocación de una sutura de esquina en la fascia abdominal utilizando una sutura de polifilamento. (E-I) Sutura corrida de la fascia abdominal; (J-Q) sutura de la capa cutánea mediante puntos individuales. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67322/67322fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
6. Pasos adicionales
<ol>
	<li>Dependiendo del escenario deseado, el propósito de la investigación y el grado de insuficiencia renal deseado, considere las desviaciones de este protocolo, incluida una variación en la cantidad de parénquima renal resecado, por ejemplo, nefrectomía total unilateral (nefrectomía 3/6), nefrectomía total bilateral (nefrectomía 6/6), monopolectomía unilateral (nefrectomía 1/6), monopolectomía bilateral (nefrectomía 2/6), bipolectomía unilateral (nefrectomía 2/6) y bipolectomía bilateral (nefrectomía 4/6).</li>
	<li>En general, se debe sacrificar a los animales mediante una cardiectomía aguda sin cierre previo de la pared abdominal para aplicaciones que no sean de supervivencia, o realizar un cierre abdominal escalonado como se describe anteriormente en caso de experimentos de supervivencia planificados con seguimiento.</li>
	<li>En el caso de aplicaciones de supervivencia, mantener condiciones estériles en todo momento durante la cirugía. Antes de la cirugía, prepare la piel de forma aséptica en el sitio quirúrgico con un exfoliante (a base de yodo o clorhexidina) y alcohol. Use un paquete nuevo de instrumentos esterilizados en autoclave para cada animal.</li>
	<li>Después de la cirugía, monitoree al animal hasta que esté lo suficientemente consciente como para mantener la decúbito esternal y aíslelo hasta que se recupere por completo.</li>
	<li>Como tratamiento postquirúrgico del animal, incluir visitas diarias a través del personal médico, así como tratamiento del dolor postquirúrgico mediante inyecciones subcutáneas de 5 mg/kg de carprofeno de peso corporal 2 veces al día durante 2 días.</li>
	<li>Utilice hojas de puntuación con criterios de terminación claramente definidos para el tiempo que transcurre hasta la recuperación postoperatoria completa. Utilice la Escala de Muecas de Rata26 o la Puntuación de Condición Corporal27 de la literatura citada. Finalice el experimento si la puntuación de mueca ≥ 6 o una puntuación de condición corporal = 1 después de la aplicación de carprofeno. Además, se termina en caso de una complicación quirúrgica como una infección de la herida postoperatoria o una insuficiencia de cierre de la pared abdominal.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Nefrectomía estandarizada 5/6 en ratas para insuficiencia renal y malperfusión

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</ol>

<table><tbody><tr><td>pinza de preparación atraumática</td><td>Aesculap</td><td>FB395R</td><td>DE BAKEY ATRAUMATA pinza atraumática, recta</td></tr><tr><td>roma abrazadera</td><td>Aesculap</td><td>BJ012R</td><td>BABY-MIXTER pinza de preparación y ligadura, doblada, cánula de 180 mm</td></tr><tr><td></td><td>BD (Beckton, Dickinson)</td><td>301300</td><td>BD Microlance 3 cánula 20 G</td></tr><tr><td>varillas de fijación</td><td>legefirm</td><td>&lrm; 500343896</td><td>diapasones utilizados como varillas de fijación metálicas en forma de Y</td></tr><tr><td>almohadilla térmica</td><td>Royal Gardineer</td><td>IP67</td><td>Royal Gardineer Almohadilla térmica tamaño S, 20 vatios</td></tr><tr><td>tubo perfusor de plástico</td><td>M. Schilling GmbH</td><td></td><td>Tubo de conexión S702NC150 COEX 150 cm</td></tr><tr><td>sutura de polifilamento</td><td>Covidien</td><td>CL-769</td><td>Covidien Polysorb Sutura reabsorbible trenzada 2-0 75 cm</td></tr><tr><td>tijeras de</td> <td>preparaciónAesculap</td><td>BC177R</td><td>JAMESON tijeras de preparación, dobladas, modelo fino, romo/romo, 150 mm (6")</td></tr> <tr><td>parche de hemostático de sellado</td><td>Baxter</td><td>1506257</td><td>Hemopatch Sellado Hemopatch Baxter 45 x 90 mm</td></tr><tr><td>brida de bucle para recipiente de silicona</td><td>SERAG WIESSNER</td><td>SL26</td><td>brida de bucle para recipiente de silicona 2,5 mm rojo</td></tr><tr><td>Rata Spraque Dawley</td><td>Janvier Labs</td><td>RN-SD-M</td><td>Spraque Dawley</td></tr><tr><td>rata acero placa</td><td>Maschinenbau Feld GmbH</td><td>C010206</td><td>Chapa galvanizada, 40 x 50 cm, espesor 4,0 mm</td></tr><tr><td>Pinza Yasargil</td><td>Aesculap</td><td>FE795K</td><td>YASARGIL Sistema de grapas para aneurismas Phynox Clip temporal (estándar) Aplicador</td></tr> de <tr><td>pinzas Yasargil</td><td>Aesculap</td><td>FE558K</td><td>YASARGIL Aplicador de pinzas para aneurismas Phynox (estándar)</td></tr></tbody></table>

5/6 nefrectomía con bipolectomía aguda mediante laparotomía de línea media en ratas

5/6 Nephrectomy Using Sharp Bipolectomy Via Midline Laparotomy in Rats

Este protocolo se llevó a cabo en 10 ratas macho (peso medio 398 ± 35 g) en un entorno de no supervivencia y el procedimiento fue realizado por un residente quirúrgico de tercer año. La tasa de éxito definida por la supervivencia a más de 20 min tras el cierre de la pared abdominal fue del 100%. La duración media de la preparación desde la incisión cutánea hasta el cierre cutáneo fue de 18 min 34 s ± 7 min 31 s.
Desafortunadamente, debido a la naturaleza no sobreviviente de este manuscrito, no...

5/6 Nefrectomía con bipolectomía aguda mediante laparotomía de línea media en ratas

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the ...

56-nephrectomy-using-sharp-bipolectomy-via-midline-laparotomy-in-rats

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Un método de dos etapas para establecer la enfermedad renal crónica (ERC) en ratas Lewis mediante la extirpación quirúrgica 5/6th de masa renal se describe. Combinación de la intervención quirúrgica, NOS-inhibición y una dieta alta en sal conduce a un modelo parecido a ERC humana, permitiendo el estudio de los mecanismos causales y el desarrollo de nuevas intervenciones terapéuticas.

5/6th nefrectomía en combinación con dieta alta en sal y el óxido nítrico sintasa inhibición para inducir la enfermedad renal crónica en la rata Lewis

La administración de fármacos para la recuperación de la función renal requiere el control de la localización y distribución del compuesto terapéutico. A continuación, describimos en detalle una técnica sencilla para la entrega intrarrenal de drogas en ratas. Este procedimiento se puede realizar fácilmente sin mortalidad y alta reproducibilidad.

Intravascular de entrega de los productos biológicos para el riñón de rata

Este manuscrito ofrece un procedimiento quirúrgico de dos pasos detallados para realizar nefrectomía parcial deth de ratón 5/6 (PNx) con la ligadura del polo. Cuatro semanas después de la cirugía, en comparación con ratones sham-funcionado, los ratones PNx desarrollaron fibrosis cardiaca, hipertrofia cardiaca, deterioro de la función renal, anemia y disminución de la función sistólica y diastólica de corazón.

Un modelo de nefrectomía de ratón 5/6th que induce miocardiopatía urémica Experimental

Inducir la hipertrofia hepática rápida utilizando partición de hígado asociar y ligadura de la vena porta para una hepatectomía Staged (ALPPS) se ha propuesto para la resección de tumores del hígado resecables borderline. Este modelo puede aclarar los mecanismos implicados en la hipertrofia rápida y permite realizar pruebas de drogas que promueven o bloquean la aceleración de la regeneración.

Modelo de la rata de la Asociación de partición hepática y ligadura de la vena porta para procedimiento efectuado hepatectomía (ALPPS)

Este artículo muestra el método para la colocación quirúrgica en ratones de un catéter intraperitoneal conectados a un puerto de acceso que se encuentra en la parte posterior del animal. Por otra parte, explica el procedimiento para una nefrectomía 5/6 para asemejarse al estado urémico de pacientes con EP.

Técnicas quirúrgicas para la colocación del catéter y nefrectomía 5/6 en modelos murinos de Diálisis Peritoneal

Ingeniería de tejido renales construcciones proporcionan una solución para la escasez de órganos y los efectos deletéreos de la diálisis. Aquí, describimos un protocolo micro disecar riñones murinos para el aislamiento de segmentos córtico-medular. Estos segmentos están implantados en construcciones celulares libre de andamio, formando organoides renal.

Microdisección de segmentos de tejido Renal primaria y la incorporación con la tecnología de construcción de andamio-libre nuevo

El propósito de este manuscrito y el protocolo es explicar y demostrar en detalle el procedimiento quirúrgico de trasplante ortotópico de riñón en ratas. Este método se simplifica para lograr la correcta perfusión del riñón del donante y acortar el tiempo de reperfusión mediante el uso de la técnica de anastomosis del manguito venoso y ureteral.

Trasplante de riñón de rata ortotópica: un enfoque quirúrgico novedoso y simplificado

Este artículo proporciona instrucciones detalladas para permitir a los investigadores realizar la obstrucción ureteral unilateral reversible en ratones utilizando un modelo estandarizado que permite el análisis de los resultados estructurales y funcionales a largo plazo después de la reversión de la obstrucción ureteral prolongada.

Un modelo de ratón para evaluar los resultados estructurales y funcionales a largo plazo después de la reversión de la obstrucción ureteral unilateral prolongada

Este protocolo describe un procedimiento de supervivencia para una linfadenectomía renal bilateral murina segura y bien tolerada.

Linfodenectomía renal bilateral murina

Único puerto de la cirugía laparoscópica es cambiar el estándar de cuidado en la atención quirúrgica como si nada ya que la técnica laparoscópica se introdujo hace 20 años. Se presenta a la técnica de la nefrectomía simple donante de puerto con el dispositivo Gelpoint. Hemos realizado con éxito esta cirugía en 100 pacientes.

De un puerto nefrectomía del donante

Aprende la nefrectomía 5/6 mediante bipolectomía aguda con laparotomía de línea media en ratas. Este protocolo estandarizado induce insuficiencia renal con precisión para investigar enfermedades renales.

5/6 Nefrectomía con bipolectomía aguda mediante laparotomía de línea media en ratas

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