Name: Un modelo murino inmunocompetente para la terapia térmica intersticial con láser del glioblastoma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Aprende a desarrollar un modelo murino inmunocompetente para evaluar la terapia térmica intersticial con láser en glioblastoma. Este método permite estudiar respuestas celulares y optimizar tratamientos en tumores cerebrales inoperables.

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<ol><li>Canadian Cancer Society. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+2023%22">Cancer Statistics 2023</a>. , Canadian Cancer Statistics Advisory Committee in collaboration with the Canadian Cancer Society, Statistics Canada and the Public Health Agency of Canada. Toronto, ON. http://cancer.ca/Canadian-Cancer-Statistics-2023-EN (2023).</li>
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<li>Carpentier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+thermal+therapy%3A+Real-time+MRI-guided+and+computer-controlled+procedures+for+metastatic+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg+Med%22%5BJournal%5D)">Laser thermal therapy: Real-time MRI-guided and computer-controlled procedures for metastatic brain tumors.</a> Lasers Surg Med. 43 (10), 943-950 (2011).</li>
<li>Haddad, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+glioblastoma+for+the+evaluation+of+novel+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Mouse models of glioblastoma for the evaluation of novel therapeutic strategies.</a> Neurooncol Adv. 3 (1), vdab100(2021).</li>
<li>Chokshi, C. R., Savage, N., Venugopal, C., Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patient-derived+xenograft+model+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A patient-derived xenograft model of glioblastoma.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100179(2020).</li>
<li>Alcaniz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinically+relevant+glioblastoma+patient-derived+xenograft+models+to+guide+drug+development+and+identify+molecular+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinically relevant glioblastoma patient-derived xenograft models to guide drug development and identify molecular signatures.</a> Front Oncol. 13, 1129627(2023).</li>
<li>Muir, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy+for+newly+diagnosed+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy for newly diagnosed glioblastoma.</a> Lasers Med Sci. 37 (3), 1811-1820 (2022).</li>
<li>Muir, M., Traylor, J. I., Gadot, R., Patel, R., Prabhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeat+laser+interstitial+thermal+therapy+for+recurrent+primary+and+metastatic+intracranial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Neurol+Int%22%5BJournal%5D)">Repeat laser interstitial thermal therapy for recurrent primary and metastatic intracranial tumors.</a> Surg Neurol Int. 13, 311(2022).</li>
<li>De Groot, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+laser+interstitial+thermal+therapy+%28LITT%29+for+newly+diagnosed+and+recurrent+IDH+wild-type+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Efficacy of laser interstitial thermal therapy (LITT) for newly diagnosed and recurrent IDH wild-type glioblastoma.</a> Neurooncol Adv. 4 (1), vdac040(2022).</li>
<li>Holste, K. G., Orringer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy.</a> Neurooncol Adv. 2 (1), vdz035(2020).</li>
<li>Leuthardt, E. C., Voigt, J., Kim, A. H., Sylvester, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-center+cost+analysis+of+treating+primary+and+metastatic+brain+cancers+with+either+brain+laser+interstitial+thermal+therapy+%28LITT%29+or+craniotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacoecon+Open%22%5BJournal%5D)">A single-center cost analysis of treating primary and metastatic brain cancers with either brain laser interstitial thermal therapy (LITT) or craniotomy.</a> Pharmacoecon Open. 1 (1), 53-63 (2017).</li>
<li>Bastos, D. C. D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+local+control+of+brain+metastasis+treated+with+laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Predictors of local control of brain metastasis treated with laser interstitial thermal therapy.</a> Neurosurgery. 87 (1), 112-122 (2020).</li>
<li>Darbinyan, A., Leelatian, N., Fomchenko, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+changes+associated+with+laser+interstitial+thermal+therapy+for+radiation+necrosis%3A+illustrative+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Case+Lessons%22%5BJournal%5D)">Histological changes associated with laser interstitial thermal therapy for radiation necrosis: illustrative cases.</a> J Neurosurg Case Lessons. 4 (1), CASE21373(2022).</li>
<li>Grant, G. A., Porter, B. E., Li, D., Barros Guinle, M. I., Kaur, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach%2C+complications%2C+and+outcomes+for+37+consecutive+pediatric+patients+undergoing+laser+ablation+for+medically+refractory+epilepsy+at+Stanford+Children%27s+Health%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Approach, complications, and outcomes for 37 consecutive pediatric patients undergoing laser ablation for medically refractory epilepsy at Stanford Children's Health.</a> J Neurosurg Pediatr. 33 (1), 1-11 (2023).</li>
<li>Ogasawara, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy+for+cerebral+cavernous+malformations%3A+A+systematic+review+of+indications%2C+safety%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy for cerebral cavernous malformations: A systematic review of indications, safety, and outcomes.</a> World Neurosurg. 166, 279-287.e1 (2022).</li>
<li>Satzer, D., Mahavadi, A., Lacy, M., Grant, J. E., Warnke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+laser+anterior+capsulotomy+for+obsessive-compulsive+disorder%3A+lesion+size+and+tractography+correlate+with+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Interstitial laser anterior capsulotomy for obsessive-compulsive disorder: lesion size and tractography correlate with outcome.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 93 (3), 317-323 (2022).</li>
<li>Salehi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+enhancement+of+blood-brain+and+blood-tumor+barriers+permeability+by+laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Therapeutic enhancement of blood-brain and blood-tumor barriers permeability by laser interstitial thermal therapy.</a> Neurooncol Adv. 2 (1), vdaa071(2020).</li>
<li>Navarro, K. L., Huss, M., Smith, J. C., Sharp, P., Marx, J. O., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR J. 62 (1-2), 238-273 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Lanzas de absorción</td><td>FST</td><td>18105-01</td><td>Esponjas hemostáticas.</td></tr><tr><td>Pinza de tejido Adson</td><td>FST</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 ratones</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Cepa #000664</td> 6 <td>a 12 semanas de edad macho y hembra</td></tr><tr><td>Aplicadores con punta de algodón (6")</td><td>Electrónica Microscopy Sciences</td><td>72308</td><td></td></tr><tr><td>CT2A línea celular de glioma Generosamente</td><td></td><td></td><td>donado por el Dr. Peter Fecci, Universidad de Duke.</td></tr><tr><td>Extracto de membrana basal con factor de crecimiento reducido Cultrex, PathClear</td><td>Biotechne, R& Sistemas D</td><td>3433-010-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>, Gibco, ThermoFisher Scientific,</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de doble cámara&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1450003</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 2.0 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22363352</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol etílico Anhidro</td><td>Greenfield Global</td><td>P016EAAN</td><td>Diluido al 70% con ddH2O</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino, calificado, Canadá</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12483020</td><td></td></tr><tr><td>Envoltura de plástico Glad Press-n-Seal</td><td>Amazon.ca</td><td></td><td></td>12587704417</tr><tr><td>Taladro de alta velocidad</td><td>Kopf Instruments Modelo</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>K & J Medidor de temperatura de termopar</td><td>Omega</td><td>HH509R</td><td></td></tr><tr><td>Metacam (meloxicam)</td><td>WDDC</td><td>114424</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de jeringa de microinyección</td><td>WPI</td><td>UMP3T-1</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de microlitro (Serie 700)</td><td>Hamilton</td><td>87908</td><td>Las agujas personalizadas están disponibles. Un bisel de aguja empinado ayuda a un parto preciso, y una longitud de aguja más corta ayuda a la estabilidad.</td></tr><tr><td>Destornillador de agujas/Portaagujas</td><td>FST</td><td>12500-12</td><td>Una punta fina es la más adecuada debido al reducido espacio de trabajo, pero muchos estilos son adecuados según la preferencia del mango.</td></tr><tr><td>Opixcare Plus ungüento oftálmico</td><td>WDDC</td><td>135941</td><td></td></tr><tr><td>solución salina tamponada con fosfato (10x)</td><td>Fisher bioreactivos</td><td>BP399-4</td><td>Diluir a 1x con ddH2O</td></tr><tr><td>Povidona yodada</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>3955-16</td><td>Aliquat en tubos más pequeños para usar con aplicadores con punta de algodón.</td></tr><tr><td>Solución salina (normal)</td><td>WDDC</td><td>126588</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí, de un solo uso (Hoja #15)</td><td>Tijeras Feather</td><td>Feather NO15</td><td></td></tr><tr><td>, quirúrgicas</td><td>finas FST</td><td>91460-11</td><td>Las tijeras finas de estudiante, Iris o Bonn son todas adecuadas.</td></tr><tr><td>Marco estereotáctico</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modelo 940</td><td>Con consola de visualización digital y cono de nariz de ratón y barras para los oídos.</td></tr><tr><td>Soporte de jeringa estereotáctica</td><td>Kopf Instruments Modelo</td><td>1772-F</td><td>Si no se utiliza una bomba de inyección.</td></tr><tr><td>Suturas (5-0 monofilamento)</td><td>Ethicon</td><td>MCP463G</td><td>Monofilamento violeta monocryl con punta de corte inverso</td></tr><tr><td>Jeringa, 28 G&nbsp; (0,5 mL)&nbsp;</td><td>BD</td><td>BD 329461</td><td>BD Lo-Dose U-100 Jeringas de insulina</td></tr><tr><td>TC20 Contador de células automatizado</td><td>BIO-RAD</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de termopar, diámetro fino (Tipo K)</td><td>Omega</td><td>TJM-CA316-IM025G-150</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%), rojo fenol</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond by 3M, pegamento para tejidos veterinarios&nbsp;</td><td>WDDC</td><td>126125</td><td></td></tr><tr><td>Wahl Peanut Clippers</td><td>WDDC/Wahl</td><td>100963</td><td>También disponible directamente del fabricante.</td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Bensen Medical</td><td>70308/121873</td><td>Se puede utilizar cualquier artículo similar.</td></tr><tr><td>Webcol Alcohol preps</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>71005-20</td><td>Toallita de preparación con alcohol, 2 capas, tamaño mediano.</td></tr></tbody></table>

un modelo murino inmunocompetente para la terapia térmica intersticial con láser del glioblastoma

An Immunocompetent Murine Model for Laser Interstitial Thermal Therapy of Glioblastoma

El éxito de la implantación de tumores CT2A y los tratamientos con LITT se pueden caracterizar mediante resonancia magnética ponderada en T2, como se muestra en las figuras 4, 5 y 6. Las imágenes de resonancia magnética se obtuvieron utilizando un imán superconductor libre de criógeno 7T con un diámetro de 17 cm y una bobina de cabeza de ratón en cuadratura utilizando los parámetros de secuencia descritos en el protocolo anterior. El cumplimiento cuidadoso de este método debería dar como resultado tasas de captura cercanas al 100 %, localización tumoral consistente y formación tumoral aproximadamente esférica, como se muestra en la Figura 4. Estas características proporcionan una base óptima para los tratamientos posteriores de LITT y cualquier análisis posterior. Del mismo modo, como se observa en la Figura 5, las ablaciones de LITT también deben ser consistentes tanto en tamaño como en localización. El núcleo central del tejido ablacionado estará compuesto por necrosis coagulativa y licuefactiva y se visualizará fácilmente como una hipointensidad (es decir, negro) en la resonancia magnética ponderada en T2. En los días inmediatamente posteriores al tratamiento con LITT, también es típico, dependiendo del tratamiento con LITT realizado, ver un área hiperintensa (es decir, blanca) dentro y alrededor de la lesión correspondiente a un edema perioperatorio. La Figura 6 muestra un resultado deficiente y destaca algunos de los posibles escollos al realizar este protocolo.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig04.jpg"> 
Figura 4: Imágenes de RM coronal ponderadas en T2 de la formación ideal del tumor CT2A. Imágenes representativas de la formación tumoral en tres ratones C57BL/6 (A, B, C) a los 12 días después de la implantación. Las flechas blancas indican el borde del tumor. Obsérvese la ubicación constante del tumor y la formación aproximadamente esférica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig05.jpg"> 
Figura 5: Imágenes de RM coronal ponderadas en T2 de la ablación ideal de LITT (1 día después de LITT). Imágenes representativas de la ablación tumoral LITT en tres ratones C57BL/6 (A, B, C) a los 13 días después de la implantación. Nótese el tamaño y la ubicación consistentes del núcleo de la lesión necrótica. La realización de resonancias magnéticas previas a la LITT y ablaciones de la LITT un poco antes proporcionaría un mejor equilibrio entre el tamaño óptimo del tumor para la focalización láser y la capacidad de obtener criterios de valoración posteriores al tratamiento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig06.jpg"> 
Figura 6: Imágenes de resonancia magnética coronal ponderadas en T2 de tratamientos LITT preoptimizados. Imágenes de tres ratones C57BL/6 (A, B, C) tratados con parámetros láser idénticos y objetivos estereotácticos antes de las optimizaciones del protocolo, como ejemplo de un resultado no ideal. Las flechas blancas indican el borde del tumor. Las áreas bordeadas muestran la región del edema. Se observa una variabilidad significativa, que incluye un crecimiento tumoral menos uniforme y una mala focalización de la ablación con láser, lo que resulta en un daño tisular inconsistente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Un modelo murino inmunocompetente para la terapia térmica intersticial con láser del glioblastoma

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and ...

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Research

Investigación

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Cancer Research

Investigación del cáncer

Implantación intracraneal de GL261 células en ratones C57BL / 6 produce los gliomas malignos que recapitular muchas de las características del glioblastoma multiforme humano. Hemos utilizado GL261 células que expresan establemente la luciferasa que nos permita...

La implantación intracraneal con posterioridad 3D En Vivo Bioluminiscentes imagen de gliomas murino

Se describe un método integrado para la implantación precisa, estereotáctica de las células de glioblastoma multiforme en el cerebro de ratones desnudos y posterior...

La implantación estereotáctica intracraneal y<em&gt; En vivo</em&gt; Radiología bioluminiscente de xenoinjertos de tumores en un sistema modelo de ratón de glioblastoma multiforme

Comience con un modelo de ratón de glioblastoma, un tumor cerebral invasivo.En la periferia del tumor, la barrera hematoencefálica (BBB) permanece intacta, con células endoteliales que forman uniones estrechas que regulan la entrada molecular.El mouse está equipado con una fibra óptica montada en la cabeza para administrar luz láser.Administre un láser infrarrojo de baja intensidad, que penetra en la piel y el cráneo para llegar al cerebro.El láser excita el oxígeno molecular en las células...

Interrupción de la barrera hematoencefálica inducida por láser para la administración de liposomas en un modelo de ratón de glioblastoma

Fuente: Clark, A.J., et al. Imágenes de bioluminiscencia de un modelo animal inmunocompetente para el glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra imágenes de bioluminiscencia para rastrear la progresión del glioblastoma en un modelo de ratón inmunocompetente, utilizando células tumorales que expresan luciferasa y luciferina para cuantificar el crecimiento tumoral de forma no invasiva.

Imágenes de bioluminiscencia de un modelo de ratón inmunocompetente para el glioblastoma

Hemos establecido un modelo ortotópico de glioblastoma cortical en ratones para intravital microscopía de dos fotones que recapitula las limitaciones biofísicas normalmente en juego durante el crecimiento del tumor. Una ventana de cristal crónica reemplazando el cráneo por encima de la del tumor permite el seguimiento de la progresión del tumor con el tiempo por microscopía de dos fotones.

El mantenimiento de un modelo de ratón ortotópico Glioblastoma Restricciones cerebral parenquimatosa físicas y Conveniente para intravital microscopía de dos fotones

GL261 proporcionan un modelo animal inmunocompetente útil de glioblastoma. Los objetivos de este protocolo son demostrar las técnicas adecuadas para monitorizar el crecimiento tumoral intracraneal mediante imágenes de bioluminiscencia in vivo, y verificar la utilidad de las células GL261 modificadas con luciferasa para el estudio de la inmunología tumoral y los enfoques inmunoterapéuticos para el tratamiento del glioblastoma.

La bioluminiscencia de imágenes de un Modelo inmunocompetentes Animal para Glioblastoma

La microdisección láser (LMD) es una técnica sensible y altamente reproducible que se puede utilizar para descubrir vías que median la heterogeneidad e invasión del glioma. Aquí, describimos un protocolo optimizado para aislar áreas discretas del tejido glioma usando LMD láser seguido de análisis transcriptomático.

Microdisección de captura láser de las subregiones de Glioma para la caracterización espacial y molecular de la heterogeneidad intratumoral, los oncostreams y la invasión

Aquí, describimos un modelo de ratón ortotópico preclínico para GBM, establecido por inyección intracraneal de células derivadas de tumores modelo de ratón genéticamente modificados. Este modelo muestra las características de la enfermedad del GBM humano. Para estudios traslacionales, el tumor cerebral de ratón se rastrea mediante resonancia magnética in vivo e histopatología.

Modelos ortotópicos traslacionales del glioblastoma multiforme

Este protocolo presenta las técnicas y la metodología necesarias para la terapia hipertérmica dirigida en modelos de tumores sólidos. El enfoque aprovecha la conversión fototérmica de la luz infrarroja cercana mediante nanovarillas de oro inyectadas intratumoralmente para inducir un calentamiento localizado dentro del microambiente tumoral.

Inducción de hipertermia leve dirigida en modelos tumorales murinos mediante conversión fototérmica de luz infrarroja cercana mediante nanovarillas de oro intratumorales

El objetivo de este protocolo es proporcionar a los investigadores una técnica altamente reproducible para las implantaciones intracraneales.

Implantación intracraneal estereotáctica de líneas celulares de xenoinjertos derivadas de pacientes con glioblastoma en ratones

Aprende a desarrollar un modelo murino inmunocompetente para evaluar la terapia térmica intersticial con láser en glioblastoma. Este método permite estudiar respuestas celulares y optimizar tratamientos en tumores cerebrales inoperables.

Un modelo murino inmunocompetente para la terapia térmica intersticial con láser del glioblastoma

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