Visualización no invasiva de la morfología microvascular del lecho ungueal en ratones mediante capilaroscopia

Uno de los intereses de nuestro laboratorio es la disfunción vascular en enfermedades neurodegenerativas. Nuestro objetivo es detectar y monitorear la patología microvascular periférica a través de la capilaroscopia para obtener información sobre su papel potencial en las enfermedades del sistema nervioso central. La detección de la disfunción microvascular en animales suele ser invasiva, se lleva a cabo ex vivo o es costosa. Con este protocolo, los investigadores pueden evaluar de manera fácil y económica la microvasculatura del lecho ungueal y traducir los hallazgos clínicos de la capilaroscopia del pliegue ungueal a modelos animales. Presentamos una ubicación novedosa para visualizar el reflejo de la microvasculatura periférica, el lecho ungueal. En comparación con la capilaroscopia del pliegue ungueal, la capilaroscopia del lecho ungueal proporciona un área más grande para una mejor observación de la morfología y estructura microvascular.

[Instructor] Para comenzar, coloque el ratón anestesiado en la mesa de operaciones para el procedimiento. Luego aplique gel lubricante para los ojos o ungüento oftálmico estéril no medicado en ambos ojos para evitar que la córnea se seque. Luego, manteniendo al animal bajo anestesia usando un cono nasal, aplique una cantidad generosa de crema depilatoria en toda la pata con un aplicador. Asegure una cobertura completa de las áreas de las patas y el lecho ungueal. Después de dejar la crema durante dos minutos, limpie cuidadosamente la crema depilatoria con un pañuelo limpio y lave la pata con agua tibia y estéril. 24 horas después de la eliminación del pelo, instale el equipo de capilaroscopia en una sala con temperatura controlada mantenida entre 21,5 y 22,5 grados centígrados. Conecte el capilaroscopio a una computadora portátil a través de una conexión USB. Abra la aplicación de software de video Debut en la computadora portátil. Después de anestesiar adecuadamente al ratón, aplique gel lubricante para los ojos o ungüento oftálmico estéril no medicado en ambos ojos. Coloque cinta de laboratorio blanca o un material de fondo similar debajo de la pata para mejorar el contraste y mejorar la visualización de los vasos. Ahora coloque la pata trasera con el lado volar hacia arriba en la plataforma de cinta de laboratorio, debajo del objetivo. Extienda suavemente los dedos de los pies para separar las uñas bajo el objetivo del microscopio con un aplicador. Asegúrese de que los lechos ungueales estén claramente separados para obtener imágenes óptimas de los vasos. Visualice lo que está siendo magnificado por el capilaroscopio y concéntrese en el lecho ungueal ajustando los ajustadores de las etapas X e Y y la rueda de aumento para obtener una imagen clara. Para reducir el deslumbramiento y mejorar el enfoque, aplique generosamente aceite de inmersión en la pata, asegurando una cobertura completa de las uñas. Concéntrese en la uña del segundo dedo de la pata trasera, ya que esta es la uña más grande y más fácil de visualizar en ratones. Ajuste los ajustadores de las etapas X e Y y la rueda de aumento para enfocar la red de vasos. Ajuste el objetivo para minimizar el deslumbramiento y ver la red de vasos ungueales. Para grabar un video, presiona el botón rojo Grabar en Debut. Guarde cada video en la carpeta de proyecto correspondiente y etiquete cada video en consecuencia. A continuación, abra el software ImageJ y arrastre el archivo a la interfaz del software para cargar la imagen. Para ajustar el brillo y el contraste, seleccione la imagen, seguida de Ajustar y Brillo/Contraste. Esta herramienta ayuda a alterar el contraste de las imágenes para visualizar mejor la morfología de los vasos. Una vez ajustada la imagen, haga clic en Establecer en la herramienta Brillo/Contraste. Finalmente, vaya a Archivo, Guardar como y seleccione Tiff para guardar la imagen. La morfología vascular del lecho ungueal se obtuvo con éxito mediante el método de capilaroscopia. La vasculatura típica del lecho ungueal de ratón consistía en un vaso aferente, un vaso eferente y una red de capilares que conectaban ambos. La red capilar del lecho ungueal fue consistente en diferentes cepas de ratón, como se demostró en ratones de tipo salvaje en un fondo SV129 / S6 y un fondo C57 / B6J.