Establecimiento y validación de un modelo rata de hipertensión arterial pulmonar asociada a fibrosis pulmonar

Esta investigación investiga la patogénesis de la hipertensión pulmonar del grupo tres, centrándose en los mecanismos moleculares en caso de fibrosis pulmonar. A diferencia de la hipertensión arterial pulmonar, los mecanismos subyacentes a la hipertensión pulmonar asociada a la enfermedad pulmonar intersticial aún no se conocen bien. Los desarrollos recientes en este campo incluyen la eficacia para revertir la remodelación vascular. El descubrimiento de fenotipos de endotelios similares al cáncer y hallazgos metabólicos, que vinculan los aminoácidos y la desregulación lipídica con la patogénesis de la hipertensión pulmonar. La metabólica de secuenciación I-A a granel y de células individuales y los ensayos funcionales, como las pruebas de resistencia a casos molestos, son tecnologías fundamentales para mapear la hipertensión pulmonar, la heterogeneidad e identificar objetivos terapéuticos.

[Instructor] Para comenzar, intubar la tráquea de la rata utilizando un tubo PE-50, insertado a una profundidad de tres centímetros, que es la distancia desde la glotis hasta el final del tubo. Con una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 26, extraiga 0,2 mililitros de bleomicina e inyéctela en las vías respiratorias a través de una cánula como dosis única. Coloque a la rata en posición supina para asegurar una distribución uniforme de la bleomicina. Sostenga suavemente y gire lentamente la rata, alternando los lados en un ángulo de 30 grados a 45 grados. Mantenga cada rotación durante 10 a 15 segundos y repita tres o cuatro veces. Abra el software PFT y verifique que se reconozca el dispositivo. Ahora encienda el interruptor del instrumento de control principal y asegúrese de que cada interruptor del amplificador de señal esté apagado. Para configurar el flujo de aire, encienda la tuerca reguladora del flujo de aire de succión y ajuste la inspiración a cinco. Luego encienda la tuerca reguladora del flujo de aire espiratorio y ajuste la caducidad lenta a menos cuatro. Establezca el valor de presión en 60. Calibre el instrumento en el orden de flujo FRC, flujo, flujo alto y presión pulmonar con un error inferior al 5%. Después de anestesiar a la rata, corte la piel a lo largo del centro del cuello. Separe los músculos capa por capa para exponer la parte superior de la tráquea cervical. Haga una incisión horizontal entre los anillos del cartílago traqueal. Inserte rápidamente la cánula de metal en la incisión traqueal, asegurando un posicionamiento correcto, y asegúrela con cuatro suturas de hilo de seda cero. Coloque la rata en el compartimento para animales PFT y conecte la cánula traqueal a la interfaz del canal de flujo de aire fuera del instrumento. Haga clic en el botón de inicio y examine la capacidad vital forzada o FVC y la distensibilidad pulmonar dinámica. Para la detección de la presión sistólica del ventrículo derecho, o RVSP, fije el abdomen de la rata anestesiada hacia arriba en el banco experimental. Hacer una incisión de unos cuatro centímetros de largo en el lado derecho del cuello, utilizando unas tijeras quirúrgicas. Separe la vena yugular externa suavemente con pinzas microquirúrgicas, asegurándose de que se aísle una longitud de aproximadamente un centímetro. Inserte dos líneas quirúrgicas en los extremos distal y proximal de la vena separada. Lime el extremo distal de la vena yugular externa, usando cuatro hilos de seda cero. Levante suavemente la línea quirúrgica proximal y colóquela en la pared de la vena distal. Haga una pequeña incisión de aproximadamente 0,3 milímetros con unas tijeras pequeñas. Después de insertar el tubo PE-50 en la vena yugular externa, lime el tubo PE-50 y la vena con cuatro hilos de seda cero para evitar fugas de sangre. Observe la forma de onda de presión venosa en la grabadora. Empuje el catéter lentamente hacia la aurícula derecha, avanzando hacia el ventrículo derecho para mostrar la forma de onda de presión del ventrículo derecho. Cuando la presión sea estable, registre la presión ventricular derecha durante un minuto y guarde los datos para su análisis. Después de la toracotomía, retire el corazón intacto de la rata con unas pinzas. Corta el oráculo y el tejido conectivo cerca del corazón con unas tijeras. Cortar la pared libre del ventrículo derecho a lo largo de la arteria pulmonar. Este tejido es el ventrículo derecho y los tejidos restantes son el ventrículo izquierdo más el tabique intraventricular. Después de la separación, drene la superficie del ventrículo derecho y el ventrículo izquierdo más el tabique intraventricular, utilizando papel de filtro. Pesar el ventrículo derecho y el ventrículo izquierdo más el tabique ventricular por separado con una balanza analítica antes de calcular su relación de peso. Esta figura ilustra los cambios hemodinámicos, la remodelación vascular pulmonar y el deterioro de la función pulmonar observados en el modelo de rata PF PH inducido por bleomicina. La presión sistólica del ventrículo derecho y la relación entre el ventrículo derecho y el ventrículo izquierdo más el tabique aumentaron significativamente en el grupo modelo en comparación con el grupo de control. La tinción histológica reveló más áreas teñidas de azul alrededor de las arterias pulmonares en el grupo modelo, lo que indica una mayor acumulación de colágeno. La capacidad vital forzada y la distensibilidad pulmonar dinámica se redujeron significativamente en el grupo modelo en comparación con el grupo control. Las relaciones entre el tiempo de aceleración de la arteria pulmonar y el tiempo de eyección, la excursión sistólica del plano anular tricúspide, el cambio de área fraccional del ventrículo derecho y el gasto cardíaco se redujeron significativamente en el grupo modelo. La concentración de hidroxiprolina fue significativamente mayor en el grupo modelo, lo que indica un mayor contenido de colágeno en el tejido pulmonar. Los pesos del hígado y los riñones no fueron significativamente diferentes entre los grupos de control y modelo.