Name: El blanqueo iterativo amplía la multiplicidad con el uso de la automatización de tinción para instalaciones centrales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: Descubre el método IBEX para neurociencia usando tinción automatizada con amplificación de señal por tiramida. Esta técnica mejora la calidad de imagen tisular y la reproducibilidad en laboratorios centrales.

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<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kits de reactivo de manchas Alexa TSA</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Tintes alternativos TSA si no hay filtros de microscopía de ópalo disponibles. Estos incluyen Alexa Fluor 488 (canal azul/verde), Alexa Fluor 555 o 568 (canal rojo), Alexa Fluor 647 (canal rojo lejano), Alexa Fluor 750 (infrarrojo cercano, si está equipada con filtros adecuados).</td></tr><tr><td>Anticuerpo Arg1</td><td>Señalización celular</td><td>93668</td><td>Usado en la Figura 4 en 1:100</td></tr><tr><td>Material Blades</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>O similar, el perfil alto o bajo dependerá del tipo de tejido</td></tr><tr><td>Anticuerpo CD11b</td><td>Abcam</td><td>ab133357</td><td>Usado en la Figura 4 en 1:2000</td></tr><tr><td>Anticuerpo CD163</td><td>Abcam</td><td>ab182422</td><td>Usado en la Figura 4 en 1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo CD31</td><td>Señalización celular</td><td>77699S</td><td>Usado en la Figura 2 en el minuto 1:100</td></tr><tr><td>Anticuerpo CD3e</td><td>Dako</td><td>A045201-2</td><td>Usado en la Figura 1 en el minuto 1:100</td></tr><tr><td>Tool Coplin Jar</td><td>Fischer Scientific</td><td>01-816-21</td><td>O algo similar</td></tr><tr><td>Material Abrigos</td><td>VWR</td><td>v48393-026</td><td>O algo similar</td></tr><tr><td>Anticuerpo CX3CR1</td><td>Abcam</td><td>ab308613</td><td>Usado en la Figura 4 en 1:450</td></tr><tr><td>Stain DAPI</td><td>Akoya</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>Software FIJI</td><td></td><td></td><td>Utilizado para medir la intensidad de la señal</td></tr><tr><td>Slide Fisher Superfront Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>O algo similar</td></tr><tr><td>Software HALO</td><td>Indica Labs</td><td></td><td>Ejemplo de software de análisis de imágenes comercialmente disponible. Se usan para alinear y analizar imágenes.</td></tr><tr><td>Anticuerpo Iba1</td><td>Señalización celular</td><td>17191</td><td>Usado en la Figura 4 en 1:800</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>Akoya</td><td></td><td>Utilizado para medir la intensidad de la señal</td></tr><tr><td>Anticuerpo iNOS</td><td>Abcam</td><td>ab283655</td><td>Usado en la Figura 4 en 1:400</td></tr><tr><td>Instrument Leica Bond Rx (o RXm)</td><td>Leica Biosystems</td><td>21.2201</td><td>En el texto se le denomina "Autostainer 1". Asegúrate de que todos los reactivos asociados estén también disponibles, incluyendo cajas de tinción y soluciones a granel.&nbsp;</td></tr><tr><td>Reagent LiBH4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62460-5G-F</td><td>Manténganse en un entorno anhidro</td></tr><tr><td>Instrument Mantra Snap</td><td>Akoya</td><td></td><td>Se necesita un microscopio multiespectral de harina para proteger los tintes. Ejemplo de microscopio que puede usarse para detectar tintes de ópalo.</td></tr><tr><td>Microtomo Tool </td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>O similar con accesorios preferidos como pinceles</td></tr><tr><td>Kit de reactivo de tinción Opal IHC 480</td><td>Akoya</td><td>FP1500001KT</td><td>Usado en la Figura 4</td></tr><tr><td>Reactivo de tinción Kit Plex Opal IHC 6-plex</td><td>Akoya</td><td>NEL821001KT</td><td>520 y 620 no decoloran, como se usan en las Figuras 1, 2 y 4</td></tr><tr><td>Kit de reactivo de tinción Opal IHC 780</td><td>Akoya</td><td>FP1501001KT</td><td>Usado en la Figura 4</td></tr><tr><td>Horno Tool </td><td>Millipore Sigma</td><td>Z683329</td><td>O algo similar, también se puede hacer en autostainer</td></tr><tr><td>Anticuerpo Pancitoqueratina</td><td>Abcam</td><td>ab9377</td><td>Usado en la Figura 4 en el minuto 1:50</td></tr><tr><td>Reagent PBS (opcional)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>Instrument FenoImagen</td><td>Akoya</td><td></td><td>Imagen multiespectral de diapositivas completas con desmezclado espectral integrado incluido en el software</td></tr><tr><td>Reactiv ProLong Gold Antifade</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36961</td><td>O medios de montaje acuosos similares</td></tr><tr><td>Anticuerpo ProSP-C n-terminal (ProSPC)</td><td>Biorreactivos de las Siete Colinas</td><td>WRAB-9337</td><td>Usado en la Figura 4 en el minuto 1:250</td></tr><tr><td>Anticuerpo RABIA</td><td>R& D</td><td>MAB1179</td><td>Usado en las Figuras 1 y 2 en el minuto 1:50</td></tr><tr><td>Reactivo Buffer de reacción</td><td>Roche</td><td>NC1895692</td><td>Para su uso con el autotinzador Ventana</td></tr><tr><td>Anticuerpo SARS-CoV-2-N</td><td>Señalización celular</td><td>68344</td><td>Usado en la Figura 2 en 1:1000</td></tr><tr><td>Portaportaobjetos TOMO Adhesion CC Portaobjetos de microscopio CC-WH</td><td>Avantik</td><td>SKUSL6519-1</td><td>Si la adherencia del tejido es motivo de preocupación</td></tr><tr><td>Instrument Ventana Discovery Ultra</td><td>Roche</td><td></td><td>En el texto se le denomina "Autostainer 2". Asegúrate de que todos los reactivos asociados estén también disponibles, incluyendo cajas de tinción y soluciones a granel.&nbsp;</td></tr><tr><td>Reactivo Buffer de lavado</td><td>Leica Biosystems</td><td>AR9590</td><td>Para uso con Leica Bond autostainer</td></tr><tr><td>Reactivo Agua</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-230-147</td><td>La mejor DI es la mejor, no la milipore</td></tr><tr><td>Baño María Tool </td><td>Leica Biosystems</td><td>140607020C1</td><td>O algo similar</td></tr></tbody></table>

el blanqueo iterativo amplía la multiplicidad con el uso de la automatización de tinción para instalaciones centrales

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

El blanqueo iterativo amplía la multiplicidad con el uso de la automatización de tinción para instalaciones centrales

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

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